Теоретичні та практичні аспекти виготовлення гіперімунних сироваток (на моделі вірусів хвороби Ауєскі, геморагічної хвороби кролів і чуми м’ясоїдних)

При застосуванні концентрованих антигенів з використанням аеросилу активність сироваток в РН підвищувалась на 0,25-0,5 log2 (Р0,05). Надалі при гіперімунізації випробувано принцип “ад'ювант в ад'юванті”, широко застосований при виробництві протиящурних вакцин. Заздалегідь були досліджені реактогенні і імуностимулювальні властивості кількох масляних ад'ювантів вітчизняного виробництва (ПЕС, масляний ад'ювант ВНДЯІ, масляні ад'юванти на основі ярославського і ангарського масел). Для виготовлення емульсій брали концентровані поліетиленгліколем і аеросилом препарати. Аналіз результатів, отриманих при застосуванні цих препаратів, показав переваги застосування комбінованих ад'ювантів. Активність отриманих від кролів гіперімунних сироваток до вірусу хвороби Ауєскі після застосування концентрованих поліетиленгліколем та емульсованих антигенів становила 7,0-8,5 log2, у великої рогатої худоби 5,75-7,5 log2 в РН. При використанні “ад'юванту в ад'юванті”, тобто вірусовмісних суспензій, концентрованих аеросилом і емульсованих у масляних ад'ювантах, активність гіперімунних сироваток до вірусу хвороби Ауєскі у кролів підвищується в РН до 7,5-9,0 log2 (Р0,05), у великої рогатої худоби 6,25-8,0 log2 (Р0,01).

За аналізу матеріалів застосування різних масляних ад'ювантів на моделях кількох вірусів встановлені найбільш високі ад'ювантні властивості ПЕС і масляного ад'юванту ВНДЯІ. Значно менші ад'ювантні властивості мали ярославське та ангарське масло. Активність гіперімунних сироваток від кролів і великої рогатої худоби, отриманих із застосуванням ПЕС і ад'юванту ВНДЯІ, була вищою на 1-3 log2 (Р0,01-0,001) порівняно із сироватками, отриманими з іншими масляними ад'ювантами.

Паралельно нами були проведені дослідження впливу випробуваних масляних ад'ювантів з вірусом геморагічної хвороби кролів на елімінацію гемаглютинабельних антитіл у крові донорів після гіперімунізації. Спостереження за імунізованими тваринами проводили протягом 300 діб. Встановлено, що при застосуванні масляного ад'юванту ПЕС гемаглютинабельні антитіла виявляли у кролів навіть на 270-300 добу після завершення імунізації. При застосуванні ярославського масла і масляного ад'юванту ВНДЯІ порогові значення антитіл виявлені на 240 добу, а при застосуванні ангарського масла - на 210 добу.

Реактогенні властивості масляних ад'ювантів вітчизняного виробництва були менш виражені, зокрема запальні реакції на місці введення ад'юванту на основі ПЕС не перевищували у кролів 1-2 бали за шкалою А.А. Сидорчука, у морських свинок, свиней і великої рогатої худоби - 2-3 бали, у коней - 4-5 балів. Ад'юванти на основі ярославського, ангарського і масляного ад'юванту ВНДЯІ (3310) виявились більш реактогеннми порівняно з ПЕС (1-2 балів).

Порівняльне вивчення впливу різних типів масляної емульсії на основі вітчизняних ад'ювантів на активність гіперімунних сироваток. Стимулювальна дія ад'ювантів обумовлена, насамперед, повільною резорбцією антигену. При порівнянні різних типів емульсії на основі вітчизняних масляних ад'ювантів (“вода в маслі”, “масло в воді”, “вода-масло-вода”) на моделях вірусів хвороби Ауєскі та чуми м'ясоїдних ми дійшли висновку, що об'єм ад'юванту має бути більшим за об'єм водної фази антигену, принаймні у співвідношенні 60% до 40% (3 : 2, 2 : 1 тощо). Однак, в цих випадках дещо знижувалась стабільність емульсії при зберіганні.

У попередніх дослідах гіперімунні сироватки, отримані з застосуванням ПАФ, були найбільш активними. Пізніше приблизно такі ж за активністю сироватки були отримані нами при додаванні до масляного ад'юванту 3-5% хімічно чистого скипидару (проте реактогенність таких антигенів при застосуванні на кролях була виражена найбільше). Сорбенти не мали таких імуностимулювальних властивостей, як ПАФ або неповний ад'ювант Фрейнда (емульсії типу “вода в маслі”), проявляли недовгочасний ефект, лише в момент введення. За оптимальних умов емульсування розміри крапель зменшувались досить швидко, протягом 1-5 хв. Таким чином досягали відповідної якості емульсії. На властивості отримуваних суспензій впливав також спосіб введення компонентів при гомогенізації. Емульсія типу “вода в маслі” була значно стабільнішою при поступовому додаванні водної фази антигену в масляне середовище. На властивості отримуваної емульсії при незмінних компонентах впливала інтенсивність перемішування. Як правило, при більш швидкому перемішуванні утворювалася досить стабільна емульсія. Зміна температури майже не впливала на якість емульсії. Хоча слід зауважити, що при підвищенні температури і в'язкість, і поверхневий натяг зменшуються, а відповідно емульсування проходило легше. Однак, враховуючи термолабільність вірусних антигенів, емульсування проводили при температурах від 10 до 25оС.

Недоліком масляних ад'ювантів типу “вода в маслі” є досить незначна стимуляція порівняно з сорбентами клітинноопосередкованого імунітету, що має більше значення у вакцинному виробництві, однак не має значення при виробництві сироваток. Перевагою ПАФ та масляних ад'ювантів типу “вода в маслі” був більш пролонгуючий імуностимулювальний ефект (протягом усього періоду запалення), який характеризується (за даними спеціальної літератури) посиленням первинної імунної відповіді і більш раннім переходом від синтезу імуноглобуліну М до синтезу імуноглобуліну G. При застосуванні комбінованого антигену (сорбент з антигеном в маслі в емульсії типу “вода в маслі”) досягається ще більш разючий ефект. Титри антитіл даних сироваток переважали навіть ті, що отримували при застосуванні ПАФ. Такі результати отримали з антигенами вірусів чуми м'ясоїдних, геморагічної хвороби кролів і хвороби Ауєскі.

Досліди на кролях (табл. 2) і великій рогатій худобі показали повною мірою переваги масляних емульсій типу “вода в маслі”. Так, кінцева активність гіперімунних сироваток кролів з антигеном вірусу хвороби Ауєскі при застосуванні емульсій “вода в маслі” становила 9,33±0,25 log2, при застосуванні емульсії “вода-масло-вода” - 7,66±0,25 (Р0,01), при застосуванні емульсії “масло у воді” - 3,5±0,21 log2 (Р0,001); з антигеном вірусу чуми м'ясоїдних при застосуванні емульсій “вода в маслі” активність сироваток становила 11,12±0,1 log2, при застосуванні емульсії “вода-масло-вода” - 8,5±0,29 (Р0,01), при застосуванні емульсії “масло у воді” - 3,5±0,21 log2 (Р0,001). Подібна ситуація спостерігалась і при імунізації великої рогатої худоби.

