Фармако-токсикологические свойства и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Фармако-токсикологические свойства и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак

Ветеринарная фармакология с токсикологией

Зверев Артем Александрович



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди сезонных паразитарных болезней собак особое место занимает бабезиоз - специфическое трансмиссивное заболевание, вызываемое паразитированием в эритроцитах одноклеточных паразитов - Babesia canis. Возбудитель и продукты его жизнедеятельности являются первым патогенетическим фактором, оказывающим аллергическое воздействие на организм животного.

Клинически заболевание проявляется лихорадкой, бледностью слизистых оболочек, нарушением функций почек и печени, расстройством деятельности сердечно-сосудистой и дыхательной систем, что приводит к полиорганной недостаточности, заканчивающейся, как правило, гибелью животного.

Бабезиоз собак широко распространено во многих странах Европы, Азии, Африки и Америки.

Возбудитель бабезиоза собак - Ваbеsiа саnis, впервые был обнаружен в Италии Рiаnоm и Galli-Valerio в 1892 году, а в России В.Л. Якимовым и В.Л. Любинецким в 1909 г. (А.В. Князевский, 1956).

Переносчиками заболевания являются иксодовые клещи Dermacentor pictus, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus turanicus.

Химиотерапевтические препараты при бабезиозе собак стали применяться вскоре после установления этиологии и раскрытия сущности самого заболевания. С этой целью отечественными и зарубежными исследователями против B.canis испытано значительное количество лекарственных препаратов различного химического состава. (В.Л. Любинецкий, 1909; В.Л. Якимов, А.Д. Рыбкина, 1965; Б.В. Шумилов, 1971; L.S.Jacobson, 1996 и др.)

Однако большинство из апробированных средств оказалось малоэффективными или высокотоксичными. Лекарственных средств, обладающих длительным профилактическим действием, до настоящего времени не найдено.

Проанализировав мировой опыт лечения бабазиоза собак, Б.А. Тимофеев и И.Г. Карпенко (1977) рекомендовали для применения при бабезиозе плотоядных Азидин (Беренил, Верибен), Трипафлавин, Гемоспоридин, Диамидин, Акаприн, Пироплазмин.

Как сообщает ряд исследователей, Беренил и Азидин стерилизуют организм животного от возбудителя, т.е. обеспечивают полное исчезновение паразитов из крови через 48 часов после введения лекарственных средств, а также профилактируют заболевание при введении за 5-17 дней до заражения (Д.В. Князевский, 1956; А.Д. Рыбкина, 1965; Д.А. Страшнов, 1975; В.П. Лебедева, 1992; В.О. Новгородцева, 1999 и др.). По сведениям других авторов, введение названных препаратов не обеспечивает стерилизацию организм собак от B.canis (Б.В.Шумилов,1971).

За рубежом при кровепаразитарных болезнях животных с положительными результатами применяют препараты на основе имидокарба (Eureby J., Moreau U., Chauve et.al., 1980; Оgunkova A.B., Adeyanjn J.B., Aliu Y.O., 1981; Uilenberg G. et.al., 1981). Однако сведения об использовании имидокарба для терапии бабезиоза собак весьма малочисленны, а данных в отношение его профилактического действия практически нет.

Это и определило выбор темы, суть которой заключается в разработке нового лекарственного средства на основе имидокарба для лечения и профилактики бабезиоза собак.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии для лечения и профилактики бабезиоза собак нового лекарственного средства в форме раствора для инъекций на основе имидокарба.

В задачи исследований входило:

- обосновать состав лекарственного средства на основе имидокарба, разработать показатели качества и методы контроля; изучить стабильность Имидокарба 5% в процессе хранения;

- изучить острую и субхроническую токсичность, иммунотоксические, аллергезирующие, местно - раздражающие и эмбриотропные свойства лекарственного средства в опытах на лабораторных животных и собаках;

- исследовать фармакокинетику имидокарба в организме собак после применения Имидокарба 5%;

- определить лечебно-профилактическую дозу и схему применения Имидокарба 5% при бабезиозе собак;

- изучить терапевтическую эффективность Имидокарба 5% при спонтанном бабезиозе собак в период сезонных вспышек заболевания;

- изучить профилактические свойства Имидокарба 5% при экспериментальном бабезиозе щенков собак;

- разработать и представить для согласования и утверждения в установленном порядке проект инструкции по применению при бабезиозе собак лекарственного средства на основе имидокарба.

