Современные методы оценки иммунного статуса животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

Реферат

на тему: «Современные методы оценки иммунного статуса животных, их характеристика, особенности»

Содержание

Введение

1. Оценка иммунного статуса при иммунодефицитах

1.1 Принципы иммунофенотипирования лимфоцитов

1.2 Иммунофенотипирование лимфоцитов иммуноферментным методом

1.3 Особенности фенотипа лимфоцитов в норме и при заболеваниях

2. Оценка фагоцитоза и факторов врожденного иммунитета

2.1 Характеристика гуморальных факторов естественного иммунитета

2.2 Специфические показатели иммунного статуса и методы их определения

2.3 Значение показателей иммунного статуса (иммунограмм)

Заключение

Список использованной литературы

Введение

Для того чтобы грамотно и квалифицированно диагностировать болезни врач-клиницист должен в достаточной степени знать сущность и значение основных иммунологических параметров организма в норме и патологии, определяемых современными методами.

Все современные показатели иммунного статуса можно разделить на 2 группы: антигенспецифические и антиген-неспецифические. Эти методы используют для оценки иммунного статуса, т.е. для характеристики состояния системы иммунитета (СИ).

Для оценки иммунного статуса при иммунодефицитах используются преимущественно антигеннеспецифические методы, а для диагностики инфекционных заболеваний и аллергии -- антиген(аллерген)-специфические. Имеются четыре основных группы антиген-неспецифических методов:

1. Количественная характеристика популяций и субпопуляций лимфоцитов и других лей- коцитов методами иммунофенотипирования клеток по рецепторам, CD-антигенам и другим маркерам.

2. Анализ функций клеток СИ (т.е. лейкоцитов) -- пролиферативной, секреторной, цитокиновой, цитотоксической.

3. Определение медиаторов и цитокинов, продуцируемых клетками, в биологических жидкостях.

4. Определение гуморальных факторов системы иммунитета (иммуноглобулинов, комплемента и др.)

1. Оценка иммунного статуса при иммунодефицитах

Количество методов, необходимых для полноценной характеристики состояния системы иммунитета, быстро увеличивается параллельно сложности их выполнения. Поэтому применение тестов I и даже II уровня для оценки иммунного статуса недостаточно эффективно. Концепция иммунологического образа болезни, обосновывающая существование для каждого заболевания и его вариантов своих измененных параметров, а также ориентировка на вид и вариант иммунного статуса, позволяет использовать небольшую группу главных диагностических показателей в каждом конкретном случае.

Лабораторная диагностика иммунодефицита (ИД) основывается на определенной последовательности, алгоритме действий, используемых при оценке иммунного статуса. Выявление ИД проводят в двух ситуациях:

1) при скрининге контингентов населения определенных регионов и рабочих коллективов на предмет наличия ИД;

2) при обследовании больных с целью уточнения предварительного диагноза. Для некоторых генетических обусловленных иммунодефицитов возможна пренатальная диагностика на основании ультразвукового обследования, хромосомного и биохимического анализов. Эпидемиологические скрининговые обследования различных групп населения и больных на наличие иммунодефицитов проводятся по следующей примерной схеме.

1. Анамнез и осмотр. Заполнение анкет. Их анализ, формирование групп риска с предвари- тельным диагнозом по основным синдромам.

2. Клинико-лабораторное обследование. Основные показатели крови и биохимический статус (объем по показаниям). Предварительный диагноз иммунопатологии (вариант иммунного статуса). Рекомендации по набору тестов для оценки иммунного статуса.

3. Оценка иммунного статуса (наиболее распространенные тесты):

3.1. Общий анализ крови; определение соотношении нейтрофилы/лимфоциты/моноциты. СОЭ, СРБ, белковые фракции сыворотки крови (g-глобулины).

3.2. Определение количества Т-лимфоцитов (процент и абсолютное число) методами с моноклональными антителами (мАТ) антителами к CD2, CD3, CD4, CD8, CD25. Отношения CD4/CD8.

3.3. Определение В-лимфоцитов -- CD19, CD21, CD22, CD72 или Ig+B.

3.4. Определение иммуноглобулинов классов G, М, А, Е в сыворотке крови и sIgA слюне. Соотношения их количества (G/M/A).

3.5. Поглотительная активность нейтрофилов крови, частиц латекса и/или стафилококков, кандид (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс); оценка киллинга кандид, бактерий.

3.6. НСТ-тест.

3.7. Определение циркулирующих иммунных комплексов (методом ПЭГ-осаждения). Другие тесты по показаниям.

3.8. Антитела против стрептококка, дифтерийного токсина, гемофильной палочки, столбнячного токсоида, стафилококка, его токсина и вирусов (кори, гриппа).

3.9. Определение гемолитической активности комплемента (С50) и/или его компонентов.

3.10. Внутрикожные пробы (после забора крови!) с распространенными антигенами (туберкулин, стрептокиназа-стрептодерназа, антигены бактерий и грибов).

3.11. По показаниям--определение ферментов, отсутствующих при первичных иммунодефицитах (АДА, пуриннуклеозидфосфорилазы, альфафетопротеин при атаксии; гранулы лейкоцитов при гранулематозной болезни).

3.12. Оценка интерферонового статуса: концентрация интерферона в сыворотке крови; уровень интерферонa а и g в культуре лимфоцитов крови после стимуляции вирусом болезни Ньюкастла и стафилококковым энтеротоксином соответственно.

3.13. HLA-типирование (при необходимости).

3.14. Выявление цитокинов (по показаниям), в крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) и в клетках системы иммунитета (СИ) методами проточной цитометрии.

3.15. Определение общей g-цепи рецепторов цитокинов при тяжелом комбинированном иммунодефиците (ТКИД) методом проточной цитометрии.

Основные показатели лимфоидной системы

Среди различных методов ОИС центральным является определение фенотипа популяций и субпопуляций лимфоцитов.

Фенотипирование лимфоцитов, в настоящее время, проводиться с помощью моноклональных антител (мАТ) к СD-антигенам в реакции иммунной флуоресценции с учетом результатов на люминисцентном микроскопе или проточном цитометре. Метод проточной цитометрии является высокоточным и эффективным для анализа популяций и субпопуляций любых лейкоцитов, в том числе по двум и трем маркерам с помощью мАТ меченых флюоресцентными метками, однако не может широко использоваться в клинической практике из-за дороговизны анализов. Для анализа популяций и субпопуляций лимфоцитов помимо методов иммунофлюоресценции с суспензией лимфоцитов можно использовать разработанные нами стабильные иммунодиагностикумы на основе моноклональных антител, позволяющие фенотипировать лимфоциты в лейкосуспензии с регистрацией при обычной световой микроскопии.

