Размещено на http://allbest.ru

Лабораторная диагностика рожи свиней

Введение

рожа свинья инфекционный диагностика

Выбор темы для курсовой работы обосновывается тем, что рожа до сих пор является одним из наиболее распространенных заболеваний свиней в мире. Кроме свиней болеют крупный и мелкий рогатый скот, лошади, северные олени, многие дикие млекопитающие, домашние и дикие птицы. Среди домашних и диких животных, птиц и, особенно, грызунов широко распространено микробоносительство.

Возбудителя рожи часто обнаруживают в организме морских и речных рыб, дельфинов, насекомых и членистоногих. Болеет рожей и человек. Рожа свиней (эризипилоид) у человека -- инфекционная болезнь кожи, вызываемая палочкой свиной рожи. Заражение происходит при работе с мясом, рыбой, птицей, особенно часто при уколах кожи рыбьей костью. Чаще наблюдается у мясников, работников боен, а также у домашних хозяек.

Болезнь распространена во многих странах и вызывает больший экономический ущерб вследствие гибели, абортов, мертворождаемости, вынужденного убоя больных свиней, снижения продуктивности больных животных и затрат на проведение лечебно-профилактических и противоэпизоотических (оздоровительных) мероприятий [3].

Рожа свиней распространена во многих странах мира. В Европе регистрируется повсеместно. Часто встречается в США, Канаде, Аргентине, Чили, Уругвае, Австралии, Новой Зеландии. Описана болезнь в Кении, ЮАР, Турции, Индии, Индонезии, Китае, Японии[9]. Экономический ущерб, причиняемый свиноводству рожей свиней, может достигать значительных размеров. В США в некоторые годы болели рожей более 700 тыс. свиней. При этом у значительного количества животных заболевание протекало хронически. Его обнаруживали на мясокомбинатах при убое свиней. В результате браковки страна ежегодно теряла десятки тысяч тонн высокоценных мясных продуктов [5]. Первые сведения о роже свиней в России относятся к 1883 году. В центральных губерниях (Орловской, Вологодской, Смоленской, Костромской, Московской, Новгородской, Пермской, Петербургской, Рязанской и других) в 1899, 1900, 1903-1916 годах отмечались эпизоотии болезни. Падеж свиней доходил до 70%. [9].

1.Обзор литературы

Рожа свиней -- инфекционное заболевание, сопровождающееся, при остром течении, явлениями септицемии и воспалительной эритемой кожи, а при хроническом -- эндокардитом и некрозами кожи [12].

Р. Кох в 1878 году впервые обнаружил возбудителя септицемии мышей (Bacillus murisepticus), который, в последующем, оказался совершенно тождественен с возбудителем рожи свиней по морфологическим, культуральным и серологическим свойствам.

Культуру возбудителя рожи выделили Л. Пастер и А. Тюлье в 1882 году из трупа свиньи, с помощью которой они приготовили соответствующую вакцину. Позднее вакцинные штаммы были получены Д.Ф. Коневым (1899), В. Виноградником (1931), которые в настоящее время используются для приготовления противорожистых вакцин. Над усовершенствованием вакцин в СССР работали А.С. Соломкин, Г.Д. Глуховцев, В.Т. Котов, С.Н. Муромцев, В.П. Меркулов, А.П. Эпштейн и другие.

Изучением рожи свиней занимались ученые Витебской ордена “Знак Почета” государственной академии ветеринарной медицины В.Ф. Петров, Д.Д. Бутьянов, А.А. Шпаковский, М.С. Жаков, Н.С. Безбородкин, В.Д. Чернигов, Л.П. Вель, В.Ф. Багрецов и другие [2,5,8].

Широкое распространение рожи в природе указывает на многообразие источников этой инфекции для свиней. Важнейшими следует считать: 1) свиней, больных различными клиническими, а также и латентными формами рожи; 2) не обезвреженные продукты убоя свиней, больных рожей: 3) участки почвы, инфицированные бактериями рожи: 4) грызунов и насекомых -- носителей рожистых бактерий [12].

В настоящий момент, известно три типа возбудителя рожи свиней: А, В и N. Наибольшее распространение имеет тип А, тип В встречается реже, однако он обладает наиболее высокими иммуногенными свойствами, поэтому его чаще используют для приготовления вакцин [8].

Возбудитель - бактерия Егуsiреlothrix insidiosa - единственный представитель рода, Erysipelothrix из семейства Lactobacillaceae. Возбудителя рожи относят к убиквитарным (повсеместно встречающимся) микроорганизмам, В зависимости от условий обитания Егуsiреlothrix insidiosa имеют неодинаковые морфологические, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства.

