Биоэлементы в листьях тропических лекарственных растений Polyscias filicifolia (Moore ex Fournier) Bailey (Araliaceae), Ginkgo biloba L (Ginkgoaceae) и биологически активных добавок

Изучение макро- и микроэлементного состава в листьях тропических лекарственных растений Polyscias filicifolia Bailey, Ginkgo biloba L и некоторых импортных биологически активных добавок. Установление наличия в них всех жизненно-важных элементов.

Рубрика Биология и естествознание
Вид статья
Язык русский
Дата добавления 02.04.2019
Размер файла 50,0 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Полная исследовательская публикация _ Слепян Л.И., Каухова И.Е., Громова О.Н., Пивоварова Н.С.,

Власенко М.А., Яковлева М.В. и Шантырь И.И.

Размещено на http://www.allbest.ru//

80 ______ http://butlerov.com/ _______ ©--Butlerov Communications. 2014. Vol.37. No.3. P.79-84. (English Preprint)

Размещено на http://www.allbest.ru//

Биоэлементы в листьях тропических лекарственных растений Polyscias filicifolia (Moore ex Fournier) Bailey (Araliaceae), Ginkgo biloba L (Ginkgoaceae) и биологически активных добавок

Слепян Лариса Ивановна

Аннотация

Методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой проведено изучение макро- и микроэлементного состава в листьях тропических лекарственных растений Polyscias filicifolia (Moore ex Fournier) Bailey (Araliaceae), Ginkgo biloba L (Ginkgoaceae) и некоторых импортных биологически активных добавок Установлено наличие всех жизненно-важных элементов в исследованных объектах. Анализ полученных данных показал большие различия в содержании в них макро- и микроэлементов.

добавка микроэлементный тропический растение

Введение

Состав биоэлементов, входящих в лекарственные растения и фитопрепараты или биологически-активные добавки (БАД) на их основе, играет важную роль в деятельности живого организма. Макро- и микроэлементы и их концентрация в различных органах и тканях связаны с их биологической ролью и выполнением определенных физиологических функций в процессах жизнедеятельности. Биоэлементы входят в состав витаминов, ферментов, гормонов и других биологически активных веществ (БАВ), регулирующих многие биохимические процессы в клетках. Поэтому недостаток биоэлементов может вызвать нарушение гомеостаза, что приводит к снижению резервов здоровья человека и ухудшению его адаптации к неблагоприятным факторам среды [1-7]. Несбалансированность по структуре и качеству питания населения России, которая проявляется в недостаточности белкового и витаминно-минеральных компонентов также влияет на здоровье населения [8-10].

Целью настоящего исследования явилось проведение сравнительного качественного и количественного анализа макро- и микроэлементов некоторых лекарственных растений и импортных БАД, широко используемых за рубежом и рекламируемых в России с целью повышения неспецифической адаптационной реакции организма к неблагоприятным факторам среды, а также для усиления иммунитета.

Экспериментальная часть

В качестве объектов были проанализированы образцы листьев тропического растения Polyscias filicifolia (Moore ex Fournier) Bailey (Araliaceae), (шифр - листья Pol., №10), растущего в оранжерее, и листья Ginkgo biloba L (Ginkgoaceae), (шифр листья GK, №11), растущего в Ботаническом саду им. В.Л. Комарова (г. Санкт-Петербург). БАД: Плодовые тела и микориза гриба шиитаки Lentinula edodes., полученные по специальной методике в СПХФА (шифр - шиитаки - мицелий №14 и шии-таки - плодовые тела №15).

Для сравнения были выбраны импортные БАД, наиболее часто предлагаемые в России и за рубежом для поддержания здорового образа жизни:

“American Ginseng” (100% Euro Ginseng, в капсулах. NPH b.v./Euro Ginseng, Netherland. U.K. &Distributor), (шифр - Ам. Ж., №24).

“Wild Siberian Ginseng” (Root Eleutherococcus senticosus, в капсулах. Wild Grown. Nature's way products Inc. America's Botanical Expert), (шифр - Eleutherococcus, №25).

“Herba Echinacea purpurea”, в капсулах. Nature's way products Inc. America's Botanical Expert. Organical Certified, (шифр - Echinaceae., №26).