Отже, введення тваринам масляного ад'юванту і антигену без диспергування всього об'єму рідини не забезпечує імуностимулювального ефекту. Цей факт свідчить про те, що імуногенна та антигенна активність емульсій визначається, у першу чергу, не вмістом у ній масляного ад'юванту, а ступенем його емульсування. Емульгатори, що входять до складу чисельних емульсій (“вода-масло-вода”), такі як, наприклад, твін-80 не забезпечують високий ступінь емульсування.

Стимулювальний вплив на активність гіперімунних сироваток масляні ад'юванти здійснюють не стільки тому, що викликають місцеву запальну реакцію, скільки внаслідок корпускулювання антигену. Антиген з додаванням у нього в якості ад'юванту мінерального масла буде ефективним лише тоді, коли досягається достатня ступінь емульсування водної фази антигену у масляній фазі, яка забезпечує стійкість емульсії при створенні стандартного препарату для імунізації.

Вивчення реактогенних та імуностимулювальних властивостей масляних ад'ювантів фірми “SEPPIC”. Результати, отримані при вивченні ад'ювантів фірми “SEPPIC” при застосуванні різних типів емульсії, виявились

цілком протилежними тим, які були отримані при застосуванні вітчизняних, і показали їх переваги над останніми. Ад'юванти ISA25, ISA27, ISA28 та ISA35 з типом емульсії “масло в воді” переважали за імуностимулювальними властивостями ад'юванти з типом емульсії “вода-масло-вода” - ISA206 і типом емульсії “вода в маслі” - ISA50 (табл. 3).

Пояснити такий факт можна не лише наявністю в препаратах типу “масло в воді” значно вищої концентрації вірусного антигену (співідношення ад'юванта і водної фази 25:75), а й застосованими в цих препаратах емульгаторами, які й забезпечують такий стимулювальний ефект. Подібні результати було підтверджено нашими дослідженнями на моделях різних вірусів (хвороби Ауєскі, чуми м'ясоїдних, вірусу геморагічної хвороби кролів). Активність сироваток при застосуванні емульсій “масло в воді” була вищою порівняно з сироватками, отриманими при застосуванні інших типів емульсії, на 0,67-2,0 log2 (Р0,05-0,01) в РН. Серед чотирьох препаратів з типом емульсії “масло в воді” виділялись своєю ад'ювантною активністю препарати ISA27 та ISA35. Переваги цих ад'ювантів були встановлені при застосуванні на кролях, свинях, великій рогатій худобі і конях.

Таблиця 2

Активність специфічних сироваток, отриманих при гіперімунізації кролів із застосуванням різних типів емульсії

Антиген	Тип емульсії	Активність гіперімунних сироваток в РН, log2
		діб після уведення антигену
		10	20	30	40	50	70
1	Т-1	1,14±0,12	2,33±0,15	4,0±0	6,14±0,12	7,66±0,2	9,33±0,25
	Т-2	1,77±0,15 ****	2,66±0,25 **	4,55±0,31	5,33±0,2 *	6,12±0,1 *	7,66±0,25 *
	Т-3	-	-	1,0±0	2,11±0,09 ***	3,33±0,2 ***	3,5±0,21 ***
2	Т-1	1,6±0,2	4,0±0	5,7±0,18	7,42±0,25	9,11±0,02	11,12±0,1
	Т-2	2,0±0	4,5±0,28	6,16±0,14	6,12±0,1 *	7,09±0,13 *	8,5±0,29 *
	Т-3	0,66±0,25	1,33±0,19	1,66±0,2 ***	2,11±0,09 ***	2,37±0,03 ***	3,25±0,32 ***

Примітки. 1. 1 - антиген вірусу хвороби Ауєскі, 2 - антиген вірусу чуми м'ясоїдних; 2. Т-1-емульсія типу “вода в маслі”,

Т-2-емульсія типу “вода-масло-вода”, Т-3-емульсія типу “масло у воді”; 3. ** - Р>0,5, **** - Р<0,05, * - Р<0,01,

*** - Р<0,001, порівняно з Т-1

Позитивним є також те, що фірма-виробник попереджає в настановах із застосування цих препаратів про те, який ад'ювант найкраще підходить тварині-донору. Так, ад'ювант ISA50 з типом емульсії “вода в маслі” найкраще підходить для застосування на великій рогатій худобі і вівцях, ISA206 з типом емульсії “вода-масло-вода” - на великій рогатій худобі, вівцях, свинях, ISA25 з типом емульсії “масло в воді” - для овець і свиней, ISA27,

Таблиця 3

Активність гіперімунних сироваток, отриманих від великої рогатої худоби із застосуванням антигенів вірусів чуми м'ясоїдних, геморагічної хвороби кролів, хвороби Ауєскі

Антиген	Ад'ювант	Кінцева активність отриманих гіперімунних сироваток, log2, n=3
		Серологічні реакції
		РН	РЗК	РРІД
Вірусу чуми м'ясоїдних	ISA50	8,0±0	6,0±0	9,67±0,39
	ISA206	8,33±0,39	6,0±0	9,67±0,39*
	ISA25	9,0±0	7,0±0	10,33±0,39**
	ISA27	10,0±0	7,67±0,39	11,67±0,39***
	ISA35	10,33±0,39	8,33±0,39	12,67±0,39****
Вірусу геморагічної хвороби кролів	ISA50	-	8,67±0,39	-
	ISA206	-	9,0±0	-
	ISA25	-	10,33±0,39	-
	ISA27	-	10,33±0,39**	-
	ISA35	-	11,0±0	-
Вірусу хвороби Ауєскі	ISA50	5,33±0,39	4,67±0,39	6,33±0,39
	ISA206	5,67±0,39**	5,0±0	7,0±0
	ISA25	6,67±0,39***	5,33±0,39**	7,0±0
	ISA27	8,0±0	6,67±0,39***	8,33±0,39***
	ISA35	8,33±0,39****	7,0±0	8,67±0,39***

Примітка. * - Р>0,5, ** - Р<0,05, *** - Р<0,01; **** - Р<0,001.

ISA28 та ISA35 з типом емульсії “масло в воді” - для свиней, коней, овець, собак і котів. При проведенні дослідів з'ясувалось, що французькі ад'юванти зовсім не проявляли реактогенних властивостей на тваринах-донорах. Більше того, порівнюючи їхні ад'ювантні властивості з такими із найкращих вітчизняних (ПЕС, масляний ад'ювант ВНДЯІ), з'ясували значні переваги перших. Титри гемаглютинабельних антитіл в РЗГА були вищими при застосуванні ідентично виготовлених антигенів на 2,25-3,5 log2 (Р0,01-0,001) і їх порогові титри антитіл вдавалось виявляти на 270-300 добу (у найкращих вітчизняних на 240-270 добу). Однак, переваги французьких ад'ювантів не обмежуються лише наведеними показниками. При застосуванні емульсованих концентрованих аеросилом препаратів (“ад'ювант в ад'юванті”) практично не виявляли реактогенності при застосуванні їх на донорах. Реактогенність 1 бал за шкалою А.А. Сидорчука було виявлено лише у ад'ювантів ISA50 та ISA206. Таким чином, отримані нами дані свідчать про перспективність застосування ад'ювантів фірми “SEPPIC” при проведенні гіперімунізації і при виготовленні емульсованих вакцин.