1) Общее количество лимфоцитов при подсчете формулы крови. При рождении их содержание 20-28%. На 5-6 день жизни -- 40-45%. В возрасте 2-3 мес. их относительное содержание достигает 55-65% и сохраняется на этом уровне до 5-6 лет, после чего происходит их снижение и в возрасте 6-15 лет и у взрослых, относи- тельное количество лимфоцитов составляет 22-30% от других лейкоцитов (около 1500- 2500 клеток в 1 мм3 ). Увеличение количества лимфоцитов (лимфоцитоз) характерно для ряда инфекционных заболеваний, а также рецидивирующих и хронических заболеваний ЛОР- органов и бронхолегочной системы.

2) Общие Т-лимфоциты (CD2+, CD3+- клетки), в настоящее время, определяются с помощью моноклональных антител к СD-антигенам (СD2, СD3). У новорожденных их содержание 40-48%. В раннем детском возрасте -- 50-60%. У взрослых их уровень составляет 55-70% (1000-1500 клеток в 1 мм3 ). При заболеваниях инфекционной этиологии характерно снижение CD3+- Т-лимфоцитов до 40-50%, которое может сохранятся в периоде реконвалесценции и не требует иммунокорригирующей терапии. Если же CD3+- Т- лимфоцитов в крови ниже 40% или после бо- лезни их содержание в течении 1 месяца не приходит в норму -- это расценивается как Т-клеточный иммунодефицит и необходимо проведение иммунокоррекции или иммунотерапии под контролем иммунограммы.

3) Уровень Т-хелперов и Т-цитотоксических определяется с помощью моноклональных антител к СD4 (Тx) и СD8 (Тц) антигенам. В норме CD4+ -Т-хелперов 36-45%, CD8+-Т-цитотоксических (супрессоров)-19- 28%, соотношение Тx/Тц (иммунорегуляторный индекс, ИРИ) = 1,5-1.8. При рецидивирующих инфекционных заболеваниях этот индекс снижается до 1,2-1,5, за счет содержания CD4+-Т-хелперов (26-32%). При аутоиммунных и аллергических заболеваниях индекс больше 2.0.

4) Для выявления ранней фазы активации лимфоцитов определяют рецептор для ИЛ-2 (CD25), поздней -- HLA-DR антигены и CD71 (рецептор для трансферрина). В норме содержание CD25+- лимфоцитов 6-12%. При вирусных и бактериальных инфекциях их уровень может достигать 20-30% в остром периоде заболевания, преимущественно за счет Т-лимфоцитов. Длительное сохранение высокого уровня CD25+- лимфоцитов в ремиссию, после исчезно- вения клинических симптомов, указывающее на гиперактивацию, характерно для рецидивирующих и хронических заболеваний. HLA-DR антиген в норме экспрессируют В-лимфоциты и моноциты (12-18%). При активации он появляется на Т-лимфоцитах (3-6%).

5) Функциональные показатели Т-лимфоци- тов: пролиферативная активность -- реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с определением продукции ИЛ-2, других цитокинов. Способность к бласттрансформации, после стимуляции антигеном или митогеном (ФГА) отражает функциональную активность иммунокомпетентных клеток. Лучшим показателем активации Т-клеток в тестах in vitro является определение ИЛ-2, который выделяется активированными Т-лимфоцитами и в норме поддерживает пролонгированную пролиферацию. Реакцию подавления миг- рации лимфоцитов (РПМЛ) можно использовать для дифференциальной диагностики с хроническими заболеваниями, при которых появляются медиаторы ПЧЗТ, подавляющие миграцию лейкоцитов.

6) Общее количество В-лимфоцитов можно определить с помощью моноклональных антител к антигенам СD19 -- СD22, СD72. Используют также антитела к иммуноглобулинам, которые находятся на поверхности В-лимфоцитов. В-лимфоциты составляют 20-30% всех лимфоцитов (600-800 клеток в 1 мм3 крови). Содержание CD22+-субпопуляции В-клеток составляет 14-20% у здоровых. Есть данные, что при острых респираторных заболеваниях их уровень в фазе реконвалесценции увеличивается до 26-28%.

7) Функциональные продукты В-лимфоцитов -- иммуноглобулины классов G, М, A и их субклассы в сыворотке крови и различных биологических жидкостях определяют с помощью реакции преципитации по Манчини, а также иммуноферментным, нефелометрическим и турбидиметрическим методами. При иммунодефицитах уровень иммуноглобулинов снижается, а при стимуляции системы иммунитета и воспалении -- повышается. Содержание иммуноглобулинов в норме представлено в табл.1.

При рецидивирующих инфекционных заболеваниях имеет важное значение определение субклассов IgG. Их физиологическое соотношение: IgG1 -- 60-66%, IgG2 -- 20-30%, IgG3 -- 5- 8%, IgG4 -- 4-5% от общего иммуноглобулина G (табл. 2). Широкий ряд респираторной патологии, включающей рецидивирующие бронхи- ты, пневмонии, бронхоэктазы, синуситы и др., ассоциируется с наличием дефицита IgG1. Дефицит IgG3 , который может протекать совместно с дефицитом IgG1 , связывают с рецидивирующими обструктивными заболеваниями легких. Рецидивирующие респираторные инфекции бактериальной этиологии (гемофильная палочка, пневмококк) имеют связь с дефицитом IgG2 в ассоциации с дефицитом IgA.

1.1 Принципы иммунофенотипирования лимфоцитов

Характеристика клеток СИ по их фенотипу служит одним из основных подходов для изучения их роли в норме и патологии. Оптимальным является его оценка в совокупности с клеточными функциями, т.е. «фенотип+функция».

Фенотип клетки -- совокупность молекул, рецепторов, других структурных компонентов, которые она экспрессирует в момент исследования. Этот фенотип определяется активностью соответствующих структурных и регуляторных генов. Поэтому фенотип отражает генную активность клетки, которая, изменяясь под влиянием тех или других факторов, приводит к его модуляции.

Для характеристики фенотипа клеток используются различные маркеры:

- рецепторы, связывающие эритроциты, бактерии, вирусы, иммуноглобулины, гормоны и т.д.

