Особенности гена фактора некроза опухоли-А у больных ишемической болезнью сердца узбекской популяции

Размещено на http://www.allbest.ru

Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр терапии и медицинской реабилитации, г. Ташкент, Республика Узбекистан

Особенности гена фактора некроза опухоли-А у больных ишемической болезнью сердца узбекской популяции

Аляви Анис Лутфуллаевич - академик, руководитель проекта;

Алиахунова Мавжуда Юсуповна - доктор медицинских

наук, профессор, главный научный сотрудник;

Туляганова Дилдора Каримовна - кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник;

Нуритдинова Севара Каримовна - кандидат медицинских наук

старший научный сотрудник, отдел кардиологии,

Аннотация

В статье приведены данные по исследованию частоты полиморфных аллелей и генотипов промотора гена ТЫК-а г'1800630, в крови здоровых лиц и больных ИБС узбекской популяции. Проведённый нами анализ полиморфизма С-863-А гена ФНО-а выявил генетические особенности, влияющие на риск развития ИБС. В перспективе типирование генетических маркеров, включая ФНО-а, позволит более четко прогнозировать риски развития патологии в группах лиц, предрасположенных к развитию сердечно-сосудистых заболеваний, и в группах диагностированной ИБС. Ключевые слова: ишемическая болезнь сердца, фактор некроза опухоли-а, полиморфизм генов.

Основная часть

Ишемическая болезнь сердца (ИБС), остается наиболее социально значимым мультифакторным заболеванием, обусловливающим наибольшую смертность среди населения в большинстве развитых стран [1].

Примечательно, что использование современных достижений в исследовании генома человека в клинической кардиологии сделали реальной раннюю, досимптомную диагностику не только генных, но и многих мультифакториальных заболеваний [2, 15].

В последние годы научные исследования механизмов инициации и прогрессирования ИБС направлены на оценку генетических факторов развития этого синдрома. Это перспективный подход в связи с тем, что выявляется генетический риск и прогнозируются осложнения заболевания до появления клинических проявлений [3, 4].

Многочисленные данные о влиянии факторов воспаления на развитие и течение атеросклероза привлекли интерес ученых к изучению генов, кодирующих их структуру. Фактор некроза опухолей-альфа (ФНО-а) -- провоспалительный цитокин, обладающий широким спектром биологических эффектов на организм [8]. Многообразные эффекты ФНО-а обуславливают его участие в формировании различных патологических состояний, таких как аутоиммунные, инфекционные, сердечно-сосудистые и другие заболевания [17, 20].

Его концентрация повышается в сыворотке у больных, как с нестабильной, так и стабильной стенокардией ГГГ-ГУ функционального класса [9, 10]. Уровень циркулирующего в крови ФНО-а генетически регулируется. Ген ФНО-а расположен на 6-й хромосоме, позиции 6р 21,1-21,3 внутри кластера генов МНС между ИЬА-Б и HLA-DR генами.

Известно более 30 полиморфных вариантов генов (ОНП - однонуклеотидные полиморфизмы) [21]. Наибольший интерес исследователей вызвал ОНП промоторной области гена в позициях - 238-308 с заменой гуанина на аденин и -863 с заменой цитозина на аденин [7, 11]. Бразильские ученые выявили увеличение частоты мутантного генотипа в позиции -308 гена ФНО-а. В исследованиях R. АШотсеШ et а1 отмечена ассоциация -308 А с развитием ИМ и высоким уровнем в плазме маркеров ишемии и приверженности лиц, несущих -308 AG + АА генотипы к развитию ИМ с зубцами Q, чем без зубца Q [5, 12].

Известно, что у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС) уровень ФНО-а в сыворотке крови повышается, что, в свою очередь, модифицирует риск развития коронарных событий в дальнейшем. Таким образом, полиморфный вариант (863С>А) ФНО-а может рассматриваться как фактор риска ИБС и его осложнений.

Цель исследования. Изучение частоты полиморфных аллелей и генотипов промотора гена Т№-а ге1800630, в крови здоровых лиц и больных ИБС узбекской популяции.

Материал и методы исследования

В исследование включены 53 больных ИБС со стенокардией напряжения П-Ш ФК (по классификации Канадской ассоциации кардиологов), осложненной ХСН П-Ш по NYHA. Среди них мужчин было - 41 (77,3%), женщин -12 (22,6%). Средний возраст составил 61,9±5,8 лет.

Диагноз верифицировался на основании тщательного анализа клинических данных, а также клинико-инструментальных исследований, включавших ЭКГ, ЭхоКГ, общеклинических и биохимических исследований крови. Признаки хронической сердечной недостаточности П-Ш функционального класса (ФК) по NYHA выявляли в соответствие с национальными рекомендациями по диагностике и лечению ХСН [8,13]. Длительность заболевания составила 8,7±3,56 года.

