Злокачественный отек у животных

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Болезни, вызываемые микробами (бактериями и бациллами), несмотря на эффективные методы борьбы с ними, все чаще наносят существенный ущерб животноводству.

Патолого-анатомические изменения при данных заболеваниях очень разнообразны и зависят от свойств возбудителя, состояния резистентности макроорганизма и условий окружающей среды.

Большинство патогенных микробов вызывают изменения, свойственные их виду. Например, возбудитель туберкулеза вызывает образование бугорков-туберкул; некробактерии - очагов некроза и т.д. Однако одни и те же микробы при различной вирулентности и локализации могут явиться причиной различных реакций организма. Например, в одном случае стрептококки обуславливают возникновение абсцессов, флегмоны, в другом - сепсис.

Поэтому диагностика заболеваний, в том числе и бактериальных, должна быть комплексной с учетом клинических признаков, результатом аллергических, серологических, бактериологических и патоморфологических исследований.

Такое заболевание как злокачественный отек относится к болезням животных, вызываемых бактериями - бактериозам. Это заболевание оказывает отрицательное влияние на выращивание сельскохозяйственных животных и получение прибыли организациями, занятыми в сфере животноводства.

Злокачественный отек у животных в виде спорадических случаев, иногда в виде небольших вспышек встречается повсеместно. Экономический ущерб от болезни сравнительно не большой.

Злокачественный отек - заболевание вызываемое группой анаэробных спорообразующих клостридий. Главнейшие из них Cl. Septicum, Cl. novyi, Cl. Perfringens, Cl. HistoliticumиCl.Sordellii.Каждый из перечисленных микроорганизмов может быть возбудителем заболевания, как в отдельности, так и в различных ассоциациях друг с другом или аэробной микрофлорой. Весьма важное значение в развитии инфекции имеет общее состояние макроорганизма. Переутомление, голодание, наличие повреждений кожи, слизистых оболочек способствуют снижению его резистентности и заражению. К злокачественному отеку восприимчивы все виды сельскохозяйственных животных но чаще всего заболевают крупный рогатый скот и лошади.

У крупного рогатого скота злокачественным отеком часто осложняются тяжелые отелы, сопровождающиеся травматизацией родовых путей.

У свиней злокачественным отеком чаще поражаются желудок, реже - кишечник. При этом стенка желудка достигает толщины 3-5 см, отечна, пронизана пузырьками газа. Слизистая оболочка нередко некротизирована, покрыта грязно-бурыми наложениями.

У всех видов животных при злокачественном отеке вследствие интоксикации наблюдаются дистрофические изменения и нарушения кровообращения в сердце, легких, печени, почках и в центральной нервной системе.

Таким образом, вопрос изучения диагностики и профилактики злокачественного отека актуален и требует к себе должного внимания в направлении разработки методов лечения, профилактики и выработки иммунитета, чем и занимается современная ветеринария.



Краткая характеристика заболевания

Злокачественный отек (лат. -- Oedemamalignum, septicaemiagangrenosa; англ. -- Malignantoedema, gasgangrena, bighead; раневой газовый отек, газовая гангрена) -- остро протекающая неконтагиозная раневая токсикоинфекция животных и человека, вызываемая группой патогенных клостридии и характеризующаяся воспалительными отеками с образованием газов, некрозом пораженных тканей и интоксикацией организма.

Злокачественный отек -- болезнь полимикробной этиологии. В развитии инфекционного процесса основную роль играют следующие виды бактерий из рода клостридий: С. septicum, С. novyi, С. perfringens, С. chauvoei (имеет значение только у овец), С. hystoliticum и С. sordellii. Из пораженных тканей чаще выделяют С. perfringens (60... 80%, чаще тип А), реже -- С. novyi (20...30%, в основном тип А), С. septicum (10...20 %), С. hystoliticum (2...20 %), реже -- другие представители патогенных клостридий. Болезнь вызывают как каждая из этих клостридий, так и их ассоциации. Другие микроорганизмы самостоятельно болезнь не вызывают, но обеспечивают более благоприятные условия для активного размножения возбудителей.

Эпизоотология. К злокачественному отеку восприимчивы овцы, лошади, мулы, ослы, крупный рогатый скот, свиньи, олени. Маловосприимчивы и заболевают редко человек, плотоядные, птицы, собаки и кошки. Зарегистрированы случаи заболевания других видов животных. Наиболее восприимчивы лошади и овцы.

Источником возбудителя инфекции служат больные животные, которые выделяют возбудитель болезни во внешнюю среду с фекалиями и истечениями.

Ворота инфекции -- раны и повреждения. Болезнь отмечается в виде спорадических случаев после ранений, оперативных вмешательств, кастрации, стрижки, обрезки хвостов и т. д., проведенных без соблюдения правил асептики и антисептики. Возникновению болезни способствуют тяжелые роды, задержание последа, выпадение матки, внесение инфекции при оказании акушерской помощи и т. д.