- антигены системы HLA

- молекулы кластера дифференцировки -- CD

С целью фенотипирования лимфоцитов широко использовалось определение рецеп- торов к эритроцитам барана и мыши. Гликопротеиды эритроцитов барана (ЭБ) связываются с Т-лимфоцитами, причем ре- цептором для этого служит молекула адгезии CD2. Первые данные об изменении уровня Т- лимфоцитов при многих иммунодефицитных болезнях были получены методом розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Позже эти данные были подтверждены путем определения Т-лимфоцитов с помощью моноклональных антител к CD3-молекуле. Хотя метод Е-РОК считается устаревшим, в принципе он позволяет достоверно судить об уров- не зрелых Т-лимфоцитов, хотя и не выявляет Т-клетки с низкоаффинными рецепторами к ЭБ. Однако модификация метода путем обработки ЭБ папаином или нейроаминидазой, «разрыхляющими» мембраны эритроцитов и расщепляющими некоторые вещества, позволяет выявлять всю популяцию Т-клеток, сопоставимую с определением методом проточной цитометрии.

Использование определения «активных» Т-лимфоцитов, связывающих ЭБ при 37°С, принесло меньше информации из-за неясности сущности феномена и его связи с конк- ретными, ныне известными, субпопуляциями Т-клеток. Все же этот метод в определенной степени детектирует гетерогенность феноти- па Т-клеток и иногда указывает на связь с тяжестью патологического процесса при снижении их уровня.

Применение метода «теофиллинчувствительности» для характеристики Тх и Тс оказалось неприемлемым, так как нет корреляции его показателей с CD4+ и CD8+-лимфоцитами и поэтому значение уменьшения розеткообразования под влиянием теофиллина остается неясным.

Особенности иммунофенотипирования лимфоцитов методами лазерной проточной цитометрии

Цитометрия клеток в потоке позволяет анализировать их фенотип по морфологическим и молекулярным параметрам. Эти параметры различаются у лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов. Скорость анализируемого потока 10-30 тыс. клеток в секунду.

Проточный цитометр имеет три основные блока: оптический для измерения рассеивания света и флюоресценции возбуждаемого одним или двумя лазерами; блок преобразования световых сигналов в электрические; компьютер для анализа данных.

Проточный цитофлуориметр FACS Calibur™ производства фирмы Becton Dickinson -- универсальная система, предназначенная как для клинических, так и научных исследований, основанных на анализе свойств клеток. Прибор может проводить регистрацию до 6 оптических параметров клеток, включая 4 параметра флуоресценции с использованием двухлазерной оптической схемы, что позволяет оценивать распределение нескольких клеточных маркеров в одной пробе и предоставляет широкие возможности для выбора различных флуоресцентных реагентов и их сочетаний при проведении исследований.

Двухлазерная конфигурация оптической системы прибора гарантирует надежное разделение сигнала при работе с многоцветными метками и позволяет использовать широкий спектр флуоресцентых меток.

Для метода меченых антител применяют флуоресцентные красители -- флюоресцеин-5- изотиоцианат (ФИТЦ) и R-фикоэритрин (ФЭ). Под воздействием аргонового лазера с длиной волны 488 нм ФИТЦ излучает свет в зеленом спектре, а ФЭ -- в оранжево-красном. Применение других флюорохромов и нескольких лазеров позволяет проводить мультицветовой анализ нескольких параметров клетки одномоментно, что является большим преимуществом этой технологии.

Несмотря на то, что иммунофенотипические маркеры лимфоцитов интенсивно изучаются, о чем свидетельствует большое количество работ, их значение при многих нозологических формах остается недостаточно исследованным. Кроме того, для проведения адекватной терапии, необходимо точно знать диагностические иммунологические критерии при назначении тех или иных иммуномодулирующих препаратов.

Наиболее существенным фактором, определяющим состояние иммунитета, является количественная и/или функциональная характеристика субпопуляций клеток системы иммунитета.

К настоящему времени практически сформировался стандарт, по которому осуществляется идентификация иммунокомпетентных клеток и определение их функциональной способности. Он включает:

- выделение лейкоцитарной фракции крови с лизисом эритроцитов;

- инкубация выделенных клеток с моноклональными антителами к CD-рецепторам -- маркерам клеточных популяций при неадекватной для иммунологических реакций температуре -- 4°С, из-за «сбрасывания» рецепторов при 37°С;

- обработку клеток моно- или поликлональным антимышиным антииммуноглобулиновым конъюгатом, связанным с флюорохромом;

- идентификацию маркер-несущей субпопуляции при помощи метода проточной цитометрии или иммунофлюоресции.

Данный подход получил широкое распространение в странах Западной Европы, США и России.

Основные недостатки такого подхода -- необходимость инкубации при неадекватной температуре 4°С, использование для оценки результатов дорогостоящего проточного цитометра или люминисцентного микроскопа.

При использовании «одинарной» метки выделенные из крови лейкоциты инкубируют с немечеными мАТ против соответствующего CD- антигена при 4°С 30 мин. Когда используют непрямой метод и первичные немеченые мАТ, то на втором этапе добавляют антитела, меченые флуорохромом -- антимышиные, козьи или кроличьи иммуноглобулины или их F(ab)2 фрагменты и снова инкубируют при 4°С 30 мин. Очевидно, что хотя «холодовая» инкубация предотвращает движение мембраны и сброс рецептора с антителом, однако не является оптимальной температурой взаимодействия антитела и антигена.

Другим критическим моментом является последующий этап лизиса эритроцитов. Лизирующий раствор (0,8% раствор хлористого аммония + 0,1% NaHCO3 + 0,0037% натрие- вая соль ЭДТА, рН=7,2-7,4), в котором инкубируют клетки 1-3 мин, а затем центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, может повреждать мембраны лимфоцитов, удаляя с них наиболее лабильные рецепторы активации как непосредственно, так и под действием ферментов, выделяющихся из поврежденных клеток. Когда используют метод с «двойной» меткой, то лейкоциты инкубируют с антителами при 20-22°С 30 мин, что лучше для взаимодействия антител и антигенов. Однако и в этом методе остается этап лизиса эритроцитов. Оптимальным было бы исключить данную процедуру.

Стоимость проточного цитометра составляет (в зависимости от фирмы-изготовителя) от 100 до 230 тыс. долларов США. Кроме того, в странах СНГ, серийно данные приборы вообще не производятся. Естественно, их использование необходимо, особенно для научных целей: для одномоментного выявления двух-трех и более маркеров. Однако при повседневной оценке иммунного статуса больных необходимы более простые и дешевые методы.

Это важно для иммунологического мониторинга населения, и особенно -- отдельных его контингентов (ликвидаторов аварии на ЧАЭС, детей, лиц с первичными и вторичны- ми иммунодефицитами, аллергическими заболеваниями).

