Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Алгоритмы оценки гепато- и нефропатологии при бабезиозе собак

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных,

патология, онкология и морфология животных

Самойлова Евгения Сергеевна

Троицк - 2012

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины"

Научный руководитель: Дерхо Марина Аркадьевна доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты: Гизатуллина Фирдаус Габдрахмановна, доктор биологических наук, доцент, ФГБОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины", кафедра терапии и диагностики животных, профессор

Дроздова Людмила Ивановна, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО "Уральская государственная сельскохозяйственная академия", кафедра анатомии и гистологии, заведующая

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО "Институт ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета"

Защита состоится "_____" __________2012 г. в ______часов на заседании диссертационного совета Д 220.066.01 при ФГБОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины" по адресу: 457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина, 13, тел.8 (35163) 2-48-88; факс 8 (35163) 2-04-72; E-mail: tvi_t@mail.ru, официальный сайт: www.usavm. ac.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины".

Автореферат разослан "____" ________________2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Борисенко Елена Валерьевна

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Бабезиоз - одно из самых распространенных инвазионных заболеваний собак, которое до сих пор наносит значительный экономический ущерб служебному собаководству и частным владельцам, так как оканчивается, как правило, при несвоевременном лечении, гибелью животных (Г.А. Саипов, О.Л. Куликова, Л.С. Мясникова, 2005; В.А. Сидоркин, 2006).

В последние десятилетия на фоне влияния различных факторов в эпизоотической обстановке Челябинской области произошли значительные изменения, что характеризовалось созданием благоприятных условий и расширением границ ареала для обитания переносчиков; росту численности собак, их плотности в городах и населенных пунктах региона; формированием на территориях крупных городов синантропных очагов. В совокупности данные причины привели к росту заболеваемости животных.

В настоящее время общепризнанно, что при всех кровепаразитарных болезнях, включая и бабезиоз собак, существуют особенности патогенеза, свойственные определённому заболеванию и виду животных, что исключает единый унифицированный подход к изучению этих вопросов, а тем более приравнивание данных, полученных при бабезиозе крупного рогатого скота, например, к бабезиозу собак. Проблема борьбы с инвазией ещё далека от разрешения, что объясняется, главным образом, недостаточностью знаний сущности патологии, возникающей в ответ на взаимоотношение паразита и хозяина. Кроме этого, мало изучены закономерности развития метаболических сдвигов в организме животных на фоне паразитирования бабезий, хотя совершенно ясно, что именно здесь лежит ключ к пониманию механизма развития патологии.

В связи с этим анализ сдвигов в обменных процессах организма собак при острой форме спонтанного бабезиоза на клеточном, органном и организменном уровнях имеет теоретическую и практическую значимость. Вместе с тем, исследования, направленные на выявление патологии отдельных органов пораженного организма, возникающие в ответ на развитие в нём паразитов, дают возможность изучить патогенез заболевания и разработать научно-обоснованные методы оценки состояния здоровья животных, лечения и профилактики.

Степень разработанности проблемы. Проведенные ранее исследования были посвящены: изучению морфобиологических особенностей Babesia canis, клинических признаков и течения болезни, некоторых аспектов эпизоотологии бабезиоза собак; предложен ряд химиотерапевтических препаратов для лечения и профилактики (Х. Георгиу; А.Н. Пономаренко, 1998; А.В. Будовской, 2002; А. Пригодин, 2002; М.П. Прус, 2006; Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский, 2008; В.В. Анников, Л.В. Анникова, М.Е. Попова, 2009 и др.). Однако большинство аспектов патогенеза бабезиоза собак до сих пор остаются мало изученными и требуют дальнейшего исследования.

Цель и задачи исследований. Цель нашей работы - установить особенности гепато - и нефропатологии при бабезиозе собак с помощью клинико-гематологических, биохимических и ультразвуковых методов исследования и на их основе разработать алгоритм оценки метаболического состояния организма собак при инвазии.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотологические особенности и клинические признаки острой формы спонтанного бабезиоза собак в г. Магнитогорске.

2. Оптимизировать тест-системы лабораторных (гематоморфологических, биохимических, ультразвуковых) методов исследования, позволяющих охарактеризовать состояние организма собак при бабезиозе, и оценить их информативность в установлении эндогенной интоксикации и проявлении гепато - и нефропатологии.

3. Создать модель патогенеза острой формы спонтанного бабезиоза собак.

4. Разработать алгоритм оценки метаболического состояния организма собак при бабезиозе на основе оптимизированных тест-систем лабораторных методов исследования.

5. Проверить информативность алгоритма оценки метаболических нарушений в организме собак на примере прогнозирования исхода заболевания и мониторинга лечения.

Предмет и объект исследования. Предметом исследования явилась разработка алгоритма оценки гепато - и нефропатологии при острой форме спонтанного бабезиоза собак.

Объект исследования - собаки в возрасте от 1 года до 4-х лет, массой тела 10-15 кг, преимущественно охотничьих пород - спаниели (английский и русский), гончие и лайки, принадлежащие частным владельцам; кровь и моча.

Научная новизна результатов исследования. Оптимизированы тест-системы лабораторных методов исследований для бабезиоза собак. Создана модель патогенеза острой формы спонтанной паразитемии, согласно которой основной патогенетической причиной развития осложнений при инвазии является гипоксический и гиперметаболический энергодефицит. Разработан алгоритм оценки метаболического состояния организма собак при бабезиозе, включающий определение в крови концентрации общего белка, креатинина, мочевины, активности АлАТ, АсАТ, ГГТ и расчёт коэффициента де Ритиса. При благоприятном исходе в организме собак сохраняется анаболическая направленность обменных процессов, для которых характерно сохранение концентрации общего белка и активности ГГТ в пределах нормы, приоритетное повышение активности АлАТ по сравнению с АсАТ (коэффициент де Ритиса менее 0,7 усл. ед.). Данный алгоритм позволяет охарактеризовать общее состояние животных, степень выраженности гепато - и нефропатологии, вести мониторинг на этапах лечения и прогнозировать исход инвазии. Определена информативность параклинических тестов в оценке уровня эндогенной интоксикации при инвазии и установлено, что для её характеристики можно использовать ЛИИ с поправочными коэффициентами, ИЛСОЭ, ИСНМ, ИСЛМ, величина которых снижается соответственно в 2,3; 3,4-5,0; 2,5 и 1,9-3,3 раза.