Патогенез. Различают инфекционную и токсическую стадии развития болезни. В инфекционной стадии происходят усиленное размножение микроорганизмов в очаге поражения (образование отека и газовая инфильтрация пораженных тканей) и быстрое распространение их по всему организму с кровью в атональном состоянии. Токсическая стадия развивается в результате действия токсинов, распространяющихся в тканях, вызывающих гибель организма от токсемии. Поражения чаще наблюдаются на участках тела с массивной мускулатурой -- круп, бедро, лопатка, спина, голова, шея, голень.

Споры возбудителей болезни, попав в поврежденную ткань, при наличии анаэробных условий прорастают, интенсивно размножаются, выделяя токсины. Микробы, токсины и продукты распада тканей всасываются в кровь, разносятся по всему организму, осложняя патологический процесс. В результате интоксикации поражаются ЦНС, дыхательный центр, нарушается сердечная деятельность и наступает смерть от интоксикации.

Течение и клиническое проявление. Длительность инкубационного периода зависит от возбудителя и локализации патологического процесса и составляет от 12 ч до нескольких дней. Течение болезни острое, особенно у овец и лошадей. Злокачественный отек протекает от 1 до 3...4, иногда до 7 дней. Летальность высокая.

Клиническое проявление и течение болезни зависят от вида животных, вида и токсичности возбудителя или их ассоциации, характера и локализации поражений. Различают послераневой злокачественный отек, послеродовой злокачественный отек, злокачественный отек сычуга ягнят, злокачественный отек головы и др.

Общие признаки: сильное угнетение, отказ от корма, учащение пульса, затрудненное дыхание, синюшность слизистых оболочек, температура тела чаще всего повышена (но может быть и в пределах нормы) на 1...2 °С, перед смертью понижается. При отсутствии лечения животные погибают в течение нескольких дней. злокачественный отек токсикоинфекция животное

Чаще всего встречается эмфизематозная форма болезни, которая характеризуется стремительно развивающейся газовой инфильтрацией пораженных тканей, быстрым увеличением объема пораженной области. При пальпации отмечается крепитация, при надавливании из раны выделяется экссудат с пузырьками газа. При этой форме болезни возбудителем чаще служит С. perfringens. Отечно-токсическая форма характеризуется быстро развивающимся отеком пораженных тканей. Отек быстро увеличивается и распространяется на окружающие ткани. Некротические процессы в мышцах и газообразование отсутствуют или слабо выражены. Очень быстро проявляются признаки общей интоксикации организма. Из патологического материала выделяют С. novyi и С. septicum. Тканерасплавляющая форма отличается резко выраженными явлениями расплавления ткани с обнажением костей. Отечность и газообразование выражены слабо. Эта форма злокачественного отека встречается очень редко, вызывается С. histolyticum.

Чаще встречается смешанная форма[5].

На рисунке 1 и 2 представлены изображения злокачественных отеков [5].

Рисунок 1 Серозное воспаление кожи, подкожной клетчатки и мышц лошади.

Рисунок 2 Серозное воспаление и некроз слизистой оболочки желудка свиньи.

Характеристика возбудителя

История открытия возбудителя

Научное описание болезни сделал Р. Кох (1881), он же выделил один из его возбудителей -- С. novyi. Л. Пастер и Жубер (1887) выделили С. septicum.

Рисунок3 фото Р. Кох

Немецкий врач и бактериолог Генрих Герман Роберт Кох родился 11 декабря 1843 года в Клаусталь-Целлерфельде. Его родителями были Герман Кох, работавший в управлении шахт, и Матильда Юлия Генриетта Кох (Бивенд). В семье было 13 детей, Роберт был третьим по возрасту ребенком. В 1862 году окончил гимназию, в том же году Роберт поступил в Геттингенский университет.

1866 год оказался для Коха богатым на события. 13 января Роберт с отличием выдержал экзамен на степень доктора медицины. 16 марта Кох выдержал государственные экзамены на практикующего врача в Ганновере. Летом участвовал в борьбе с холерой в Гамбурге. Наконец, 27 сентября Роберту было предоставлено право на врачебную практику в поселке Лангенгаген.

В 1869 году Кохи обосновались в немецком городе Раквице, где Роберт начал врачебную практику в должности ассистента в больнице для умалишенных.

В 1871 году Кох демобилизовался и в следующем году был назначен уездным санитарным врачом в Вольштейне (ныне Вольштын в Польше).

Его статьи по проблемам сибирской язвы были опубликованы в 1876 и 1877 годах при содействии ботаника Ф. Кона и патолога Ю. Конгейма в университете Бреслау. Кох опубликовал также описание своих лабораторных методов: метод культивирования микроорганизмов на биологических жидкостях, метод «висячей капли» и окрашивание бактерий анилиновыми красками.

В 1878 году Кох опубликовал классическую работу об этиологии инфекций при ранениях, в которой сформулировал знаменитую триаду, известную в медицине как «триада Коха-Генле».

