Особенности выращивания рыб в индустриальных рыбоводных хозяйствах, ветеринарные требования к ним

Размещено на http://www.allbest.ru/

1. Особенности выращивания рыб в индустриальных рыбоводных хозяйствах, ветеринарные требования к ним

1.1 Особенности выращивания рыб в индустриальных рыбоводных хозяйствах

Технология индустриального рыбоводства основывается на выращивании рыбы при высокой плотности посадки путем создания благоприятных условий культивирования, кормлении полноценными кормами, механизации и автоматизации всех производственных процессов и получении товарной продукции в течении года.

Современные индустриальные рыбоводные предприятия можно разделить на 2 типа: тепловодные и холодноводные.

В основе этого деления лежат биологические особенности культивируемых видов рыб, их отношение к условиям внешней среды: температуре, гидрохимическому режиму и другим факторам.

На тепловодных хозяйствах основными объектами разведения являются карп, осетровые, канальный сом, угори, тиляпии.

На холодноводных хозяйствах разводят лососевых и сиговых рыб.

Также в зависимости от солевого состава источника водоснабжения индустриальные предприятия можно разделить на 3 типа: пресноводные, солоноватоводные и морские.

В зависимости от организации и завершенности процесса выращивания рыбы различают следующие системы хозяйств:

Полносистемное хозяйство, где разведение и выращивание рыбы осуществляют от икры до товарной продукции.

К полносистемным относят также племенные хозяйства, занимающиеся выращиванием производителей и ремонтной группы.

Рыбопитомник -- это хозяйство, где производится выращивание посадочного материала (личинок, молоди, сеголетков и др.).

В нагульных хозяйствах не предусмотрено получение собственного посадочного материала, он завозится с других хозяйств и выращивается до товарной массы.

В России индустриальное рыбоводство развивается по следующим направлениям: садковые рыбоводные хозяйства на теплых водах и в водоемах с естественной температурой воды;

бассейновые рыбоводные хозяйства с использованием пресной, солоноватой и морской воды, где происходит:

выращивание рыбы в установках с замкнутым циклом водообеспечения;

выращивание рыб с системой с оборотным водоснобжением.

Отличие по производительности и интенсивности индустриального рыбоводства от традиционных форм ( пастбищного и прудового) можно показать на следующем примере.

Пастбищное рыбоводство позволяет выращивать до 100 кг/га продукции, экстенсивная

форма прудоволго рыбоводства до -1 тонны/ га, интенсивная форма до -10 тонн на га.

Методы индустриального рыбоводства при замкнутом цикле водообеспечения позволяют достигать до 500-1000 тон на га.

При этом затраты природных ресурсов на 1 кг готовой продукции происходят следующим образом:

при пастбищном методе- 100 м² земли, и 130 м³ воды;

при традиционном методе прудового рыбоводства -- 10 м² земли и 10-20 м³ воды;

при интенсивном методе прудового рыбоводства -- 1 м² земли и 5-10 м³ воды;

при индустриальном методе -- 0,01 м² и 0,005 м³ воды.

Для всех типов предприятий индустриального рыбоводства характерны особенности развития аквакультуры и ее высших форм при индустриальных методах выращивания является ослабление пресса природных факторов на успешность производства торговой продукции.

В общем случае при всех индустриальных методах выращивания удовлетворение таких жизненных потребностей рыбы, как температурный и кислородный режимы, качество водной среды обеспечивается не естественным, а искусственным фукционнированием водных экосистем. В индустриальных хозяйствах все потребности рыбы удовлетворяются соответствующими инженерными системами: чистота воды обеспечивается системой фильтров, ее качество -- блоком водоподготовки, включающим терморегуляцию, оксигенацию, очистку от органических загрязнений.

В итоге вода в индустриальных установках выполняет лишь такую технологическую функцию, как вынос из зоны обитания рыб различных твердых и растворенных загрязнений и доставку в эту зону тепла и кислорода.

Сама вода не производит продукцию, как это наблюдается в прудовых и озерных условиях.

Таким образом индустриальная аквакультура оказывается автономным хозяйствам, независимым по отношению к процессам, с которыми связано продуцирование рыбы в естественных или частично измененных водных экосистемах.

Ветеринарные требования к ним.

Общие ветеринарно-санитарные правила.

При проектировании и строительстве рыбоводных хозяйств обязательно выполнение следующих требований:

Для разведения и выращивания рыбы разрешается использовать только водоемы и водоисточники с нормальным для рыбоводства солевым и газовым режимом воды, благополучные по инфекционным и инвазионным болезням, к которым восприимчивы намечаемые к разведению и выращиванию в хозяйстве виды рыб;

При строительстве рыбоводных прудов на заболоченных участках в проекте необходимо предусматривать мероприятия, обеспечивающие полное осушение ложа нерестовых, летне-маточных и выростных прудов, которые должны иметь слабоводопроницаемый слой глины и суглинка мощностью не менее 1-2 м;

Не допускается строительство нерестовых, маточных прудов и зимовалов ближе 500 м от населенных пунктов, животноводческих ферм и скотомогильников;

Все пруды хозяйства должны иметь независимое водоснабжение и гидротехнические сооружения, препятствующие проникновению в них сорной рыбы и других водных организмов - переносчиков болезней рыб;

Головной пруд должен быть оборудован спускным устройством, позволяющим быстро и полностью спускать воду и проводить в нем оздоровительные мероприятия в случае возникновения инфекционных и инвазионных болезней рыб;

Рыбопитомники должны располагаться выше нагульных прудов во избежание попадания в них воды, зараженной возбудителями инфекционных и инвазионных болезней рыб;

В каждом полносистемном рыбоводном хозяйстве и рыбопитомнике должно быть не менее двух карантинно-изоляторных прудов с независимым водоснабжением для карантинирования в них поступающей в хозяйство, a также для изолирования больной и подозрительной по заболеванию рыбы. Кроме того, необходимо оборудовать несколько небольших прудов-садков для временных передержек рыбы (производителей перед нерестом; рыбы, подготовленной для отправки в другие хозяйства; для дегельминтизации и т. д.);

В каждом рыбоводном хозяйстве предусматривать строительство лаборатории для проведения ихтиопатологических исследований, а также бассейнов или ванн для проведения лечебных и профилактических обработок рыб.