Теоретическая значимость работы. Доказано, что основной патогенетической причиной развития гепато - и нефропатологии при острой форме спонтанного бабезиоза собак является наличие гипоксического и гиперметаболического энергодефицита в организме животных, что вносит вклад в расширение представлении о патогенезе заболевания; теоретически обоснован алгоритм оценки метаболического состояния организма собак при паразитемии, который позволяет охарактеризовать функции печени и почек, прогнозировать исход заболевания и вести мониторинг лечения; Изучены особенности эпизоотологического процесса при бабезиозе собак в условиях г. Магнитогорска и подтверждены ранее установленные факты о зависимости заболеваемости и смертности животных от сезона года, возраста, пола и породы.

Практическая значимость работы. Оптимизированные тест-системы внедрены в практику работы ветеринарных клиник г. Магнитогорска и используются для оценки общего состояния собак, функций печени и почек при бабезиозе, подбора комплекса препаратов для симптоматического лечения, мониторинга химиотерапии.

Материалы и результаты исследований могут использоваться в учебных целях при изучении ветеринарной паразитологии, патфизиологии, клинической биохимии на факультете ветеринарной медицины.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Область диссертационных исследований соответствует формуле специальности 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных, а именно п.2 "Вопросы клинической ветеринарии, принципы, методы и технологии обследования, общей, специальной и инструментальной диагностики болезней животных, частная синдроматика (кардио-, нейро-, гепато-, нефропатология, желудочно-кишечные, респираторные, репродуктивные расстройства), п.5 "Особенности клинических и патоморфологических проявлений, патогенез и семиотика инфекционных и инвазионных болезней животных, их значение для диагностики, дифференциальной диагностики и лечения", п.9 "Структура и функции клеток, тканей и органов животных, взаимосвязь функциональных, структурных и гистохимических изменений в норме и патологии".

Апробация и реализация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на международных научно-практических конференциях: "Здоровье сберегающие технологии АПК РФ" (г. Троицк, 2008); "Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта "Развитие АПК" (г. Троицк, 2008); "Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии" (г. Москва, 2008); "Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии" (г. Троицк, 2009); "Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных" (г. Троицк, 2009); на XVII Московском международном ветеринарном конгрессе, г. Москва, 2009 г.

Результаты диссертационной работы внедрены в практику работы ветеринарных клиник г. Магнитогорска: ООО "Ветеринарный центр", "Биовет", "Природа", ОГУ СББЖ №1 г. Магнитогорска.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных статей, в том числе три статьи в изданиях, рекомендованных ВАК России.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Уровень заболеваемости собак бабезиозом и летальности в г. Магнитогорске определяется сезоном года, возрастом, породой и полом животных.

2. Характеристика информативности оптимизированных тест-систем лабораторных методов исследования при оценке: общего состояния организма животных, уровня эндогенной интоксикации и гепато - и нефропатологии.

3. Модель патогенеза острой формы спонтанного бабезиоза собак.

4. Обоснование алгоритма оценки метаболического состояния организма собак при бабезиозе и результаты его апробации при прогнозировании исхода инвазии и мониторинге лечения.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, библиографического списка использованной литературы. Работа проиллюстрирована 23 таблицей и 5 рисунками. Список литературы включает 250 источников, в том числе 67 зарубежных авторов.

2. Собственные исследования и их результаты

2.1 Материалы и методы исследований

Диссертационная работа является самостоятельным разделом научных исследований и выполнена в рамках государственной научной программы "Разработка и внедрение здоровьесберегающих технологий в животноводстве" (№ Гос. регистрации 0120.0801292).

Экспериментальная часть работы выполнена на базе ООО "Ветеринарный центр" г. Магнитогорска, лабораторные исследования - в ОГУ Магнитогорской межрайонной ветеринарной лаборатории и в лаборатории городской больницы №3 г. Магнитогорска в 2007-2010 г. г.

Объектом исследования служили собаки разных пород, возраста и пола, принадлежащие частным владельцам и спонтанно зараженные Babesia canis. Заболевание протекало в острой форме. Диагноз на бабезиоз ставили на основании эпизоотологических данных, клинических признаков и результатов исследования мазков периферической крови. В ходе работы выполнено 3 серии экспериментов.

бабезиоз собака инвазионное заболевание

В первой серии оценили эпизоотологическую ситуацию в г. Магнитогорске по бабезиозу на основании записей в амбулаторных журналах ветеринарных клиник: ООО "Ветеринарный центр", "Биовет", "Природа", ОГУ СББЖ №1 г. Магнитогорска за 2008 - 2010 гг.

Во второй серии эксперимента изучали патогенез острой формы спонтанного бабезиоза (рис.1).

С этой целью из собак (в возрасте от 1 года до 4-х лет, преимущественно охотничьих пород), владельцы которых обратились в клинику на 2-3-й день проявления клинических признаков бабезиоза, было сформировано две опытные группы (n=20). Отличительной особенностью животных первой группы было наличие в клинике инвазии гемоглобинурии, а у второй - её отсутствие. Контролем служила группа клинически здоровых собак, подобранная в соответствии с возрастом, породой и полом животных опытных групп.

В третьей серии изучали информативность алгоритма оценки метаболического состояния организма собак на примере прогнозирования исхода заболевания и мониторинга лечения.

