Біологічні властивості збудника, удосконалення методів діагностики та специфічної профілактики лістеріозу тварин

Ключові слова: лістеріоз, Listeria monocytogenes, діагностика, профілактика, інактивована вакцина, клітинний імунітет, неспецифічні фактори.

Гаркавенко Т.A. Биологические особенности возбудителя, усовершенствование методов диагностики и специфической профилактики листериоза животных. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16.00.03 - ветеринарная микробиология и вирусология. - Национальный аграрный университет, Киев, 2008.

Диссертация посвящена изучению основных биологических свойств возбудителя листериоза в Украине, совершенствованию бактериологических методов диагностики и специфической профилактики этого заболевания.

Изучена эпизоотологическая ситуация по листериозу животных в Украине. Болезнь встречается в основном у мелкого и крупного рогатого скота, свиней, а также у домашних животных. Источником заражения людей могут быть больные животные, продукты питания животного происхождения. Также одним из факторов передачи инфекционного начала при листериозе служат городские канализационные сооружения, стоки животноводческих комплексов, мясоперерабатывающих комбинатов и другие пищевые объекты, а также земля .

Установлено, что полевые изоляты листерий, выделенные из патологического материала от больных животных и из трупов, а также из пищевых продуктов и сырья животного происходжения, имеют сходные морфологические и культуральные особенности, но отличаются по биохимическим свойствам и по вирулентности. Выделены культуры листерий 6 видов: Listeria monocytogenes, L. ivanovii, L. innocua, L. seeligeri, L. welshimeri, L. grayi.

По результатам проведённых исследований предложен способ подготовки патматериала для посева, который предусматривает обязательную гомогенизацию исследуемого материала. Оптимальными средами для культивирования листерий являются бульйон Фрейзера, триптиказо-соевый бульон с дрожджевым экстрактом, мясо-пептонный бульйон с добавлением 15,0 % желточной эмульсии и 0,5 % активированного угля, ПАЛКАМ и Оксфордский агары с селективными добавками.

Определение лецитиназной активности культур на желточном агаре с 0,5 % активированного угля дало возможность надёжно диференцировать листерии от непродуцирующих лецитиназу ентерококков и ешерихий, и от продуцирующих её независимо от присутствия сорбента стафилококков, а также L. monocytogenes от непатогенных видов листерий.

С помощью КАМП-теста определяли не только наличие гемолиза, но и зоны расширеного гемолиза около культур Staph. aureus и R. еqui, что дало возможность отличать листерии разных видов.

Исследование биохимических свойств листерий на полосках набора системы „API - листерия” облегчило работу и ускорило сроки проведения идентификации культур.

Предложены референс-культуры листерий, которые вошли в состав „Набору еталонних тест-культур для ідентифікації лістерій” ТУ У 24.4 - 00699715-001:2007, используемых для проверки ростовых свойств питательных сред, а также в качестве контрольных культур при постановке КАМП-теста.

Отсутствие отечественной вакцины против листериоза животных вызвало необходимость создания вакцины. Предложен вакцинный штамм Listeria monocytogenes, отработаны оптимальные питательные среды и температурные режимы культивирования возбудителя, обеспечивающие максимальное накопление бактериальной массы, способы инактивации и сорбции листериозного антигена, в результате чего сконструированы экспериментальные образцы вакцины концентрированой инактивированой против листериоза животных ”Листерисан”.

Применение препарата на лабораторных животных и овцах показало, что вакцина вызывает синтез листериозных антител у двухкратно вакцинированных животных, среднегеометрический титр которых через 6 месяцев после прививки составлял 2,70±0,06,, что характеризуется достаточной протективной активностью и она может быть использована в системе профилактических мероприятий против этого заболевания.

Гематологические показатели у овец, привитих вакциной “Листерисан”, характеризуются незначительным увеличением количества сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов, интенсивной дифференциацией и количественным увеличением в 1,3 и 2,8 раза Т- и В-лимфоцитов соответственно, что свидетельствует о доброкачественном поствакцинальном процессе.

Достаточно хорошо проявились неспецифические защитные реакции организма привитых животных. Так, показатели неспецифической резистентности были значительно выше по сравнению с исходными данными, БАСК увеличилась в 1,1 раза, а ЛАСК - в 1,7 раза. Повторное введение вакцины через 14 дней вызывало у животных повышение активности БАС и ЛАС крови по сравнению с показателями после первого введения вакцины.

Более выражено на листериозный антиген проявилась клеточная реакция у привитых овец. Фагоцитарная активность нейтрофилов в исследованных пробах крови подопытных животных увеличилась в 3,5 раза по сравнению с исходными данными (р<0,001), а фагоцитарный индекс - на 3,2 м. к. в одном активном нейтрофиле, относительно предыдущих данных (р<0,05), коэффициент бактерицидности после вакцинации возрос до 0,99±0,09 и оставался приблизительно на таком же уровне на протяжении опыта.

Установлена полная безвредность вакцины. Использование экспериментального образца вакцины “Листерисан” в ОХ “Асканийское” Херсонской обл. на овцах обеспечило зпизоотическое благополучие хозяйства в течении года (срок набладения).

Ключевые слова: листериоз, Listeria monocytogenes, диагностика, профилактика, инактивированная вакцина, клеточный иммунитет, неспецифические факторы.

Garkavenko T. Biological properties of agents, improvement of diagnostics and specific prevention of animals listeriosis. - Manuscript.

The dissertation on competition of a scientific degree of the Candidate of Veterinary Science in speciality 16.00.03 - Veterinary microbiology and virology. - National Agricultural University, Kyiv, 2008.

Dissertation is devoted the study of basic biological properties of agents of animals listeriosis in Ukraine, to the improvement of bacteriological methods of diagnostics and specific prophylaxis of this disease.

Distribution of listeriosis is studied among animals in Ukraine.

It is discovered that isolates listeria, that was pich from pathological material from sick animals and dead bodies, and also from food products and raw material of animal origin, were similar morphological, cultural properties, but differed after biochemical properties and virulence.

As a result of the executed researches the methods of pathological material preparation of patmaterialu are offered for sowing, optimum mediums for cultivation of listeria and methods of identification of agents.

Made and studied the experimental sample of vaccine concentrated inactivated against the animals listeriosis of ”Listerisan”, which creates sufficient protective defence and can be used in the system of measures of prophylaxis of this disease.

Key words: listeriosis, Listeria monocytogenes, diagnostics, prevention maintenance, inactivated vaccine, cellular immuniti, nonspecific factors.

Размещено на Allbest.ru