Поширення, біологічні властивості збудника та удосконалення профілактики пастерельозу кроликів

Внесення до м'ясо-пептонного бульйону 15 % аутолізату дріжджів, 10 % дефібринованої крові, 15 % сироватки крові або 15 % дріжджованого аутолізату крові стимулює накопичення пастерел відповідно в 1,8; 10,0; 4,5 і 4,6 рази.

Модифікований спосіб провокації пастерельозної інфекції у тварин-бактеріоносіїв шляхом інтраназального інстилювання 0,2 см³/гол 0,5 %-го розчину бриліантгрюну один раз на добу впродовж 3 діб та додаткової імуносупресії дексаметазоном у дозі 2 мг/кг маси тварини 2 рази на добу протягом 3 діб підвищує ізоляцію культур P. multocida у 5 разів порівняно з методом Н.И. Розанова.

Теоретично і експериментально обґрунтовано переваги застосування 0,5 %-го пероксиду водню порівняно з 1 %-ним дімером етиленіміну та 0,25 %-ним формальдегідом щодо інактивації P. multocida сероварів А і Д, S. aureus, E. coli та B. bronchiseptica, повна інактивація інфекційності настає відповідно впродовж 7,7 і 7,8; 10,6; 7,3 та 7,8 годин. Величина вірогідності апроксимації (R²) кінетики інактивації досліджуваних бактерій відповідно сягає 0,98; 0,92; 0,81; 0,82 та 0,86 при використанні 0,5 %-го розчину пероксиду водню; 0,91; 0,89; 0,88; 0,92; 0,86 при інактивації культур 1 %-ним розчином дімеру етиленіміну і 0,81; 0,78; 0,83; 0,85 при стерилізації 0,25 %-ним розчином формальдегіду, що вказує на близькість значень теоретично розрахованих ліній регресій до фактичних експериментальних даних.

Застосування інактивованих моно- та асоційованої вакцин у комплексі протиепізоотичних заходів щодо профілактики респіраторних, кишкових та змішаних хвороб кроликів, сприяє збереженості і зниженню захворюваності кроленят у 3,0 рази в порівнянні з невакцинованими тваринами.

Введення кроликам експериментальних зразків вакцин в об'ємі 1,0 см³ підшкірно (5Ч10⁹ м. к.) активізує як клітинний, так і гуморальний імунітет, про що свідчить збільшення в популяції лімфоцитів кількості Т-хелперів у 2,5 і 3,1 рази, в сироватці крові імуноглобулінів класів G, A, M у 1,5 рази та титрів аглютинуючих антитіл у 1,9 рази. Протективна ефективність експериментальних зразків моно- і асоційованої вакцин сягає 98,9 і 100,0 %, відповідно.

Пропозиції виробництву

Розроблено і впроваджено для ветеринарної медицини: “Методичні вказівки з діагностики та організації протиепізоотичних заходів при патологіях кроликів, які викликаються умовно патогенними бактеріями”, “Методичні рекомендації щодо одержання біомаси пастерел при стаціонарному та глибинному культивуванні”, “Настанову з діагностики пастерельозу тварин”, що затверджені науково-методичною радою Державного департаменту ветеринарної медицини МАП України (протокол № 3 від 20.12.2006 р.); “Вакцину інактивовану проти пастерельозу кроликів” (ТУ У 24.4-00493669-002:2007); “Листівку-вкладку із застосування вакцини інактивованої проти пастерельозу кроликів”; “Інструкцію щодо виготовлення та контролю вакцини інактивованої проти пастерельозу кроликів”; спосіб ізоляції пастерел від кроликів-пастерелоносіїв; епізоотичні штами 99 P. multocida серовару D та 127 P. multocida серовару А.

Перелік наукових праць за темою дисертації

1. Паразитоценози сільськогосподарських тварин / А. Ф. Руденко, П. А. Руденко, А. А. Руденко, С. С. Кліменко, А. П. Бабенко // Збірник наукових праць Луганського національного аграрного університету. Ветеринарні науки. - Луганськ, 2006. - № 69 (92). - С. 201-210. Дисертантом були вивчені бактеріальні паразитоценози при кишково-респіраторних хворобах кроликів у господарствах південно-східної частини України.