Научная новизна. Впервые разработано новое лекарственное средство на основе имидокарба дипропионата, обладающее высокой терапевтической эффективностью при бабезиозе собак и менее выраженной гепатонефротоксичностью, чем применяемые в ветеринарных клиниках противобабезиозные препараты. Определены показатели качества и методы контроля Имидокарба 5%, изучены его физико-химические, фармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическая эффективность при бабезиозе собак.

Практическая значимость работы. Для применения в клинической практике лечения бабезиоза собак предложено лекарственное средство на основе имидокарба дипропионата в форме раствора для инъекций под рабочим названием - Имидокарб 5%. Определены показатели качества лекарственного средства, разработаны методы их контроля, установлена оптимальная лечебно-профилактическая доза и схема применения лекарственного средства при бабезиозе собак.

На основании результатов исследований и обобщения полученных данных разработан проект инструкции по применению лекарственного средства на основе имидокарба (торговое название Фортикарб) при бабезиозе собак. (Утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минсельхоза РФ 22.05.2008 г).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на:

- заседаниях Ученого совета ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (г. Москва; 2004, 2005, 2006, 2007 гг.);

- научно-практической конференции: «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС, г. Москва, 2006.

Положения, выносимые на защиту:

- состав, показатели качества и методы контроля, результаты изучения стабильности в процессе хранения лекарственного средства в форме раствора для инъекций на основе имидокарба;

- характеристика фармако-токсикологических свойств Имидокарба 5% по результатам опытов на лабораторных животных и собаках;

- результаты изучения фармакокинетики имидокарба в плазме крови собак после применения Имидокарба 5%;

- результаты изучения лечебно-профилактической эффективности Имидокарба 5% при спонтанном и экспериментальном бабезиозе собак;

- практические предложения по стандартизации, контролю качества и применению Имидокарба 5% при бабезиозе собак.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 126 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования и обсуждение их результатов, выводы, практические предложения, список литературы.

Работа иллюстрирована 35 таблицами и 1 рисунком. Список использованной литературы включает 179 источников, в том числе 92 зарубежных. Приложение на 8 листах.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2003-2008 гг. в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов ФГУ «ВГНКИ», в Благотворительном Фонде Защиты животных «БИМ», на базе ветеринарных клиник города Москвы и Московской области

Материалом для проведения научно-исследовательских работ по указанной теме служил препарат на основе имидокарба, разработанный совместно с сотрудниками лаборатории качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных ФГУ «ВГНКИ».

Имидокарб 5% раствор для инъекций представляет собой стерильную прозрачную жидкость светло-желтого цвета, содержащую в 1 мл в качестве действующего вещества 50 мг имидокарба в виде дипропионата, а в качестве вспомогательных веществ - поливинилпирролидон, бензиловый спирт, пропионовую кислоту и воду для инъекций.

Для стандартизации и контроля качества Имидокарба 5%, а также определения гарантированного срока годности были использованы стандартные методы определения качества лекарственных средств, предъявляемые Государственной фармакопеей (Х1 издание, 1987г) к растворам для инъекций, включая внешний вид, окраску, прозрачность, рН, наличие механических включений, подлинность и содержание действующего вещества, основного вспомогательного компонента, стерильность и пирогенность. Для количественного определения действующего вещества препарата и его подлинности, а также количественного определения бензилового спирта был предложен метод с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Изучение стабильности препарата проводили в условиях естественного хранения препарата при комнатной температуре в течение 3 лет. Оценку качества Имидокарба 5% в процессе хранения проводили по всем установленным для предлагаемого препарата показателям качества.

Острую токсичность лекарственного средства изучали на 42 белых крысах обоего пола, массой 200-220 г. и 42 белых мышах-самцах массой 18-20 г. Крысам опытных групп препарат в форме 10% раствора имидокарба вводили в желудок при помощи иглы-зонда в дозах 500; 1000; 2000; 2500; 3000 и 4000 мг/кг (по действующему веществу - ДВ) дробно с интервалом 30 минут в 2-3 приема.

Мышам испытуемый препарат при разведении водой для инъекций вводили подкожно в дозах 25; 50; 100; 150; 175 и 200 мг/кг массы животного (по ДВ).