Отримання гіперімунних сироваток на інактивовані й неінактивовані антигени. При порівняльному вивченні активності гіперімунних сироваток, отриманих на неінактивовані антигени, інактивовані формальдегідом та неінактивовані антигени в масляному ад'юванті, встановили, що після чотирьох ін'єкцій антигену більш високі титри антитіл (Р0,001) спостерігаються у кролів, гіперімунізованих неінактивованим антигеном вірусу чуми м'ясоїдних у масляному ад'юванті (вітчизняні ад'юванти з типом емульсії “вода в маслі”) - 10,33±0,39 log2 в РН. Для порівняння при застосуванні антигену, інактивованого формальдегідом, активність сироваток не перевищує - 9,0±0,0 log2. Гіперімунізація живим вірусом чуми м'ясоїдних без застосування масляного ад'юванту призводить до підвищення рівня титрів антитіл лише після другого введення. При подальших ін'єкціях вірусу відбувається його нейтралізація. Кінцева активність таких антисироваток до вірусу чуми м'ясоїдних досягає лише 2,0±0,0 log2.

Подібну ситуацію спостерігали і при гіперімунізації великої рогатої худоби антигенами вірусу геморагічної хвороби кролів. Активність сироваток, отриманих при застосуванні живого вірусу, в РЗК становила 3,67±0,39 log2, живого вірусу в масляному ад'юванті - 11,33±0,39 (Р0,001), а інактивованого вірусу з масляним ад'ювантом - 10,0±0 log2 (Р0,001).

Якщо живий вірус (антиген) знаходиться у водній фракції (фазі) емульсії типу “вода в маслі” нейтралізація збудника не відбувається і наступні введення таких антигенів призводять до підвищення титрів специфічних антитіл.

Досліди з інактивації вірусів теплом, формальдегідом і аміноетилетиленіміном ще раз підтверджують тезу про те, що формальдегід і тепло частково ушкоджують антигенні структури віріонів при їхній інактивації. При порівняльному вивченні інактивуючого впливу на віруси тепла, формальдегіду і аміноетилетиленіміну встановлено, що тепловий фактор має негативний вплив на антигенну будову вірусів (більшою мірою на параміксовіруси) і є мало придатним як інактивуючий агент при приготуванні гіперімунних сироваток. Досліди доводять, що азиридини інактивують вірус чуми м'ясоїдних і вірусної геморагічної хвороби кролів за реакцією першого ступеня в лінійній залежності і можуть бути рекомендовані для застосування у виробництві гіперімунних сироваток і вакцин проти цих хвороб. Встановлено також, що формальдегід і тепло більшою мірою впливають на антигенні характеристики параміксовірусів (вірус чуми м'ясоїдних) і в меншому ступені на каліцивіруси (вірус геморагічної хвороби кролів). Не залишається також сумнівів, що температура відіграє роль критичного фактору при інактивації вірусів із застосуванням хімічних засобів.

Отже, при виготовленні вірусних антигенів з метою імунізації тварин встановлені переваги хімічної інактивації вірусів при умові втрати ними біологічної активності, але із збереженням їх антигенних властивостей. При приготуванні діагностичних гіперімунних сироваток може бути використана методика гіперімунізації тварин-донорів атенуйованими штамами вірусу, емульсованими в масляних ад'ювантах з типом емульсії “вода в маслі”.

Використання феномену вторинної імунної відповіді при отриманні гіперімунних сироваток. Гіперімунні сироватки з високими титрами вірусоспецифічних антитіл також отримували шляхом використання механізму регуляції гуморальної імунної відповіді - феномену імунологічної пам'яті.

Після уведення антигену в організм тварин-донорів антитіла починали виявляти на 3-5 добу (хвороба Ауєскі), а на окремі антигени (чума м'ясоїдних, вірус геморагічної хвороби кролів) - на 3-4 добу. Повторне уведення антигену через 49 діб після початку імунізації спричиняло вторинну імунну відповідь, яка характеризувалась утворенням високих титрів антитіл. Так, при первинній імунній відповіді після введення концентрованого антигену вірусу чуми м'ясоїдних на 21-у добу утворились максимальні титри вірусонейтралізуючих антитіл - 2,0 log2. На 42 добу після введення антитіл у донорів не виявили. Введення такого ж антигену в тій же дозі на 49 добу після першого введення спричинило утворення вірусонейтралізуючих антитіл у титрі - 4,5 log2 (Р0,001). При вторинній імунній відповіді антитіла визначались у сироватці крові більш тривалий час (дев'ять тижнів), ніж при первинній (шість тижнів). Таким чином, для отримання феномену вторинної імунної відповіді потрібно, щоб інтервал між первинним і повторним введенням антигену становив не менше 30-45 діб (термін достатній для утворення клітин імунологічної пам'яті). Швидкість виникнення імунологічної пам'яті залежить від природи антигену і донорів, що використовуються. Однак, при гіперімунізації кролів (концентрованими антигенами вірусу чуми м'ясоїдних), морських свинок і великої рогатої худоби були виявлені подібні закономірності. Титри сироваток, отриманих при застосуванні феномену вторинної імунної відповіді, у великої рогатої худоби перевищували відповідні при первинній - на 3,75 log2 (Р0,001), у кролів та морських свинок на 4,0 log2 (Р0,001).

При аналізі результатів гіперімунізції кролів при використанні інтервалів різної тривалості встановили, що при 10-добових інтервалах введення антигену максимальну активність сироваток 9,0 log2 відзначали вже на 50 добу, при 20-добових інтервалах на 70 добу (8,66 log2, Р0,05), при інтервалі 80 діб - 9,66 log2 (Р0,05) на 100 добу. У наших дослідах було взято однакову кількість антигену для гіперімунізації і кількість введень обмежувалась трьома (при інтервалах 10-20 діб), відповідно за умови подальшого введення антигену титри таких сироваток могли бути значно вищими.