Морфология. Erysipelothrix rhusiopathiae (синонимы: Егуsiреlothrix insidiosa, Bacillus rhusiopathiae suis) - это тонкая, нежная, прямая или слегка изогнутая, неподвижная палочка размером 0,2-0,3 х 0,5-1,5 мкм. Под микроскопом микроб имеет вид отдельных палочек, в мазках располагается одиночно, парами, кучками, иногда в виде римской “V” или длинных нитей. Последние обычно обнаруживаются в тромбах на сердечных клапанах при бородавчатом эндокардите и в старых бульонных культурах. Возбудитель грамположительный, красится анилиновыми красителями. Спор и капсул не образует и не имеет жгутиков. Наряду с типичными формами встречаются инволюционные в виде нитей или палочек измененной морфологии. Образование нитей и других инволюционных форм является результатом воздействия на бактерии рожи свиней неблагоприятных условий внешней среды. Бактерии размножаются перешнуровыванием с образованием гетероморфных клеток. По характеру дыхания возбудитель аэроб, но может расти и в анаэробных условиях [9].

Культуральные свойства и биохимические свойств Erysipelothrix rhusiopathiae не требователен к питательным средам. Хорошо растет при температуре 36-38°С и рН 7,2-7,6 на простых средах: на обычном или полужидком мясопептонном бульоне, среде Хоттингера - через 24 часа образуется равномерное легкое помутнение без пристеночного кольца или пленки. При встряхивании наблюдается незначительная волнистость (“муаровые волны”). Через 48-72 часа выпадающий на дно осадок при встряхивании поднимается в виде облачка. На мясопептонном агаре через 16-24 часа формируются мелкие круглые колонии, напоминающие капельки росы, при этом при высевах материала из трупов павших животных обычно растут гладкие круглые и прозрачные колонии (S-формы), при пересеве старых культур часто, на ряду с гладкими, появляются шероховатые колонии (R-формы), имеющие неровные волнистые края, дающие по сторонам отростки. Кроме того, имеется переходная форма О- или S, R-колоний - с неровными краями и волнистой поверхностью. В гладких колониях микробы представляются в виде тонких коротких палочек, в шероховатых - они более длинные, изогнутые, неравномерной толщины. Для животных микробы из гладких колоний более вирулентные, чем из шероховатых. Бактерии S-формы выделяются при септической форме, O- и R - форм - при хроническом течении болезни. Пышный рост возбудителя рожи наблюдается на МПА и МПБ с 0,2% сахарозы и глюкозы с добавлением 0,3-0,5% сыворотки крови лошадей.

На сывороточном агаре наблюдается более обильный рост, при этом просвечивающие колонии несколько крупнее, чем на обычном агаре. На МПЖ при посеве уколом через 6-8 дней от линии укола отходят густые серовато-белые горизонтальные отростки, по внешнему виду напоминающие ерша. В последние годы для интенсификации процесса культивирования бактерий в качестве основы питательных сред успешно применяется дешевое не пищевое сырье и продукты микробиологического синтеза. Для этих целей используют ферментативно-дрожжевой гидролизат (ФКДГ), ферментолизат биомассы микроорганизмов (ФБМ), ферментативный гидролизат казеина, питательная среда из гидролизатов мясокостной муки, гидролизата сыворотки крови, а также двукомпонентная питательная среда из гидролизатов белков крови животных, содержащая источники азота, углерода, минеральные соли и стимулятор роста определенного состава и состоящий из биологически активных веществ из торфа и витаминов. Для повышения выхода целевого продукта в биологической промышленности используется стимулятор роста бактерий из нативной сыворотки крови животных [9].

Исследование токсигенных свойств возбудителя Рожа свиней относится к инфекционным болезням с природной очаговостью. Источником возбудителя инфекции бывают многие виды домашних и диких животных: свиньи (в первую очередь), овцы, крупный рогатый скот, олени, грызуны, птицы, рыбы, моллюски, ракообразные.

Больные животные выделяют возбудителя с мочой и испражнениями, загрязняя растения, почву и воду, поэтому между ними преобладает пищевой (алиментарный) путь заражения. Кроме того, возможен и трансмиссивный путь передачи возбудителя инфекции через различных клещей и насекомых через поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки [1].

Как правило, рожа проявляется в виде единичных случаев или энзоотических вспышек и практически никогда не охватывает все поголовье хозяйства. Заболевание имеет выраженную весенне-летнюю сезонность, хотя отдельные спорадические случаи могут регистрироваться в течение всего года. Важной особенностью рожи является стационарность, которая проявляется повторными вспышками через неопределенные промежутки времени [9].