2. Руденко А. А. Бактеріальні паразитоценози з домінуючою участю Pasteurella multocida кроленят в аматорських господарствах південно-східної частини України // Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини.- Х., - 2006. - Вип. 13 (38), ч. 3. - С. 103-106.

3. Руденко А. А. Выделение Pasteurella multocida от кроликов с инфекционной патологией в фермерском хозяйстве Луганской области // Наукові праці. Актуальні проблеми ветеринарної медицини. - Сімферополь, 2005. - Вип. 92. - С. 38-43.

4. Руденко А. А. Значення Pasteurella multocida в специфічній профілактиці пневмоентеритів кроленят // Збірник наукових праць Луганського національного аграрного університету. Ветеринарні науки. - Луганськ, 2006. - № 63/86. - С.136-144.

5. Руденко А. А. Изоляция Pasteurella multocida серовара А от кроликов-пастереллоносителей // Вісник Сумського національного аграрного університету. - Суми, 2005. - Вип. 1-2 (13-14). - С. 117-120.

6. Руденко А. А. Культурально-морфологічні властивості культур Pasteurella multocida, ізольованих у кролівничих господарствах південно-східної частини України // Матеріали 1 Міжнародної науково-практичної конференції “Наукова молодь: досягнення та перспективи”. - Луганськ, 2006. - Т. 2. - С. 166-169.

7. Руденко А. А. Этиопатогенетические и иммунобиологические аспекты пастереллеза кроликов // Збірник наукових праць Луганського національного аграрного університету. Ветеринарні науки.- Луганськ, 2005. - № 50/73. - С.223-228.

8. Руденко А. А., Заболотная В. П., Сосницкий А. И. Биологические закономерности функционирования болезнетворных потенций микробиального патогена Pasteurella multocida в паразито-хозяинной системе на модели организма кролика // Збірник наукових праць Луганського національного аграрного університету. Ветеринарні науки.- Луганськ, 2005. - № 50/73. - С. 229-234. Дисертантом вивчено біологічні властивості P. multocida, як гетерогенного за патогенністю і вірулентністю виду, що детермінує функціональну активність паразито-хазяїнної моделі і результат взаємодії антагоністичних систем збудника захворювання зі сприйнятливим організмом.

9. Изучение биологических свойств реактивированных культур Pasteurella multocida / А. И. Сосницкий, Б. Т. Стегний, А. А. Руденко, В. П. Заболотная // Ветеринарна медицина: Міжвідомчий тематичний науковий збірник. - Х. - 2005. -Вип. 85, Т. 2. - С.1007-1011. Дисертантом досліджено біологічні властивості пастерел при проведенні реактивації ліофільно висушених культур P. multocida.

10. Сосницький О. І., Руденко А. А., Заболотна В. П. Розробка і випробування пастерельозного бактерину для імунізації кролів // Наук.-техн. бюл. Інституту біології тварин і ДНДКІ ветпрепаратів та кормових добавок. - Львів, 2005. - Вип. 6., № 3,4. - С. 372-377. Аспірантом вивчено кінетику інактивації пастерел за допомогою ДЕІ і ФА. Проведено порівняльний аналіз імуногенної активності пастерельозних вакцин для імунізації кролів.

11. Деклараційний патент України на корисну модель 11612, МКИ B 61L 7/00; A61 K39/102. Спосіб ізоляції пастерел від кролів-пастерелоносіїв. Руденко А.А.; ЛНАУ. - № а200506473; Заявл. 01.07.2005; Опубл.16.01.2006; Бюл. №1. - 2 с.

12. Патент України на корисну модель 18446. МКИ A61K 39/00. Епізоотичний штам Pasteurella multocida серовару D. Руденко А.А.; ЛНАУ - № u200604400 ; Заявл. 19.04.2006; Опубл. 15.11.2006; Бюл. № 11. - 4 с.