Динаміка елімінації різних груп антитіл у донорів. Дослідження динаміки елімінації різних груп антитіл у донорів (велика рогата худоба, кролі, морські свинки) при використанні антигенів вірусів хвороби Ауєскі, чуми м'ясоїдних і вірусної геморагічної хвороби кролів показали, що вірусонейтралізуючі і гемаглютинабельні антитіла зберігаються в крові імунізованих тварин протягом 10 міс., преципітувальні і комплементозв'язувальні - 3-6 міс. При застосуванні масляного ад'юванту ISA35 вірусонейтралізуючі антитіла у крові донорів циркулювали протягом 10 міс. Комплементозв'язувальні і преципітувальні антитіла хоча й мали більш високі ніж в РН титри, однак їх елімінація відбувається значно швидше. Виявлені деякі видові особливості при отриманні специфічних антисироваток. Так, кролі на введення вірусних антигенів відповідають напрацюванням найбільш високих титрів преципітувальних антитіл, морські свинки - комплементозв'язувальних. Результати, що отримані нами на моделі трьох вірусів, підтверджують дані про особливості формування і елімінації антитіл. Знання корелятивних показників різних груп антитіл у донорів дозволить швидше оцінювати якість гіперімунних сироваток за показниками активності (результати РЗК отримуємо через 2 год, РРІД і РДП - 12-24 год, РН - 3-5 діб).

Відпрацювання технологічних етапів очищення гіперімунних сироваток. Результати дослідів з очищення отриманих гіперімунних сироваток із застосуванням поліетиленгліколю і аеросилу показали, що ці речовини внаслідок високих сорбівних властивостей є непридатними для застосування. Висока преципітувальна активність поліетиленгліколю і сорбівні властивості аеросилу виявились настільки вираженими, що в осад разом з баластними білками попадала значна частина гаммаглобулінів. Навіть незначні концентрації поліетиленгліколю (5%) і аеросилу (0,03%) призводили до зниження преципітувальної активності (“виснаження”) оброблених сироваток. Досліди із застосування центрифугування показали, що при проведенні останнього в режимі 4000 g сироватка звільняється від баластного білку майже вдвічі - з 67,3 г/л до 44,6 г/л (Р0,01), до того ж, преципітувальна активність таких препаратів залишається на вихідному рівні. При додаванні до сироватки дезмолу (0,05-0,1%) і наступному центрифугуванні концентрація білку становила 16,2-22,4 г/л (Р0,001). Активність сироваток в РРІД при цьому не зменшувалась. Метод може бути перспективним для застосування на підприємствах біологічної промисловості.

В дослідах з очищення і консервування сироватки із застосуванням формальдегіду встановлено, що найбільш оптимальною є концентрація 0,005%. Освітлення сироваток із застосуванням формальдегіду до стандартів центрифугування відбувалось вже через 12-18 год. Експериментальні зразки сироваток проти чуми м'ясоїдних (моновалентної і полівалентної), які були виготовлені із застосуванням формальдегіду, виявились активними й нешкідливими. Метод може бути прийнятий для застосування у великомасштабному виробництві.

Вивчення лікувальних властивостей отриманих гіперімунних сироваток. При застосуванні специфічної гіперімунної сироватки проти чуми м'ясоїдних у експериментально заражених цуценят припинявся розвиток захворювання і вони одужували. Порівняльні дослідження титрів вірусонейтралізуючих і преципітувальних антитіл сироваток виробництва Білоцерківського ДАУ і Покровської біофабрики не виявили відмінностей цих показників. Активність сироваток становила 6,0 log2 в РН і 10,0 log2 в РРІД. Однак, згідно настанов із застосування лікувальна доза сироватки виробництва Покровської біофабрики була явно занижена. Гострі досліди з зараження цуценят і застосування їм лікувальних сироваток підтвердили правильність такого підходу. При застосуванні сироваток з активністю в РН - 6,0 log2 доза сироватки на тварину повинна становити не менше 1,0-2,0 см3/кг маси тіла.

Результати вивчення лікувальних і превентивних властивостей сироваток проти вірусної геморагічної хвороби кролів показали високу ефективність останньої. Гіперімунна сироватка від кролів і великої рогатої худоби з активністю в РЗГА 11,01-13,1 log2, яка була введена навіть в об'ємі 0,5 см3 на тварину за 1-1,5 год до зараження, попереджала розвиток захворювання. Несприйнятливість до зараження тривала протягом 40 діб (термін спостереження). Таким чином, розроблена сироватка не поступалась за активністю прототипним препаратам російського виробництва, дозування яких при лікуванні є ідентичним запропонованим нами.

ВИСНОВКИ

1. У дисертації теоретично узагальнено і вирішено наукове завдання щодо удосконалення схем і методів отримання гіперімунних сироваток від тварин-донорів. На підставі отриманих даних експериментально обґрунтовані та розроблені засоби діагностики, лікування та профілактики чуми м'ясоїдних, геморагічної хвороби кролів і хвороби Ауєскі; розроблена технологія отримання діагностичних та імунізуючих препаратів, що включає класичні та альтернативні методи очищення і концентрування антигенів, оптимізовані схеми гіперімунізації тварин-донорів емульсованими препаратами. На основі запропонованих методик гіперімунізації виготовлені гіперімунні лікувальні сироватки проти чуми м'ясоїдних і вірусної геморагічної хвороби кролів, на які розроблені й затверджені відповідні ТУ.

2. Найбільш придатними для репродукції та накопичення вірусів чуми м'ясоїдних є первинні (ФЕК) та перещеплювані (ПТП, ВНК-21, GH-91) культури клітин, які забезпечують їх репродукцію з інфекційною активністю в середньому 7,5 і 6,83 lg ТЦД50/см3, відповідно, а для вірусу геморагічної хвороби - кролі, в печінці яких його титр інфекційності досягає 4,25-4,5 lg ЛД50/см3.

3. Азиридини в концентрації 0,04-0,08% при температурі 37оС повністю інактивують віруси чуми м'ясоїдних без зміни їх антигенної активності за 8 год, при 26оС - за 6-10 год, формальдегід в концентрації 0,07-0,035% - за 4 і 6 год, відповідно. Прогрівання при 56оС впродовж 1 год повністю інактивує параміксовіруси і неповністю каліцивіруси, про що свідчить залишкова інфекційність (вірус геморагічної хвороби кролів).

4. Виготовлення антигенів для гіперімунізації тварин-донорів є ефективним за технологією, що включає процеси напрацювання вірусної сировини, освітлення вірусовмісної суспензії центрифугуванням при 3000-4000 g протягом 20-30 хвилин, комбінованого концентрування шляхом сорбції вірусу 0,03-0,06%-ним розчином аеросилу А-300, осаджування 10-12%-ним розчином ПЕГ 6000, інактивації 0,12-0,16%-ним розчином аміноетилетиленіміну і емульсування в масляному ад'юванті.

5. Розроблено схеми гіперімунізації лабораторних тварин (морських свинок та кролів), які передбачають триразове введення концентрованих емульсованих антигенів, що дозволяє за 30-40 діб отримувати високоактивні специфічні сироватки, придатні для використання в РДП, РРІД, РН, РЗК і РТЗК.

6. Розроблено схему імунізації великої рогатої худоби, що передбачає триразове почергове введення інактивованих концентрованих антигенів на основі масляного ад'юванту із використанням локальної реакції лімфатичних вузлів. Вона дозволяє отримувати на 29-35 добу від початку імунізації специфічні сироватки з активністю до вірусів хвороби Ауєскі в РН 7,8±0,2-8,9±0,09 log2, чуми м'ясоїдних 11,15±0,02 log2 і геморагічної хвороби кролів в РЗГА - 14,2±0,2 log2.