Антигенное строение возбудителя. Возбудитель рожи свиней имеет три антигенных серовара - А, В и N. Каждый из сероваров характеризуется наличием видовых антигенов и гаптенов. Серовар А обладает высокой вирулентностью и вызывает заболевание у свиней до 95% случаев. Серовар В характеризуется пониженной вирулентностью и хорошими иммуногенными свойствами и поэтому пригоден для изготовления противорожистых сывороток и инактивированных вакцин. Серотип N встречается в организме клинически здоровых животных. Эризипелотриксы имеют антигенное родство с возбудителем листериоза. Из лабораторных животных к возбудителю рожи свиней наиболее восприимчивы белые мыши и голуби [9].

Устойчивость возбудителя. Несмотря на то, что Erysipelothrix rhusiopathiae не образует спор, возбудитель чрезвычайно устойчив во внешней среде, что объясняется наличием на его оболочке воско-липидных веществ [9].

В гниющих трупах и органах свиней, зарытых в почву, сохраняется 10-12 мес; в почвах, богатых органическими веществами, - 7-9 мес; в навозной жиже - до 290 дней, водопроводной воде - 100-108 дней; в фекалиях - 38-78 дней. В засоленной свинине микробы выживают до 6 мес; в копченых продуктах - до 3 мес. Под действием прямых солнечных лучей бактерии погибают через 10- 12 дней, а высушивание при рассеянном свете убивает их через 3 -4 нед. [4].

При температуре 50°С возбудитель сохраняется в течение 20 минут, при 70°С - 5 минут, при 100°С - погибает через одну минуту. Прямые солнечные лучи убивают возбудителя лишь через 10-12 дней. У эризипелотриксов выражена чувствительность к антибиотикам (пенициллину, бицилиину-3 и -5, энробиофлоксу, энроксилу, линко-спектину, формазину и др.). По устойчивости к химическим дезинфицирующим средствам возбудитель рожи относится к первой группе (к группе малоустойчивых). Губительно действуют на них 2%-ные растворы гидроксида натрия и формалина, 10 %-ный раствор хлорной извести, 3%-ный раствор пероксида водорода, 1%-ный раствор йодеза и виркона С в соотношении 1: 100, 3%-ный фенола и другие в общепринятых концентрациях [4].

Эпизоотологические данные К роже восприимчивы свиньи в возрасте от 3 до 12 месяцев.

Восприимчивость к роже в известной степени зависит и от условий кормления и содержания свиней. Недостаток в кормовом рационе протеина, минеральных веществ и витаминов снижает естественную устойчивость к этому заболеванию. Такое же неблагоприятное влияние на устойчивость свиней к роже оказывает односторонне кормление, в частности, дача кормов богатых углеводами, но бедных витаминами и минеральными веществами. К бактериям рожи восприимчивы грызуны многих видов и насекомоядные, которые, ввиду их многочисленности, имеют большое значение в круговороте Erysipelothrix rhusiopathiae в природе и могут выступать в роли источника возбудителя инфекции и для свиней. Из домашних животных рожей могут заболевать мелкий и крупный рогатый скот, лошади, собаки. Среди домашних птиц рожа зарегистрирована у цыплят, бройлерных кур, индеек, уток, гусей, цесарок. Нередко рожей могут заболевать дикие животные и птица зоопарков. Болеет рожей свиней и человек. Наиболее опасным источником возбудителя инфекции являются свиньи в период острого течения болезни, во время которого, а также после выздоровления с мочой и калом выделяется большое количество вирулентных бактерий. Не менее опасны свиньи и в период хронического течения рожи, так как бактерии находятся не только в пораженных тканях, но и выделяются во внешнюю среду.

Доказана передача возбудителя рожи мухами-жигалками. Переносчиками могут быть также птицы, мыши и крысы, обитающие на территории ферм. Передача возбудителя рожи возможна через предметы ухода, корм и воду, загрязненные выделениями больных свиней, а также не обезвреженные продукты убоя последних. Факторами передачи возбудителя так же служат трупы, павших от рожи свиней. Особенно важное значение, как факторы передачи возбудителя инфекции, в распространении рожи играют почва и вода. Так, почвы песчаные и известковые так же, как богатые перегноем, особенно благоприятны для развития бактерий рожи. В этом случае важным является и реакция почвы: в кислых почвах возбудитель быстро погибает, а в щелочных - годами остается жизнеспособным и даже размножается. Также установлено, что в тех местах, где поение свиней проводят мягкой водой, отмечается более тяжелое течение болезни, чем в тех местах, где используется вода, содержащая большое количество солей кальция. Данное обстоятельство можно объяснить тем, что обеднение организма солями кальция приводит к снижению его иммунного статуса, а следовательно и к более тяжелому течению инфекционного процесса.

Основной путь распространения возбудителя - алиментарный, реже - трансмиссивный и контактный. Существует и вертикальный путь передачи. Рожа свиней относится к группе инфекционных заболеваний, характеризующихся выраженной весенне-летне-осенней сезонностью [9].