13. Патент України на корисну модель 21254. МКИ A61K 39/00. Епізоотичний штам Pasteurella multocida серовару А для виготовлення інактивованого бактерину проти інфекційних пневмоентеритів кролів. Руденко А.А. ; ЛНАУ - № u200608023; Заявл. 17.07.2006; Опубл.15.03.2007; Бюл. № 3. - 4 с.

Руденко А. А. Поширення, біологічні властивості збудника та удосконалення профілактики пастерельозу кроликів. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 - ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Національний науковий центр “Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини”. Харків, 2007

У дисертації викладено результати вивчення спектру і поширення асоціацій умовно патогенних бактерій, які спричиняють або ускладнюють перебіг шлунково-кишкових, респіраторних та змішаних форм перебігу цих хвороб кроликів, біологічні властивості збудника, зокрема P. multocida, та удосконалення діагностики і профілактики зазначених хвороб, зокрема пастерельозу кроликів.

У господарствах південно-східної частини України в етіології пневмоентеритів кроликів беруть участь 14 видів умовно патогенних бактерій. Частіше за все ізолюють P. multocida (34,1 %), S. aureus (23,6 %), E. coli (13,8 %) та S. epidermidis (7,5 %); менш розповсюдженими - B. bronchiseptica (4,2 %), S. pyogenes (3,8 %), K. pneumoniae (3,8 %), S. pneumoniae (2,7 %), S. saprophyticus (2,3 %), P. aeruginosa (2,1 %) і рідко - P. vulgaris, S. faecalis, P. mirabilis та M. luteus (2,1 %).

За біологічними властивостями культури P. multocida, які ізольовані від кроликів із господарств південно-східної частині України, мало чим відрізняються від пастерел, отриманих від інших видів тварин. За допомогою РНГА 173 культури (58,8 %) було віднесено до серовару А, 98 (33,4 %) - до серовару D, 23 ізоляти (7,8 %) не мали сероваріантної належності. За патогенними властивостями культури пастерел суттєво відрізняються між собою: ізоляти з внутрішніх органів хворих кроликів викликали загибель 64,1 % мишей, і навпаки культури з носової порожнини були патогенними тільки для 29,9 % мишей.

З метою удосконалення діагностики пастерельозу запропоновано модифікацію методу Н.И. Розанова, що передбачає додаткову імуносупресію кроликів-пастерелоносіїв дексаметазоном.

Встановлено оптимальні параметри інактивації культур пастерел, стафілококів, ешерихій та бордетел 0,5 %-ним пероксидом водню, поріг безпечності цього процесу забезпечується відповідно через 7,7; 7,8; 10,6; 7,3 та 7,8 годин.

У порівняльному досліді на 246 кроликах випробувано 2 серії інактивованих вакцин, що виготовлені із пастерел сероварів А і Д та з асоціації культур умовно патогенних бактерій, в тому числі і P. multocida, що циркулюють в аматорських кролефермах, які сприяють збільшенню збереженості і зниженню захворюваності кроликів, відповідно у 2,8 й 3,0 рази. Щеплення тварин інактивованими вакцинами активізує як клітинний, так і гуморальний імунітет, про що свідчить збільшення в крові імуноглобулінів класів G, A, M, Т- і В-лімфоцитів та імунорегуляторного індексу, відповідно у 1,4; 1,2-1,8; 1,3-1,6; 1,3-1,6; 1,1-1,4 та 1,4-2,5 разів.

Інактивована вакцина проти пастерельозу кроликів пропонується для оздоровлення кролівницьких ферм, неблагополучних щодо пневмоентеритів.

Руденко А. А. Распространение, биологические свойства возбудителя и усовершенствование профилактики пастереллеза кроликов. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16.00.03 - ветеринарная микробиология и вирусология. Национальный научный центр “Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины”. Харьков, 2007

В диссертации изложены результаты изучения ассоциаций условно патогенных бактерий, которые вызывают или осложняют течение желудочно-кишечных, респираторных и смешанных болезней кроликов, биологических свойств возбудителя и усовершенствования диагностики и профилактики пастереллеза кроликов.

