Определение серотиповой специфичности негемадсорбирующих штаммов вируса африканской чумы свиней

Размещено на http://www.allbest.ru/

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии

Российской академии сельскохозяйственных наук

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЕРОТИПОВОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ НЕГЕМАДСОРБИРУЮЩИХ ШТАММОВ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

Середа Алексей Дмитриевич

д. б. н., профессор

г. Покров

Аннотация

Инактивированные по инфекционности гамма-облучением культуральные препараты (г-ОП) из негемадсорбирующих штаммов вируса африканской чумы свиней (АЧС) приобретают способность индуцировать гемадсорбцию в культуре клеток костного мозга свиней (ККМС). Получены экспериментальные данные, свидетельствующие, что модификация реакции задержки гемадсорбции (РЗГАд) - реакция "снятия" гемадсорбции, индуцируемой г-ОП, может быть использована в научно-исследовательской работе при определении серотипоспецифичности негемадсорбирующих изолятов вируса АЧС

Ключевые слова: вирус африканской чумы свиней, реакция задержки гемадсорбции, негемадсорбирующие штаммы

Gamma irradiation-inactivated cultural preparations (g-IP) of African swine fever (ASF) non-haemadsorbing strains acquire a potential for haemadsorption induction in porcine bone marrow culture (PBMC). We have obtained some experimental data indicating that a modification of haemadsorption inhibition assay (HIA) which is an assay aimed at "removal" of г -IP-induced haemadsorption may be used in research works to determine serospecificity rates of ASF virus non-haemadsorbing isolates

Keywords: african sine fever virus, haemadsorption inhibition, non-haemadsorbing strains

Вирус АЧС гетерогенен по составу генома, физико-химическим свойствам, патогенности, антигенности, способности индуцировать гемадсобцию. Разработаны методы классификации штаммов, основанные на генотипических или фенотипических свойствах вируса АЧС. Наиболее распространенным способом, позволяющим типировать штаммы и изоляты in vitro по фенотипическому признаку, была и остается РЗГАд. По данным РЗГАд и иммунологических проб на свиньях депонированные во ВНИИВВиМ штаммы и изоляты вируса АЧС разделены на 11 групп, из которых 8 охарактеризованы как сероиммуногруппы с соответствующими референс-штаммами. Однако, наличие значительного количества выделенных в Африке от аборигенных свиней и аргасовых клещей негемадсорбирующих штаммов и изолятов вируса АЧС создает существенные трудности в их сероиммунотиповой классификации.

Было обнаружено, что г-ОП, приготовленные из лизатов адгезированных клеток (А-клеток) культуры ККМС, инфицированных гемадсорбирующими и негемадсорбирующими штаммами вируса АЧС, индуцируют развитие гемадсорбции в культурах ККМС. Представлялось целесообразным изучить это явление и попытаться определить возможность его использования для серотипирования негемадсорбирующих штаммов, изолятов, вариантов вируса АЧС.

Условия и методика проведения исследований

Двухсуточную культуру ККМС в 1.5 литровых клинских матрасах заражали вирусом АЧС с множественностью 10-4 ГАЕ 50 или ТЦД 50/клетка. Через 4-5 суток культивирования при 37 ОС вируссодержащую суспензию дважды осветляли центрифугированием при 3000 g 30 мин, в надосадок добавляли полиэтиленгликоль с м.м. 6000 кДа до 5 % и через 24 часа инкубирования при 4 ОС осаждали преципитат при 3000 g в течение 20 мин. Осадок ресуспендировали в 0.15 М NaCl в фосфатном буферном растворе с рН 7.2 (ФБР) в объеме 1:100 от исходного и переосаждали через раствор 30 % сахарозы на ФБР при 50000 g в течение 2 часов. Осадок ресуспендировали в ФБР в объеме 1:500 от исходного и подвергали г-облучению в дозе 25 кГрей.

РЗГАд ставили в двух модификациях:

1. По 0.5-1.0 мл сыворотки вносили в 9 смі двухсуточной культуры ККМС и затем добавляли по 1 смі г-ОП в разведениях от 1:16 до 1:512. Учет реакции производили через 1-2 суток.

2. В чашки Карреля с 9 смі двухсуточной культурой ККМС вносили по 1 смі г-ОП в разведениях от 1:16 до 1:1024. В течение трех суток наблюдали за развитием гемадсорбции. На вторые или третьи сутки отбирали чашки с гемадсорбцией, вносили в них по 0.5-1.0 смі гомологичных и гетерологичных по сероиммунотипу антисывороток. Учет реакции производили через 30-60 мин инкубирования при 37 ОС.

Интенсивность гемадсорбции г-ОП в культуре ККМС оценивали по бальной шкале при наблюдении в световой микроскоп с увеличением х 400:

(0) - нет адсорбции эритроцитов;

(1) - по 3-9 эритроцитов адсорбированы на 3-8 А-клетках;

(2) - по 3-9 эритроцитов на более 50 % А-клеток;

(3) - более 10 эритроцитов адсорбированы на более 50 % А-клеток;

(4) - более 10 эритроцитов адсобированы на более 90 % А-клеток.