«Два года с присущей ему дотошностью изучал он причины гнойного воспаления ран, открыл крохотных микробов, вызывающих смертельное нагноение; изучал он этого микроба на лабораторных животных, но так досконально, с такой точностью проследил развитие воспалительного и гнойного процесса, что выпущенная им затем брошюра на эту тему наделала много шума в медицинских кругах, - пишет М.И. Яновская. - Работа эта до сих пор является классической. В ней сформулированы три знаменитых требования, на основании которых можно установить связь данного заболевания с определенным микроорганизмом.

Р. Кох ввел в бактериологическую технику метод микрофотографирования.

Открытия Коха сразу принесли ему широкую известность, и в 1880 году он, в значительной мере благодаря усилиям Конгейма, стал правительственным советником в Имперском отделении здравоохранения в Берлине. В 1881 году Кох опубликовал работу «Методы изучения патогенных организмов», в которой описал способ выращивания микробов в твердых средах. Этот способ имел важное значение для изолирования и изучения чистых бактериальных культур.

Кох достиг величайшего триумфа 24 марта 1882 года, когда он объявил о том, что сумел выделить бациллу, вызывающую туберкулез.

В 1885 году Кох стал профессором Берлинского университета и директором только что созданного Института гигиены. А в 1891 году ученый возглавил выстроенный специально для него Институт инфекционных болезней.

В 1893 году Кох, разведшись со своей первой супругой, женился на молодой актрисе ХедвигеФрайбург.

С середины девяностых годов ученый много времени проводит в научных командировках. В 1896 году Кох с новой женой выехал в Восточную Африку, на борьбу с чумой рогатого скота. В следующем году он возглавляет экспедицию в Индию для изучения чумы. В 1899 году ученый стал во главе экспедиции по изучению малярии в Италии, на Яве и в Новой Гвинее. В 1903 году Кох отправился в Центральную Африку, на эпизоотию рогатого скота.

В 1905 году Кох за «исследования и открытия, касающиеся лечения туберкулеза» был удостоен Нобелевской премии по физиологии и медицине. В нобелевской лекции Кох сказал, что, если окинуть взором путь, «который пройден за последние годы в борьбе с таким широко распространенным заболеванием, как туберкулез, мы не сможем не констатировать, что здесь были сделаны первые важнейшие шаги».

За год до получения премии Кох ушел с поста директора Института инфекционных болезней. Но он не прекратил научную деятельность и в 1906-1907 годах возглавил экспедицию в Центральную и Восточную Африку для борьбы с сонной болезнью. Для лечения этой болезни ученый предложил атоксил.

В апреле 1909 года состоялся последний доклад Коха в Академии наук в Берлине на тему «Эпидемиология туберкулеза». 27 мая 1910 года ученый скончался в Баден-Бадене от сердечного приступа.

Морфология возбудителя его место в систематике по Берджи.

Злокачественный отек вызывается группой анаэробных спорообразующих клостридий (толстостенные грамположительные бактерии). Главнейшие из них Cl.Septicum, Cl. novyi, Cl. Perfringens, Cl. HistoliticumиCl. Sordellii.

Вегетативные клетки -- крупные, строго грамположительные, жгутиков не имеют, неподвижны (один из немногих неподвижных видов). Классические формы представлены короткими палочками с обрубленными под прямым углом концами (0,6-1,0 ? 1-1,5 мкм). Морфология может варьировать (антибиотики, ионы металлов, радиоактивное облучение), например, invitro на углеводных безбелковых средах могут образовываться коккобациллярные формы, а на белковых безуглеводных средах -- нити с заостренными концами длинной до 145 мкм. Invivo образуют капсулы (единственный капсулообразующий вид среди патогенныхклостридий). В течение некоторого времени капсулы сохраняются и при культивировании на средах, содержащих нативный белок, наиболее выражены у вирулентных штаммов, резистентных к фагоцитарным реакциям. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, в старых культурах могут быть грамотрицательными.

Споры Clostridiumperfringens крупные, овальные, расположены центрально (у С. perfringens типа А -- также субтерминально), клетка-спорангий практически не деформируется. Термоустойчивость спор серотипов В и D относительно невысока (погибают при кипячении в течение 15-30 минут), споры типов А и С более устойчивы и выживают при кипячении и даже автоклавировании в течение 1-6 ч. Спорообразование обычно имеет место в почве и кишечнике, invitro споры можно получить на щелочных средах, богатых белком и не содержащих утилизируемых углеводов (например, на свернувшейся лошадиной сыворотке). Спорообразование стимулирует прогревание при 75°С в течение 10-15 минут.

Тип А. Clostridiumperfringens типа А -- факультативный анаэроб (в сравнении с другими клостридиями) и относительно толерантен к кратковременным кислородным воздеиствиям, хотя имеются чувствительные штаммы, погибающие при воздействии О2 на культуру в течение 3 минут. Способен расти в высоких столбиках сред без герметизации вазелином.

Морфология колоний

У Clostridiumperfringens типа А значительно варьирует от условий выращивания. На плотных питательных средах обычно образуются S- и R-колонии. S-колонии круглые, сочные, куполообразные, с гладкими ровными краями, в начале роста прозрачные, напоминающие капли росы, позднее становятся мутными, серовато-белыми. R-колонии неправильной формы, бугристые, с неровными шероховатыми краями, в глубине агара напоминают комочки ваты. У некоторых штаммов отмечают слизистые М-колонии, особенно у слизистых вариантов С. perfringens типа А, образующих густую слизь на жидких средах, они напоминают S-колонии с более высоким куполом и слизистой консистенцией; представлены капсулированными клетками. Иногда можно наблюдать смешанные О-колонии.