“ Кошачий коготь”, в капсулах - кора тропической лианы - Uncaria tomentosa, растущей в бассейне реки Амазонки на Перуанском нагорье. (Арт Лайф, сертифицирован по ИСО9001:2000), (шифр - Uncaria, №28).

“Порошок чеснока”, драже. Илья Рогов (Ilja RogoffR Forte. A. Nattermann& Cie. GmbH), (шифр- Рогов, №27).

Анализ элементного состава в исследуемых объектах был проведен с помощью метода масс- спектроскопии с индуктивно-связанной плазмой (ИСП-МС), обладающей высокой чувствительностью и селективностью и позволяющий определять в одной пробе содержание макро- микро и ультра-микроэлементов после специальной пробоподготовки [11]. Для проведения исследований использо-вали по 3 пробы каждого образца. Представленные данные обработаны статистически и выражены как средне арифметические со стандартным отклонением (SD). Для оценки различий между экспериментальными данными использовали критерий Стьюдента. Различия считали достоверными при уровне вероятности P ? 0.05. Аналитические исследования выполнены в научно-исследовательской лаборатории элементного анализа ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России.

Результаты и их обсуждение

Выделяют два основных пути поступления элементов в растения: это корневое, когда происходит их поглощение из почвы, и листовое (или надземными органами), которое происходит за счет поглощения элементов из воздуха. На корневое поглощение влияет ряд факторов (рH почвы и ее тип, состав почвенных вод, сезон и др.), на листовое поглощение - состав воздуха, сезонность и общая экология [12].

В процессе исследований были определены эссенциальные элементы (жизненно - важные для человека) - K, Ca, Cr, Cu, Fe, Mg, Mn, Na, Se, Zn; условно-эссенциальные (житзненно важные, но вредные в определенных дозах) - As, B, Li, Ni, Se, V и потенциально токсичные (Al, Ba, Cd, Pb, As). Учитывая большое количество данных, полученных в результате анализа исследуемых образцов, они были сгруппированы по группам элементов, выполняющих близкие функции. Полученные при анализе данные представлены в табл. 1.

Установлено, что максимальное содержание калия определено в мицелии и плодовом теле шиитаки и почти в два раза ниже концентрация этого элемента была определена для листьев полисциас. Раннее нами было показано, что содержание калия в биомассе штамма полисциас, культивируемого in vitro, было почти в 4 раза выше, чем в растении in vivo [13].

Максимальное содержание магния найдено в листьях гинкго, а в листьях полисциаса и шиитаки его концентрация была в два раза ниже. В то же время, в биомассе штамма полисциаса, культивируемого in vitro, содержание магния было практически таким же, как в исходном растении in vivo [13].

Известно, что кальций является универсальным регулятором в жизнедеятельности как растительной, так и животной клетки [14]. Он влияет на осмотическую деятельность, электрическую поляризацию анионов и реактивных групп, а также на проницаемость биомембран, определяя таким образом нормальное протекание биохимических процессов в клетке. Любое увеличение кальция воспринимается клеткой как сигнал тревоги, поэтому в клетке существует много систем быстрого удаления Ca [14].

Содержание Ca в исследуемых образцах было практически близким от 27830.0 мкг/г до 33430.0 мкг/г. Надо отметить, что в клетке наряду с Ca+2 всегда присутствуют ионы Mg+2. В клетке имеются специальные белки-рецепторы, которые отличают эти похожие между собой ионы. В зависимости от концентрации кальция они по-разному взаимодействуют с мишенями и обеспечивают Са - зависимое управление многочисленными процессами в клетке [14].

Максимальное содержание магния было определено в образцах листьев гинкго, а в остальных исследуемых образцах его концентрация была в два раза ниже (табл. 1).

Табл. 1. Содержания некоторых биоэлементов в листьях Polyscias filicifolia (Moore ex Fournier) Bailey (Araliaceae), листьях Ginkgo biloba L (Ginkgoaceae) и грибах шиитаки (мкг/г сухой массы)

Элемент

Образец, № пробы

Листья Pol., №10

Листья GK, №11

Шии-таки - мицелий, №14

Шии-таки - плод. тело, №15

Na

1627.0

964.60

1115.0

867.0

Mg

3200.0

7119.0

4276.0

3521.0

K

16150.0

2343.0

37800.0

32730.0

Ca

27830.0

36800.0

17130.0

33430.0

Mn

59.980

13.350

2309.0

1971.0

Fe

113.40

43.960

285.30

190.90

Cu

19.790

4.659

57.44

49.59

Zn

336.0

31.680 .