Проектирование, строительство и переоборудование прудовых хозяйств и рыбопитомников для разведения рыбы допускается только по согласованию с органами ветеринарной службы.

С целью создания для рыб благополучных ветеринарно-санитарных и рыбоводных условий необходимо:

Не допускать загрязнения рыбохозяйственных водоемов канализационными и сточными водами сахарных, нефтеперерабатывающих, целлюлозно-бумажных и других предприятий, если эти воды предварительно не очищены и не обезврежены;

мойку машин и тары, а также мочку льна, конопли и другого сырья в прудах и других водоемах, используемых для разведения рыбы; применения для удобрения прудов не обезвреженного биотермическим путем навоза (удобрение прудов навозом из хозяйств,

неблагополучных по заразным заболеваниям животных, запрещается);

попадания из других водоисточников в пруды рыб, моллюсков и других организмов, являющихся переносчиками или промежуточными хозяевами возбудителей различных заболеваний рыб; чрезмерного зарастания рыбохо-зяйственных водоемов водной растительностью (выкашивать ее не менее двух-трех раз в течение летнего периода);

Нерестовые, летне-маточные, карантинные, выростные и нагульные пруды оставлять на зиму без воды для промораживания дна;

После осеннего спуска воды и вылова рыбы заболоченные и не осушаемые участки ложа нагульных, выростных прудов подвергать ежегодно дезинфекции и дезинвазии негашеной или хлорной известью;

Просохшие возвышенные участки ложа выростных прудов подвергать неглубокой весенней вспашке или культивации. В рыбоводных хозяйствах южной зоны ложа выростных прудов целесообразно засевать викоовсяной смесью с уборкой ее до пересадки мальков из нерестовых прудов;

Зимовальные и нерестовые пруды оставлять на лето без воды для просушивания и не допускать зарастания их; для этого в течение лета проводить двух-трехкратное выкашивание растительности и культивацию ложа;

Выростные и нагульные пруды, независимо от их эпизоотического состояния, выводить на профилактическое летование поочередно через каждые 5-6 лет рыбоводной эксплуатации (или чаще), используя их ложе под посевы викоовсяной смеси, кукурузы, подсолнечника, люпина и других сельскохозяйственных культур;

Не спускные пруды и другие малые рыбохозяйственные водоемы, используемые для рыбоводства, тщательно очистить от надводной жесткой и от излишней мягкой растительности, а также от пней и кустарника. Проводить в них расчистку родников и протоков, а также вылов сорной и хищной рыбы;

Следить за качеством воды в рыбоводных хозяйствах. Периодически проводить гидрохимические исследования и принимать меры по поддержанию необходимого газового и солевого режима воды;

Устанавливать для каждого пруда плотность посадки рыб на единицу площади с учетом естественной кормовой базы, условий их кормления, газового и солевого режима воды и эпизоотического состояния хозяйства;

Производителей из нерестовых прудов отлавливать и пересаживать в летне-маточные пруды в течение первых суток после нереста. Личинок из нерестовых прудов в выростные пересаживать на 4-6 день после выклева;

Не допускать на водоемах большого скопления водоплавающей птицы. Норма посадки уток на один гектар водного зеркала нагульного пруда от 100 до 250 голов. В каждом конкретном случае количество допускаемой к содержанию на водоеме птицы определяется, исходя из глубины пруда, газового и солевого режима воды, а также из общего санитарного состояния водоема. Не следует также допускать концентрации уток в небольших загонах, надо размещать их по всему пруду. Выгул водоплавающей птицы на головных, выростных и маточных прудах запрещается;

Обеспечивать надлежащее санитарное состояние прибрежной зоны водоемов, проводить периодическую профилактическую дезинфекцию мест ветеринарно-санитарных обработок рыб, хранения рыбоводного инвентаря, оборудования и причалов;

При появлении в водоемах трупов рыб немедленно принимать меры к их сбору и уничтожению, а также к выявлению причин ее гибели;

Весной, после облова зимовалов, и осенью, после вылова рыбы, подвергать профилактической дезинфекции весь рыбоводный инвентарь, оборудование, орудия лова, спецодежду рабочих;

В производственные пруды нe допускать посадки карпа (сазана) разных возрастов, а также совместной посадки рыб, завезенных из разных водоемов (участков) хозяйства.

Завоз в водоемы рыбы, икры и беспозвоночных водных организмов для целей рыборазведения и акклиматизации разрешается только из хозяйств и водоемов, благополучных по инфекционным и инвазионным болезням рыб.

Перевозка рыбы, оплодотворенной икры и беспозвоночных водных организмов для целей разведения, выращивания и акклиматизации разрешается только при наличии ветеринарного свидетельства. В ветеринарном свидетельстве (форма № 1) должно быть указано: «Рыба (оплодотворенная икра, раки, другие водные организмы) вывозится из хозяйства и водоема, благополучного по инфекционным и инвазионным болезням рыб, и подвергнута профилактической обработке, тара дезинфицирована". Перевозку и пересадку рыб следует проводить с соблюдением мер предосторожности, не допуская их травмирования.

Рыба, предназначенная к перевозке в другие водоемы для целей акклиматизации и разведения, независимо от благополучия по заразным болезням, должна подвергаться обработке в антипаразитарных ваннах.

Обработке с профилактической целью в антипаразитарных ваннах подлежат также сеголетки, производители и ремонтные рыбы - перед посадкой на зимовку; производители - за 2-3 дня перед посадкой на нерест и годовики карпа, сазана и карася - перед посадкой в нагульные пруды.

Поступающие в хозяйство производители и ремонтный молодняк подлежат обязательному карантинированию в карантинных или изоляторных прудах не менее 30 дней при температуре воды не ниже 12°С. Если температура воды в карантинных прудах ниже 12°С, то срок карантинирования удлиняют на такое время, при котором среднесуточная температура воды в течение 30 дней подряд не будет ниже 12°С.

Температуру воды в карантинных прудах записывают в специальный журнал, который хранят в хозяйстве. Совместное содержание производителей с рыбами других групп запрещается.

За каждым рыбохозяйственным водоемом или группой прудов должны быть закреплены отдельный инвентарь, орудия лова, плавсредства и другие рыбоводные принадлежности.