7. У процесі порівняльного випробування існує кореляція між ступенем запальних процесів у місці введення ад'ювантів вітчизняного виробництва (НАФ і ПАФ) та ефектом індукції антитіл. Установлено, що препарати французької фірми “SEPPIC” (ISA25, ISA27, ISA28, ISA35, ISA50, ISA206) мають значний імуностимулювальний і пролонгуючий ефект на фоні мінімальної реактогенності для тварин.

8. Для гіперімунізації тварин найбільш стабільною є емульсія типу “вода в маслі”, в якій антиген повністю корпускульований, що забезпечує виражену імунну відповідь внаслідок більш тривалого часу асиміляції антигену.

9. Заміна фенолу на формалін при консервуванні гіперімунних сироваток дає значний економічний ефект; формальдегід в концентрації 0,005% очищує сироватку крові до стандартів центрифугування за 12-18 годин. Оптимальне очищення від баластних білків сироваток крові (до 16,2-22,4 г/л проти 67,3 г/л загального білка у вихідному препараті) забезпечує 0,05-0,1%-ний розчин дезмолу з наступним відстоюванням протягом 5 годин і центрифугуванням при 2,5 тис. об/хв упродовж 20-30 хв. Очищення сироваток з використанням ПЕГ і аеросилу знижує їхню активність на 6-8 і 3-8 log2, відповідно, внаслідок виснаження сироваток щодо гамма-глобулінів.

10. Застосування гіперімунних специфічних сироваток проти чуми м'ясоїдних (моновалентної й відповідної у складі полівалентної) з активністю 7 log2 в РН у дозі 1,0-2,0 см3/кг маси тіла тварини забезпечує лікувальний ефект і може бути використане в системі заходів профілактики та боротьби з цією хворобою.

11. Гіперімунна сироватка проти геморагічної хвороби кролів має лікувальні та превентивні властивості. Застосування сироватки в дозі 0,5 см3 попереджає зараження тварин через 1-1,5 год після її введення і забезпечує несприйнятливість до інфікування впродовж 40 діб. Вона проявляє лікувальні властивості при застосуванні тваринам з клінічними ознаками захворювання.

12. Для контролю вірусовмісної сировини при виробництві вакцини проти вірусної геморагічної хвороби кролів обов'язковим є застосування РГА та РЗК з метою контролю активності антигену. Активність 10%-ної вірусовмісної суспензії печінки повинна становити не менше 9 ГАО log2 в РГА.

13. При гіперімунізації тварин-донорів оптимальним інтервалом між введенням антигену є 10-20 діб, що співпадає з феноменом вторинної імунної відповіді і дозволяє отримувати максимальне накопичення антитіл у сироватці крові. Подовження інтервалів між введенням антигену до 80 діб збільшує терміни отримання специфічної сироватки. Вірусонейтралізуючі та гемаглютинуючі антитіла утримуються в крові імунізованих тварин протягом 10 міс, а преципітувальні і комплементозв'язувальні - 3-6 міс.

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ

Розроблено й запропоновано для ветеринарної медицини (в співавторстві):

1. Гіперімунна сироватка проти чуми м'ясоїдних (хвороба Карре) із культурального вірусу (ТУ затверджені Головним управлінням ветеринарної медицини з держветінспекцією Міністерства сільського господарства і продовольства України, травень 1995 р.).

2. Настанова по застосуванню гіперімунної сироватки проти чуми м'ясоїдних (хвороба Карре) із культурального вірусу (затверджені Головним управлінням ветеринарної медицини з держветінспекцією Міністерства сільського господарства і продовольства України, № 15-14/34, травень 1995 р.).

3. Сироватка проти вірусної геморагічної хвороби кролів (ТУ У 46.15.417-99 затверджені Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства агропромислового комплексу України, жовтень 1999 р.).

4. Настанова по застосуванню сироватки проти вірусної геморагічної хвороби кролів (затверджена Головним державним інспектором ветеринарної медицини України, № 15-14/178, жовтень 1999 р.).

5. Інактивована тканинна концентрована формол-вакцина проти вірусної геморагічної хвороби кролів із штаму ГК/99 (ТУ У 46.15.418-99 затверджені Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства агропромислового комплексу України, жовтень 1999 р.).

6. Настанова по застосуванню інактивованої тканинної концентрованої формол-вакцини проти вірусної геморагічної хвороби кролів із штаму ГК/99 (затверджена Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства агропромислового комплексу України, № 15-14/177, жовтень 1999 р.).

7. Тимчасова настанова по застосуванню полівалентної сироватки проти чуми, парвовірусних інфекцій та вірусного гепатиту собак і хутрових звірів (затверджена начальником Головного управління ветеринарної медицини з держветінспекцією Міністерства сільського господарства і продовольства України, № 15-14/87, липень 1996 р.).

8. Запропоновані:

8.1. Спосіб отримання діагностичної сироватки до вірусу чуми м'ясоїдних (деклараційний патент України № 35684 А, 2001 р.).

8.2. Способ получения диагностической сыворотки к вирусу болезни Ауески (патент РФ № 2036660, 1995 г.).

8.3. Способ получения диагностической сыворотки к вирусу болезни Ауески (патент РФ № 2044548, 1995 г.).

8.4. Виділений, паспортизований і депонований в ДНКІБіШМ штам НК/99 вірусу геморагічної хвороби кролів.

8.5. Методи і схеми імунізації морських свинок, кролів, свиней, коней і великої рогатої худоби концентрованими антигенами на основі масляних ад'ювантів.

8.6. Метод отримання очищених і концентрованих у 10-100 разів за об'ємом вірусних антигенів чуми м'ясоїдних, геморагічної хвороби кролів.

8.7. Метод інактивації вірусів чуми м'ясоїдних, геморагічної хвороби кролів із застосуванням азиридинів (аміноетилетиленімін), які не впливають на антигенні структури збудників.

8.8. Масляні ад'юванти вітчизняного виробництва, на основі яких готують емульсії типу “вода в маслі”, які забезпечують найвищі пролонгуючі імуностимулювальні властивості.

8.9. Дезмол для очищення виробничих (великомасштабних) об'ємів гіперімунних сироваток у біофабричних умовах виробництва, який скорочує терміни випуску препарату.

8.10. Метод визначення гемаглютинабельної активності вірусу геморагічної хвороби кролів в РЗГА при виробництві вакцин і специфічних сироваток.

8.11. З огляду на те, що імуностимулювальна активність ад'ювантів французької фірми “SEPPIC” перевищує відомі вітчизняні аналоги та у таких препаратів практично відсутня реактогенність, пропонуємо біологічним підприємствам України впроваджувати у вакцинному виробництві і при проведенні циклів гіперімунізації тварин застосування таких препаратів. З препаратів цієї фірми рекомендуємо застосовувати емульсії типу “масло у воді”, що мають найбільш виражені імуностимулювальні властивості.