Фенотипирование лимфоцитов с частицами, покрытыми моноклональными антителами

Детекция структур клеточной поверхности с помощью свободных антител или других лиганд, связывающихся с определенными подвижными молекулами, которые могут по ней мигрировать и сбрасываться, не отражает той ситуации, когда происходит взаимодействие клетки с рецептором другой клетки, т.е. путем межклеточных контактов, а «лиганд-рецептор» фиксируется на клетке. Поэтому необходим аналитический метод, регистрирующий взаимодействие фиксированных лиганд-антител или антигенов с клеточной поверхностью, моделирующий межклеточные взаимодействия. Такой метод предложен нами на основе диагностикумов с фиксированными эритроцитами -- частицами, покрытыми мАТ.

Для анализа фенотипа популяций и субпопуляций лимфоцитов мы предложили ис- пользовать разработанные нами стабильные иммунодиагностикумы на основе моноклональных антител, связанные с частицами. Эритроциты обрабатывали антителами против иммуноглобулинов мыши и сорбировали на них мАТ. В итоге получили стабильный диагностикум, который использовали в прямой реакции розеткообразования с суспензией неочищенных лейкоцитов или лимфоцитов. Сравнение метода с проточной цитометрией и иммунофлюоресценцией позволило установить прямую корреляцию по CD-антигенам, выявляемым разными методами. Однако, количественно метод анти-CD-частиц выявлял меньшее количество CD3+-лимфоцитов и большее CD25+ активированных лимфоцитов, чем метод проточной цитометрии. Это связано, по-нашему мнению, в первом случае с плотностью распределения CD3-молекул на мембране лимфоцитов, так как для образования стабильной розетки в методе анти-CD-частиц требуется большая плотность CD3-молекул, а в проточной цитометрии типируются лимфоциты и с меньшей плотностью распределения CD3-молекул. Выявление же более высокого процента CD25+ лимфоцитов, методом СД-частиц, по-видимому, связано со стабилизацией мембраны при связи нескольких молекул CD25-антигена с антителами прочно сорбированными на частице, т.е. при так называемом «комплексном многоточечном» связывании, что предотвращает их движение к полюсу клетки и сброс рецептора вместе с антителом к нему что происходит при «одноточечном» связывании свободных антител (метод проточной цитометрии).

Мы установили, что при иммунодефицитных вариантах бронхолегочных и инфекци- онно-воспалительных заболеваний, как правило, снижены уровни лимфоцитов с феноти- пом CD3+ Т-общие и CD4+ Т-хелперы, иммунорегуляторный индекс -- CD4/CD8. Одно- временно отмечалось усиление экспрессии рецепторов активации -- CD25, CD71. Аналогичные данные в целом получены и методом проточной цитометрии.

1.2 Иммунофенотипирование лимфоцитов иммуноферментным методом

Принцип метода. При применении реагентов фирмы Dako используется сродство стрептавидина к биотину. Фиксированные мазки крови обрабатывают мАТ к к соответствующему CD-антигену, а несвязывающиеся антитела удаляют промыванием. На следующем этапе мазки обрабатывают антителами к мАТ (против мышиного иммуноглобулина) меченные биотином. После чего добавляют стрептавидин, меченый ферментом (пероксидазой, щелочной фосфатазой). Выявляют активность фермента субстратхромогенной смесью. При микроскопии вокруг клеток, связавших антитела, имеется ореол окрашенного хромогена. Контроли включают отрицательный образец необработанный мАТ и положительный -- клетки с известным фенотипом. В качестве положительного контроля применяют антитела к CD45 (положительны все лимфоциты), а в качестве отрицательного -- неиммунный мышиный IgG1 вместо мАТ. Метод не нашел широкого применения. Использование фиксированных мазков с клетками не является оптимальным, т.к. клетки могут терять некоторые молекулы при фиксации. лимфоцит фенотипирование фагоцитоз иммунный

Иммуномагнитное выделение лимфоцитов как метод их фенотипирования

Согласно рекламному проспекту Фирма Dynal (Норвегия) предлагает метод иммунофенотипирования лимфоцитов на основе их биомагнитного сепарирования и подсчета абсолютного количества. Принцип метода заключается в том, что парамагнитные полистерольные микрочастицы (диаметр 4,5 мкм), конъюгированные с моноклональными антителами к CD4 и CD8 антигенам, связываются с клетками, имеющими эти антигены и после 10 мин инкубации осаждаются на магнитном сепараторе, а несвязавшиеся -- удаляются. В итоге подсчитывается количество клеток, связавшихся с микрочастицами.

Это один из методов, в котором мАТ связаны с достаточно крупными микрочастица- ми, которые взаимодействуют с клетками. Способ конъюгации антител с частицами не описывается. Этапы выделения CD4+, CD8+- лимфоцитов:

- цельную кровь разбавляют фосфатным бу- фером (125 мл крови + 350 мкл буфера)

- удаляют моноциты, для чего к крови добавляют 25 мкл анти-CD14 частиц (Dynabeads), инкубируют 10 мин при магнитном сепараторе, а затем отсасывают надосадочную жидкость (НЖ) с лимфоцитами

- к двум разным порциям НЖ без моноцитов добавляют по 25 мкл анти-CD4 и на магнитном сепараторе Dynal MPC лимфоциты, связавшие осажденные клетки, ресуспензируют в лизирующем растворе уксусной кис- лоты для разрушения эритроцитов (5 мкм при комнатной температуре)

- добавляют красители (генцианвиолет или акридиновый оранжевый) и подсчитывают количество клеток в камере Горяева на световом или флуоресцентном микроскопе. Корреляция с проточной цитометрией -- 90%.

Данный метод наиболее близок разработанному нами методу CD-частиц, так как микрочастицы несут антитела. Стоимость дозы магнитных частиц для одного анализа составляет 3 долл. Метод ограничен анализом CD8+ и CD4+-лимфоцитов.

Лимфоцитотоксический тест

Принцип метода. При связывании антител с антигенами на поверхности клетки образуется иммунный комплекс, который активирует комплемент, лизирующий клетку. Лизис оценивается по окраске клеток трипановым синим. В методе используются только те изотипы мАТ, которые способны после связывания с антигеном активировать добавленный комп- лемент. Рассчитывается процент окрышен- ных погибших клеток, который отражает количество Т- или В-лимфоцитов соответствующей субпопуляции. В настоящее время метод чаще применяется для выявления HLA- антигенов.