В целях повышения эффективности прудового рыболовства и повышения устойчивости рыбы к заболеваниям в каждом рыбхозе необходимо обеспечивать оптимальные условия для выращиваемой рыбы путем создания необходимого водообмена игазового режима в прудах, улучшения естественной кормовой базы за счет внесения в пруды минеральных удобрений и организации рационального кормления рыбы. Все категории прудов рыбоводных хозяйств должны использоваться только по их прямому назначению.

За всеми рыбохозяйственными водоемами устанавливают постоянный ветеринарный надзор с целью принятия своевременных мер по предупреждению и ликвидации болезней рыб.

Ежегодно, независимо от эпизоотического состояния водоемов, рыбу 3-4 раза подвергают ветеринарному осмотру и ихтиопатологическим исследованиям (при плановых весенних и осенних, а также контрольных обловах).

2. Мероприятия против заразных болезней рыб

Целесообразность оздоровления хозяйств путем летования прудов в каждом случае определяют с учетом характера заболевания, технических возможностей и экономических расчетов.

При невозможности проведения летования прудов осуществляют комплекс следующих мероприятий:

Проводят уборку и уничтожение трупов погибших рыб, облов и выбраковку больной рыбы;

формируют иммунное стадо рыб или заменяют его видами рыб, невосприимчивыми к данному заболеванию;

производителей и ремонтных рыб содержат в карантинно-изоляторных прудах;

проводят дезинфекцию прудов, орудий лова, инвентаря;

зарыбляют пруды рыбопосадочным материалом, выращенным в данном хозяйстве; проводят профилактическую и лечебную обработку рыб в соответствии с действующими инструкциями.

В случае заболевания рыб руководители рыбоводных хозяйств обязаны сообщить об этом ветеринарному врачу и до eго прибытия не допускать вылова и вывоза рыбы из водоема, в котором возникло заболевание.

Получив сообщение о появлении заболевания рыб, ветврач обязан принять меры к установлению диагноза и разработать мероприятия по предотвращению распространения и ликвидации заболевания.

При установлении в рыбоводном хозяйстве инфекционных или инвазионных болезней рыб на хозяйство, водоем в зависимости от установленной болезни накладывают карантин или вводят в нем ограничения.

Одновременно проводят оздоровительные мероприятия в соответствии с действующими инструкциями.

2.1 Правила отбора и пересылки патматериала от рыб для лабораторных исследований

Пробы воды берут в нескольких точках водоема с таким расчетом, чтобы собранные образцы отражали гидрохимическое состояние водоема или загрязненность его отдельного участка (зоны гибели рыб, места впадения ручья или сбросного канала, района интенсивного поверхностного стока и т.д.), а также в незагрязненном участке (выше по течению).

В прудах и других проточных емкостях берут пробы на вытоке воды.

Пробы воды (не менее 2 л) отбирают батометром из поверхностных (на глубине 50 см) и придонных слоев в чистые стеклянные или полиэтиленовые бутылки.

Перед заполнением посуду ополаскивают 2--3 раза исследуемой водой. В тех случаях, когда время транспортирования пробы составляет более 1 сут, их рекомендуется фиксировать различными консервантами в зависимости от целей исследования.

Зимой воду при транспортировании следует утеплять, чтобы исключить ее замерзание.

Пробы грунта (массой 2 кг) берут также из разных зон водоема дночерпателем Экмана или Кирпичникова. Грунт сушат на воздухе и упаковывают в широкогорлые банки или полиэтиленовые мешки.

Бентосные организмы (хирономиды, олигохеты, моллюски) в количестве 100--150 г отмывают от ила водой из водоема.

Больных или подозрительных по заболеванию рыб доставляют в ветеринарную лабораторию живыми. Для исследования берут 10-- 15 рыб на различных стадиях болезни.

Живых рыб перевозят в молочных бидонах или других емкостях, заполненных на 3/4 объема водой из того же водоема, откуда взята проба, или водой из артезианской скважины.

Летом при длительном транспортировании воду с рыбой постепенно охлаждают до температуры 12--15 °С, добавляя мелкие кусочки льда. Чтобы не вызывать у рыб температурного шока, нельзя допускать перепад температуры воды исходного водоема и транспортной емкости более 5--7 °С.

В случае невозможности выполнить эти условия отбирают патматериалы от больных рыб и соответствующим способом консервируют.

Для химико-токсикологического анализа пригодны снулая рыба или свежие трупы, которые отправляют в охлажденном, замороженном виде или консервируют 70°-ным спиртом.

Кусочки органов для бактериологических и вирусологических исследований отбирают стерильно, замораживают или консервируют 40--50%-ным раствором глицерина в кипяченой воде или физиологическом растворе. Кровь, экссудат и другой жидкий пат-материал доставляют в запаянных пастеровских пипетках.

Пробы для микологических исследований консервируют в растворе антибиотиков (пенициллина или стрептомицина по 100 ЕД/мл раствора).

В исключительных случаях делают посевы в лаборатории рыбоводного хозяйства.

Кровь для исследований берут пастеровской пипеткой из хвостовых сосудов (артемии и вены) или из сердца с соблюдением правил асептики и антисептики .

Взятую кровь используют для посева, приготовления мазков, гематологических и биохимических исследований.

Цельную кровь стабилизируют гепарином (1000 ЕД/мл) или лимоннокислым натрием. Сыворотку крови получают общепринятым методом, помещают в стерильные запаянные ампулы, а летом консервируют 5%-ным раствором фенола (1--2 капли на 1 мл сыворотки) или тиомерсалом из расчета 10 мг препарата на 10 мл сыворотки.

Отобранные жидкие материалы перевозят в термосе со льдом.

Материал для гистологических исследований берут от погибших и вынужденно убитых рыб.

Мелких рыб (мальки и сеголетки) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных особей берут органы или кусочки органов размером 2 х 3 см и толщиной 0,5-- 1,0 см.

Кусочки из пораженных органов и тканей вырезают так, чтобы были захвачены нормальные и измененные участки.

Независимо от степени поражения берут кусочки кожи с подлежащей мускулатурой, жабр, печени, почек, селезенки, сердца, кишечника, плавательного пузыря, головного мозга. Кишечник перед фиксацией осторожно вскрывают или делают на нем несколько надрезов, чтобы фиксирующая жидкость проникла в его полость.