Контрольную группу составили 20 добровольцев мужского пола узбекской национальности, сопоставимые по возрасту и без сердечно-сосудистой патологии.

Распределение больных по клинико-анамнестическим данным приведено в таблице 1.

Таблица 1 Распределение больных по клинико-анамнестическим данным

Критерии исключения:

1) Наличие инфаркта миокарда в течение последних 3 месяцев.

2) Наличие сопутствующей патологии сердца - врожденных и приобретённых пороков сердца.

3) Наличие тяжелой сопутствующей соматической патологии.

У всех пациентов был определен генотип по полиморфизму 863С>А гена ФНО-а. Материалом для ДНК служила венозная кровь из локтевой вены объемом 1 мл. Выделение ДНК из цельной крови осуществлялось набором реагентов Diatom™ DNA Prep 200 (производство ООО “Лаборатория ИзоГен”, Москва, Россия). Выделение ДНК проводилось по стандартному протоколу выделения ДНК с использованием набора реагентов Diatom™ DNA Prep 200.

Полимеразно-цепную реакцию проводили с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров и набора реагентов для ПЦР амплификации ДНК GenePak™ PCRCore.

Результаты и обсуждение

Анализ генотипов изучаемых полиморфизмов проводили, обрабатывая соответствующими рестриктазами ПЦР-продукты, содержащие однонуклеотидный полиморфизм.

ПЦР продукт подвергался рестрикционному анализу с использованием фермента BstBA I (НПО “Сибэнзим”) при температуре 37 С в течение 8 часов.

При анализе генотипирования ге1800630 полиморфизма гена ФНО-а. присутствие одного фрагмента весом 126 п.н. - говорит о том, что данный образец носитель гомозиготного (дикого) генотипа СС, а присутствие двух фрагментов весом = 126/103 п.н. - образец носитель гетерозиготного генотипа СА, присутствие одного фрагмента весом = 103 п.н.- образец носитель гомозиготного (мутантного) генотипа АА.

В результате проведенного нами генетического анализа среди пациентов ИБС и здоровых добровольцев обнаружено, существенное отличие встречаемости полиморфных вариантов исследуемого гена от группы контроля.

У пациентов страдающих ИБС было выявлено, что носители мутантного и гетерозиготного генотипов АА и СА составили 7,5% (п=4), наблюдается преобладание здорового генотипа СС (85%, п=45). В контрольной группе преобладание носителей здорового типа составило 65%, гетерозиготного генотипов 35%, а носители мутантного генотипа отсутствовали (табл.2).

Таблица 2 Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизм (863С>А) гена ФНО-а у больных ИБС и лиц контрольной группы

ФНО-а является ключевым медиатором формирования и прогрессирования атеросклеротических поражений сосудов и одним из главных факторов ИБС, а повышение его системной продукции рассматривают как одну из важных причин дестабилизации ИБС. Концентрация в плазме ФНО-а ассоциирована со степенью развития раннего атеросклероза и коррелирует с метаболическими и клеточными изменениями, считающимися важными для кардиоваскулярных процессов. Повышение продукции ФНО-а - раннее и центральное событие в атерогенезе [14, 15].

В независимо проведенных исследованиях анализа SNP- полиморфизма в позиции -863 выявлена корреляция с уровнем транкрипционной активности промотора гена ФНО-а, а следовательно, и с уровнем продукции ФНО-а [16]. Относительно зависимости уровня экспрессии от полиморфизма в позиции -863 данные разных исследователей противоречивы [6, 20] и, вероятно зависят от популяционных особенностей исследуемых групп. Однако определение генетических маркеров может отражать подверженность предполагаемому фактору риска в течение всей жизни пациента лучше, чем определение его концентрации в плазме, результаты которого могут изменяться со временем [4, 16].

Конечно же, результаты наших исследований требуют дальнейших исследований с использованием более большого количества больных.

Заключение

Таким образом, проведенный нами анализ полиморфизма С-863-А гена ФНО-а выявил генетические особенности, влияющие на риск развития ИБС. В перспективе типирование генетических маркеров, включая ФНО-а позволит более четко прогнозировать риски развития патологии в группах лиц, предрасположенных к развитию сердечно-сосудистых заболеваний, и в группах диагностированной ИБС.

Выявление молекулярных маркеров системного воспаления можно использовать для оценки персонифицированного прогноза развития и прогрессирования ИБС.

полиморфный ген некроз опухоль

Список литературы