Характеристика связывания липополисахаридов бактерий лейкоцитами для оценки иммунного статуса

В норме клетки СИ постоянно контактируют с бактериями в миндалинах, пейеровых бляшках, других структурах мукозоассоции- рованной лимфоидной ткани. Важнейшими структурами бактериальной стенки и активаторами СИ служат липополисахариды (ЛПС). Центральная часть ЛПС (ядро) -- олигосахаридный «кор» состоит из остатков 2-кето-3- дезоксиоктоната, галактозы, глюкозы, гептозы и N-ацетилглюкозамина. С одной стороны, к этому ядру присоединен липид А, а с другой стороны -- О-специфические полисахаридные цепочки из 3-4 сахаров, которые являются наиболее иммуногенными в ЛПС и определяют его специфичность.

В целом ЛПС является эндотоксином и уже в небольших дозах вызывает лихорадку из-за активации макрофагов и выделения ими ИЛ1, ФНОa и других цитокинов, поликлональную тимуснезависимую активацию В-лимфоцитов и синтез антител, дегрануляцию гранулоцитов, агрегацию тромбоцитов. Он может связываться с любыми клетками организма, но особенно с макрофагами. В больших дозах угнетает фагоцитоз, вызывает токсикоз, нарушение функции сердечно-сосудистой системы, тромбозы, эндотоксиновый шок. ЛПС некоторых бактерий входит в состав иммуностимуляторов (продигиозан, пирогенал).

В сыворотке крови имеется ЛПС-связывающий белок; ЛПС комплексируется с ним, а затем связывается с CD14-рецептором моноцитов макрофагов и активирует их. CD14 имеется также на В-лимфоцитах и, видимо, на всех лейкоцитах. Суперактивация лейкоцитов через этот рецептор приводит к развитию эндотоксинового шока. Блокировка этого рецептора используется в лечении. ЛПС-активированная сыворотка (комплекс ЛПС+белок) индуцирует экспрессию функционального активного рецептора для ИЛ-8 на нейтрофилах и усиливает их миграцию.

ЛПС и пептидогликан бактерий имеют связующие рецепторы на всех лейкоцитах. Лейкоциты новорожденных слабее связывают ЛПС, чем взрослых. Причем не только через CD14 рецептор, так как имеются другие структуры. В прямом связывании ЛПС участвуют Toll-рецепторы [TLR-1-11].

ЛПС является митогеном для В-лимфоци- тов и может служить суперантигеном. Более того, оказалось, что он может стимулировать пролиферацию отдельных Т-лимфоцитов (1:1000) продукцию ими цитокинов. При местном контакте со слизистой оболочкой носа ЛПС в дозах 0,001-1 мкг/мл через 24 часа активировал CD3 Т-клетки и секрецию цитокинов и ферментов, т.е. индуцировал местное воспаление.

Однако, во всех цитированных работах изучалось связывание с лейкоцитами свободного ЛПС, но не изучено связывание ассоциированного на частицах. Оценка связывания ЛПС лейкоцитами и, в частности лимфоцитов, может служить интегральным показателем состояния СИ, так как при этом оценивается состояние их рецепторного аппарата.

Для приготовления ЛПС-диагностикума - частиц мы к 1 мл эритроцитов, фиксированных и активированных 2,5% раствором глютарового альдегида, добавляли 5 мл 0,01% раствора ЛПС (S. flexneri) и инкубировали 30 мин при 37°С. Затем эритроциты отмывали 2 раза фосфатным буфером и использовали в качестве диагностикума в реакции розеткообразования с суспензией лейкоцитов крови здоровых и больных.

Уровень ЛПС+-лимфоцитов у здоровых лиц был высоким -- 51,4±8,6%, что указывает на то, что его связывали не только В-лимфоциты для которых он служит митогеном, но и Т-клетки.

Уровень лимфоцитов, несущих рецепторы к липополисахариду бактериальной стенки, -- является интегральным показателем состояния функции защиты системы иммунитета от бактериальной инфекции. Имеется связь содержания ЛПС+-лимфоцитов с длительностью клинических симптомов заболевания. При выздоровлении их относительное количество в крови составляло 40-56%. Оно достоверно не уменьшалось при атопической бронхиальной астме и других аллергических заболеваниях. В остром периоде заболеваний, ассоциированных с инфекцией, характерно было их снижение до 30- 36%, которое в периоде реконвалесценции возвращалось к норме. При рецидивирующих тяжелых гнойно-септических заболеваниях снижение может достигать 22-30% и длительно сохраняется в периоде ремиссии (рис. 1).

Следовательно, определение уровня ЛПС+- лимфоцитов позволяет оценить состояние рецепторов врожденного иммунитета, снижение их экспрессии указывает на инфекцию и имеет прогностическое значение.

1.3 Особенности фенотипа лимфоцитов в норме и при заболеваниях

В норме при определении Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций с помощью мАТ авторы приводят значительно отличающиеся показатели нормы, в том числе и возрастной. Диапазоны верхних и нижних границ показателей нормы, приводимых лабораторией С.-Петербурга, существенно различаются. Это связано как с указанными особенностями методов выявления клеточных субпопуляций, так и с их высоким динамизмом в крови. У 6-10% здоровых людей имеются в норме значительные отклонения показателей от сред- них величин: у 9% людей количество лимфоцитов 42% у 8% лиц, ЕК>20% у 3% людей и т.д.

Уровни субпопуляций лимфоцитов изменяются при стрессе, физической нагрузке, при всех заболеваниях, под влиянием лечения различными препаратами. У детей раннего возраста имеется физиологический лимфоцитоз и связанный с ним отличающийся состав субпопуляций лимфоцитов.

Однако, как правило, динамика субпопуляций лимфоцитов в крови больных отражает тяжесть течения заболевания и по их составу можно осуществлять его прогнозирование.

При большинстве заболеваний снижается уровень CD3+- и CD4+-лимфоцитов. Нередко при хронических воспалительных заболеваниях повышается уровень CD25+-Т-лимфоцитов, что указывает на их активацию. Снижение этой и увеличение HLA-DR субпопуляции указывает на благоприятную динамику процесса. При герпетических и других вирусных инфекциях снижается уровень Тх и Тс, а также количество лимфоцитов, возникает иммунодефицитный лимфоцитопенический синдром.

Уменьшение уровня Т-лимфоцитов и Тх отмечается и при бактериальных инфекциях уже потому, что нередко они возникают на фоне вирусных. Кроме того, Тх чувствитель- ны к бактериальным токсинам в большей степени, чем В-лимфоциты. Уровень CD8+-кил- леров может быть повышен.