9. Результати досліджень увійшли в наукові монографії: “Чума м'ясоїдних” (м. Біла Церква, 2000. - 129 с.; 2002. - 176 с.), “Вірусна геморагічна хвороба кроликів” (м. Біла Церква, 2001, - 64 с.), “Хвороба Ауєскі” (м. Біла Церква, 2002. - 220 с.); “Інфекційні та інвазійні хвороби кролів” (м. Біла Церква, 2003. - 288 с.); підручники: “Практикум із загальної епізоотології” (м. Біла Церква, 1999. - С.52-55, 57-61, 66, 76-78), “Загальна епізоотологія” (м. Біла Церква, 2002. - С. 347-353, 357-362, 445-448, 452-455).

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

Наукові монографії

1. Чума м'ясоїдних / Корнієнко Л.Є., Власенко В.В., Ярчук Б.М., Корнієнко Л.М. - Біла Церква, 2000. - 129 с.

(Дисертантом викладено розділи: вступ, збудник хвороби, патогенез, імунітет та імунопатологія, діагностика, серологічна ідентифікація, серодіагностика і ретроспективна діагностика, диференційна діагностика, вакцини і вакцинація, серопрофілактика, серотерапія і лікування).

2. Чума м'ясоїдних / Корнієнко Л.Є., Ярчук Б.М., Корнієнко Л.М., Власенко В.В., Домбровський О.Б. // Вид. 2-е. Доп. і перероб. - 2002. -173 с.

(Дисертантом викладено розділи: вступ, збудник хвороби, патогенез, імунітет та імунопатологія, діагностика, диференційна діагностика, вакцини і вакцинація, серопрофілактика, серотерапія і лікування ).

3. Вірусна геморагічна хвороба кроликів / Корнієнко Л.Є., Главацький В.П., Ярчук Б.М., Корнієнко Л.М., Мандигра М.С., Домбровський О.Б., Тирсін Р.В. - Біла Церква, 2001. - 64 с.

(Дисертантом викладено розділи: характеристика збудника, патогенез, діагностика, диференційна діагностика, імунітет, специфічна профілактика й лікування).

4. Хвороба Ауєскі / Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М., Білокінь В.С., Міщенко В.О., Домбровський О.Б., Ярчук Б.М. // За ред. Л.Є. Корнієнка. - Біла Церква, 2002. - 220 с.

(Дисертантом викладено розділи: вступ, характеристика збудника, патогенез, діагностика і диференційна діагностика, імунітет та специфічна профілактика).

5. Інфекційні та інвазійні хвороби кролів / Л.Є. Корнієнко, О.Б. Домбровський, С.І. Пономар, А.А. Антіпов. - Біла Церква, 2003. - 288 с.

(Дисертантом викладений розділ “Вірусні хвороби кролів”)

Статті у журналах та збірниках наукових праць

6. Застосування РЗК для індикації вірусу хвороби Ауєскі / Білокінь В.С., Міщенко В.О., Корнієнко Л.М., Корнієнко Л.Є., Берус П.Т. // Вісник аграрної науки. - 1995. - № 7. - С. 80-85.

(Дисертантом проведено удосконалення методики постановки, узагальнено результати).

7. Серологічна діагностика чуми м'ясоїдних у собак / Л. Корнієнко, Л. Корнієнко, Б. Ярчук, В. Власенко // Ветеринарна медицина України. - 1996. - № 8. - С. 36.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати).

8. Корнієнко Л.Є. Використання реакції нейтралізації для ідентифікації вірусу чуми м'ясоїдних і перевірки активності отриманих гіперімунних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1997. - Вип. 3, ч. 1. - С. 74-77.

9. Вірус чуми м'ясоїдних для приготування лікувальних препаратів / Ярчук Б., Корнієнко Л., Корнієнко Л., Сімоненко М., Власенко В. // Тваринництво України. - 1997. - № 11. - С. 17.

(Дисертантом організовано досліди, проведені дослідження, узагальнено результати).

10. Гіперімунні сироватки проти вірусу чуми м'ясоїдних / Ярчук Б., Корнієнко Л., Корнієнко Л., Сімоненко М., Власенко В. // Тваринництво України. - 1997. - № 3. - С. 20-21.

(Дисертантом організовано досліди, проведені дослідження, узагальнено результати).

11. Корнієнко Л.Є. Патогенез чуми м'ясоїдних при експериментальному зараженні // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1998. - Вип. 4, ч. 1. - С. 57-59.

12. Ефективність гіперімунної сироватки при чумі м'ясоїдних у собак / Головаха В., Корнієнко Л., Дикий О., Корнієнко Л., Ярчук Б. // Ветеринарна медицина України. - 1999. - № 3. - С. 18.

(Дисертантом проведено експериментальні досліди й узагальнено результати).

13. Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М. Спосіб отримання специфічних сироваток на антигени вірусів чуми м'ясоїдних, чуми великої рогатої худоби і хвороби Ауєскі // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1999. - Вип. 8, ч. 1. - С. 124-129.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати досліджень).

14. Імунітет, імунопатологія при чумі м'ясоїдних і корекція цих процесів із застосуванням гіперімунних сироваток / Л.Є Корнієнко, Л.М. Корнієнко, Ю.М. Тирсіна, В.В. Власенко // Ветеринарна медицина: Міжвідомч. темат. наук. збірник. - Харків. - 1999. - Вип. 76. - С. 9-13.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати досліджень).

15. Корнієнко Л.Є., Главацький В.П. Вплив різних інактивантів на антигенну властивість вірусів при отриманні специфічних гіперімунних сироваток // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1999. - Вип. 9. - С. 87-91.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати досліджень).

16. Корнієнко Л.Є. Вплив різних типів масляної емульсії на антитільну активність гіперімунних сироваток // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 2000. - Вип. 11. - С. 57-61.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати досліджень).

17. Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М., Домбровський О.Б. Вірусоспецифічна активність гіперімунних сироваток великої рогатої худоби, отриманих на антиген вірусу геморагічної хвороби кролів // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 2006. - Вип. 39. - С. 89-94.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати досліджень).

18. Корнієнко Л.Є. Теоретичне обгрунтування і опрацювання технології отримання гіперімунних сироваток з діагностичною і лікувальною метою на концентровані емульсовані антигени // Ветеринарна медицина: Міжвідомч. темат. наук. збірник. - Харків. - 2000. - Вип. 77. - С. 157-163.

19. Депонування і паспортизація штаму вірусної геморагічної хвороби кролів / Прискока В., Котляр Д., Палійчук Н., Главацький В., Корнієнко Л., Корнієнко Л. // Ветеринарна медицина України. - 2000. - № 8. - С. 18-19.

(Дисертантом проведено експериментальні та виробничі досліди й узагальнено результати досліджень).

20. Корнієнко Л.Є. Удосконалення технологічних етапів очистки гіперімунних сироваток // Вісник Полтавського державного сільськогосподарського інституту. - Полтава. - 2000. - № 4. - С. 53-55.