В хозяйствах юго-восточного региона Украины в этиологии пневмоэнтеритов кроликов принимают участие 14 видов условно патогенных бактерий. Чаще всего изолируют P. multocida (34,1 %), S. aureus (23,6 %), E. coli (13,8 %) и S. epidermidis (7,5 %); реже встречались - B. bronchiseptica (4,2 %), S. pyogenes (3,8 %), K. pneumoniae (3,8 %), S. pneumoniae (2,7 %), S. saprophyticus (2,3 %), P. aeruginosa (2,1 %) и редко - P. vulgaris, S. faecalis, P. mirabilis, M. luteus (2,1 %).

По биологическим свойствам культуры P. multocida, изолированные от кроликов в хозяйствах юго-восточного региона Украины, мало отличаются от пастерелл, выделенных от других видов животных. С помощью РНГА 173 культуры (58,8 %) отнесено к серовару А, 98 (33,4 %) - к серовару D, 23 изолята (7,8 %) не имели серовариантной принадлежности. В 10 хозяйствах (83,3 %) изолировано культуры пастерелл сероваров А и D и не выделено ни одного изолята P. multocida серовара В. При несерологическом типировании пастерелл 173 культур (58,8 %) были положительными в стафилококковом тесте, а 121 (41,2 %) - образовывали флокулят в трипафлавиновой пробе.

По патогенным свойствам культуры пастерелл существенно отличаются между собой: изоляты из внутренних органов больных кроликов вызывали гибель 64,1 % мышей, и наоборот культуры из носовой полости были патогенными только для 29,9 % мышей.

С целью усовершенствования диагностики скрытого течения пастереллеза предложен модифицированный нами метод, который предполагает интраназальное введение кроликам по 0,2 см³ 0,5 %-го водного раствора бриллиантгрюна 1 раз в сутки в течение 3 суток и дополнительную иммуносупрессию дексаметазоном, который при внутримышечном применении в дозе 2 мг/кг 2 раза в сутки на протяжении 3 суток в 5 раз повышает выделяемость пастерелл у животных-пастереллоносителей.

Для усовершенствования состава питательной среды и повышения эффективности накопления бактериальной массы испытано дефибринированную кровь, аутолизат дрожжей, сыворотку крови и изготовленный дрожжевой аутолизат крови. Добавление дрожжевого аутолизата крови к питательной среде способствует повышению накопления живых микробных клеток P. multocida в 5,4 раза по сравнению с простым МПБ, что может быть использовано в производстве инактивированных биопрепаратов.

Для инактивации культур пастерелл, стафилококков, ешерихий и бордетелл использовано перекись водорода, димер этиленимина и формальдегид. Лучшие результаты получены при применении 0,5 % перекиси водорода, которая обеспечивает безопасный порог инактивации P. multocida серовара А, P. multocida серовара D, S. aureus, E. coli и B. bronchiseptica соответственно через 7,7; 7,8; 10,6; 7,3 и 7,8 часов.

В сравнительном опыте на 246 кроликах испытаны 2 серии инактивованных вакцин, которые соответственно изготовлены из культур пастерелл сероваров А и Д и ассоциации условно патогенных бактерий, в том числе и P. multocida, в комплексе противоэпизоотических мероприятий при респираторных, кишечных и смешанных заболеваниях, которые снижают заболеваемость и увеличивают сохранность крольчат соответственно в 2,8 и 3,0 раза. Технология изготовления вакцины обеспечивает получение стерильного, безвредного, иммуногенного, малореактогенного и обладающего высокими превентивными и иммунобиологическими свойствами препарата. Прививка животным инактивированных вакцин активизирует как клеточный, так и гуморальный иммунитет, о чем свидетельствует увеличение в крови иммуноглобулинов классов G, A, M, Т- и В-лимфоцитов и иммунорегуляторного индекса соответственно в 1,4; 1,2-1,8; 1,3-1,6; 1,3-1,6; 1,1-1,4 и 1,4-2,5 раза.