Для оценки алгоритма в ходе лечения животных было сформировано две группы, в которых в качестве антипаразитарного средства использовали беренил в виде 7% -го раствора в дозе 3,5 мг/кг внутримышечно. После его введения капельно вливали раствор Рингера. В качестве симптоматической терапии всем опытным животным назначали преднизолон, сульфокамфокаин, рибоксин, цианкобаламин, фуросемид, папаверин, анальгин, Феррум Лек, Эссенциале Н. Дозы препаратов подбирали для каждого животного индивидуально в зависимости от массы тела, курс составлял 5 дней. Кроме выше указанных препаратов животным первой опытной группы включали в схему лечения гамавит, второй - лигфол в виде внутримышечных инъекций.

Рисунок 1 - Схема эксперимента

Материалом исследований служила кровь, сыворотка крови и моча. Клинический анализ крови выполнен на гематологическом анализаторе "Aba-cus Vet"; биохимический - на биохимическом анализаторе "Chiron Diagnostics LTD"; анализ мочи - с помощью диагностических мультитестовых индикаторных полосок; УЗИ - с помощью линейно - конвексного ультразвукового сканера HS - 2000 (Honda Electronics, LTD) и датчика частотой 5,0 МГц.

Полученные данные статистически обработаны на персональном компьютере в программе "Microsoft Excel - 2003". Оценка достоверности различий между показателями производилась с использованием параметрического критерия t - Стьюдента (Г.Ф. Лакин, 1980).

2.2 Эпизоотологические особенности бабезиоза собак

В рамках мониторинга распространения бабезиоза в г. Магнитогорске мы учитывали уровень заболеваемости, летальности, сезонности, зависимость частоты инвазирования от района города, породы, пола и возраста собак.

Мы установили, что инвазия достаточно широко и повсеместно распространена в районах г. Магнитогорска. При этом стационарно неблагополучными являются Правобережный и Ленинский районы, в которых уровень заболеваемости за период 2008-2010 г. г. колебалась, соответственно, в пределах 25,8-28,2 и 33,9-36,3%. В Орджоникидзевском и Левобережном районах бабезиоз собак регистрировался на уровне 19,6-24,1 и 12,1-18,8%, соответственно.

Оценка сезонной динамики показала, что наивысший уровень заболеваемости собак наблюдается в мае (33,5-40,8%), наименьший - в летние месяцы, особенно в августе. Новый всплеск заболеваемости появляется в сентябре и октябре. В целом сезонная динамика имеет характер двухвершинной кривой с ярко выраженным пиком инвазии в мае и менее резко - в сентябре.

Кроме этого, на уровень заболеваемости собак бабезиозом влияет: а) пол животных (самцы инвазируются чаще, чем самки); б) возраст животных (наиболее часто болеют собаки в возрасте от 1 года до 5 лет); в) порода собак (чаще заболевают лайки (26,33-27,95%), русский спаниель (23,17-25,33 %), среднеазиатская овчарка (19,65-20,99%)). Наибольший уровень смертности был характерен для щенков до 1 года, наименьший - от 1 года до 5-ти лет.

Таким образом, в г. Магнитогорске имеются клещи-переносчики, зараженные Babesia canis, и восприимчивые животные. Сезон заболевания собак совпадает с периодом активной фазы клещей-переносчиков. Уровень заболеваемости зависит от района города, пола, возраста и породы собак.

2.3 Клинический анализ крови

Для оценки общего состояния животных использовали клинический анализ крови. Мы установили, что у собак I-ой опытной группы содержание гемоглобина (Hb), эритроцитов (RBC) и гематокрита (Ht), по сравнению с контролем, уменьшилось, соответственно, на 38,4; 27,1 и 32,4%, а у II - ой - на 58,4; 35,5 и 54,1% в результате внутрисосудистого гемолиза эритроцитов и появления антиэритроцитарных антител.

Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) и значение цветного показателя (ЦП) у животных I-ой опытной группы составило 21,2±0,39 Пг и 0,63±0,01 усл. ед., II-ой опытной группы - 21,2±0,39 Пг и 0,49±0,006 усл. ед. соответственно, что на 15,5 и 35,6% меньше, чем в контроле.

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) у собак I-ой опытной группы была равна 31,56±0,40% (в контроле - 34,64±0,37%), а II-ой опытной группы - 31,2±0,66% (в контроле 34,1±0,40%). Средний объём эритроцита (МСV) у животных I-ой опытной группы был меньше, чем в контроле на 7,3%, а II-ой - на 28,9%.

Количество ретикулоцитов и СОЭ в крови больных собак увеличивалось в I-ой и II-ой опытных группах, соответственно, в 4,4; 2,6 и 5,6; 4,1 раза, а тромбоцитов, наоборот, уменьшалось 1,46-1,65 раза по сравнению с контролем.

Для инвазии был характерен лейкоцитоз. Количество лейкоцитов в I-ой опытной группе выросло на 31,5%, а во II-ой - на 60,8%. В лейкограмме увеличилось содержание эозинофилов (EOS), палочкоядерных нейтрофилов (ПН) и моноцитов (MONO), соответственно, в 2,76; 1,62 и 1, 65 раза в I-ой опытной группе и в 3,73; 3,67 и 1,88 раза во II-ой. Уровень сегментоядерных нейтрофилов (СН) и лимфоцитов (LYM), наоборот, снизился на 13,6-17,5 и 12,2-29,9%.