Результаты исследований

В сравнительном аспекте была изучена способность индуцировать гемадсорбцию г-ОП из гемадсорбирующего вирулентного эпизоотического штамма Катанга-78 и его культуральных вариантов: вирулентного с атипичной ("рыхлой") гемадсорбцией Катанга-105, авирулентных и негемадсорбирующих вариантов Катанга-149, Катанга-170, Катанга-190. Установлено, что г-ОП из негемадсорбирующих вариантов вируса АЧС в 2-4 раза более активны в способности индуцировать гемадсорбцию, чем - из гемадсорбирующих (табл. 1).

Таблица 1 - Гемадсорбирующая активность g-ОП из штаммов и вариантов вируса АЧС

Свойство г-ОП из негемадсорбирующих штаммов и вариантов вируса АЧС индуцировать гемадсорбцию побудило изучить ее серологическую типоспецифичность. В экспериментах использовали препараты из негемадсорбирующего авирулентного варианта Катанга-149, выделенного в лабораторных условиях из вирулентного гемадсорбирующего шт. Катанга-78, относящегося к 1 сероиммунотипу; негемадсорбирующего авирулентного шт. Мфуати-79, относящегося по данным иммунопробы на свиньях к 2 иммунотипу; негемадсорбирующего авирулентгого варианта Фнг, выделенного из вирулентного гемадсорбирующего шт. Ф-32, являющегося референс-штаммом 4 сероиммунотипа, а также активные в РЗГАд антисыворотки к референс-штаммам 1-4 серотипов с титрами 1:160-1:640. Эксперименты показали, что добавление гомологичных по сероиммунотипу вируса антисывороток снижает интенсивность гемадсорбции г-ОП, а в ряде случаев полностью задерживает в первой модификации или "снимает" во второй модификации гемадсорбцию. Данные, представленные в таблице, свидетельствуют, что реакция "снятия" гемадсорбции серотипоспецифична (табл. 2). африканский чума гемадсорбция вирус

Таблица 2 - Результаты РЗГАд с г-ОП из различных штаммов и вариантов вируса АЧС (модификация "снятия")

В большей степени это показательно со шт. Мфуати-79. Обращает на себя внимание активность в данной реакции антисыворотки 1 серотипа по отношению к г-ОП из варианта Фнг 4 серотипа и антисыворотки 4 серотипа по отношению к г-ОП из варианта Катанга-149 I серотипа. Вероятно, это связано с антигенным сходством штаммов этих серотипов. Из проведенных 23 экспериментов в 17 реакция задержки или "снятия" гемадсорбции была серотипоспецифична (74 %), в 4 сомнительна (17.4 %) и в двух - не серотипоспецифична (8.6 %).

Постановка реакции во второй модификации более экономична в отношении расходования антисывороток и более специфична. Последнее связано с тем, что до момента учета реакции при постановке в первой модификации происходит связывание активных в РЗГАд антител гомологичной антисыворотки, т.к. в ряде экспериментов наблюдали восстановление гемадсорбции, индуцируемой г-ОП, через 24-36 часов после ее "снятия" гомологичной антисывороткой.

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют, что модификация РЗГАд - реакция "снятия" гемадсорбции, индуцируемой г-ОП, может быть использована в научно-исследовательской работе при определении серотиповой принадлежности негемадсорбирующих изолятов вируса АЧС.

Список литературы

1. Антигенное различие изолятов вируса африканской чумы свиней в пределах одного серотипа по данным количественной радиоиммунопреципитации / Е.Г. Анохина, А.Д. Середа, Н.И. Митин, В.В. Макаров // Актуал. вопр. вет. вирусол. - Покров, 1995. - С. 138.

2. Балышев, В.М. Изучение гетеротиповых взаимодействий штаммов вируса АЧС ин витро и ин виво / В.М. Балышев, И.В Федорищев, М.В. Салина // Вирус. болезни с.-х. животных. - Владимир, 1995. - С. 230.

3. Середа, А.Д. Физико-химический полиморфизм вирусной популяции и дефектные интерферирующие частицы вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, Н.А. Власов, В.В. Макаров // Вестник РАСХН. - 1997.- № 5. - С.67-70.

4. Середа А.Д., Макаров В.В. Идентификация изолятоспецифического гликополипептида вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, В.В. Макаров // Ветеринария. - 1992. - № 1. - С. 22-24.

5. Сероиммунологическая классификация природных изолятов вируса африканской чумы свиней / И.Ф. Вишняков, Митин Н.И.; Петров Ю.И.; Черятников Л.Л.; Киселев А.В.; Бурлаков В.А.; Балышев В.М.; Федорищев И.В.; Моргунов Ю.П. // Актуал. вопр. вет. вирусол., Покров. - 1995. - С. 141-143.

6. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterization / Bastos ADS, Penrith M-L, Cruciиre C. // Arch. Virol. - 2003. - vol.148. - Р. 693 - 706.

Размещено на Allbest.ru