На агареЦейсслера через 12-18 ч образует гладкие сероватые колонии с ровными краями и плотным возвышением в центре. Колонии окружены зоной гемолиза, он может быть полным либо частичным. Зона гемолиза может быть двойной: вокруг колоний полный гемолиз (за счет действия гемолизинов), на отдалении -- неполный (за счет действия лецитиназы). При контакте с кислородом колонии могут приобретать зеленоватую окраску.

На желточномагаре образует колонии, окруженные зоной перламутрового преципитата (фосфорилхолин), образующегося из лецитина куриного желтка под действием лецитиназы.

Характерный признак колоний Clostridiumperfringens типа А -- способность менять серовато-белый цвет на зеленовато-оливковый после кратковременного пребывания в аэробных условиях (может служить дифференциально диагностическим признаком).

Колонии в толще питательной среды имеют вид чечевичных зерен, дисков или комочков ваты.

Рост на жидких и полужидких средах, особенно содержащих глюкозу, происходит очень бурно с образованием Н2 и СО2, и обычно заканчивается через 8-12 ч; при стоянии среда постепенно светлеет и образуется обильный осадок, культуры Clostridiumperfringens типа А имеют характерный запах масляной кислоты. Оптимум рН 7,2-7,4, но могут расти в интервале 5,0-8,5. Первые признаки роста на среде Китта-Тароцци могут проявляться уже через 1-2 ч (особенно при 43°С); последние проявляются появлением пузырьков газа из-под кусочков печени при встряхивании. Помутнение среды и активное газообразование можно наблюдать через 4-8 ч культивирования [2].

Рисунок 4 Микрофотография окрашенных по ГрамуClostridiumperfringens



Лабораторная диагностика

Особенности взятия и пересылки патологического материала

Общие положения

1. При необходимости определить или подтвердить причину заболевания или гибели животных (включая птиц, зверей, пчел, рыб) при подозрении на инфекционную или инвазионную болезнь или на отравление необходимо взять соответствующий патологический материал и направить его в ветеринарную лабораторию для исследования.

Кроме того, в лабораторию направляют корма для различных видов исследований, а также кровь и другой материал от животных для биохимических анализов.

Во всех случаях взятия и пересылки материала необходимо руководствоваться изложенными ниже правилами, а также соответствующими инструкциями по борьбе с болезнями животных.

Взятие и пересылка патологического материала для бактериологического и вирусологического исследований

2. Патологический материал необходимо брать стерильными инструментами в стерильную посуду. Поверхность органа (ткани), от которого берут патологический материал, на месте разреза следует обжечь над пламенем или прижечь нагретой металлической пластинкой.

3. Патологический материал должен быть взят как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. Начавшееся разложение трупа может сделать его негодным для исследования.

Патологический материал отправляют в лабораторию в неконсервированном виде; в том случае, если невозможно доставить его в лабораторию в течение ближайших 24-30 часов, патологический материал посылают только в консервированном виде.

4. Для бактериологического исследования патологический материал (органы или их части) консервируют 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением или автоклавированием в течение 30 минут. Материал можно консервировать также в стерильном вазелиновом масле. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4-5 раз превышающем его объем.

5. Материал, направляемый для вирусологических исследований, консервируют 30-50%-ным раствором химически чистого глицерина на физиологическом растворе поваренной соли. Физиологический раствор предварительно стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 30 минут.

6. Небольшие трупы павших животных (поросят, ягнят, телят), а также трупы мелких животных лучше посылать целыми в непроницаемой таре.

7. Трубчатые кости посылают на исследование в целом виде, с неповрежденными концами, тщательно очистив их от мышц и сухожилий.

Кости завертывают в марлю или полотно, смоченное дезинфицирующей жидкостью (5%-ным раствором карболовой кислоты). Кости можно также посыпать поваренной солью и завернуть в полотно или марлю.

8. Кишечник перед посылкой для бактериологического и вирусологического исследований освобождают от фекальных масс, а концы кишечника перевязывают. На исследование посылают части кишечника с наиболее характерными патологическими изменениями. Кишечник помещают в банки с 30-40%-ным водным раствором глицерина или насыщенным водным раствором поваренной соли. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 5-7 раз.

9. Кал для исследования отправляют в стерильных стаканах, пробирках или банках, которые хорошо закрывают пергаментной бумагой.

От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. Кал в лабораторию должен быть доставлен не позднее 24 часов после его взятия.

10. При посылке для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 10Ч10 см. Кусочки кожи посылают в стерильной, герметически закупоренной посуде.

11. Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал для бактериологического и вирусологического исследований посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или во флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками.

12. Кровь, гной, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др. посылают для микроскопического исследования (для обнаружения в них микробов, кровепаразитов и для определения лейкоцитарной формулы) в виде мазков.