Иммунитет. Переболевшие рожей свиньи приобретают напряженный и длительный иммунитет, что обусловлено фагоцитозом и сывороточными антителами. Иммунитет можно создать и искусственно, путем введения животным микробов рожи, ослабленных разными способами, т.е. с помощью вакцин. Такая вакцинация (двукратная) обычно производится до наступления летнего сезона, чтобы при наступлении жаркого периода года и выгона свиней на пастбище они были защищены от заболевания. Небольшая реакция, возникающая после введения вакцины, проходит быстро и создает активный иммунитет.

Для активной иммунизации применяют вакцины из ослабленных и убитых бактерий (депонированная вакцина, изготовленная из матрикса Конева, вакцина из штамма ВР-2_, концентрированная гидроокисьалюминиевая формолвакцина). Вакцинацию проводят согласно наставлениям по применению вакцин. Длительность иммунитета после вакцинации составляет до 6 месяцев (активный иммунитет). Иммунитет может быть и временным (пассивным), который передается свиньям путем введения сыворотки против рожи, сыворотку получают от лошадей, в кровь которым вводилось большое количество не ослабленных микробов рожи. Лошади рожей свиней не болеют, а их кровь приобретает лечебные и предохрательные свойства против этой болезни.

Сывороточный (пассивный) иммунитет весьма непродолжителен (до 14 суток). Поэтому сыворотка наиболее часто применяется для временного предохранения животных от заболевания при перевозке, выставке или для лечения уже заболевших свиней [9].

По данным отдельных авторов у привитых против рожи животных хоть и формируется стойкий иммунитет, однако в отдельных случаях он бывает нестерильным и большинство переболевших свиней длительное время остаются бактерионосителями и при воздействии стресс-факторов могут заболевать повторно. Установлено, что при титре агглютининов 1:80 и выше поросята устойчивы к заражению. Эти данные не зависят от характера иммунитета (поствакцинальный или колостральный) [11].

Специфическая профилактика. Для специфической профилактики рожи свиней во многих странах мира с развитым свиноводством используют живые и инактивированные вакцины.

Инактивированные вакцины обеспечивают формирование у привитых животных достаточно выраженного иммунитета лишь в том случае, если они изготовлены из специально отобранных иммуногенных штаммов серологического типа В [13].

Основным средством для лечения рожи свиней является гипериммунная противорожистая сыворотка, которую вводят подкожно, а в тяжелых случаях внутримышечно в дозе 1,0-1,5 мл/кг живой массы. Эффект от применения сыворотки усиливается при одновременном введении антибиотиков, таких как пенициллин, стрептомицин, гентамицин, левомицетин.

При отсутствии гипериммунной сыворотки можно применять только антибиотики. Хороший эффект дают пенициллин - вводят внутримышечно в дозе 10-20 тыс. ЕД/кг живой массы три раза в день; стрептомицин -в дозе 10-15тыс. ЕД/кг живой массы два-три раза в день; левомицетин - в дозе 0,5-1,0 г два-три раза в день. Терапевтический эффект усиливается при одновременном введении пенициллина и стрептомицина.

В последнее время для лечения рожи свиней широкое распространение получают антибиотики-цефалоспорины, такие как кефзол, цефалексин, цефамезин, клафоран и другие, которые вводят из расчета 0,01-0,02 г/ кг живой массы 2-3 раза в день.

Одновременно с применением гипериммунной сыворотки и антибиотиков следует проводить симптоматическое лечение, включающее применение сердечных и противоаллергических препаратов, а также витаминов. В частности из сердечных средств можно подкожно или внутримышечно вводить кофеинбензоат натрия в дозе 0,5-1,5 г; кордиамин в дозе 1-4 мл/60 кг массы тела 3-4 раза в день; сульфокамфокаин - в дозе 1-2 мл 2-3 раза в день. Для предупреждения и устранения аллергических реакций можно применять 1%-ный раствор димедрола или 10%-ный раствор дипразина, которые вводят внутримышечно в дозе 0,5-1,0 мл два-три раза в день. Для уменьшения порозности кровеносных капилляров показано применение 10%-ного раствора глюконата кальция в дозе 0,5-1,0 г ежедневно до выздоровления. Для повышения резистентности организма следует вводить витаминные препараты, в частности витамин С - 2-3 раза в день, витамин В₁ - один раз в день, В₁₂ один-два раза в день, В₆ - один раз в день, внутрь с кормом можно давать комплексные витаминные препараты. В случае необходимости применяют слабительные средства.

У больных животных должна быть в достатке питьевая вода, в которую можно добавлять небольшое количество перманганата калия, фурацеллина, фуразолидона. Полезно назначение диетотерапии, включающей в себя кисломолочные продукты или молоко.