Головной мозг осторожно извлекают целиком после вскрытия черепной коробки.

Подлежащий исследованию материал помещают в стеклянные банки и фиксируют 10\%-ным нейтральным формалином, жидкостью Буэна или Карнуа.

С пораженных органов собирают паразитов и консервируют разными способами в зависимости от их систематического положения и размеров.

Для определения простейших -- инфузорий, жгутиконосцев -- готовят мазки соскобов из жабр и кожных покровов на предметных стеклах, подсушивают их на воздухе и хранят в бумаге или фиксируют жидкостью Шаудина 15--20 мин.

Из цист миксо-споридий также готовят мазки на предметных стеклах, которые сразу заключают в глицерин-желатину.

Гельминтов собирают с органов в солонки или чашки Петри, промывают от слизи водой или физиологическим раствором и выдерживают в них до гибели паразита. Моногенетических сосальщиков сразу заключают в глицерин-желатину на предметных стеклах или фиксируют в 4\%-ном растворе формалина.

Трематод, ленточных червей и скребней фиксируют 70°-ным спиртом между стеклами так, чтобы они расправились, а у скребней вышел хоботок; нематод и личинок цестод консервируют в жидкости Барбагалло.

Паразитических рачков фиксируют в 70°-ном спирте или 4\%-ном формалине, пиявок --в 4\%-ном формалине, не раздавливая, и глохидий -- в 70°-ном спирте.

Отобранные материалы подробно описывают, этикетируют, упаковывают в водонепроницаемую тару, опечатывают и высылают с нарочным в ветеринарную лабораторию или другое учреждение, где имеются возможности для исследования.

В сопроводительном письме сообщают данные обследования водоема, указывают предполагаемый диагноз и какие лабораторные исследования необходимо провести.

3. Бактериологические и вирусологические исследования

Бактериологические посевы проводят вначале с пораженных участков кожи, мышц (язвы, абсцессы и др.), жаберной ткани, крови и асцитной жидкости, а после вскрытия полости -- обязательно с печени, почек или селезенки.

Материал для вирусологических исследований отбирают из органов и тканей, где концентрируется вирус, а при малоизученных болезнях -- из наиболее пораженных органов.

Язвы перед отбором патологического материала промывают стерильным физиологическим раствором; содержимое абсцессов, фурункулов, асцитной жидкости набирают пастеровской пипеткой после прижигания места прокола.

Для асептического вскрытия рыбу обездвиживают, фиксируют препаровальными иглами на деревянной или пробковой доске.

Туловище с левой стороны освобождают от слизи и чешуи, удаляют грудной и брюшной плавники, дезинфицируют 70°-ным спиртом или фламбируют спиртовым тампоном.

Брюшную стенку отсекают стерильными ножницами полулунным разрезом от ануса к жаберной крышке.

Патматериал с паренхиматозных органов отбирают стерильно пастеровскими пипетками или бактериологической петлей.

Первичные бактериологические посевы проводят на МПБ, МПА и некоторые дифференциальные среды (например, кровяной агар, Китт--Тароцци).

3.1 Патологический материал для вирусологических исследований

Засевают на первичные однослойные или перевиваемые клеточные культуры, полученные из органов и тканей рыб. В нашей стране выращивают в основном две клеточные линии: ЕРС, полученную из эпителия оспенных разростов карпа, и БНМ, полученную из кожно-мышечной ткани рыбы пимефала.

Посевы бактерий и вирусов инкубируют в термостате при температуре 24--26 °С.

Для ускоренной дифференциации псевдомонад и аэромонад от сходных с ними родов бактерий определяют оксидазную активность культур и способность их расщеплять глюкозу на среде Хью-Лейфсона (тест окисления -- ферментации).

Одновременно или после окончания посевов готовят мазки крови и отпечатки из некротических участков, язв, паренхиматозных органов, трассудата или экссудата.

Их окрашивают по Романовскому--Гимза или по Граму общепринятыми способами.

4. Микологические исследования

При подозрении на грибковые заболевания рыб проводят микологические, а при бранхиомикозе и глубоких микозах -- гистологические исследования.

При большинстве микозов рыб (бранхиомикоз, сапролегниоз и др.) достаточно надежным методом диагностики является микроскопическое исследование патологического материала. Исследуют нативные препараты из пораженных органов с добавлением нескольких капель 50\%-ного водного раствора глицерина, 0,9\%-ного раствора хлорида натрия или водопроводной воды.

При исследовании на бранхиомикоз микроскопируют некроти-зированные участки или подвергнутые гнилостному разложению жабры больных рыб. Соскобы с жабр помещают на предметное стекло, добавляют несколько капель воды или других растворов, раздавливают покровным стеклом и просматривают при малом и среднем увеличении. В поле зрения микроскопа хорошо видны гифы гриба со спорами. В гистологических срезах они располагаются в просвете сосудов и респираторных складках, окрашиваются гематоксилин-эозином в темно-лиловый цвет.

Для обнаружения сапролегниевых грибов исследуют под микроскопом соскобы с кожи, жабр, носовых ямок, а также икру. При этом хорошо видны гифы гриба, заканчивающиеся зооспоран-гиями.

При глубоких микозах (ихтиофонозе, экзофиаламикозе, мико-тическом грануломатозе) исследуют микроскопически нативные раздавленные препараты из пораженных органов (печени, почек, селезенки и др.).

Чистые культуры грибов выделяют на обычных грибных средах--агаре Сабуро, Чапека, МПА. Для выделения возбудителя бранхиомикоза посевы делают из жабр, подвергшихся гнилостному разложению. Возбудителей ихтиофоноза и других глубоких микозов культивируют на МПА с добавлением 1 \% сыворотки крупного рогатого скота, а также на глюкозо-дрожжевом агаре.

Сапролегниевые грибы хорошо растут на стерилизованных кипячением семенах конопли и льна, помещенных в агаровые пластины (1,5\%-ный агар на воде), которые раскладывают в чашках Петри. Грибок растет при комнатной температуре в виде ватообразных колоний. Его также культивируют на МПА, агаре Чапека и Сабуро, для чего вырезают из них небольшие блоки, засевают культурой и раскладывают в чашки Петри.