Предметные стекла предварительно кипятят в течение 10-15 минут в 1-2%-ном водном растворе соды, затем хорошо промывают чистой водой и насухо вытирают. Сухие стекла помещают в раствор спирт-эфира, взятых в равных частях, где и хранят до употребления.

У животных кровь берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц -- с поверхности гребня или подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают или выбривают, кожу тщательно протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом и затем эфиром.

Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными.

Первую каплю крови удаляют стерильной ватой (исключение делается при исследовании крови на гемоспоридиозы, когда берут для мазка первую каплю крови), а следующую свободно выступившую каплю крови берут на предварительно подготовленное предметное стекло путем быстрого и легкого прикосновения к капле поверхностью стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45°С шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла.

Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, его быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя его до края на 0,5-1 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут свежую каплю крови.

Готовые мазки крови высушивают на воздухе; подсушивать их над пламенем или на солнце не рекомендуется. В холодное время года мазки делают в теплом помещении или на стеклах, подогретых на крышке теплого стерилизатора.

Метод фиксации мазков зависит от цели исследования (см. специальную часть Правил).

Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом делают надпись с указанием номера или клички животного и даты приготовления мазка.

Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно заключать между двумя предметными стеклами. После растирания помещенного между ними материала стекла разъединяют в

противоположные стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получаются два довольно тонких мазка. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков.

Взятие крови для серологического исследования

13. У лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи.

Взятие материала для патологогистологического исследования

14. Для патологогистологического исследования материал берут от свежих трупов или убитых животных. Нужно брать те органы и ткани, где обнаружены те или иные патологические изменения. Из разных участков патологически измененных органов (тканей) вырезают тонкие, небольшие кусочки, но не более 1- 2 см толщиной. Вместе с пораженными участками ткани захватывают и граничащую с ней нормальную ткань.

При иссечении кусочка учитывают микроскопическое строение того или иного органа и ткани. Так, кусочки из почки берут с таким расчетом, чтобы попадали оба слоя -- корковый и мозговой. Из органов, имеющих во всех частях одинаковое строение, при иссечении необходимо захватывать и их капсулы.

После взятия материал тотчас помещают в фиксирующую жидкость, объем которой должен в 10 раз превышать объем взятого материала. В качестве фиксирующей жидкости лучше всего использовать 10%-ный водный раствор продажного формалина. За неимением формалина можно использовать в качестве фиксирующей жидкости 96%-ный чистый спирт. При применении спирта толщина кусочков ткани не должна превышать 0,5 см.

Фиксирующую жидкость во всех случаях через сутки необходимо заменить свежей.

Патологический материал фиксируют в стеклянной посуде. Головной, спинной мозг и другие нервные ткани лучше фиксировать в 10%-ном нейтральном формалине. Нейтрализуется формалин прибавлением в продажный формалин сухого мела или углекислой магнезии до 1/10-1/20 его объема. Для фиксации кусочков мозга можно использовать также 96%-ный спирт, жидкость Карнуа или смесь Буэн-Дюбоска.

В холодное время года во избежание промерзания при пересылке материал, профилированный в формалине, как указано выше, перекладывают в 30-50%-ный раствор глицерина, приготовленный на 10%-ном формалине, или в 70%-ный спирт, или в насыщенный раствор поваренной соли.

На банку с кусочками органов и тканей наклеивают ярлык с указанием номера или клички животного, а внутрь ее опускают этикетку из плотной бумаги или картона с написанным на ней простым (не химическим) карандашом номером животного.

Помещать в одну посуду несколько объектов исследования от разных животных можно только при том условии, если каждый из них завязывают в марлю вместе с отдельной этикеткой.

Упаковка и пересылка патологического материала

15. Трупы мелких животных, части трупов крупных животных и отдельные органы в свежем (нефиксированном) виде отправляют для исследования в лабораторию только с нарочным. Посылаемый материал, особенно от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить возможность рассеивания инфекции в пути. Перед упаковкой материал необходимо завернуть в холст или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором (фенольного креолина, лизола, известкового молока), и уложить в ящик со стружками, мякиной или опилками.

16. Части органов, жидкости, отправляемые в лабораторию почтой в фиксированном или консервированном виде, должны быть помещены в герметически закупоренную стеклянную посуду с притертой стеклянной, пластмассовой, резиновой или корковой пробкой. Пробка должна быть закреплена проволокой или бечевкой и залита менделеевской замазкой (сургучом, смолкой, парафином или воском), чтобы укупорка была непроницаемой для жидкости. Укупоренную посуду вкладывают в прочный плотный ящик и хорошо обкладывают ватой, паклей, стружками, опилками или другими упаковочными материалами.

Кости обертывают целлофаном, полиэтиленовой пленкой или смоченными в дезрастворе марлей или полотном и также упаковываются в ящики.

17. При пересылке почтой или с нарочным патологического материала от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, или явно инфицированного материала упаковка должна гарантировать доставку материала в целости и исключить возможность рассеивания возбудителей инфекции. На лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись: «Осторожно -- стекло» и «Верх».