21. Корнієнко Л.Є. Раціональні методи отримання гіперімунних сироваток на антигени вірусу геморагічної хвороби кролів // Збірник наукових праць Харківського зооветеринарного інституту. - Харків: РВВ ХЗВІ. - 2000. - Вип. 6, ч. 2. - С. 118-121.

22. Корнієнко Л.Є. Лікувальна ефективність гіперімунних сироваток при експериментальному зараженні кролів вірусом геморагічної хвороби // Ветеринарна медицина: Міжвідомч. темат. наук. збірник. - Харків. - 2000. - Вип. 78, ч. 1. - С. 160-164.

23. Корнієнко Л.Є. Отримання гіперімунних сироваток на неінактивовані антигени // Вісник Полтавського державного сільськогосподарського інституту. - Полтава. - 2000. - № 5 (12). - С. 37-38.

24. Корнієнко Л.Є. Вивчення деяких патогенетичних особливостей вірусної геморагічної хвороби кролів із застосуванням серологічних реакцій // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 2000. - Вип. 14. - С. 206-209.

25. Корнієнко Л.Є. Вивчення імунобіологічних властивостей масляних ад'ювантів фірми “SEPPIC” при отриманні гіперімунних сироваток від кролів на антигени вірусів чуми м'ясоїдних, хвороби Ауєскі і геморагічної хвороби кролів // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 2001. - Вип. 16. - С. 99-105.

26. Корнієнко Л.Є. Динаміка елімінації різних груп антитіл у донорів // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 2002. - Вип. 23 - С. 85-90.

27. Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М., Домбровський О.Б. Отримання гіперімунних сироваток від тварин-донорів на концентровані комбіновані вірусні антигени / Матер. наук.-практ. конф., присвяченої 75-річчю Новогалещинської біофабрики: Зб. наук. праць Полтавської ДАА. - Полтава, 2006. - С. 94-98.

(Дисертантом проведено експериментальні досліди й узагальнено результати).

28. Корнієнко Л.Є., Розумнюк А.В. Відпрацювання технологічних етапів очистки гіперімунних сироваток // Аграрні вісті. - 2002. - № 4- С. 11-13.

(Дисертантом організовано досліди, проведені дослідження, узагальнено результати).

29. Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М., Домбровський О.Б. Залишкова вірулентність вакцини проти вірусної геморагічної хвороби кролів інактивованої гідроксидалюмінієвої // Вісник Білоцерківського ДАУ. - Вип. 29. - Біла Церква, 2004. - С. 70-75.

30. Ефективність імунізації кролів проти вірусної геморагічної хвороби / Л.Є. Корнієнко, М.В. Сімоненко, Л.М. Корнієнко та ін. // Аграрні вісті. - 2003. - № 4. - С. 14-15.

(Дисертантом організовано досліди, проведені дослідження, узагальнено результати).

31. Використання різних донорів і ад'ювантів для отримання гіперімунних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних / В.В. Власенко, Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1996. - Вип. 1. - С. 8-10.

(Дисертантом організовано досліди, проведені дослідження, узагальнено результати).

32. Концентрування вірусу хвороби Карре за допомогою поверхнево-активних речовин і сорбентів / В.В. Власенко, Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко, Б.М. Ярчук // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1996. - Вип. 1. - С. 10-12.

(Дисертантом організовано досліди, проведені дослідження, узагальнено результати).

33. Корнієнко Л. Застосування формаліну у технології виробництва гіперімунних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1997. - Вип. 3, ч. 1. - С. 77-80.

34. Корнієнко Л.Є. Загальні принципи отримання противірусних імунних сироваток // Вісник Білоцерківського державного аграрного університету. - Біла Церква. - 1998. - Вип. 4, ч. 1. - С. 52-56.

35. Деякі аспекти профілактики чуми м'ясоїдних у собак / Корнієнко Л., Корнієнко Л., Власенко В., Якубчак В., Овсяник Є. // Ветеринарна медицина України. - 2000. - № 10. - С. 20-21.

(Дисертантом проведено експериментальні досліди й узагальнено результати).

Патенти

36. Пат. 2036660 РФ, МКИ 6А 61К 39/42. Способ получения диагностической сыворотки к вирусу болезни Ауески / В.А. Мищенко, Л.Н. Корниенко, М.Г. Костюченко, В.С. Белоконь, Л.Е. Корниенко (РФ). - № 5051099; Заявл. 12.05.92; Опубл. 09.06.95; Бюл.-№ 16. - 4 с.

37. Пат. 2044548 РФ, МКИ 6А 61К 39/42. Способ получения диагностической сыворотки к вирусу болезни Ауески / В.А. Мищенко, Л.Н. Корниенко, Л.Е. Корниенко, В.С. Белоконь (РФ). - № 5565519; Заявл. 08.10.92; Опубл. 2.09.95; Бюл.-№ 27. - 4 с.

38. Пат. 97115531 UA, МПК 6А61К 35/16, 39/395. Спосіб отримання діагностичної сироватки до вірусу чуми м'ясоїдних / Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко (Україна). - № 35684; Заявл. 19.11.97; Опубл. 16.04.01; Бюл. - № 3. - 3 с.

Підручники

39. Загальна епізоотологія / Ярчук Б.М., Вербицький П.І., Литвин В.П., Корнієнко Л.Є., Домбровський О.Б., Тирсін Р.В., Корнієнко Л.М // За ред. Б.М. Ярчука, Л.Є. Корнієнка. - Біла Церква, 2002. - 656 с.

(Дисертантом викладено розділи: рівні вивчення імунітету, біологія імунної відповіді, еволюція інфекційних хвороб, сучасний етап вивчення природно-вогнищевих інфекцій, специфічна профілактика, особливості діагностики інфекційних захворювань в епізоотології, явища популяційного рівня в епізоотології, терапія і лікувально-профілактичні заходи при інфекційних хворобах, заразні хвороби диких тварин, емерджентні та екзотичні інфекції, ветеринарні аспекти охорони здоров'я).

40. Практикум із загальної епізоотології / Ярчук Б.М., Паска М.М., Корнієнко Л.Є., Заярнюк В.П., Домбровський О.Б., Сімоненко М.В., Корнієнко Л.М., Тирсін Р.В., Шульга П.Г., Бондаренко Д.І. // За ред . Б.М. Ярчука. - Біла Церква, 1999. - 168 с.

(Дисертантом викладено самостійно розділ: особливості діагностики інфекційних захворювань; у співавторстві: біологічні ветеринарні препарати у системі специфічного захисту, діагностики та лікування тварин при інфекційних хворобах).

41. Епізоотологія з мікробіологією. Підручник / Г.В. Козловська, Л.Є. Корнієнко, Н.Г. Наконечна та ін., За ред. В.Г. Постоя. - Вища освіта, 2006. - 543.

Тези наукових конференцій

42. Корнієнко Л.М., Корнієнко Л.Є. Одержання гіперімунних сироваток проти вірусу хвороби Ауєскі на свинях // Тези доп. Республ. конф. молод. вчених. - Харків. - 1992. - С. 20.