В профилактике рожи важную роль играет вакцинация, восприимчивого поголовья свиней. Как правило, животных с двухмесячного возраста, начинают иммунизировать до наступления летнего сезона. С этой целью можно применять как живые, так и инактивированные вакцины, которые обычно вводит двукратно. Продолжительность иммунитета у привитых свиней составляет до шести месяцев. Для временного предохранения животных от заболевания рожей, например при перевозках, можно использовать гипериммунную сыворотку, пассивный иммунитет после введения которой длится до 14-ти дней.

Для профилактики распространенной вакциной является вакцина против болезни Ауески и рожи свиней, которая вызывает образование специфического иммунитета к возбудителям болезни Ауески и рожистой инфекции. Иммунитет у вакцинированных свиней наступает через 7-10 суток к болезни Ауески и продолжается до 6 месяцев. Противорожистый иммунитет вырабатывается к 25 суткам и продолжается свыше 6 месяцев. Помимо специфической профилактики необходимо проводить мероприятия, направленные на ликвидацию источников возбудителя инфекции, в частности, регулярно проводить очистку и дезинфекцию свинарников, летних лагерей, обеззараживать продукты убоя. Из дезинфицирующих средств против рожи эффективны 2%-ный раствор гидроокиси натрия, 3%-ный раствор фенола, 10%-ная хлорная известь. В случае появления рожи свиней в хозяйстве, все поголовье нужно тщательно обследовать. Больных животных лечат, через десять дней после выздоровления их переводят в общий свинарник, предварительно проведя дезинфекцию кожных покровов и конечностей, и вакцинировав всех наболевших животных.

В неблагополучном хозяйстве вводят ограничения: запрещают ввоз и вывоз свиней и их перегруппировку; вывоз не обезвреженного мяса, полученного от вынужденно убитых животных; вывоз кормов, с которыми соприкасались больные свиньи. Навоз обеззараживают биотермическим способом. Ограничения снимают через 14 дней после последнего случая выздоровления больного животного, очистки и заключительной дезинфекции помещений, выгульных дворов и предметов ухода, а также после вакцинации всего поголовья свиней. Мероприятия по ликвидации указаны в схеме 2. [7]

В настоящее время для лечения и профилактики рожи свиней выпускают следующие биопрепараты (приложение 4):

1. Сыворотка против рожи свиней (Армавирская биофабрика, Краснодарская биофабрика, Орловская биофабрика);

2. Вакцина против рожи свиней депонированная (Армавирская биофабрика, Краснодарская биофабрика);

3. Вакцина живая сухая из штамма ВР-2 против рожи свиней (Армавирская биофабрика, Ставропольская биофабрика и др.),

4. Вакцина против рожи свиней из штамма ВР-2 жидкая (Омский биокомбинат) [7].

2. Собственные исследования

В хозяйстве ЗАО «Шувалово» пал поросенок в возрасте 1,5 года. Ветеринарный врач проведя внешний осмотр и выяснив с какой клинической картиной протекала болезнь поставил предварительный диагноз- рожа свиней. При этом для исследования в лабораторию с сопроводительным документом (приложение 1) был отправлен следующий патологический материал: печень, сердце, селезенка, почка. Обосновываясь на том, что кожные покровы не истощенного трупа в области подгрудка и промежности цианотичны, на спине и боках различной величины темно-красные участки. Лимфатические узлы увеличены, резко гиперемированы с четко выступающими фолликулами. Лабораторные исследования проводим согласно схеме бактериологического исследования патологического материала на рожу свиней (приложение 2)

Первый день исследований:

Делаем мазки из присланных органов - селезенки, почки, печени, путем отпечатка. Стерильно вырезаем кусочки органов, поверхностью среза несколько раз касаемся предметного стекла. Мазки высушиваем на воздухе. Окрашиваем по Граму и проводим реакцию МФА.

Окраска по Граму:

На фиксированный мазок помещаем полоску фильтровальной бумаги, пропитанную спиртовым раствором генциан кристалвиолета , наносим на нее несколько капель дистиллированной воды для увлажнения, выдерживаем 2 мин, бумажку удаляем.

Препарат, не промывая, обрабатываем раствором Люголя 1-2 мин; раствор сливаем.

Наносим 96% этанола 45 сек,

Препарат тщательно промываем водой и

Окрашиваем фуксином Пфейффера 2 мин.

Вновь промываем водой, подсушиваем фильтровальной бумагой и микроскопируем

Микрокартина: мелкие грамположительные палочки, располагающиеся одиночно и попарно в виде V, что схоже с описаниями морфологических свойств в литературных источниках [6].

Метод флуоресцирующих антител (МФА):

Готовим мазки отпечатки на предметном стекле из органов.

Подсушиваем на воздухе.