18. Стеклянную посуду, в которой заключен посылаемый материал с подозрением на наличие особо опасных болезней (сап, сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия, перипневмония крупного рогатого скота, чума крупного рогатого скота, чума свиней, псевдочума птиц, ящур, бешенство), обязательно упаковывают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют, или опечатывают, а затем упаковывают еще в деревянный ящик.

Если такой материал доставляют с нарочным, можно отправлять его в стеклянной, герметически закупоренной посуде, без металлической коробки, но в деревянном ящике.

19. На взятый патологический материал составляют сопроводительный документ.

Если при вскрытии посылки в лаборатории будут установлены несоответствие сопроводительному документу или порча патологического материала, об этом обязательно составляют акт, копию которого отправляют ветеринарному врачу, направившему материал в лабораторию.

Для бактериологического исследования посылают в запаянных пипетках экссудат из воспаленного крепитирующего отека, а также препараты-отпечатки на предметных стеклах из пораженных частей мышц больных животных.

От трупов животных посылают кусочки печени, селезенки, почек и пораженных мышц в растворе глицерина или же пересыпанные солью.

Бактериологическая диагностика

Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей -- грамположительны и окрашиваются в иссиня-черный (темно-синий) цвет, многие неспороносные бактерии -- грамотрицательны и окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма -- розовый.

Техника проведения окраски по Граму.

Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основным, а другой -- дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (-) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Подготовка материала для окраски

Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют.

Фиксация

При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.

Физический способ фиксации:

Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2с.

Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70--80 °С).

Химический способ фиксации:

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % -- 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе.

Процесс окрашивания

На фиксированный мазок наливают один из основных красителей на 2--3 минуты. Во избежание осадков окрашивают через фильтровальную бумагу.

Сливают краску, аккуратно удаляют фильтровальную бумагу. Мазок заливают на 1--2 мин раствором Люголя или йодистым раствором по Граму (водный раствор йодида калия и кристаллического йода в соотношении 2:1) на 1--2 минуты до почернения препарата.

Раствор сливают, мазок прополаскивают 96° этиловым спиртом или ацетоном, наливая и сливая его, пока и мазок не обесцветится и стекающая жидкость не станет чистой (приблизительно 20-40-60 секунд).

Тщательно промывают стекла в проточной или дистиллированной воде 1--2 мин.

Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают фуксином или сафранином (2--5 мин).

Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Для клостридийхарактерны анаэробный тип метаболизма, положительное окрашивание по Граму [6].

Рисунок 5 окраска по Граму

Рисунок 6 - окраска по ГрамуC. Perfringens



Культуральные свойства

Таблица 1 Культурально-морфологический свойства клостридий.

Вид	Морфология	Культуральные свойства
	Окраска по Граму	Спора	Кап-сула	Под-виж-ность	Размеры бактериальной клетки
C. tetani	+	+	-	+	Тонкие, стройные па-лочки до 6 мкм, спора округлая на конце микробной клетки	Строгий анаэроб. На МППБ - мелкохлопчатое помутнение с незначительным газообразованиемНа сахарном кровяном МПА - нежный налет с периферическими отростками, вокруг колоний гемолиз
C. botulinum	+	+	-	+	Крупные палочки с закругленными концами, споры располо-женытерминально	Строгий анаэроб, срок культивирования 48-72 ч.На МППБ - помутнение среды с газообразованием, характерный запах прогорклого масла. На кровяном МПА - колонии крупные с корневидными отростками и зоной гемолиза
C. chauvoei	+	+	-	+	Полиморфные, толстые палочки до 8 мкм	На МППБ - помутнение, осадок, газообразование незначительное. На сахарном кровяном МПА - колонии в виде “перламутровой” пуговицы, узкая зона гемолиза
C. perfringens	+	+	+	-	Толстые, короткие палочки, располагаются одиночно	На МППБ - обильное помутнение с газообразованиемНа сахарном кровяном МПА -мелкие колонии,вокруг колоний гемолиз
C. novyi	+	+	-	+	Крупные палочки, располагаются одиночно	На МППБ - обильное помутнение с газообразованием. На сахарном кровяном МПА - колонии в виде спутанного клубка, гемолиза нет
C.sordellii	+	+	-	+	Крупные полиморфные палочки, располагаются цепочками по 2-4 клетки	На МППБ - обильное помутнение в нижней части среды, газообразование умеренноеНа сахарном кровяном МПА - корневидные, неправильной формы колонии с сероватой шероховатой поверхностью, гемолиз сильный, но может отсутствовать
C. histolyticum	+	+	-	+	Тонкие, стройные, с закругленными концами, расположенные одиночно, попарно	На МППБ - рост в виде умеренного помутненияНа сахарном кровяном МПА - колонии в виде росинок, без гемолиза

Биохимические свойства

Биохимические свойства clostridiumnovyi. Бактерии типов А, В и С ферментируют глюкозу, фруктозу и мальтозу, а тип D -- только глюкозу; глицерин разлагают все микроорганизмы (кроме нескольких штаммов типа В). Протеолитические свойства у С. novyi выражены сравнительно слабо; все штаммы разлагают желатину, свёртывают молоко (медленно), но не разлагают свернувшийся яичный белок (исключая несколько штаммов); бактерии типа D образуют индол и HJS.