Таблица 1 - Тест-система клинического и биохимического анализа крови при бабезиозе

Показатель	Норма	При бабезиозе	Показатель	Норма	При бабезиозе
Гематокрит	37,0-55,0 %	v; vv	Общий белок	40-73 г/л	N
Гемоглобин	110,0-170,0 г/л	vvv	Альбумины	22-39 г/л	N
Эритроциты	5,2-8,4 1012/л	vv; vvv	Alb/Gl		менее 0,9
МСН	22,0-27,0 Пг	v	АлАТ	до 52 U/L	^^^
МСНС	34,0-36,0 %	v; vv	АсАТ	до 42 U/L	^^
МСV	64-74 мкм3	v; vv	Де Ритиса	1,1-1,3	менее 0,7
ЦП	0,7-1,1	v; vv	ГГТ	до 10 U/L	N; ^
Ретикулоциты в % от RBC	0,0-2,0 в % от RBC	^	Щелочная фосфатаза	18-70 U/L	^
СОЭ	1,0-5,0 мм/ч	^^^	Холестерин	2,9-6,5 ммоль/л	N
Тромбоциты	160-430 тыс/мм3	N	Билирубин общий	3-13,5 мкмоль/л	^^^
Лейкоциты	8,5-10,5109/л	^; ^^	Билирубин прямой	до 5,5 мкмоль/л	^^^
Эозинофилы	2,0-9,0%	^	Пр. Троммера	до 4 усл. ед.	^; ^^
Пал. нейтрофилы	1,0-6,0%	^	Мочевина	3,5-9,2 ммоль/л	^^^
Сег. нейтрофилы	40,0-71,0%	N
Лимфоциты	21,0-40,0%	N; v
Моноциты	1,0-5,0%	^

Примечание: N - соответствует границам нормы; ^ - увеличено незначительно; ^^ - умеренно увеличено; ^^^ - сильно увеличено; v - уменьшено незначительно; vv - умеренно снижено; vvv - сильно снижено

Таким образом, острое течение спонтанного бабезиоза собак сопровождается микроцитарной гипохромной анемией, для которой характерно снижение МСV, МСН, МСНС, тромбоцитов; умеренное увеличение количества ретикулоцитов и резкое - СОЭ. Кровепаразитоз протекает на фоне дефицита иммунного ответа за счёт уменьшения концентрации СН и LYM.

При сравнении результатов клинического анализа крови с показателями нормы была получена тест-система, отражающая характер их изменений при бабезиозе (табл.1). Наибольшие количественные сдвиги отмечены у показателей красной крови, что свидетельствует о нарушении дыхательной функции крови и развитии гипоксии, вероятно, являющейся одной из основных патогенетических причин.

Менее значительные сдвиги были специфичны для состава белой крови, но они указывали на наличие в организме больных собак воспалительного процесса на фоне возрастающей антигенной нагрузки и иммунодефицита.

2.4 Биохимическая оценка функций печени при бабезиозе собак

Совокупность лабораторных показателей обмена билирубина, сывороточных белков и ферментов позволяет оценить характер дисфункций в печени. Эти критерии не специфичны для бабезиоза, но вместе с тем характеризуют состояние гепатоцитов. Функциональную активность клеток печени оценивали по синдромному принципу (Б.А. Никулин, 2007).

"Синдром цитолиза", оцениваемый по активности ферментов АлАТ, АсАТ и их соотношению, характеризовался преимущественным "вымыванием" из гепатоцитов АлАТ, что приводило к снижению значения коэффициента де Ритиса до 0,68 усл. ед. (р<0,001).

Бабезиоз собак сопровождался нарушением функции образования и оттока желчи ("синдрома холестаза"), о чём свидетельствовало увеличение, по сравнению с контролем, активности ЩФ и ГГТ, концентрации холестерина, общего и прямого билирубина у животных I и II опытных групп в 1,49; 1,89; 1,45; 2,94; 3,45 и 1,91; 2,06; 1,48; 3,55 и 4,17 раза соответственно.

При инвазии у собак опытных групп уменьшалась, по сравнению с контролем, концентрация общего белка и альбуминов соответственно, на 23,0-24,8% и 29,1-33,8%. На этом фоне увеличивалась величина белково-осадочной пробы в 5-6 раз и содержание глобулинов, но снижалось значение Alb/Gl - коэффициента до 0,87-0,88 усл. ед. В совокупности эти данные указывают на развитие в организме собак "мезенхимально-воспалительного синдрома".

О наличии "гепатодепрессивного синдрома" свидетельствовало резкое увеличение в крови больных собак уровня мочевины (более чем в 3 раза по сравнению с контролем) и уменьшение концентрации альбуминов, что являлось следствием усиления продукционной азотемии и снижения биосинтетической активности гепатоцитов.

Гипопротеинемия и диспротеинемия при бабезиозе являлась результатом напряженного обмена белков в печени, обусловленного взаимодействием мезенхимальной ткани с поступающими в орган с кровотоком антигенами, аллергенами и токсинами ("синдром раздражения ретикуло-эндотелия").

Таким образом, печеночный профиль биохимических показателей крови свидетельствовал о том, что при бабезиозе собак развивается гепатопатология по типу острого гепатита.

При сравнении величин биохимических показателей крови с границами нормы была получена тест-система, позволяющая оценить степень повреждения печеночных клеток при паразитемии (табл.1).

2.5 Биохимическая оценка функций почек при бабезиозе собак

Для оценки функциональной активности почечного фильтра использовали алгоритм почечного профиля (Б.А. Никулин, 2007).

В крови больных собак хотя и снижался уровень общего белка и альбуминов по сравнению с контролем, но не выходил за границы нормы. Однако на этом фоне резко увеличивалась концентрация мочевины и креатинина, превышая контроль более чем в 2,5-3,0 раза. Анализ мочи показал, что она изменяет цвет, прозрачность, относительную плотность, значение рН, содержит избыточные количества белка, билирубина и уробилиногена. Однако в ней отсутствует глюкоза и гемоглобин. В совокупности эти данные свидетельствуют о развитии при бабезиозе почечной недостаточности.