571.0

405.5

V

7.731

3.16

2.169

1.699

Cr

4.040

1.55

1.37

1.224

Co

0.101

0.025

0.515

0.521

Ni

0.00

0.00

14.24

16.30

Mo

0.381

0.0

25.81

17.18

Ba

28.58

101.50

7.532

5.760

B

98.22

88.39

107.90

87.40

Ge

0.125

0.066

1172.01

1048.0

Se

0.855

0.690

1.314

0.835

Таким образом, видно, что такие биоэлементы как калий и магний, которые играют значительную роль в нормализации работы сердечно - сосудистой системы, а также кальций и натрий, выполняющие в организме ведущую роль в водно-солевом обмене, присутствуют в представленных образцах в достаточном количестве.

Максимально высокое содержание марганца было определено в образцах №14 и №15. Почти в 35 раз ниже была его концентрация в листьях полисциаса и в 130 раз ниже в листьях гинкго.

В биологических системах марганец участвует в синтезе хлорофилла, катализирует некоторые окислительно-восстановительные реакции процессов дыхания и фотосинтеза. Содержание марганца в травах колеблется от 17 мг/кг до 334 мг/кг. Манганофилы могут накапливать марганец до 2000 мг/кг сухой массы [12].

Такую же закономерность можно отметить и для элемента Fe. Содержание, которого было высоким в образцах шиитаки - №14 и №15, в 2 раза ниже в листьях полисциаса и почти в 5 раза ниже в листьях гинкго. Железо в растениях представлено преимущественно в органических формах, как составная часть гемсодержащих дыхательных ферментов: цито-хромов и цитохромоксидаз. Восстановленная форма железа может реокисляться и в тканях растений железо представлено в виде комплексов с различными органическими соедине-ниями. Однако, как нами было показано раннее, в биомассе штамма полисциаса, полученной в условиях культуры тканей in vitro, содержание марганца и железа было в несколько раз выше, чем в данных образцах, что возможно, связано с наличием этих элементов в питательной среде [13].

Высокое содержание меди отмечено в образцах шии-таки, которое почти в 10 раз было выше, чем в образцах листьев гинкго и в 2.5 раза выше, чем в листьях полисциаса, но почти в 8 раз ниже, чем в биомассе этого штамма (6.253 мкг/г), как было показано нами раннее [13].

В растениях до 98-99% меди содержится в виде комплексных форм и связано с ее участием в окислительно-восстановительных реакциях. Медь входит в состав полифенолоксидазы, оксидазы и некоторых других ферментов. Содержание меди повышено в листьях, где свыше 60% этого металла сосредоточено в хлоропластах.

Максимальная концентрация цинка обнаружена в образцах шиитаки. Почти такая же концентрация этого элемента была определена нами в образцах биомассы штамма полисциаса (420.0 мкг/г), выращенной на питательной среде аналогичной для культивирования шии-таки.

Возможно, именно с этим может быть связано использование грибов шии-таки и препаратов из биомассы штамма полисциаса для коррекции иммунных состояний и профилактики онкологических и диабетических заболеваний [15].

Цинк в растениях входит в состав многих ферментов. В ферментах, выполняющих каталитическую функцию, этот металл координируется четырьмя лигандами. Три лиганда представлены аминокислотными остатками (гистидина, глутамина, аспарагина), а четвертый - молекулой воды. В ферментах, где цинк выполняет структурную функцию (алкогольдегид-рогеназа, Zn-белки, и другие), атомы цинка координированы c S-группами четырех остатков цистеина. Кроме того, цинк участвует в синтезе гетероауксина и индолилуксусной кислоты, регулирующих рост растений [16].

Для образцов листьев полисциаса характерно высокое содержание ванадия, что в 2 и 3 раза превышало этот показатель для листьев гингко и шиитаки соответственно. Содержания хрома было также максимальным в листьях полисциаса, в отличие от листьев гинкго и образцов шии-аки, в которых его содержание было почти в 4 раза ниже.