На основании повышенного уровня активированных CD3+DR+-лимфоцитов более 5% и увеличения (>3200 кл/мкл) или снижение (< 1200 клеток/мкл) делается прогноз развития герпетической инфекции.

Острое воспаление сопровождается следующим фенотипом лимфоцитов: CD3-, CD4+ или CD8-, CD4/CD8N или -, СВ25-, CD69-, CD16+ CD56+ N или Ї. При бактериальных инфекциях преобладает развитие гуморального ответа по Тх2 типа, однако у части лиц по Тх1 типа с ГЗТ. Подострое или затяжное воспаление с благоприятным течением характеризуется нормализацией показателей статуса.

Фенотип лимфоцитов связан с типом иммунной реакции: при гуморальном ответе с участием Тх 2 имеются активированные В- клетки, в лимфоидных органах и слизистых оболочках много плазматических клеток, а в крови -- антитела разных изотипов. Причем при первичном ответе IgM, при вторичном -- IgG (субклассы), а при аллергичес- ком -- IgE. В иммунный ответ с участием сли- зистых оболочек вовлекаются клетки местно- го иммунитета и отмечается синтез секреторных IgA-антител.

Клеточный ответ с преобладанием активности Тх 1 типа характеризуется появлением Т-киллеров, которыми могут быть CD8+-Т- лимфоциты и потомки CD4+-клеток.

По изменению фенотипа клеток и других показателей СИ можно прогнозировать течение патологического процесса.

Иммунодиагностика патологии и аномальный иммунный ответ

Специфическая иммунодиагностика основана на классическом выявлении иммунной реакции, особенно ее вторичного ответа: по наличию антител класса G против какого-то антигена, хотя первичный ответ в типичной ситуации сопровождают антитела класса М и их определение может иметь большее диагностическое значение. Часть антител связывается антигеном, образуя иммунные комплексы. Другая -- сорбируется лейкоцитами -- лимфоцитами, гранулоцитами, моноцитами- макрофагами, тромбоцитами и, по-видимому, эндотелием сосудов. Даже при нормальном иммунном ответе выявляются лишь свободные антитела и в основном класса G -- субклассы G1, G2, реже G3 и G4.

Патологический, аномальный иммунный ответ встречается примерно у 10% индивидов. Его патологичность и аномальность может выражаться в следующем:

- агаммаглобулинемия -- дефицит синтеза всех иммуноглобулинов

- дефицит синтеза G1, G2 и, как следствие компенсации, -- появление антител IgM, IgA, не определяемых в тех тестах, которые используются для выявления IgG, например, ИФА

- дефицит синтеза IgM

- гиперпродукция IgE -- как следствие ал- лергического аномального ответа

- синтез «неполных» антител, не выявляемых в том или ином тесте

- наличие анти-Ig-нов, препятствующих определению антител

- низко- и высокодозовая толерантность к антигену и подавление ответа -- аллергия

- диссоциация иммунного ответа -- угнетение синтеза антител на фоне гиперактивности иммунных Т-лимфоцитов

- супресия иммунного ответа из-за активации специфических супрессоров

- дефицит соответствующих хелперов

- другие причины, ведущие к недостатку антител к данному антигену

Во всех перечисленных ситуациях аномального иммунного ответа можно не вы- явить антитела к конкретному антигену и сделать вывод о его отсутствии. Между тем, ситуации при этом наиболее тяжелые, патологические. Следовательно, иммунодиаг- ностика, ориентированная на однократное определение узкого спектра антител одного изотипа только в сыворотке крови и толь- ко одним серологическим тестом заведомо не позволяет определить наиболее аномальный иммунный ответ в наиболее драматических ситуациях.

Важнейшую часть иммунопатологии составляют аллергические заболевания и иммунодефициты. Обращает на себя внимание, что если аллергические и инфекционные заболевания четко связаны с участием в иммунном процессе конкретных, облигатных аллер- генов и инфектов, т.е. по существу являются антигенспецифическими, то иммунодефици- ты в этом отношении являются преимущественно антигеннеспецифическими.

Основа иммунодефицита -- угнетение или полное недоразвитие какого-либо звена СИ, чем и объясняется недостаточность защиты и развитие инфекций, вызываемых различными условно-патогенными микроорганизмами. Правда, при любой форме ИД могут встречаться наиболее распространенные виды возбудителей, однако в целом характерно их разнообразие. Диагностика базируется на оценке иммунного статуса по многим показателям СИ, для выявления в ней дефектного звена.

2. Оценка фагоцитоза и факторов врожденного иммунитета

Функция фагоцитоза является важным показателем состояния системы гранулоцитов и мононуклеарных фагоцитов, так как это -- главный неспецифический механизм антибактериальной защиты. Снижение показателей фагоцитоза характерно при соответствующих иммунодефицитах, повышение -- при благоприятном течении инфекции.

1) Оценивается поглотительная и переваривающая активность гранулоцитов с определением фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа. Фагоцитарный индекс (ФИ) -- это количество фагоцитов, участвующих в фагоцитозе (норма -- 60-80%). Фагоцитарное число (ФЧ) -- это среднее количество частиц или микроорганизмов в одном фагоците (норма 3-8). Оценка показателей через разные промежутки времени позволяет оценить динамику фагоцитоза. В норме через 90 мин фагоцитарный индекс должен быть ниже, чем через 45 мин и 60 мин, в связи с перевариванием микробов. При нарушении переваривания он не меняется.

Переваривание бактерий можно оценивать путем посева лизатов лейкоцитов на питательные среды и подсчета выросших колоний. Метод предполагает использование в качестве объекта фагоцитоза живых микроорганизмов. Переваривающую активность фагоцитов оценивают по числу выросших колоний.

Переваривание кандид (киллинг): оценивают киллинг в % убитых клеток через 30 и 60 мин минут инкубации. Подсчитывают при световой микроскопии процент убитых фагоцитами, окрашенных синькой, дрожжевых клеток. В норме киллинг состовляет 23-30%. Исследование этих показателей в динамике позволяет оченить скорость лизиса поглощенных клеток. Повышение ФИ и ФЧ при сохраненном киллинге указывает на снижение скорости лизиса дрожжевых клеток. Уменьшение ФИ и ФЧ при сохраненном киллинге указывает на интенсивный лизис дрожжевых клеток.

2) Метаболическую активность фагоцитов определяют после окраски их 0.25% раствором нитросинего тетразолия. В норме окрашивается 12-21% нейтрофилов, при инфекциях их число увеличивается до 40% и более.