Исследование токсигенных свойств

Clostridiumperfringens образует как минимум 12 идентифицированных токсинов (ферментов) и энтеротоксин; у гиалуронидазы и дезоксирибонуклеазы токсичность не доказана;

Токсин (лецитиназа С) проявляет дерматонекротизирующее, гемолитическое и летальное (убивает лабораторных животных при внутривенном введении) действие, опосредованное лецитиназной (фосфолипазной) активностью (разлагает лецитин на фосфорилхолин и глицериды), продуцируют все типы Clostridiumperfringens, но наиболее интенсивно тип А.

Токсин (коллагеназа и желатиназа) разрушает ретикулярную ткань мышц и коллагеновые волокна соединительной ткани, активно усиливает цистеин в присутствии Fe2+, оказывает летальное и некротизирующее действие, продуценты -- типы А, С, Е и некоторые штаммы типа D.

Токсин (протеиназа) расщепляет денатурированный коллаген и желатин, во многом действует подобно фибринолизину, секретируется в форме протоксина, активируемого трипсином. Проявляет активность экзоэнзима, обусловливающего некротические свойства.

Энтеротоксин образуют Clostridiumperfringens типов А и С, вызывающие пищевые токсикоинфекции, по своей природе он термолабильный протеин, продуцируемый при споруляции бактерий в толстой кишке, его практически не образуют лабораторные культуры, и он быстро разрушается при термической обработке пищевых продуктов, что значительно затрудняет его биохимическое изучение и идентификацию; вызывает рвоту и диарею, оказывает летальное действие, а также обусловливает появление эритематозной кожной сыпи у лабораторных животных. Диарея развивается вследствие потери воды и электролитов за счет дилатации и повышения проницаемости капилляров.

Антигенное строение возбудителя

Выделяют 6 сероваров (A-F) Clostridiumperfringens, различающихся по антигенным свойствам продуцируемых экзотоксинов. Все серовары образуют токсин лецитиназу. Тип А включает много подтипов, идентифицируемых реакциями агглютинации, что облегчает диагностику в случаях пищевых токсикоинфекций и анаэробных раневых инфекций.

Серологическая диагностика

Лабораторная диагностика включает серологическую идентификацию Аг возбудителя и AT к ним в различных биологических жидкостях организма и выделение культуры возбудителя (аналогично бактериологическому исследованию на наличие Clostridiumperfringens), что в случае Clostridiumnovyi представляет определенные трудности. Дифференциальную диагностику от прочих клостридий, вызывающих анаэробные инфекции, проводят оценкой сахаролитических, протеолитических и некоторых других биохимических свойств.

Таблица 2 Признаки некоторых патогенных клостридий

Признак	Cl. perfringens	Cl. novyi	Cl. septicum	Cl. hislolyticum	Cl. sporogenes	Cl. bifermentans	Cl. sordellii
Подвижность	-	+	+	+	+	+	+
Сахаролитичес-кие свойства Глюкоза	+	+	+	±	+	+	+
Лактоза	+	±	+	±	-	-	-
Сахароза	+	±	±	±	-	-	+
Галактоза	+	+	+	+	+	-	-
Мальтоза	+	±	+	±	+	-	+
Инулин	-	-	-	±	-	-	-
Маннит	±	±	±	±	-	-	±
Дульцит	-	-	-	-	-	-	-
салицин	-	±	+	±	-	+	-
Глицерин	±	+	±	±	-	-	+
крахмал	+	-	-	-	-	-	-
Свернувшаяся сыворотка	±	-	-	+	+	+	+
Гемолитическая активность	±	+	+	+	+	+	+
Лакмусовое молоко	КГ, сгусток через 3-16 ч	Свертывание за несколько сут	То же	Пептонизация	То же	То же	То же
Агар с бензидином	-	Почернение	-	-	-	-	-
КГ - ферментация с образование кислоты и газа

Диагноз считается установленным:

1) при выделении культуры с характерными свойствами, положительной биопробе с типичной картиной и выделением чистой культуры;

2) при положительной биопробе из исходногопатматериала с характерной картиной патологических изменений и выделением чистой культуры [5].

При дифференциальной диагностике злокачественного отека необходимо исключить карбункулярную форму сибирской язвы и эмфизематозный карбункул крупного рогатого скота [8].

Биопроба

Биопроба при злокачественном отеке осуществляется на морских свинках, кроликах, белых мышах- внутримышечно [8].

Устойчивость возбудителя

Споры клостридий, вызывающих злокачественный отек устойчивы к различным факторам внешней среды, выдерживают кипячение в течение 1--2 ч, в почве сохраняются 7-- 8 лет.

Чувствительность к антибиотикам у Clostridiumdifficile от природы очень низкая, поэтому лечение посредством антибиотикотерапии зачастую терпит фиаско[8].

ОСОБЕННОСТИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ИММУНИТЕТ

Иммунитет при злокачественном отеке антитоксический. В связи с тем что злокачественный отек - это болезнь полимикробной этиологии и возникает спорадически, средства его активной профилактики в плановом порядке не используют. Однако полианатоксин против злокачественного отека и дезинтерии ягнят могут быть успешно использованы.

Меры предосторожности при злокачественном отеке животных сводятся в основном к соблюдению строгой осептики при операциях и своевременному лечению ран. Для профилактики родильного злокачественного отека необходимо соблюдение санитарно-гигиенических условий при отелах. При тяжелых родах с повреждением слизистых оболочек и прилегающих к ним тканей родовых путей рекомендуется орошение их дезинфицирующими растворами. Большое значение имеет соблюдение санитарно-гигиенических условий при родах и оказании акушерской помощи. В стационарно неблагополучных зонах рекомендуется перед массовыми обработками поголовья, родами, связанными с возможностью травмирования, водить животным поливалентную антитоксическую сыворотку в сочетании с антибиотиками [2].



Заключение

В заключении можно сказать, что злокачественный отек (лат. -- Oedemamalignum, septicaemiagangrenosa; англ. -- Malignantoedema, gasgangrena, bighead; раневой газовый отек, газовая гангрена) -- остро протекающая неконтагиозная раневая токсикоинфекция животных и человека, вызываемая группой патогенных клостридии и характеризующаяся воспалительными отеками с образованием газов, некрозом пораженных тканей и интоксикацией организма.

Злокачественный отек -- болезнь полимикробной этиологии. В развитии инфекционного процесса основную роль играют следующие виды бактерий из рода клостридий: С. septicum, С. novyi, С. perfringens, С. chauvoei (имеет значение только у овец), С. hystoliticum и С. sordellii. Из пораженных тканей чаще выделяют С. perfringens (60... 80%, чаще тип А), реже -- С. novyi (20...30%, в основном тип А), С. septicum (10...20 %), С. hystoliticum (2...20 %), реже -- другие представители патогенных клостридий. Болезнь вызывают как каждая из этих клостридий, так и их ассоциации. Другие микроорганизмы самостоятельно болезнь не вызывают, но обеспечивают более благоприятные условия для активного размножения возбудителей.

Научное описание болезни сделал Р. Кох (1881), он же выделил один из его возбудителей -- С. novyi. Л. Пастер и Жубер (1887) выделили С. septicum.

Взятие и пересылка патологического материала осуществляется в соответствии с определенными требованиями.

Биохимические свойства clostridiumnovyi. Бактерии типов А, В и С ферментируют глюкозу, фруктозу и мальтозу, а тип D -- только глюкозу; глицерин разлагают все микроорганизмы (кроме нескольких штаммов типа В). Протеолитические свойства у С. novyi выражены сравнительно слабо; все штаммы разлагают желатину, свёртывают молоко (медленно), но не разлагают свернувшийся яичный белок (исключая несколько штаммов); бактерии типа D образуют индол и HJS.

Выделяют 6 сероваров (A-F) Clostridiumperfringens, различающихся по антигенным свойствам продуцируемых экзотоксинов. Все серовары образуют токсин лецитиназу.

Иммунитет при злокачественном отеке антитоксический.

Меры предосторожности при злокачественном отеке животных сводятся в основном к соблюдению строгой осептики при операциях и своевременному лечению ран. Для профилактики родильного злокачественного отека необходимо соблюдение санитарно-гигиенических условий при отелах. При тяжелых родах с повреждением слизистых оболочек и прилегающих к ним тканей родовых путей рекомендуется орошение их дезинфицирующими растворами. Большое значение имеет соблюдение санитарно-гигиенических условий при родах и оказании акушерской помощи.



Библиографический список

1. Ветеринарная микробиология и иммунология / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев. - М.: КолосС. -Ч.1: Общая микробиология. -2006.-183 c.

2. Ветеринарная микробиология и иммунология / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев. -М. : КолосС - Ч.2: Иммунология. - 2007.-224 c.

3. Ветеринарная микробиология и иммунология. Воронин Е.С. М.: КолосС,2007 -671 с.

4. Иммунология/ Г.С. Воронин, А.М. Петров, М.М. Серых, Д.А. Дервишов. М.: Колос-Пресс, 2002. - 408 с.

5. Кокуричев П.И., Бомнин Б.Г., Кокуричева М.П. Патологическая анатомия сельсхохозяйственных животных. Альбом. СП.б «Агропромиздат», 1994 г.

6. Микробиология. / Н.Р. Асонов - М.: Колос, 2001. - 352 с.

7. Определитель бактерий Берджи: в 2 т.: Пер с англ. / Д.Хоулт. - М.: Мир, 1997.

8. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / В.Н. Кисленко. - М.: Колос, 2005. - 232с.

9. Эпизоотология с микробиологией / И.А. Бакулов, В.А. Ведерников, А.Л. Семенихин. - М.: Колос, 1997. - 480 с.

Размещено на Allbest.ru

...