Таблица 2 - Тест-система оценки дисфункций почек при бабезиозе

Показатель	Норма	При бабезиозе
Сыворотка крови
Общий белок	40-73 г/л	N
Альбумины	22-39 г/л	N
Alb/Gl		менее 0,9
Мочевина	3,5-9,2 ммоль/л	^^^
Креатинин	26-120 мкмоль/л	^^^
Моча
Цвет	Соломенно-жёлтый	От темно-желтого до тёмно-вишневого / бурого
Прозрачность	Прозрачная	мутная
Относительная плотность	1,013-1,035	^
рН	5,5-7,0	N
Белок	0,0-следы	^^^
Глюкоза	-	N
Билирубин	от 0,0 до "+"	^^; ^^^
Уробилиноген	от 0,0 до "следы"	^^; ^^^
Гемоглобин	-	N; ^
Эритроциты в мочевом осадке	0,0-5,0 в поле зрения	N
Лейкоциты в мочевом осадке	0,0-5,0 в поле зрения	N

Примечание: N - соответствует границам физиологической нормы; ^ - увеличено незначительно; ^^ - умеренно увеличено; ^^^ - сильно увеличено

При сравнении показателей крови и мочи с параметрами нормы была получена тест-система, позволяющая оценить работу почечного фильтра и указывающая на то, что поражение выделительной системы в организме собак при бабезиозе протекает по типу острой почечной недостаточности (табл.2).

2.6 Ультразвуковое исследование печени и почек

Для подтверждения результатов лабораторных анализов у собак опытных групп было выполнено ультразвуковое исследование, при котором: а) у печени определяли форму органа, положение, размер, четкость и ровность границ, состояние капсулы, эхогенность и однородность структуры, состояние сосудистого рисунка, а также исследовали состояние желчного пузыря и желчного протока; б) у почек - расположение органа, размер, контуры, эхогенность и однородность паренхимы, четкость дифференциации коркового и медуллярного слоев.

Мы установили, что печень у больных собак имела в пределах нормы форму, контуры, визуализацию, но границы органа были сглажены, а задняя и нижняя выходили за последнее ребро и реберную дугу; капсула хорошо дифференцировалась; эхогенность паренхимы снижена, а эхоструктура неоднородна и крупнозерниста; сосудистый рисунок представлял собой вид "звездного неба", желчные протоки расширены. Желчный пузырь имел нормальную визуализацию, слоистую структуру, округлую или овальную форму, стенка утолщена и гиперэхогенна, а его содержимое анэхогенно.

При УЗИ почек было выявлено, что органы имели в пределах нормы форму, контуры и визуализацию, но нечеткие границы и корково-мозговую дифференциацию; размер почек был увеличен, лоханка расширена, паренхима утолщена, а эхогенность кортекса и мозгового слоя снижена.

Результаты УЗИ подтверждали наличие в печени патологии по типу острого гепатита, а в почках - острой почечной недостаточности.

2.7 Оценка эндогенной интоксикации по параклиническим тестам

Эндогенная интоксикация - это процесс, обусловленный накоплением в кровяном русле токсических веществ в концентрациях, превышающих функциональные возможности естественных систем обезвреживания с последующим повреждением других органов и систем организма. Для её оценки при бабезиозе мы рассчитали индексы, используя показатели клинического анализа крови (табл.3).

Мы установили, что при бабезиозе информативную значимость имели лейкоцитарный индекс интоксикации с поправочными коэффициентами (ЛИИ) (В.К. Островский, 2006); индекс соотношения лейкоцитов и СОЭ (ИЛСОЭ); индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ); индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ), величины которых более чем в 2 раза отклонялись от значений контроля.

Таблица 3 - Интегральные индексы крови собак, (Х±sx)

Показатель	Группы животных, n=20
	Контрольная	I опытная	II опытная
ИК ()	2,18±0,04	2,37 ±0,06	2,85±0,08*
ЛИИ ()	0,70±0,02	0,30±0,01*	0,32±0,01*
ЯИ ()	0,13±0,01	0,26 ±0,01*	0,36±0,01*
ИСЛК ()	2,04±0,05	2,24±0,05	2,33±0,06
ИЛСОЭ ()	0,39±0,02	1,32± 0,10	1,95±0,07*
ИЛГ ()	4,27±0,05	3,79±0,02	3,94±0,02
ЛИ ()	0,46±0,01	0,43±0,01	0,34±0,01*
ИСНМ ()	15,75±1, 19	8,71±0,41*	6,25±0,22*
ИСЛМ ()	7, 20±0,50	3,68±0,14*	2, 19±0,07*

Примечание: * - р<0,05-0,001 по отношению к показателям в контрольной группе

В то же время лейкоцитарный индекс (ЛИ); лимфоцитарно - гранулоцитарный индекс (ИЛГ); индекс сдвига лейкоцитов крови (ИСЛК); индекс Кребса (ИК) и ядерный индекс Г.Д. Даштаянца (ЯИ) незначительно снижались при инвазии и в силу этого не имели информативной значимости.

Таким образом, патогенез бабезиоза собак сопровождается эндогенной интоксикацией, степень выраженности которой можно оценить с помощью морфогематологических индексов: ЛИИ, ИЛСОЭ, ИСНМ и ИСЛМ.

2.8 Модель патогенеза острой формы спонтанного бабезиоза собак

В основе патогенеза острой формы спонтанного бабезиоза собак лежит развитие гемолитической анемии в результате гемолиза эритроцитов за счёт паразитирования бабезий и действия антиэритроцитарных IgG-антител (Л.Ю. Карпенко, 1998; В.В. Долгов, С. А Луговская., В.Т. Морозова, 2001), что ведёт к гипоксии (рис.2), характеризующейся количественным и качественным дефицитом гемоглобина, регистрируемым по снижению величин МСН, МСНС, МСV и ЦП, активацией эритропоэза, устанавливаемой по увеличению количества ретикулоцитов в периферической крови.