3) Система мононуклеарных фагоцитов (моноцитов и макрофагов) осуществляет и другие функции, важные для различных этапов иммунного ответа, в том числе распознавание и представление антигена. Для врожденного иммунитета определяющим является состояние (количество, степень родства) ЛПС-х и др. Для приобретенного -- экспрессия антигенов дифференцировки, активации и адгезии (СD14, СD11, СD16, СD18, HLA-DR и др.), рецепторов к С3-комплементу, и Fc-рецепторов к иммуноглобулинам. Состояние функций оценивается по спонтанной и направленной миграции, способности секретировать цитокины (ИЛ-1, ФНОa и др.).

2.1 Характеристика гуморальных факторов естественного иммунитета

Факторы системы комплемента, b-лизины, интерфероны, маннан-связывающий белок, дефензины и белки острой фазы воспаления (СРБ, фибриноген, сывороточный амилоид, a2 - макроглобулин) служат первой линией защиты от патогенов и их недостаточность может быть причиной инфекции. Снижение уровня СН50 может наблюдаться как вторичное состояние при инфекционных заболеваниях ЛОР-органов и бронхов. Рецидивирующую инфекцию дыхательных путей пневмококковой этиологии связывают с дефицитом С3 компонента комплемента.

1) Гемолитическая активность комплемента определяется в реакции гемолиза с использованием гемолитической системы. Определение комплемента основано на способности продуктов его активации вызывать лизис эритроцитов, покрытых антителами. По степени гемолиза судят о гемолитической активности комплемента. В качестве единицы измерения комплемента используется 50% единица (СН50) -- количество комплемента, вызывающее 50%-ный лизис 0,5 мл стандартной суспензии сенсибилизированных эритроцитов при температуре 370 С в течение 60 мин.

2) Выявляют продукты активации С4а, С3а, С5а и др.

3) Оценивают количество компонентов комплемента (норма в сыворотке крови в мг/л: С1q-190, C1s-120, С2-30, С4-430, С3-1300, С5-75, С6-60, С7-55, С8-60, С9-160, пропердин-25, фактор В-240, С1-ингибитор-180).

4) С помощью антител выявляют отложения комплемента с иммунными комплексами в биоптатах тканей.

5) Определяют рецепторы на лейкоцитах, связывающие С3 и другие компоненты комплемента.

2.2 Специфические показатели иммунного статуса и методы их определения

Антигенспецифические методы широко используются для диагностики инфекций, аутоиммунных и аллергических заболеваний, патологии репродукции, реакций отторжения трансплантантов, опухолей.

Для оценки специфических показателей используют 3 группы методов:

1) Методы определения антител различных классов (G, М, А, Е, D) к определенным антигенам. Эти методы используются при оценке типа динамики иммунного ответа и позволяют выявить дефицит секреции антител какого-либо определенного класса или субклассов иммуно- глобулинов. При рецидивирующих заболеваниях органов дыхания наиболее часто определяются дефициты IgG1 , IgG3 , IgA и sIgA- антител к пневмококку, гемофильной палочке и ряду других микроорганизмов.

2) Методы выявления иммунных Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к определенному антигену, позволяют оценить сенсибилизацию к ним организма. Кожные пробы к PPD позволяют оценить замедленную гиперчувствительность к микобактериям туберкулеза. В клеточных тестах (бласттрансформации, угнетения миграции, стимуляции секреции цитокинов) можно оценить наличие иммунных лимфоцитов к данному антигену.

3) Методы обнаружения инфекционных антигенов, подтверждающих этиологию заболевания.

2.3 Значение показателей иммунного статуса (иммунограмм)

Все показатели оцениваются комплексно в связи с анамнезом и клиническими данными больного. Формула крови при иммунодефицитной болезни (ИДБ) обычно изменена и в связи с инфекцией может быть лейкоцитоз, ус- коренная СОЭ, нейтрофиллез (нейтропения), моноцитоз, эозинофилия. Количество лимфоцитов увеличено или понижено, причем много крупных (более 10 мкм в диаметре -- активированных). Внутрикожные тесты с распространенными антигенами отрицательны (у детей -- малозначимо). При многих ИД процентное и абсолютное число Т-лимфоцитов понижено на 15% и более. Небольшое снижение их уровня наблюдается при многих заболеваниях и нормальном иммунном ответе (например, на вакцины) и не указывает на ИД. Соотношение CD4/CD8 уменьшено, пролиферативная, цитотоксическая активность Т-клеток угнетается. Цитокиновая активность может быть пониженной или повышенной. Уровни интерферонов чаще снижаются, но могут повышаться.

При морфологическом изучении биопсий лимфоузлов Т-клеточные ИД характеризуются запустеванием паракортикальных зон, а В-клеточные (иммуноглобулиновые) -- уменьшением числа фолликулов, отсутствием герментативных центров.

Отсутствие g-глобулиновой фракции при электрофорезе сыворотки крови может указывать на агаммаглобулинемию, а ее уменьшение -- на дефицит IgG, т.к. он составляет ос- новную маску иммуноглобулинов (до 85%). При затяжных инфекциях эта фракция, как и уровень IgG, обычно увеличивается (до 15-20 г/ л). При «полных» В-клеточных дефицитах уровень IgG не превышает 2 г/л, а IgA и IgM (у взрослых) не выявляются. Отсутствие одного из иммуноглобулинов при повторном исследовании указывает на его дефицит, тогда обычно увеличен уровень другого -- дисIg. Артефакты «повышенного» IgM могут наблюдаться при исследовании методом радиальной иммунодиффузии. При наличии в сыворотке мономера IgM, который быстро диффундирует и образует широкое кольцо преципитации. Подобная ситуация и с другими Ig может быть при миеломах. Низкие уровни IgG и IgA при нормальном IgM могут быть обусловлены потерей белка через желудочно-кишечный тракт или почки, тогда снижены уровни альбумина и трансферрина. При недостаточности IgA и sIgA белки пищи проникают через желудочно-кишечный тракт и стимулируют синтез IgG-антител. Такие антитела могут преципитировать антисыворотку животных (коз, баранов) против IgA, создавая ложные кольца преципитации IgA. Выявление антител против изоантигенов эритроцитов, а также антигенов вакцин может решить вопрос о состоянии их синтеза. Поглотительная и переваривающая, хемотаксическая и метаболическая (НСТ-тест) активности могут быть компенсаторно повышенными при других ИД в связи с инфекцией. Как правило, выявляются иммунные комплексы.