Биоэлемент молибден практически отсутствовал в листьях гингко, максимальное его содержание было в образцах - шии-таки, которое почти 15-20 раз было выше, чем в листьях полисциаса.

В растениях молибден существует как Mo+6 и Mo+4. Он может участвовать в реакциях комплексообразования, катализа, а также выполняющих структурную функцию. Молибден играет важную роль в азотном обмене растений и в процессе фиксации азота у азотфиксирующих бактерий. Он входит в состав фермента нитратредуктазы, поэтому при его недостатке в листьях накапливаются нитраты и снижается интенсивность процесса синтеза белка [16].

По содержанию кобальта образцы №14 и №15 были практически одинаковы, хотя они содержали довольно высокие концентрации данного элемента, но оно не превышало нормативных показателей для БАД или продуктов диетического питания в соответствии с требованиями Сан ПИН [9, 17]. В листьях полисциаса и гинкго показатели содержания кобальта были в 5 и 20 раз ниже соответственно, чем в образцах шии-таки.

Кобальт в тканях растений находится как в ионной Со2+ и Со3+, так и комплексной формах. Долгое время кобальт рассматривался как элемент, необходимый только для живот-ных и микроорганизмов. В настоящее время кобальт относят к биоэлементам необходимым и для высших и низших растений, основная функция которого связана с его участием в фик-сации атмосферного азота в клубеньках бобовых и не бобовых растений.

Содержание бария было максимальным в листьях гинкго, что почти в 5 раз и в 20 раз превышало его содержание в образцах листьях полисциаса и в образцах шии-таки.

Содержание бора во всех образцах было почти одинаковым (табл. 1). Бор принимает участие в углеводном, белковом обмене, в поглощении воды и синтезе пектинов, входящих в состав клеточных стенок. Этот элемент для многих растений требуется в течение всего периода вегетации, так как необходим для развития активно делящихся тканей, или меристем [16].

Биоэлемент германий был определен в образцах листьев полисциаса, в 1000 раз было выше его содержание в образцах гриба шии-таки (табл. 1). Возможно, это связано с тем, что образцы шии-таки были получены при их культивировании их in vitro на шроте биомассы полисциаса, содержащем до 477.0 мкг/г Ge [13]. Этим может быть оправдано использование данного сырья как адаптогенного и иммуномодулирующего средства, в которых германий рассматривается как индуктор гамма - интерферона [15, 18].

Содержание элемента селена, также играющего важную роль в поддержании иммуни-тета, было максимальным в образцах шии-таки и в листьях полисциаса, но в два раза ниже, чем в листьях гинкго.

В табл. 2 представлены показатели содержания биоэлементов в некоторых БАД, широ-ко рекламируемых в России и за рубежом [19, 20]. Анализируя данные, представленные в табл. 2, можно отметить, что максимальное содержание всех биоэлементов было определено для образца №24 - “Американский женьшень”. Повышенным содержанием таких элементов как Na, K, Mo, Ge, B и Se отличался образец №28 - “Кошачий коготь “, в котором содержание этих элементов было выше, чем в остальных образцах.

Для образца №27 - “Чеснок“, напротив, большинство биоэлементов находились на минимальном уровне в сравнении с другими. Однако содержание германия в данном пре-парате выше, чем во всех остальных образцах, что подтверждает известные данные об имму-номодулирующем действии чеснока, а также рекомендации его применения для профилак-тики онкологических заболеваний и диабета [18]. Чем возможно обусловлен и широкий спектр использования этой добавки в Европе и в США.

Табл. 2. Содержания биоэлементов в БАД (мкг/г cухой массы)

Элемент

№ пробы, образец

№24, Ам.