В организме собак в условиях гипоксии возрастает активность митохондрий (регистрируется по повышению концентрации АсАТ). Однако обменные процессы протекают преимущественно в анаэробных условиях (увеличение ЩФ и креатинина), что в первую очередь сказывается на количестве образующейся энергии и клетки начинают испытывать энергетический "голод". Для покрытия энергозатрат активируется глюконеогенез, снижается биосинтетическая активность клеток печени, почек и всего организма в целом.

Рисунок 2 - Модель патогенеза острой формы спонтанного бабезиоза собак

Об этом свидетельствует снижение концентрации общего белка и альбуминов; повышение скорости метаболизма аминокислот, регистрируемое по активности АлАТ, ГГТ, АсАТ и количеству мочевины. В совокупности данные причины способствуют накоплению в клетках организма кислых продуктов (ацидоз).

Гипоксия инициирует расширение капилляров с замедлением местного кровотока, что обеспечивается снижением тромбоцитов; нарушаются сократительная, секреторная функции клеток на фоне повышения их проницаемость ("синдром цитолиза"). Белки крови выходят в межклеточную жидкость, дополнительно влияя на уровень гипопротеинемии и гипоальбунемии.

Таким образом, развитие гепато - (по типу гепатита) и нефропатологии (по типу острой почечной недостаточности) является результатом декомпенсации гипоксии, что проявляется в виде дистрофических и даже некробиотических изменений клеток в условиях ацидоза. Именно дефицит кислорода обуславливает развитие патологических изменений в почках и печени, так как ткани данных органов мало устойчивы к кислородному голоданию.

2.9 Алгоритм оценки метаболического состояния организма собак при бабезиозе

На следующем этапе нашей работы мы попытались проверить оптимальность набора параметров в полученных нами тест-системах. При этом мы исходили из того, что в основе развития любой патологии лежит борьба за пространство и условия обеспечения всем необходимым. Объединяющей единицей является система кровообращения, а самое главное, состав крови, выполняющий функцию информационной среды.

Исходя из этого, за теоретическую точку отсчёта в лабораторном анализе мы взяли показатели красной крови (RBC, Hb, Ht), так как жизненный цикл бабезий проходит в эритроцитах и связан с их гемолизом, что сказывается на уровне гемоглобина и эритроцитарной массы в крови. Поэтому количественные и качественные характеристики RBC, Hb и Ht лежат в основе развития гипоксии, определяющей выраженность гепато - и нефропатологии.

С этой целью мы определили корреляционную взаимосвязь гематологических и биохимических показателей у здоровых собак и инвазированных бабезиями. Наибольшее количество статистически значимых корреляций было установлено в группе здоровых животных. При бабезиозе их доля резко снижалась, но сохранялась скореллированность с АлАТ, АсАТ, ГГТ, общим белком, мочевиной и креатинином. Это позволило нам отнести данные биохимические показатели к приоритетным, и использовать их для оценки метаболического состояния организма собак, лежащего в основе развития гепато - и нефропатологии, так как: а) активность АсАТ, отражает интенсивность катаболических процессов и митохондрий; б) активность АлАТ характеризует напряженность анаболических реакций; в) активность ГГТ эквивалентна скорости заимствования аминокислот в клетках организма для биосинтетических процессов; г) концентрация общего белка отражает скоординированность процессов анаболизма и катаболизма; д) содержание мочевины и креатинина является индикатором интоксикации организма.

Таким образом, мы установили, что при бабезиозе ферменты АсАТ, АлАТ, ГГТ изменяют свою активность, что с точки зрения единства метаболизма в живом организме - основа для сохранения физиологической концентрации общего белка, а с клинической - степени выраженности повреждений гепатоцитов. Аналогично, мочевина и креатинин - отражают общий пул аминогрупп, а с клинической точки зрения - выраженность почечной патологии.

2.10 Информативность алгоритма оценки метаболического состояния организма собак

При оценке характера корреляционной взаимосвязи гематологических и биохимических показателей, мы установили, что наибольшей информативностью обладают: АлАТ, АсАТ, ГГТ, общий белок, мочевина и креатинин.

Поэтому мы попытались проверить правильность полученных выводов на практических примерах.

Таблица 4 - Тест-система оценки биохимических показателей

Показатель	Исход инвазии	Показатель	Исход инвазии
	летальный	благоприятный		летальный	благоприятный
Об. белок	v	N	ГГТ	^^^	N; ^
АлАТ	^^^	^^^	Креатинин	^^^	^^^
АсАТ	^^^^	^^	Мочевина	^^^	^^^
Де Ритиса	Более 1,3	менее 0,7

Примечание: N - соответствует границам физиологической нормы; ^ - увеличено незначительно; ^^ - умеренно увеличено; ^^^ и ^^^^ - сильно увеличено; v - понижено

На первом этапе мы сравнили между собой первичные анализы крови собак с летальным и благоприятным исходом инвазии (III серия эксперимента), учитывая только данные биохимические показатели (табл.4). При летальном исходе клеточный метаболизм в организме животных имеет катаболическую направленность в условиях энергодефицита, что характеризуется снижением концентрации общего белка ниже нормы на фоне увеличения уровня мочевины и креатинина, приоритетного возрастания активности АсАТ по сравнению с АлАТ (коэффициент де Ритиса более 1,3 усл. ед.), повышения активности ГГТ.

В случае благоприятного исхода бабезиоза в организме собак хотя и наблюдается эндогенная интоксикация (повышение концентрации мочевины, креатинина), но сохраняется анаболическая направленность обменных процессов, для которых характерно сохранение концентрации общего белка и активности ГГТ в пределах нормы, приоритетное повышение активности АлАТ по сравнению с АсАТ (коэффициент де Ритиса менее 0,7 усл. ед.).