Оценка общей гемолитической активности комплемента по СН50 позволяет выявить большинство нарушений в этой системе. Однако этот метод не выявляет недостаточность В, D и пропердина -- факторов альтернативного пути. При недостаточности С1-С8 уровень СН50 близок к нулю, а С9 -- снижен в 2 раза. Снижение уровня СН50 при ИД зависит от тяжести дефицита. При ангионевротическом отеке снижаются С4 и С2 понижается и уровень СН50. С4 и С3 можно определять методом радиальной иммунодиффузии. Их одновременное снижение указывает на активацию комплемента иммунными комплексами, а снижение только С3 -- на активацию альтернативного пути. Это важно для диагностики нефрита, вызванного IgG-антителами против С3 (NeF- нефретический фактор).

Клинические признаки различных ИДБ ассоциированы с инфекционными синдромами различной локализации.

По клиническим проявлениям можно предположительно судить о наличии того или иного дефекта в системе иммунитета. Это в первую очередь касается первичных ИДБ, сложнее дело обстоит со вторичными ИДБ.

Т-клеточные дефициты наиболее часто встречается, когда имеются:

1) вирусные инфекции, в том числе после иммунизации, цитомегаловирусная инфекция; герпес, ветряная оспа, гигантоклеточные пневмонии, генерализованная микобактериальная инфекция после вакцинации БЦЖ;

2) оральный кандидоз после химиотерапии, антибиотикотерапии (персистирующий более 6 месяцев); кожно-слизистый кандидоз;

3) РТПХ с аллопецией, эритродермией после трансплантации костного мозга или переливания крови и взвеси лейкоцитов;

4) стигмы -- признаки первичных Т-клеточных дефицитов (Ди-Джоржи -- аномалии лица, ушных раковин, сердца и др.);

5) лимфопения с дефицитом малых (диаметром менее 10 мкм лимфоцитов (1,5х109 л и меньше);

6) СПИД -- синдромы, ассоциированные с саркомой Капоши, диареей, инфекцией «оп- портунистическими» микроорганизмами.

В-клеточные дефекты (иммуноглобулинов и др.) вероятны при наличии:

1) рецидивирующих пиогенных инфекций стафилококками, стрептококками, гемофильной палочкой, сепсис, менингит;

2) персистирующей гиперплазии лимфатических узлов кишечника;

3) повторных эпизодов гнойно-септических заболеваний, связанных с неспособностью к ответу на бактериальные полисахариды (пневмококковую вакцину и др.).

Дефекты фагоцитов могут быть при:

1) рецидивирующих абсцессах (дефект киллинга бактерий)

2) локальных бактериальных инфекциях (нарушение хемотаксиса).

Недостаточность комплемента:

1) себорейный дерматит бывает при недостаточности С5

2) рецидивирующие гнойные инфекции -- С3

Наиболее вероятны иммунодефициты в тех случаях, когда имеется сочетание нескольких клинических и лабораторных признаков, особенно, при наблюдении больного в динамике. Доказательством иммунодефицита является выявление стойких нарушений СИ.

Несомненно, нельзя считать иммунодефицитом многочисленные транзиторные модуляции тех или других показателей СИ, которые встречаются при целом ряде заболеваний и воз- действий на организм, но по существу отражает нормальную реакцию СИ на раздражитель. Умеренное снижение уровня Т-лимфоцитов и повышение количества В-лимфоцитов в крови при вакцинации; иммунизации и т.д., всегда сопровождает нормальный иммунный ответ, а после его затихания показатели возвращаются к исходным. Такие изменения поэтому не требуют коррекции. Только стойкое нарушение в СИ, не исчезающее без иммунокоррегирующей терапии можно считать иммунодефицитом.

Отличить вторичный иммунодефицит от первичного бывает трудно, а иногда невозможно. Дело в том, что первичный иммунодефицит может быть скрытым, без клинических манифестаций, и проявляется только после того или другого провоцирующего воздействия или заболевания. Такие бессимптомные первичные иммунодефициты можно обнаружить у практически здоровых людей (например, дефицит IgA). Доказать вторичный характер иммунодефицита можно лишь в том случае, если ранее у больного имелись нормальные показатели ИС, а воздействие причинного иммунодепрессивного фактора (например, лечение цитостатиками) очевидно.

Следует учесть также, что иммунодефициты могут быть не только общими, но и местными. Более того, местная недостаточность какого- либо фактора иммунитета может встречаться чаще, чем общая.

Для нарушений СИ при вторичных иммунодефицитах и вторичной иммунодефицитной болезни (ВИБ) характерно не столько избирательное угнетение и даже отсутствие одного из звеньев СИ, свойственное в большей степени первичным иммунодефицитам, сколько стойкий дисбаланс различных факторов и показателей этой системы (сдвиги в соотношении популяций и субпопуляций лимфоцитов, дисиммуноглобулинемия и др.). Поэтому лабораторная диагностика вторичных иммунодефицитов должна основываться не только на величинах показателей СИ, но и на их соотношениях, позволяющих находить диагностические коэффициенты, наиболее характеризующие конкретный вид иммунодефицита.

Заключение

Лабораторное обследование не всегда позволяет установить точную локализацию иммунного дефекта, т.к. количество тестов весьма ограничено, а дефект может локализо- ваться в любом гене, участвующем в синтезе молекул, рецепторов, цитокинов СИ. Однако, из-за необходимости компенсации дефекта, другие показатели СИ изменяются, поэтому часто находят дисбаланс ее показателей, что служит критерием ИД. Поэтому диагноз -- «общая вариабельная иммунодефицитная болезнь» должен быть самым распространенным. Более того, предлагается устанавливать клинический диагноз иммунодефицита только по клиническим данным -- наличию хронического воспалительного процесса, в котором участвуют условно-патогенные микроорганизмы. Диагноз ИДБ может быть основным или дополнительным к главному заболеванию. Он формируется на основании этиологии, преобладающего клинического синдрома, выявленного дефекта в СИ.

Список использованной литературы

1. Новиков Д.К., Новикова В.И. Клеточные методы иммунодиагностики. Минск, 1979, 222 с.

2. Новиков Д.К., Новикова В.И. Оценка иммунного статуса, Москва, 1996, 315 с.

3. Тотолян А.А. Внешний контроль качества иммунологических исследований. Клин. лаб. диагност. 2001; №3: 53- 54.

4. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса в норме и при патологии. Иммунология 2001; 4: 4-6.

5. Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Развитие патогенетического принципа оценки иммунной системы человека. Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997; №6: 89-92.

...