женьшень

№25, Элеутерококк -

Eleutherococcus

№26, Эхинацея -

Echinaceae

№27,

“Чеснок”

№28, “Кошачий

коготь”

Na

2935.0

225.7

132.6

257.6

4576.0

Mg

55090.0

1949.0

1805.0

1623.0

1365.0

K

93520.0

6060.0

5533.0

4630.0

15200.0

Ca

95580.0

26080.0

22000.0

961.0

6474.0

Mn

5275.0

94.640

85.360

5.567

349.0

Fe

2649.0

174.80

226.40

18.880

177.70

Cu

2037.0

40.630

23.14

2.819

23.04

Zn

17770.0

76.610

40.86

17.23

153.2

V

26.590

5.276

3.167

1.749

3.273

Cr

78.86

2.166

1.176

1.027

1.295

Co

1.729

0.494

0.614

0.057

0.394

Ni

2.987

0.0

0.0

0.0

182.1

Mo

83.04

0.717

0.29

0.0

6.028

Ba

0.515

35.03

33.42

4.405

4.621

B

104.6

15.4

13.43

1.841

37.38

Ge

3.01

0.279

0.175

0.109

37.83

Se

72.95

0.811

0.489

0.756

1.005

По содержанию таких биоэлементов как натрий, магний и калий образцы №25, 26 и 27 имели близкие значения. Содержание кальция было максимальным в №24 и в 5 раз превосходило таковое в образцах элеутерококка и эхинацеи, но в 100 раз было ниже, чем в образце №27.

Содержание марганца и железа было близким для образцов №25 и №26. Концентрация меди и цинка была в два раза выше в элеутерококке, чем в эхинацеи. Это же можно отметить и для элементов ванадия и хрома, которые часто используют в препаратах для коррекции диабетических состояний [5].

Содержание бария, напротив, в 30 раз было выше в элеутерококке и эхинацеи по сравнению с образцом американского женьшеня и образцами №27 и №28. Несмотря на достаточно высокий уровень некоторых биоэлементов в исследуемых образцах содержание их также не превышало рекомендуемых норм суточного потребления в пищевых продуктах [9, 17].

Особенно хочется отметить, что содержание тяжелых металлов, которым уделяется особое внимание, как для лекарственного сырья, так и для препаратов на их основе и БАД, во всех исследуемых образцах их содержание было либо в пределах допустимых норм, либо они отсутствовали [9]. Так по содержанию As (мкг/г) их можно расположить в следующей последовательности: “Американский женьшень” - 2.600; “Эхинацея” - 1.831; “Элеутерококк” - 1.418; листья полисциаса - 0.605; Шии-таки - 0.503; листья гинкго - 0.31 [3]. По содер-жанию Sn мкг/г: листья полисциаса - 0.180; листья гинго-0.177; “Кошачий Коготь” - 0.105; “Американский женьшень” - 0.369; “Эхинацея” - 0.065; “Элеутерококк” - 0.061; “Чеснок” - 0.009. По содержанию Hg, мкг/г: “Кошачий коготь” - 0.208; листья полисциас - 0.145; “Аме-риканский женьшень” - 0.048; листья гинкго - 0.036; “Элеутерококк” - 0.018; “Эхинацея” - 0.017; “Чеснок” - 0.001.

Таким образом, имея четкую картину качественного и количественного содержания макро- и микроэлементов, можно более рационально использовать данное сырье и пищевые добавки как для корректировки их дефицита в продуктах питания, так и для профилактики некоторых заболеваний.

Выводы

Методом ИСП-МС проведено изучение макро- и микроэлементного состава листьев - Polysciasa filicifolia Bailey (Araliaceae) и листьев Ginkgo biloba L. (Ginkgoaceae), гриба шии-таки, а также БАД: “American Ginseng” (100% Euro Ginseng., Manufacture. NPH b.v./Euro Ginseng, Netherlands. U.K. Grover&Distributor); “Wild Siberian Ginseng” (Root Eleutherococcus senticosus, U.K. Grover & Distributer, Nature's way products Inc. America's Botanical Expert); “Herba Echinacea purpurea” (Nature's way products Inc. America's Botanical Expert. Organical Certified); “Кошачий коготь” (Кора тропической лианы - Uncaria Tomentosa, Арт Лайф. сертифицирован по ИСО9001:2000); “Порошок чеснока”, драже. Илья Рогов. (Ilja RogoffR Forte. A. Nattermann&Сie. GmbH.). В исследуемых образцах установлено наличие всех жиз-ненно важных элементов, но наблюдали большие различия в их содержании.