Данные различия в изменении биохимических показателей определяют механизмы адаптации в организме животных, что влияет на исход болезни.

На следующем этапе мы оценили информативность алгоритма оценки метаболического состояния организма собак в ходе лечения острой формы спонтанного бабезиоза (табл.5,6).

После начала лечения через двое суток у опытных собак исчезала диарея, нормализовалась ректальная температура, появлялся интерес к воде. Однако цвет слизистых по-прежнему был желтушный. Печень при пальпации характеризовалась болезненностью и увеличением каудальных границ органа.

Таблица 5 - Динамика показателей алгоритма в ходе лечения, (Х±sx)

Показатель	I опытная группа, n=10
	До лечения	5-е сутки	10-е сутки
Общий белок, г/л	51,26±0,54	53,4±0,39	55,4±0,23*
АлАТ, U/L	124,3±0,74	112,3±0,53	67,0±0,59*
АсАТ, U/L	84,2±1,004	78,6±0,72	51,0±0,30*
Коэф. де Ритиса	0,66±0,01	0,70±0,006	0,76±0,007*
ГГТ, U/L	8,2±0,30	9,7±0,17	8,2±0,31
Мочевина, ммоль/л	16,9±0,23	9,0±0,16*	8,0±0,21*
Креатинин, ммоль/л	184,2±0,75	139,6±0,51*	119,0±0,28*

Примечание: * - р<0,05-0,001 статистическая достоверность различий по отношению к показателям до лечения

Через трое суток терапии животные были малоподвижны, у них появлялся слабый аппетит, видимые слизистые оболочки оставались желтушными. На пятые сутки нормализовался аппетит, собаки стали более активными, слизистые оболочки по-прежнему оставались желтушны.

Через 10 суток после проведенной терапии у животных обеих групп нормализовался аппетит, животные были активны, слизистые оболочки были или розовато-желтые, или бледно-розового цвета.

Таблица 6 - Динамика показателей алгоритма в ходе лечения, (Х±sx)

Показатель	II опытная группа, n=10
	До лечения	5-е сутки	10-е сутки
Общий белок, г/л	48,85±0,32	52,100±0,28	56,80±0, 20*
АлАТ, U/L	128,80±0,62	91,88±0,24*	64,80±0,33*
АсАТ, U/L	87,50±0,28	63,4±0,28*	46,40±0,22*
Коэф. де Ритиса	0,68±0,005	0,69±0,003	0,72±0,005
ГГТ, U/L	10,00±0,22	11,40±0, 20	8,60±0,18
Мочевина, ммоль/л	18,90±0,16	8,60±0,15*	7,40±0,17*
Креатинин, ммоль/л	212,30±0,47	130, 20±0,34*	112,60±0,24*

Примечание: * - р<0,05-0,001 статистическая достоверность различий по отношению к показателям до лечения

Тенденция изменений биохимических показателей крови в ходе лечения собак опытных групп была однотипной и характеризовалась постепенной нормализацией их уровня. Следовательно, комплексные схемы лечения, хотя и различаются по входящим в их состав антиоксидантным препаратам (гамавит, лигфол), но оказывают выраженный положительный эффект.

Соотношение биохимических показателей, а также характер их изменений свидетельствует об анаболической направленности метаболических процессов в организме собак в ходе лечения.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют, что предложенный нами алгоритм оценки метаболического состояния организма собак отражает характер и направленность метаболических процессов при бабезиозе собак и может быть использована в ветеринарной практике для прогнозирования исхода заболевания и мониторинга лечения.

Выводы

1. Сезонная динамика бабезиоза собак в г. Магнитогорске имеет характер двухвершинной кривой с ярко выраженным пиком инвазии в мае и менее резко выраженной вспышкой заболеваемости в сентябре и октябре. На уровень заболеваемости также влияет: пол, возраст и порода животных. Наивысший уровень смертности от бабезиоза наблюдается у щенков до 1 года.

2. Наиболее неблагоприятными по бабезиозу собак в г. Магнитогорске за период 2008-2010 г. г. являлись Правобережный и Ленинский районы, в которых уровень заболеваемости составил, соответственно, 25,8-28,2 и 33,9-36,3%.

3. В патологический процесс при острой форме спонтанного бабезиоза собак вовлекается печень и почки, в которых развиваются поражения, соответственно, по типу острого гепатита и острой почечной недостаточности. Основой патогенетической причиной гепато - и нефропатологии является развитие гипоксического и гиперметаболического энергодефицита.

4. Функциональное состояние организма собак при бабезиозе, определяющее характер нарушений функций печени и почек можно охарактеризовать с помощью оптимизированных тест-систем.

а) Тест-система клинического анализа крови характеризуется резким снижением, по сравнению с физиологической нормой, количества эритроцитов, гемоглобина, гематокрита, среднего содержания гемоглобина в эритроците, средней концентрация гемоглобина в эритроците, среднего объёма эритроцита, цветного показателя; увеличением СОЭ, ретикулоцитов, лейкоцитов, эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов и моноцитов при нормальном содержании тромбоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов.

б) Тест-система биохимического анализа крови характеризуется сохранением физиологической концентрации общего белка, альбуминов, холестерина и активности ГГТ на фоне увеличения активности АлАТ, АсАТ, ЩФ, содержания мочевины, креатинина, общего и прямого билирубина, величины белково-осадочной пробы.

в) Тест-система анализа мочи включает следующее: моча изменяет цвет, прозрачность, плотность, содержит высокую концентрацию белка, билирубина и уробилиногена при нормальном содержании глюкозы, эритроцитов и лейкоцитов в мочевом осадке.

г) Тест-система ультразвукового строения печени свидетельствует, что в пределах физиологической нормы сохраняется визуализация органа, его форма и контуры, но изменяется топография, границы, визуализация капсулы и желчных протоков, эхоструктура, эхогенность паренхимы, сосудистый рисунок; желчный пузырь хотя и визуализируется, как в норме, но изменяет свою форму, толщину стенки, контурность и эхогенность содержимого.