5. Постановка биологических проб

В ряде случае для установления окончательного диагноза на инфекционную болезнь, а также при решении вопроса о снятии карантина или карантинных ограничений с хозяйства ставят биологические пробы. При постановке их с целью определения патогенности возбудителей используют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей больных или подозреваемых в заражении рыб.

Биопробы ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей. Наблюдения ведут ежедневно, учитывают число погибших рыб, клинические признаки болезни и характер патологоанатомических изменений. Продолжительность опытов устанавливают с учетом инкубационного периода и длительности течения заболевания в естественных условиях. В опыты отбирают восприимчивых к данному заболеванию рыб из благополучного хозяйства. В каждой серии для заражения и контроля берут по 10 рыб.

При вирусных болезнях в качестве инфекционного материала берут свежеприготовленную вируссодержащую суспензию культуры клеток или безбактериальные фильтраты суспензий органов больных рыб. Количество вируссодержащего материала и способ заражения подбирают индивидуально для каждого заболевания. Материал вводят внутрибрюшинно, контактным методом, орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей вирус. Параллельно ставят контрольные опыты.

Для подтверждения бактериальной природы болезни испытывают чистые культуры. Здоровых рыб заражают 2-суточными бульонными культурами внутрибрюшинно или внутримышечно в дозах 0,1--0,2 мл . Молодые или старые культуры для биопробы непригодны, так как у них меняются вирулентные свойства. Музейные штаммы перед опытом пассируют через восприимчивых рыб.

Для ускорения исследований предварительно патогенность определяют по ДНК-азной активности выделенных культур.

При постановке биологической пробы для диагностики микозов используют нативный материал, в котором содержится возбудитель на всех стадиях развития, или выращивают патогенные грибы на специальных питательных средах до стадий, пригодных для заражения. Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биологическая проба считается положительной, если у 80 \% зараженных рыб проявляется комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погибает не менее 50 \% заболевших рыб при полном сохранении их в контроле, а также при выделении исходных возбудителей.

По окончании опытов воду в аквариумах обеззараживают, создавая в ней 4\%-ную концентрацию формалина или 10\%-ную концентрацию суспензии хлорной извести. Через 1 ч воду спускают в канализационную сеть, а рыб утилизируют. Весь инвентарь и посуду, бывшие в контакте с больной рыбой, дезинфицируют в 4\%-ном растворе формальдегида в течение 1 ч. При завершении биологической пробы в бетонированных бассейнах, земляных садках, карантинных прудах проводят дезинфекцию воды хлорированием, доводя содержание свободного хлора в воде до 4--5 мг/л. Через 24 ч воду пропускают через известковый фильтр (используя только свежую негашеную известь). После этого ложе прудов дезинфицируют негашеной (10 т/га) или хлорной известью (3 т/га) и оставляют без воды в течение 1 мес.

В случае, если ставится вопрос о снятии карантина или других ограничений, биопробу проводят непосредственно в прудах хозяйства согласно инструкции по борьбе с соответствующим заболеванием.

6. Фосфоорганические соединения, классификация, отравления рыб

Фосфорорганические соединения - это высокомолекулярные эфиры различных кислот фосфора (фосфорной, пирофосфорной, фосфористой, фосфоновой, фосфиновой, фосфинистой) и их сернистых и азотистых производных.

Физико-химические свойства. Фосфорорганические соединения (ФОС) -- это большая группа пестицидов различного назначения (акарицидов, инсектицидов, фунгицидов, нематоцидов, гербицидов, дефолиантов).

Для борьбы с эктопаразитами рыб используют хлорофос и карбофос.

Фосфорорганические соединения, за исключением некоторых (хлорофос), плохо растворимы в воде и хорошо -- в органических растворителях. Концентраты эмульсий переходят в воде в стойкую эмульсию и наиболее опасны для рыбоводства. ФОС относительно малостойки в окружающей среде.

Большая часть их разлагается в растениях, почве и воде в течение одного или нескольких месяцев. Только некоторые инсектоакарициды внутрирастительного действия (метилмеркаптофос, антио, 6 фосфамид, сайфос и др.) сохраняются до года.

С увеличением рН и повышением температуры воды скорость гидролиза этих, соединений возрастает в несколько раз. В рыбохозяйственных водоемах они, как правило, обнаруживаются в незначительных количествах.

Однако при постоянном поступлении со сточными водами, а также в районах массового их применения отмечен довольно высокий уровень ФОС в воде, а также зарегистрированы случаи отравления рыб.

Фосфорорганические соединения (ФОС) широко используют в сельском хозяйстве и быту как средство борьбы с насекомыми, грызунами, сорными растениями. Отравления могут носить сезонный и массовый характер.

Токсические дозы. По классификации Л.И. Медведя выделяют следующие группы токсических веществ:

сильноядовитые (DL₅₀ менее 50мг/кг): тиофос (паратион, парафос), метафос (метилпаратион, метацид), меркаптофос (систокс, деметон, внуран), октаметил (шрадан);

· высокотоксичные (DL₅₀ - 200мг/кг): метилмеркаптофос (метил систокс, метилдеметон), фосфамид (диметоат, дитрол, рогор), дихлорфос (вапона, винилфосфат, ДДВФ), этион, фталофос; ·

средней степени токсичности (DL₅₀ - 200 - 1000 мг/кг): хлорофос (диптерекс, диплокс, трихлорфон), карбофос (малатон, малатион), метилнитрофос (сумитион, фолитион, метилхлортион), сайфос, трибуфос, цианофос; ·

малотоксичные (DL₅₀ выше 1000 мг/кг): бромофос, демуфос, темефос .

В зависимости от пути проникновения в организм ФОСы подразделяются на:

Контактные:хлорофос, ДДВФ, метафос, этафос, циодрин, карбофос, неоцидол, трихлорметафос-3. Они проникают в гемолимфу членистоногих через хитиновые покровы. Эти препараты плохо проникают в растения и довольно быстро разрушаются. Срок ожидания составляет 6 дней.

Системные:гардона, фозалон, гиподермин-хлорофос и другие препараты. Они проникают в растения, циркулируют с соками и вызывают гибель вредителей после поедания ими растений. Срок ожидания составляет 6 недель.

Контактно-системные:гетерофос, антио, фосфамид - проникают в организм вредителей и при контакте и при питании.