43. Корнієнко Л.М., Корнієнко Л.Є. Одержання гіперімунних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних на кролях // Тези доп. наук.-практ. конф.: Вчені Білоцерківського ДСГІ - виробництву. - Біла Церква. - 1994. - С. 81.

44. Результати адаптації польового штаму вірусу чуми м'ясоїдних до первинних і перещеплюваних культур клітин / Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко, В.В. Власенко // Матер. наук.-практ. конф.: Наук. забесп. агропром. комплексу України в сучасних умовах. - Біла Церква. - 1995. - С. 125.

45. Отримання гіперімунних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних на конях і собаках / Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко, В.В. Власенко // Матер. наук.-практ. конф.: Наук. забесп. агропром. комплексу України в сучасних умовах. - Біла Церква. - 1995. - С. 126.

46. Ефективність гіперімунних сироваток при лікуванні чуми м'ясоїдних у собак / Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко, В.В. Власенко // Матер. Межнар. научн. конф.: Общая эпизоотология: иммунонол., эколог. и методол. проблемы. - Харьков. - 1995. - С. 648.

47. Використання реакції радіальної імунодифузії для посмертної діагностики чуми м'ясоїдних / Л.М. Корнієнко, Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, В.В. Власенко // Матер. І-ї Всеукр. наук.-виробн. конф.: Актуальні питання вет. патології. - К., 1996. - С. 128-129.

48. Використання ад'ювантів різного походження при приготуванні гіперімунних сироваток проти чуми м'ясоїдних та їх реактогенність / Л.М. Корнієнко, Б.М. Ярчук, Л.Є. Корнієнко, В.В. Власенко // Матер. І-ї Всеукр. наук.-виробн. конф.: Актуальні питання вет. патології. - К., 1996. - С. 283-284.

49. Експериментальна інфекція у цуценят, заражених вірусом чуми м'ясоїдних / В.В. Власенко, Л.М. Корнієнко, Л.Є. Корнієнко, Б.М. Ярчук // Зб. матер. Міжнар. наук.-практ. конф.: Розвиток вет. науки в Україні: здобутки та проблеми. - Харків, 1997. - С. 166.

50. Удосконалення деяких технологічних етапів виготовлення гіперімунних лікувальних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних / В.В. Власенко, Л.М. Корнієнко, Л.Є. Корнієнко, Б.М. Ярчук // Зб. матер. Міжнар. наук.-практ. конф.: Розвиток вет. науки в Україні: здобутки та проблеми. - Харків, 1997. - С. 34-35.

51. Щодо вивчення факторів, які впливають на чутливість кролів до вірусу геморагічної хвороби при експериментальному зараженні / Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М., Головаха В.І., Главацький В.П., Власенко В.В., Древенчук О.Г. // Зб. матер. ІV-ї Міжнар. наук.-практ. конф.: Проблеми вет. обслуговування дрібних домашніх тварин. - К., 1999. - С. 46-49.

52. Активність вакцин проти вірусної геморагічної хвороби кролів / Корнієнко Л.Є., Корнієнко Л.М., Домбровський О.Б., Тирсін Р.В., Власенко В.В., Романенко Р.Л., Древенчук О.Г. // Зб. матер. VІ-ї Міжнар. наук.-практ. конф.: Проблеми вет. обслуговування дрібних домашніх тварин. - К., 2001. - С. 40-43.

53. Лікування кишкової форми чуми м'ясоїдних у собак / В.І. Головаха, Л.Є. Корнієнко, О.А. Дикий, Л.М. Корнієнко // Зб. матер. ІІ-ї Міжнар. наук.-практ. конф.: Проблеми вет. обслуговування дрібних домашніх тварин. - К., 1997. - С. 11-12.

Корнієнко Л.Є. Теоретичні та практичні аспекти виготовлення гіперімунних сироваток (на моделі вірусів хвороби Ауєскі, геморагічної хвороби кролів і чуми м'ясоїдних). - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня доктора ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 - ветеринарна мікробіологія та вірусологія. - Національний аграрний університет, Київ, 2006.

Дисертація присвячена вивченню і удосконаленню технологічних етапів отримання гіперімунних сироваток від тварин-донорів (морські свинки, кролі, свині, коні, велика рогата худоба) і науково-експериментальному обґрунтуванню методів інактивації, концентрування, очищення вірусів чуми м'ясоїдних, хвороби Ауєскі, геморагічної хвороби кролів, дослідженню різних ад'ювантів, методів очищення отриманого цільового продукту, і використанню з лікувальною і діагностичною метою препаратів, виготовлених на їх основі.

Показано, що в технології отримання гіперімунних сироваток істотне значення має очищення і концентрування антигену (аеросил, поліетиленгліколь, комбінований метод), місце і кратність ін'єкцій останнього (в лімфатичний вузол, внутрішньочеревно, внутрішньовенно), вибір ад'юванта (НАФ з типом емульсії “вода в маслі”, ПАФ, масляні ад'юванти фірми “SEPPIC”). Використання цих методів дозволяє скоротити термін отримання гіперімунних сироваток з високими титрами вірусоспецифічних антитіл від тварин-донорів до 29-40 діб від початку імунізації.

Для очищення і консервування сироватки з успіхом перевірений розчин формальдегіду. Застосування дезмолу для очищення цільового продукту від баластних речовин забезпечує високу ефективність такого підходу.

На основі експериментальних і виробничих випробувань розроблені і затверджені на державному рівні ТУ України на виготовлення “Сироватки проти вірусної геморагічної хвороби кролів”, “Гиперімунної сироватки проти чуми м'ясоїдних з культурального вірусу”, “Інактивованої тканинної концентрованої формол-вакцини проти вірусної геморагічної хвороби кролів з штаму НК/99”. Виготовлені гіперімунні сироватки проти чуми м'ясоїдних з активністю - 6,2-7,0 log2 в РН і вірусної геморагічної хвороби кролів з активністю - 11,0-13,0 log2 в РЗГА мали високі превентивні і лікувальні властивості при застосуванні на сприйнятливих тваринах.

Ключові слова: гіперімунна сироватка, хвороба Ауєскі, чума м'ясоїдних, геморагічна хвороба кролів, діагностика, лікування, інактивація, культура клітин, ад'юванти, профілактика.

Корниенко Л.Є. Теоретические и практические аспекты изготовления гипериммунных сывороток (на модели вирусов болезни Ауески, геморрагической болезни кроликов и чумы плотоядных). - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук по специальности 16.00.03 - ветеринарная микробиология и вирусология. - Национальный аграрный университет, Киев, 2006.

Диссертация посвящена изучению и усовершенствованию технологических этапов получения гипериммунных сывороток от животных-доноров (морские свинки, кролики, свиньи, лошади, крупный рогатый скот) и научно-экспериментальному обоснованию методов инактивации, концентрирования, очистки вирусов чумы плотоядных, болезни Ауески, геморрагической болезни кроликов, исследованию различных адъювантов, методов очистки полученного целевого продукта, и использованию с лечебной и диагностической целью препаратов, изготовленных на их основе.

...