Фиксируем этанолом в течении 10-15 минут.

На предметное стекло наносим каплю противорожистой люминесцирующей сыворотки.

Препарат помещаем во влажную камеру (чашку Петри) с фильтрованной бумагой, смоченной водой.

Препарат помещаем в термостат при 37-38°С на 15-30 минут.

Промываем мазок проточной водой в течение 5-10 минут.

Высушиваем фильтровальной бумагой и микроскопируем.

Микрокартина: «+++» - отчетливо выраженная, достаточно яркая флуоресценция; в мазках имеются светящиеся клетки типичной морфологии.

Готовим МПБ, МПБ, МПЖ ( согласно прил. 6) и производим посев. Культивируем 24 часов при температуре 36-38°С.

Проводим биопробу: тканевый материал измельчаем в ступке со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10 и вводим подкожно трем белым мышам массой 16-18 г по 0,2 мл.

Второй день исследований

Ведем учет культуральных свойств. Наблюдаем легкое помутнение МПБ.

Третий день исследований

В результате проведенной ранее биопробы мыши погибли.

МПБ просветляется, на дне пробирки появляется осадок, поднимающийся при встряхивании в виде облачка (что соответствуют описаниям культуральных свойств в литературных источниках [6] ) .

Готовим МПЖ (согласно прил. 6) и производим посев уколом в столбик среды.

1. Осторожно приподняв крышку чашки, захватываем прокаленной и остуженной петлей одну отдельно расположенную колонию.

2. Вносим в пробирку с плотной питательной средой. Пробирку держим в наклонном положении в левой руке между большим и указательным пальцами. Правой рукой держим петлю с посевным материалом.

3. Мизинцем правой руки вынимаем пробку из пробирки, обжигаем в пламени горелки ее край и вносим в нее петлю.

Результаты: от линии укола отходят густые серовато-белые горизонтальные отростки, по внешнему виду напоминающие ерша.

Далее из посева на МПБ выделяем чистую культуры методом Коха:

Исследуемый материал последовательно разводим в 4 пробирках с расплавленным и охлажденным МПА по 10 мл.

Затем осторожно содержимое каждой пробирки сливаем в стерильную чашку Петри и распределяем среду тонким слоем

Чашки переворачиваем вверх дном и помещаем в термостат на 24 ч

Четвертый день исследований

Выросшие на МПА культуры - мелкие росинчатые гладкие колонии S-формы. Из этих культур готовим мазки и окрашиваем их по Граму и люминесцирующей сывороткой.

Приготовление мазка:

В правую руку берем бактериологическую петлю, прожигаем ее в пламени горелки в левую чашку Петри.

Большим пальцем левой руки слегка приподнимаем крышку, обжигаем над пламенем горелки края чашки в зоне щели, осторожно захватываем бактериологическую массу с поверхности питательной среды.

На предметное стекло наносим каплю стерильного физиологического раствора, в котором петлей суспендируем бактериологическую массу

Мазок фиксируем физиологическим способом. Препарат обратной стороной стекла два-три раза медленно проводим над пламенем горелки

Окрашиваем по Граму.

Микрокартина: мелкие тонких короткие грамположительные палочки, располагающиеся одиночно и попарно в виде V, что схоже с описаниями морфологических свойств в литературных источниках [6]. Отчетливо выраженная, достаточно яркая флуоресценция; в мазках имеются светящиеся клетки типичной морфологии.

Определяем подвижность бактерий методом висячей капли:

Каплю бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносим на покровное стекло

Стеклом с «луночкой» накрываем каплю культуры( предварительно смазываем края «лунки» вазелином) так, что покровное стекло находилось в центре и прилипло к предметному стеклу

Препарат переворачиваем покровным стеклом вверх и капля висит над луночкой.

Препарат микроскопируем при затемненном поле зрения

Результат: бактерии не подвижны

Ставим реакцию аглютинации (определение серогрупповой принадлежности)

Для идентификации микроорганизма на обезжиренное стекло наносим каплю лечебно-профилактической противорожистой сыворотки

Добавляем физиологический раствор в соотношении 1:50

Затем тщательно суспендируюм бактериологической петлей суточную агаровую исследуемую культуру

Через 2 минуты учитываем результат.

На стекле появляются хлопья агглютината, что свидетельствует о положительном результате.

Одновременно ставим контроли:

антиген + физиологический раствор;

сыворотка, разведенная 1:25 без антигена.

Все пробирки встряхиваем, выдерживаем в термостате при 37°С 18 часов и затем при комнатной температуре - 8ч. Читаем реакции при помощи аглютиноскопа. Наблюдаем просветление жидкости и образование на дне пробирки осадка бактерий в форме раскрытого зонтика, который при встряхивании распадается на мелкие комочки.