Фумигантные- проникают через органы дыхания. Это возможно только при применении препаратов в форме аэрозолей. Например, аэрозоль циодрина, эстрозоль.

Кишечные- поступают в организм через кишечник.

Токсикодинамика. ФОС-ы обладают высокой липидотропностью, легко проникают через фосфолипидный слой оболочек любых клеток, быстро всасываются через слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта, кожные покровы, слизистую органов дыхания; поступают в общий кровоток, а затем в различные органы и ткани, накапливаясь преимущественно в печени, головном мозге, сердечной и скелетной мышцах, почках, внутренней жировой ткани.

В организме животных ФОС в зависимости от химической структуры подвергаются окислению, гидролизу и дехлорированию. В результате указанных реакций из менее токсичных исходных препаратов образуются в некоторых случаях более токсичные, так называемый «летальный распад» или «летальный синтез» (реакции токсикации).

Например, тиофос превращается в фосфакол, диазинон в диазоксон.

Механизм действия ФОВ на организм животного и человека заключается в нарушении каталитической функции ферментов холинэстераз.

Вследствие этого возникает расстройство обмена ацетилхолина, выражающегося в характерных изменениях функций центральной и вегетативной нервной систем, а также в нарушениях деятельности внутренних органов и скелетной мускулатуры.

Различают три типа холинэстераз: ацетилхолинэстераза, бутирилхолинэстераза и бензоилхолинэстераза. Ведущую роль в гидролизе ацетилхолина принадлежит ацетилхолинэстеразе.

При взаимодействии холинэстеразы с ФОВ образуется устойчивый к гидролизу фосфорилированный фермент, не способный взаимодействовать с молекулами ацетилхолина и утративший основную каталитическую функцию. В результате в синапсах центральной и периферической нервной системы накапливается ацетилхолин, повышается проницаемость постсинаптических мембран что усиливает транспорт Na+иK+ по градиенту концентрации и вызывает деполяризацию клеточных мембран.

Все это приводит к возбуждению холинергической иннервации и холиномиметическому эффекту. ФОВ оказывают также прямое блокирующее воздействие на холинорецепторы.

Кроме того, ФОС угнетают активность фермента транспортной Na+K+ зависимой АТФ-азы, что ведет к торможению активного транспорта электролитов и препятствует восстановлению потенциала покоя на мембранах нервных клеток, что в последующем ведет к параличу холинергической иннервации.

Холиномиметическое действие проявляется в мускариноподобных, никотиноподобных и курареподобных эффектах.

Мускариноподобный эффект характеризуется миозом (сужением зрачков), бронхоспазмом, слюнотечением, повышенным потоотделением и усилением перистальтики.

Никотиноподобный эффект - повышением кровяного давления, возбуждением и последующим параличом центральной нервной системы.

Курареподобный эффект - понижением тонуса скелетной мускулатуры, особенно шейных и мышц грудной клетки).

7. Общие методы диагностики отравлений рыб. Биологические и органолептические исследования

Косвенным указанием на наличие отравления могут служить данные гидробиологических исследований: изменение биомассы планктона и бентоса, нарушение поведения и гибель беспозвоночных, исчезновение из биоценоза некоторых видов животных и растений.

Например, к инсектоакарицидам очень чувствительны водные ракообразные (дафнии, циклопы) и личинки насекомых; к гербицидам -- высшие водные растения; к альгицидам -- водоросли и т. д. Поэтому они могут служить тест-объектами для установления загрязнения водоема соответствующими токсикантами.

Для доказательства токсичности загрязненной водной среды ставят биопробы непосредственно в водоемах (“рыбная” проба) -- в делевых садках.

Последние устанавливают в водоем, помещают в них чувствительных к токсикантам рыб (окунь, ерш, форель и др.) и ведут наблюдения за их поведением.

Подобное исследование можно провести в аквариумах или бассейнах, заполнив их водой из водоемов, сточной водой в разных разведениях и др.

Токсичность нативного патологического материала или экстрактов ядов из органов рыб определяют на лабораторных животных (рыбах, мышах, крысах, кошках, лягушках, насекомых) путем скармливания, парентерального введения или прямого контакта с патматериалом. Выбор животных и методика постановки биопробы зависят от характера предполагаемого ядовитого вещества. Например, при подозрении на пестицидное загрязнение опыты ставят на комнатных мухах, дрозофилах, комарах, используя следующие методы.

Метод сухой пленки. Пестициды извлекают из исследуемого объекта ацетоном.

Экстракт фильтруют в чашку Петри, испаряют и в чашку помещают 20 -- 30 насекомых. Появление у них нервно-паралитических явлений и отсутствие их у контрольных указывает на наличие ядохимикатов.

Метод кормления. 'Внутренние органы отравленных рыб растирают в ступке с сахарным песком и скармливают насекомым. Проба считается положительной, если все насекомые погибают с типичными признаками судорог и параличей.

Метод водных взвесей заключается в выдерживании (экспонировании) комаров, дафний, циклопов, инфузорий или рыб в водных суспензиях органов.

Органолептические исследования основаны на свойстве многих химических веществ издавать запахи, которые определяют по пятибалльной шкале. Концентрации большинства сильно пахнущих веществ, оцениваемых органолептически, как правило, находятся на уровне или ниже границы, при которой эти вещества оказывают токсический эффект.

Это обстоятельство весьма важно не только для диагностики отравлений, но и для ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы.

Прозрачность и цвет воды определяют по гидрохимическим методикам.

Исследование рыбы на наличие постороннего запаха и привкуса проводят пробой варки. Желательно установить запах в мясе и внутренних органах pыб, проваривая их вместе или раздельно.

Берут около 100 г мелко нарезанных кусочков непотрошеной рыбы или отдельно мяса и внутренних органов, заливают двойным количеством воды и кипятят до 5 мин в колбе, прикрытой стеклом. После закипания воды проверяют запах, приподнимая стекло, а в конце пробы оценивают запах, привкус и прозрачность бульона. По специфическому запаху можно обнаружить фенол и его производные (хлорфенолы), гваякол, мононитробензол, бутилбензол, мононитротолуол, толуидин, хинолин, нафтол, нафтиламин, нефть и продукты ее перегонки (бензин, керосин, соляровое масло и др.), смолы и дегти, канифоль, терпены, камфору, тимол, ментол, эфирные масла, смоляные кислоты, альдегиды (формальдегид, параформ, метальдегид), хлор- и фосфорорганические пестициды и др.