Инактивированная вакцина против пастереллеза кроликов предлагается для оздоровления кролеводческих ферм, неблагополучных относительно пневмоэнтеритов.

Rudenko A.A. Distribution, biological properties of the infestant and improvement of a prophylaxis of the pasteurellosis of the rabbits. - Manuscript.

Thesis for the defense of Ph. D., speciality 16.00.03 - veterinary microbiology and a virology. National Scientific Center “Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine”. Kharkov, 2007.

There are stated results of studying of associations of conditional pathogenic bacterias which cause or complicate the streaming of gastro-intestinal, respiratory and blended rabbits' diseases, biological properties of infestant and improvement of diagnosis and prophylaxis of the pasteurellosis of rabbits in the thesis.

Clinicoepizootologic and bacteriological researches testify that 14 kinds of conditional pathogenic bacteriums take part in economies of southeast of Ukraine in etiology of rabbits' pneumoenterites. P. multocida (34,1 %), S. aureus (23,6 %), E. coli (13,8 %) and S. epidermidis (7,5 %) have being isolated more often; B. bronchiseptica (4,2 %), S. pyogenes (3,8 %), K. pneumoniae (3,8 %), S. pneumoniae (2,7 %), S. saprophyticus (2,3 %), P. aeruginosa (2,1 %) have being isolated less and as for P. vulgaris, S. faecalis, P. mirabilis and M. luteus (2,1 %) - rarely.

On the biological properties of P. multocida cultures isolated from rabbits from economies of southeast of Ukraine did not differ much from P. multocida which was isolated from the other types of animals. 173 (58,8 %) cultures has been referred to serovar A, 98 (33,4 %) - to serovar D, 23 (7,8 %) isolates did not have any serovar belonging. On pathogenic properties P. multocida cultures essentially differed among themselves: isolates from internals of sick rabbits caused death of 64,1 % of mice and, on the contrary the cultures form a nasal chamber were pathogenic only for 29,9 % of mice.

With a purpose of improvement of diagnosis of the pasteurellosis of the rabbits - carriers of bacterium there were introduced intranasally about 0,2 sm³ 0,5 % of a water solution of tetraethyl-diamino-triphenyl-carbohydride sulphate once a day during 3 days, and in addition it was carried out imunosuppression with a help of dexamethasonum, which was applied intramuscularly in a dose of 2 mg/kg twice a day during 3 days.

To inactivate P. multocida culture, staphylococcuses, esherichias and bordetellas, the peroxide of hydrogenium, dimmer ethyleneimine and a formic aldehyde are used. The best results are received by applicating of 0,5 % of a peroxide of hydrogenium which provides a safe threshold of inactivation of P. multocida of a serovariant A, D; S. aureus, E. coli and B. bronchiseptica, accordingly through 7,7; 7,8; 10,6; 7,3 and 7,8 hours. In relative experiment at 246 rabbits, 2 series of inactivated vaccines are tested, they are made of cultures of conditional pathogenic bacteriums, P. multocida including. In a complex of anti-epizootologic measures on respiratory, intestinal and blended diseases assist decreasing and safety of a sick rate of rabbits accordingly in 2,8 and 3,0 times, compared with non vaccinated animals. The vaccines made by us are sterile, harmless, immunifacient, areactive and have high preventive and immunobiological properties. The inoculation of animals by the inactivated vaccines activate both cellular and humoral immunity, and as a fact there is in blood an augmentation of immunoglobulins of classes G, A, M, T and B-lymphocytes, accordingly in 1,4; 1,2-1,8; 1,3-1,6; 1,3-1,6 and 1,1-1,4 times.

The inactivated vaccine against the pasteurellosis of rabbits is offered for improvement of rabbit farms, unsuccessful concerning pneumoenterites.

Размещено на Allbest.ru