д) Тест-система ультразвукового строения почек характеризуется физиологичностью визуализации органа, формы и контуров на фоне изменения размера, границ, состояния паренхимы, эхогенности капсулы, кортекса, и мозгового слоя, корково-мозговой дифференциации и лоханки.

5. Наибольшей информативностью из биохимических показателей крови в оценке метаболического состояния организма собак, эквивалентного степени тяжести гепато - и нефропатологии при острой форме спонтанного бабезиоза являются общий белок, мочевина, креатинин, активность АлАТ, АсАТ и ГГТ, с помощью которых можно прогнозировать исход заболевания и вести мониторинг лечения.

6. Уровень эндогенной интоксикации в организме собак при бабезиозе отражают: лейкоцитарный индекс интоксикации с поправочными коэффициентами (0,30-0,32 усл. ед. против, 0,70-0,82); индекс соотношения лейкоцитов и СОЭ (1,32-1,95 усл. ед. против 0,29-0,39); индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (6,25-8,71 усл. ед. против 12,60-15,75); индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (2, 19-3,68 усл. ед. против 5,80-7, 20).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для прогнозирования исхода бабезиоза собак использовать алгоритм оценки метаболического состояния организма собак, включающего определение концентрации общего белка, мочевины, креатинина, активности АлАТ, АсАТ и ГГТ. Если на фоне высокого содержания в крови мочевины, креатинина уровень общего белка ниже границ физиологической нормы и резко возрастает активность ГГТ, АсАТ и АлАТ (коэффициент де Ритиса более 1,3 усл. ед.) - исход неблагоприятный. Если, несмотря на высокий уровень мочевины, креатинина, активности АлАТ и АсАТ (коэффициент де Ритиса менее 0,7 усл. ед.), в крови сохраняется концентрация общего белка и активность ГГТ в пределах нормы - исход благоприятный.

2. Для оценки уровня эндогенной интоксикации в организме собак при бабезиозе предлагаем использовать лейкоцитарный индекс интоксикации, величина которого составляет 0,30-0,32 усл. ед. (норма 0,70-0,82 усл. ед); индекс соотношения лейкоцитов и СОЭ равный 1,32-1,95 усл. ед. (норма 0,29-0,39 усл. ед); индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов - 6,25-8,71 усл. ед. (норма 12,60-15,75 усл. ед.); индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов - 2, 19-3,68 усл. ед. (норма 5,80-7,20 усл. ед.).

3. Теоретические и практические аспекты диссертационной работы могут быть использованы в учебном процессе профильных государственных образовательных учреждений высшего профессионального образования, написании монографий, справочников и учебных пособий.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Самойлова, Е.С. Из опыта применения антиоксидантов в комплексной схеме лечения бабезиоза собак [Текст] / Е.С. Самойлова, М.А. Дерхо // Ветеринарный врач. - 2009. - № 1. - С.13-16.

2. Самойлова, Е.С. Интегральные индексы интоксикации как критерий оценки уровня эндогенной интоксикации при бабезиозе [Текст] / М.А. Дерхо, Е.С. Самойлова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 207. - С.170-177.

3. Самойлова, Е.С. Оценка сопряженности воспалительного процесса в почках с гематологическими показателями при бабезиозе собак [Текст] / М.А. Дерхо, Е.С. Самойлова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 207. - С.177-182.

4. Самойлова, Е.С. Биохимическая оценка функций печени при бабезиозе собак [Текст] / Е.С. Самойлова, М.А. Дерхо // Ветеринарная клиника. - 2007. - № 10. - С.26-28.

5. Самойлова, Е.С. Клиническая диагностика бабезиоза собак [Текст] / Е.С. Самойлова, М.А. Дерхо // Ветеринарная клиника. - 2008. - № 7. - С.16-18.

6. Самойлова, Е.С. Биохимические особенности патогенеза бабезиоза собак [Текст] / Е.С. Самойлова // Мат-лы межд. науч. - практ. конф.: сб. науч. тр. - Троицк: УГАВМ, 2008. - С.142-145.

7. Самойлова, Е.С. Морфологические особенности крови при бабезиозе собак [Текст] / Е.С. Самойлова // Мат-лы межд. науч. - практ. конф.: Сб. тезисов. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им.К.И. Скрябина, 2008. - С.118.

8. Самойлова, Е.С. Некоторые физические и химические свойства мочи при бабезиозе собак [Текст] / Е.С. Самойлова // Мат-лы научно-практ конф. молодых учёных и специалистов, Троицк: УГАВМ, 2008. - С.53-56.

9. Самойлова, Е.С. Особенности работы почечного фильтра при бабезиозе собак [Текст] / Е.С. Самойлова // Вестник Тюменской государственной сельскохозяйственной академии. - 2009. - № 4 (11). - С.61-63.

10. Самойлова, Е.С. Опыт применения лигфола при лечении бабезиоза собак [Текст] / Е.С. Самойлова // Мат-лы межд. науч. - практ. конф., посв.80-летию каф. анатомии и гистологии с. - х. животных. Троицк: УГАВМ, 2009. - С.161-163.

11. Самойлова, Е.С. Роль биохимических показателей крови в клиническом обследовании собак при бабезиозе [Текст] / Е.С. Самойлова // Мат-лы межд. научно-практ конф., посвященной 80-летию УГАВМ, Троицк: УГАВМ, 2009. - С.144-146.

12. Самойлова, Е.С. Некоторые биохимические аспекты патогенеза бабезиоза собак [Текст] / Е.С. Самойлова // Мат-лы ХХVII Московского межд. вет. конгресса. - Москва, 2009. - С.52-55.

Размещено на Allbest.ru

...