7.1 Оценка результатов исследований

Заключение о причине гибели рыб составляется на основе тщательного анализа и сопоставления результатов всего комплекса полевых и лабораторных исследований. Для постановки диагноза на отравление решающее значение имеет обнаружение ядовитых веществ и их метаболитов в воде, биологических объектах и грунте, а также выявление специфических изменений в организме рыб.

Однако, в силу большого разнообразия химических веществ, поступающих в водоемы, при оценке полученных результатов необходим дифференцированный подход. В первую очередь следует критически оценивать данные химико-токсикологических исследований, поскольку даже отрицательный результат во многих случаях не является доказательством отсутствия токсикоза, и наоборот, обнаружение токсического вещества не всегда служит абсолютным указанием на отравление. В этих случаях учитывают стойкость, миграционные способности, пути метаболизма, кумулятивные свойства и фоновое содержание обнаруженного вещества во внешней среде.

При обнаружении тяжелых металлов, стойких пестицидов (хлор- и ртутьорганических), полихлорбифенилов и др. следует иметь в виду, что они в небольших количествах могут содержаться во многих водоемах и не вызывать отравлений. Тяжелые металлы входят в состав тела рыб как микроэлементы, а также могут колебаться в зависимости от геохимической провинции. Поэтому при оценке количественного содержания этих веществ в органах рыб и других объектах нужно учитывать фоновый уровень и сопоставлять их с известными количествами, способными вызвать острую или хроническую интоксикацию рыб.

В ряде случаев необходимо иметь в виду возможность эндогенного появления в организме некоторых веществ. Например, в органах рыб содержатся небольшие остатки аммиака как конечного продукта азотистого обмена. При гнилостном разложении тканей могут образовываться цианиды и сероводород.

Многие химические вещества (фосфорорганические пестициды и другие органические соединения) быстро разлагаются в водной среде и организме гидробионтов.

Они обнаруживаются только в ранние сроки интоксикации, а затем выявляются их метаболиты или можно получить отрицательный результат.

Трудности постановки диагноза на основе данных химико-токсикологического исследования связаны еще и с тем, что далеко не для всех химических веществ разработаны чувствительные и специфичные методы определения и, с другой стороны, очень слабо изучена взаимосвязь количественного содержания вещества в организме и эффектом его действия, то есть не установлены те их уровни, которые вызывают гибель рыб.

Поэтому в диагностике большинства отравлений решающее значение имеет совокупность дополнительных и косвенных показателей. Постановка биологической пробы или использование ферментных методов обнаружения ядов (ФОС) в сочетании с данными анамнеза и клинико-анатомических исследований позволяет осуществлять групповую диагностику интоксикаций.

Особенно это важно при комбинированных токсикозах, вызванных несколькими химическими веществами.

По данным гидрохимического анализа, косвенно можно судить о загрязнении водоемов коммунально-бытовыми и животноводческими стоками, минеральными удобрениями и другими токсикантами, влияющими на гидрохимический режим. Ведущими показателями их действия являются резкий дефицит кислорода и увеличение аммиака, сероводорода, нитритов и других продуктов разложения органических веществ.

Азотные удобрения сильно повышают содержание в воде аммиака, нитритов, нитратов.

Нередко решающее значение для диагностики токсикоза имеют подробно изученные обстоятельства гибели рыб, сообщения очевидцев, сведения о наиболее характерных признаках отравления, материалы обследования источников загрязнения, а также исключение заразных болезней рыб.

7.2 Клинический осмотр отравленных рыб

Проводят по схеме, принятой в ихтиопатологии. Осматривают 50 -- 100 экземпляров рыб, а затем выборочно вскрывают 15 -- 20 штук каждого вида и возраста.

В первую очередь изучают поведение рыб в естественном водоеме или в аквариуме, учитывают реакцию рыб на внешние раздражители, положение тела в воде, подвижность и координацию движений, наличие спазмов мускулатуры и судорог, частоту и ритм дыхания и т.д.

Многие отравления клинически могут протекать сходно с рядом других заболеваний. Поэтому для их дифференциации важное значение имеют последовательность возникновения, определенное сочетание и выраженность симптомов, а также характер течения болезни.

Острые отравления возникают внезапно, характеризуются кратковременным течением, массовой гибелью разных видов и возрастных групп рыб, ракообразных, лягушек, моллюсков и других гидробионтов. Кривая смертности рыб имеет характерную (языкообразную) форму с крутым подъемом в начале (первые 2 -- 3 сут) и пологим спуском в последующие 10 -- 30 сут интоксикации (О. Н. Крылов, 1980).

В клинической симптоматике отравлений рыб выделяют ряд стадий: начальное беспокойство, уменьшение или повышение возбудимости, нарушение равновесия, атаксия и стадия разрешения, заканчивающаяся восстановлением нарушенных функций, гибелью животных или переходом в хроническое отравление.

По тяжести проявления симптомов условно различают легкую, среднюю и тяжелую степень острого отравления.

При легком течении (начальной стадии) интоксикации симптомы слабо выражены, отмечают нарушение возбудимости, ориентации рыб в воде, замедление или ускорение плавания, изменение частоты дыхания, “кашель”.

Средняя степень (стадия иммобилизации) отличается бурным проявлением типичных признаков отравления: потерей равновесия, нарушением координации движения (плавание в боковом положении, по кругу, спирали, штопорообразно и т. п.), тремором мускулатуры и судорогами.

Тяжелая степень (агония) характеризуется угнетением, полной депрессией, потерей рефлексов, замедлением движения, опусканием на дно и гибелью рыб.

Хронические отравления протекают длительно в стертой, иногда бессимптомной форме, сопровождаются постепенной гибелью отдельных рыб. Отмеченные выше симптомы появляются в отдаленные сроки и незначительны.

Рыбы перестают питаться, теряют массу, отстают в росте и развитии, ослабляется их устойчивость к инфекционным и инвазионным болезням, а также неблагоприятным факторам среды.

Важное место в диагностике токсикозов занимают гематологические и биохимические показатели, отражающие избирательное действие ядовитых веществ.