Проводим тест на каталазу:

Бактериальную массу снимаем с поверхности агара бактериологической петлей и в капле 3% раствора перекиси водорода на предметном стекле. Реакция отрицательна, т. к пузырьков газа не образуется.

Рецепты приготовления реактивов, питательных сред и учет результатов исследования ферментативных свойств.

Среды для обнаружения сероводорода.

1. стерильного 1,7-2%-ный МПА - 1л.

2. сернокислое железо - 0,2 г,

3. гипосульфит натрия - 0,3 г,

4. лактозу - 1г,

5. индикатор - 0,2% водный раствор фенол рота - 12 мл.

Среду разливаем в стерильные пробирки по 5-6 мл стерилизуем текучим паром 20 мин. Перед употреблением среду скашиваем так, чтобы часть ее образовала столбик. Посев проводят на скошенный агар, а затем уколом в нижнюю часть столбика среды.

Реакция на сероводород положительная: наступает почернение

2. Обнаружение индола.

Фильтровальную бумагу пропитывают горячим насыщенным (12%) водным раствором щавелевой кислоты, затем бумагу высушивают на воздухе и разрезают на полоски размером 10х0,5 см. Для обнаружения индола засеваем пробирку с МПБ изучаемой культурой бактерий, помещаем в пробирку индикаторную бумажку, прижимая верхний конец ватной пробкой. Инкубирование проводим при 37°С 3 дня.

Нижняя часть индикаторной бумажки не окрашивается, т. о индолообразования не наблюдается.

3.Определение сахоролитических свойств

Для определения биохимических свойств готовим среды Гисса и засеваем методом укола.

1. дистиллированная вода -1 л. +1% пептона

2. NaCl-0,5 г

3. углевод-субстрат

4. агар-агар - 0,3 %

5. индикатор Андрэ- 1 мл

Нагреваем до t° 80°; затем доводим рН до 7,2 (при комнатной температуре). После этого смесь кипятим 5 мин., фильтруем и доливаем водой до первоначального объема. Добавив 0,5--1% одного из углеводов, среду разливаем по пробиркам с поплавками. Исследуемую культуру засеваем уколом петли в столбик среды, инкубируем в термостате при 37°С. Перекрашивание среды в синий или голубой цвет указывает на ферментацию сахара с образованием кислоты; такое же перекрашивание среды и появление в ее толще пузырьков - на ферментацию сахара с выделением кислоты и газа. При отсутствии ферментативной активности у микроба среда мутнеет, но цвета не меняет.

Культивируем 24 часа при температуре 36-37?С.

Результат: глюкозу, лактозу расщепляет без образования газов, но с образование кислоты. Об этом свидетельствует перекрашивание среды в синий и появление в ее толще пузырьков в пробирках с глюкозой и лактозой.

Проводим окончательный учет ферментативных свойств (через день после посева на питательные среды): исследуемая культура не образует каталазу, выделяет сероводород, разлагает глюкозу, лактозу, без образования газов, но с образование кислоты. Не разлагает мальтозу и сахарозу, не выделяет индол.

Документы, которые регламентируют ход исследований

Наставление по применению сыворотки рожистой люминесцирующей сухой. Утверждена зам. начальника Департамента ветеринарии В. В. Селиверстовым 27.01.97 г.

Методические указания по лабораторной диагностике рожи (эризипелоида) животных, утвержденные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 26. 01.0

СОПРОВОДИТЕЛЬНОЕ ПИСЬМО от «___» _____________ 20___ г.

Направляются_____ проб ______________________

от _____ Общее поголовье________________ голов.

(вид и возраст животного)

Принадлежащих:_________________

(название хозяйства, фермы, отделения, ФИО владельца животного, адрес)

Организация, производившая отбор проб:_____________

(наименование, адрес, контактный телефон)

Место отбора образца:_____________________

(область, район, поселение, населенный пункт, площадка, стадо и т.д.)

Дата и время отбора проб: «___» _______________ 20___ г. в __ час.___ мин.

Пробы упаковки ________________

(вид упаковки, НД на отбор, упаковку и транспортирование проб)

Цель исследования:_______

(мониторинг, диагностика, подтверждение диагноза, исследование напряженности иммунитета и др.)