Литература

Абдрахманова Е.Р. Биосреды человека и болезни в условиях антропогенеза Проблемы экологии: Принципы их решения на примере Южного Урала. Под ред. Н.В. Старовой. М.: Наука. 2003. С.86-96.

Агаджанян Н.А., Скальный А.Б. Химические элементы в среде обитания и экологический портрет человека. М. Изд. КМК. 2001. 83с.

Бабешина Л.Г., Рыжакова Н.К., Колоколова А.П. Экологическая безопасность лекарственного растительного сырья. Научн.- методич. конф. “11- Гаммермановские чтения“ 03.02 - 06.02.2014.- Сб. науч. тр. СПб. 2014. С.34-36.

Куркин В.А., Евстратова Р.И, Запесочная Г.Г. Фенольные соединения Eleutherococcus senticosus. Химия природ. соединений. 1991. №6. С.854-856.

Скальный А.В., Рудаков И.А. Биоэлементы в медицине. М.: Издательский дом “Оникс 21 век“ Мир. 2004. С.272.

Трубина М.Р., Воробейчик Е.А. Содержание тяжелых металлов в лекарственном сырье в зоне аэротехногенного воздействия среднеуральского медеплавильного завода. Раст. рес. 2013. Т.49. Вып.2. С.203-223

V.A. Dadali. Naturmetabolomic as the molecular basis of working out of natural biological active composition. The 17-th Congress Phytopharm. Abstracts. Book Vena. 2013. T.1. Suppl. P.26-27.

Истомин А.В., Т.В. Юдина. Гигиеническая оценка и прогноз состояния фактического питания отдельных групп населения России. Гигиена и санитария. 1996. №4. С.17-19.

Сан ПИН 2.3.2.1078-01 Продовольственное сырье и продукты пищевые. М. 2006. с доп. 2009.

Скальная М.Г., Нотова С.В. Макро- и микроэлементы в питании современного человека: эколого-физиологические и социальные аспекты. М.: РОСМЭМ. 2004. 310с.

Подунова Л.Г., Скачков В.Б., Скальный А. В., Демидов В.Д., Скальная М.Г., Серебрянский Е.П., Грабескис А.П., Кузнецов, В.В., Тимофеев П.В. Методика определения микроэлементов в диагностируемых биосубстратах атомной спектрометрией с индуктивно связанной аргоновой плазмой. Методические рекомендации, утв. ФЦ ГСЭН 29.01.2003.

Петриченко В.М., Сухинина Т.В., Фурса Н.С., Запоров А.Ю., Жекин А.В. Макро- и микроэле-ментный состав Euphrasia brevipila Burnat et Gremli. Раст. рес. 2003. Т.39. Вып.3. С.111-115.

Слепян Л.И., Кириллова Н.В., Каухова И.Е., Громова О.Н. Биоэлементный состав некоторых штаммов лекарственных растений семейства Аралиевых (Araliaceae). Бутлеровские сообщения. 2013. Т.36. №11. С.128-134

Гусев Н.В. Внутриклеточные Ca-связывающие белки. Часть 1. Классификация и структура. Соровский образовательный ж. 1998. №5. С.2-10.

Трилис Я.Г., Давыдов В.В. Новые сведения о механизмах адаптогенного действия препаратов культуры тканей Panax ginseng и Polyscias filicifolia. Раст. рес. 1995. В.3. С.19-35.

Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Изд. “Наука“. 1964. С.270.

Тутельян В.А., Суханов Б.П. Биологически активные добавки к пище: законодательно-нормативная база оборота в Российской Федерации. Вестник СПб медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2007. №2. С.77-85.

Лукевиц Э.Я., Гар Т.М., Миронов В.Ф. Биологическая роль соединений германия. Рига: Зинанте. 1990. С.1-94.

Шилина Т.С. Изучение аминокислотного и элементного состава грудного сбора № 3. Н.- мето-дич. конф. “11- Гаммермановские чтения”. 03-06.02.2014. Сб. научн. тр. СПб. 2014. С.134-136.

R.H. Bauer. Wagner. Echinaceae: Handbuch fur Artze, Apotheker und andere Naturwissenchaftler. Stuttgart. 1990.

Размещено на Allbest.ru

...

Подобные документы

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.