Так, для отравления фосфорорганическими и частично карбаматными пестицидами характерно сильное угнетение активности ацетилхолинэстеразы (АХЭ) крови и головного мозга рыб. Производные мочевины (диурон, монурон), гербициды группы 2,4-Д вызывают гипохромную или гемолитическую анемию, а инитриты -- метгемоглобинемию. Тяжелые металлы блокируют функциональные сульфгидрильные группы (SH-группы) ферментов с образованием соответствующих сульфидов.

Неспецифические изменения в морфологическом составе крови, содержании сахара и гликогена, общего белка используют для диагностики в том случае, если они закономерно повторяются и носят стабильный характер.

7.3 Патологоанатомическое исследование

Включает в первую очередь количественный учет трупов рыб и других гидробионтов. При внешнем осмотре устанавливают вид, возраст рыб, регистрируют основные изменения внешних покровов и естественных отверстий.

По трупному окоченению и степени разложения судят о времени гибели рыб. Следует иметь в виду, что большинство трупов рыб находятся на дне и там разлагаются. Всплывшие трупы прибиваются ветром к берегам, а больные рыбы являются легкой добычей для рыбоядных птиц.

Замечено, что у окуневых рыб трупное окоченение наступает быстро, они всегда лежат брюшком вверх с широко раскрытым ртом и жаберными крышками. Карповые, наоборот, находятся на боку, рот и жаберная полость прикрыты.

При отравлении ядами нервно-паралитического действия (пестициды и др.) трупное окоченение наступает гораздо быстрее и сильнее выражено, чем веществами местнораздражающего и наркотического действия.

С повышением температуры воды разложение трупов ускоряется, что затрудняет правильную оценку морфологических изменений.

Многие отравления рыб сопровождаются повышением секреции слизи на коже и жабрах. Однако механизм этого процесса и состояние слизи бывает неодинаковым. Так, кислоты и тяжелые металлы способны коагулировать слизь, она становится густой, творожистой, плохо отделяется.

Щелочи, соли щелочноземельных металлов, аммиак разжижают ее, в результате чего она быстро смывается, происходит истощение ее запасов и поверхность тела становится суховатой, а чешуя шероховатой.

Дифференцирование следует подходить и к оценке точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на туловище, плавниках, жаберных крышках, глазах; их обнаруживают не только при отравлениях, но и ряде других болезней.

Так, серповидные кровоизлияния на склере глаз служат одним из признаков асфиксии и наблюдают при псевдомонозе. Выраженное пучеглазие, ерошение чешуи, брюшная водянка встречаются только при некоторых токсикозах смешанного характера, например при токсической водянке.

В этих случаях отмечено помутнение, изъязвление и прободение роговицы глаза.

В то же время многие резорбтивные яды (пестициды и др.) не вызывают существенной местной реакции.

Жабры являются важнейшим органом всасывания и выведения ядовитых веществ из организма рыб. Различные токсиканты оказывают на жабры рефлекторное, раздражающее и реже некротизирующее действие.

Поэтому к постоянным компонентам большинства токсикозов рыб относят различные формы нарушения кровообращения в жаберном аппарате: застой крови, цианоз, кровоизлияния, анемия, токсический отек. Микрокартина проявляется отслоением и набуханием респираторного эпителия, гипертрофией и пролиферацией слизистых и хлоридных клеток, дистрофией эпителия, что приводит к утолщению лепестков, сглаживанию рисунка, увеличению объема и дряблости жабр, выпячиванию их из-под жаберных крышек.

Вещества локального действия в высоких концентрациях вызывают диффузную десквамацию эпителия и некроз ткани.

При хроническом отравлении некоторыми веществами (например, аммиаком) наблюдается очаговый некроз жабр.

При вскрытии брюшной полости обращают внимание на ее содержимое, топографию и внешний вид органов, их консистенцию, размеры, степень кровенаполнения, окраску крови, серозных и слизистых оболочек, а также наличие запаха того или иного химического вещества.

В брюшной полости при острых отравлениях нередко обнаруживают прозрачный транссудат, иногда с примесью крови. Брюшина и серозные покровы органов отечны, под капсулой просвечивают инъецированные сосуды и изредка встречаются мелкоточечные кровоизлияния.

Внутренние органы, особенно печень и почки кровенаполнены, темно-красного цвета, дряблой консистенции, селезенка не увеличена, темно-вишневого цвета. Околосердечная полость, венозный синус и предсердие нередко (например, при действии пестицидов) сильно переполнены свернувшейся кровью.

Заметные изменения в слизистой кишечника наблюдают только при поступлении ядов перорально.

В головном мозге обнаруживают отек и дистрофию нейронов, застойную гиперемию.

Картина хронических отравлений отличается снижением упитанности рыб, общей анемией и мышечной гидратацией, побледнением и атрофией печени и других органов.

Поскольку патологоанатомические изменения недостаточно специфичны, а лишь ориентируют на наличие отравления, то для их уточнения и более достоверной оценки проводят гистологические исследования.

Это дает возможность дифференцировать отравления от патологических процессов, вызванных другими причинами, а также различать формы токсикозов.

В поверхностные воды фосфорные соединения попадают со стоками химических, пищевых предприятий, спичечных фабрик, смываются с полей, обрабатываемых удобрениями и пестицидами. В воде фосфор присутствует в виде фосфатов, галогенидов, фосфорорганических соединений и даже в форме элементарного фосфора. Полифосфаты входят в состав многих моющих средств, поступающих в водоемы с бытовыми водами. Повышение уровня фосфатов в воде (5 -- 10 мг/л Р2О5) указывает на органическое загрязнение водоемов. Отмечены случаи отравления рыб желтым фосфором.

Здесь представлены данные о неорганических соединениях фосфора -- галогенидах, элементарном фосфоре и фосфатах, объединяемых под термином “общий фосфор”.

Токсичность. Минимальной летальной концентрацией треххлористого фосфора для икры и молоди рыб является 40 мг/л, пятихлористого фосфора -- 50 мг/л; пятибромистого фосфора -- 100,0 мг/л (С. К. Краснов, Н. Д. Мазманиди). По Flescher G. L. с соавт. CK50 желтого фосфора для атлантического лосося составила при экспозиции 8 сут 0.79 мг/л, для трески -- :1,89 мг/л.

...