Исследование проводится________________

(первично, втрорично)

Дата и результат предыдущего исследования_______________________________

Методы испытаний:_________

Показатели испытаний (вид заболевания и т.п.) ______________

Вакцинация поголовья_____________________________

(проводилась, не проводилась, вид вакцины, дата вакцинации)

Хозяйство по выше указанному заболеванию благополучное, неблагополучное (подчеркнуть)

Дата заболевания животного «___» ___________ 20___ г. Количество заболевших:________ голов

Дата падежа: «___» _______ 20___ г. Количество павших: ____голов

Клиническая картина:_________________

Данные патологического вскрытия:____________________

Предположительный диагноз:_______________________

Условия хранения материала:________________________

Результаты исследований предоставлять:____________________

Список животных, от кторых взят материал на исследование, прилагается на _____ листе (ах) в___ экземпляре (ах)

Лица, производившие отбор проб:__________________

От организации, производившей отбор проб:_______________________

(должность) (подпись) (ФИО)

От владельца животных:__________________

(должность) (подпись) (ФИО)

Лицо, уполномоченное доставть пробы:_________________________

(должность) (подпись) (ФИО)

*При отсутствии бланка допускается заверение сопроводительного документа печатью при наличии в ней реквизитов заказчика.

Протокол испытаний №_____

Дата поступления материала_____________________

Адрес и название хозяйства_____________________

Что прислано на исследование______________________

В каком состоянии принят материал_______________

На что исследовать______________

Ход исследования

Патологоанатомические и органолептические данные____________________

Микроскопические исследования исходного материала______________ (метод окраски)________________(морфология микробов)________________

Посевы

Вид материала, из которого произведен посев	Наименование сред
	МПА	МПБ	п/ж МПА	Сывороточные	ППА	ППБ	Китта-Тароцци	Эндо	Характер роста на среде
				МПА	МПБ
Кровь
Селезенка
Желчь
Почка
Головной мозг
Лимфоузел
Сычуг
Гной

Микроскопия культуры_______________________________

(метод окраски)____________________(морфология микробов)___________ Пересев___________________________________________________________

(на элективные среды,дробный посев,чашки,дата)

Биохимические свойства выделенного микроба

Дата исследования

Наимен.органов(материала)

Глюкоза

Лактоза

Сахароза

Дульцит

Маннит

Арабиноза

Мальтоза

Молоко

Сероводород

Аммиак

Подвижность

Серологические исследования

Гной

+

+

+

-

+

-

+

+

+

+

-

-

Биологические исследования

Животное	Дата заражения	Методика	Результат

Результаты исследования ______________________

Рекомендации

Врач-бактериолог___________________________

Заключение

Проведя бактериологическое исследование, состоящее из:

1)выделения чистой культуры возбудителя путем культивирования на питательные среды:

МПБ- слабое помутнение, образование легко разбивающегося осадка

МПА- мелкие гладкие круглые росинчатые колонии, S-формы

2)изучение ее морфологических свойств по изготовленному из культуры и окрашенного по Граму:

микрокартина: грамположительные прямые палочки. Располагаются одиночно и попарно в виде V

3)изучение ферментативных свойств:

культура не образует каталазу, выделяет сероводород, разлагает глюкозу, лактозу, без образования газов, но с образование кислоты. Не разлагает мальтозу и сахарозу, не выделяет индол.

4)определения патогенности выделенных культур путем заражении выделенной микробной культурой белых мышей: гибель двух белых мышей в течение 3 дней

5)определения серологической принадлежности используя реакцию агглютинации (на стекле) с лечебно-профилактической противорожистой сывороткой РА на стекле: образование мелкозернистого агглютината, полное просветление жидкости.

Был выделен возбудитель рожи свиней.

Список литературы

1. Емельяненко П.А., Дунаев Г.В., Кудлай Д.Г. и др.Ветеринарная микробиология: - 1982г. - 304с.

2. Радчук Н. А., Дунаев Г. В., Колычев Н. М., ч Смирнова Н. М. Ветеринарная микробиология и иммунология. - М. 1991. С. 198-201.

3. Хазиев Г.З. Зооантропонозы и их профилактика. Уфа: Гилем, 1998г. - 187с.

4. Бессарабов Б.Ф., ч, Вашутин Б.Ф., Воронин, Е.С. и др. Инфекционные болезни животных; Под ред. А.А. Сидорчук. - М.: КолосС, 2007. - 671с.

5. Костенко Т.С., Родионов В.Б., Скородумов Д.И. Практикум по ветеинаной микробиологии и иммунологии - М.: «Колос» 2001г

6. Бакулов И.А. Практикум по эпизоотологии с микробиологией Изд. 3-е, перераб. и доп. М.: Колос, 1988г. - 208с.

7. Конопаткин А.А., Бакулов И.А., и др. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных: Под ред. А.А. Конопаткина.- М.: Колос, 1984г. - 544с.

8. Дремач Г.Э. Максимович В.В. Зайцев В.В. Учебно-методическое пособие для студентов и слушателей ФПК по специальности "Ветеринарная медицина" - ВИТЕБСК: "УО "ВГАВМ" , 2003 г.-30с.

9. Лекции по ветеринарной микробиологии. Профессор, кандидат ветеринарных наук Парамонова Н.Ю.

Размещено на Allbest.ru

...