Животным контрольных групп вводили воду для инъекций соответственно перорально или подкожно в сравнимых объемах.

Каждую дозу препарата испытывали на 6 особях. Наблюдение за клиническим состоянием крыс и мышей проводили в течение 14 суток после введения препарата; при этом отмечали их общее состояние и поведение, отправление естественных функций, учитывали остроту течения токсикоза и время гибели. Токсикологические параметры рассчитывали графическим методом Миллера, Тейтнера (М.Л. Беленький, 1963; А.А. Ступников, 1975), степень опасности лекарственного средства оценивали согласно ГОСТ 12.1.007 -76.

Для оценки субхронической токсичности Имидокарба 5% использовали 60 мышей-самцов массой 18,9-23,1 г.

Препарат вводили подкожно в течение 15 суток в нативном виде и в разведении водой для инъекций (поочередно с одной и другой стороны туловища) по следующей схеме:

Таблица 1

Группа животных	Доза ДВ, мг/кг (часть LD50, установленной в остром опыте)	Количество животных в группе
I II III IV V VI контроль	55,5 (0,4) 22,2 (0,15) 11,1 (0,08) 5,55 (0,04) 2,22 (0,015) (вода для инъекций)	10 10 10 10 10 10

Контрольным животным подкожно вводили воду для инъекций в объеме 0,5 мл.

В течение опыта мышей взвешивали, оценивали поведение, учитывали время гибели. Павших животных подвергали патологоанатомическому вскрытию.

В конце опыта у декапитированных мышей отбирали пробы крови для определения морфологических и биохимических показателей. Взвешивали основные внутренние органы и рассчитывали массовые коэффициенты.

Морфологические показатели периферической крови определяли общепринятыми методами, биохимические - с помощью полуавтоматического анализатора «BioChem SA».

Эмбриотоксические и тератогенные свойства Имидокарба 5% изучали в опытах на 60 белых крысах-самках, с точно установленным сроком беременности, которых разделили на 6 групп по 10 животных в каждой. Препарат разводили водой для инъекций и вводили крысам внутримышечно с 1 по 6; с 7 по 14 и с 15 по 19 дни беременности в дозе 12 мг/кг массы животного (по ДВ).

Оценку эмбриотропных свойств препарата проводили согласно «Методическим указаниям по тестированию тератогенной активности химических веществ» (А.П.Дыбан с соавт., 1970) и «Методическим рекомендациям по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств» (1997).

Иммунотоксические свойства Имидокарба 5% изучали на мышах линии СВА массой 18-20 г. В каждой опытной группе использовали по 10 мышей. Препарат вводили внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного (по ДВ), растворителем служил 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

Влияние препарата на антителообразование определяли методом локального гемолиза в геле. Мышей иммунизировали внутрибрюшинно 2% взвесью эритроцитов барана (тимусзависимый антиген) в объеме 0,5 мл, затем внутримышечно вводили Имидокарб 5%. На 4-е сутки извлекали селезенку и вычисляли индекс стимуляции (ИС), как отношение числа АОК (антителообразующие клетки) в опыте к числу АОК в контроле (введение только ЭБ).

Титры агглютининов в сыворотке крови определяли на 7 день после иммунизации мышей ЭБ и введения препарата в микроварианте прямой реакции гемагглютинации (в 96-луночных плоскодонных планшетах). Супрессивный индекс (СИ) вычисляли как соотношение результатов в опытной и контрольной группах.

Оценка действия лекарственных средств на клеточное звено иммунного ответа предполагает использование модельных систем, дающих представление о функциональной активности лимфоцитов Т-ряда. К таким тестам относится реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и определение количества ауторозеткообразующих клеток (ауто-РОК). В качестве эритроцитарного маркера в этом тесте применяли 1,5%-ную взвесь аутологичных эритроцитов.

Сенсибилизирующие свойства Имидокарба 5% изучали на белобоких морских свинках-самцах массой 300-350 г (в каждом тесте использовали по 6 животных). Сенсибилизацию морских свинок проводили путем однократного внутрикожного введения препарата в объеме 0,05 мл (150 мкг) в ухо за 12 дней до тестирования. Контрольным животным вводили в том же объеме растворитель (0,9% раствор NaCl).

Для выявления сенсибилизации у морских свинок использовали конъюнктивальную, внутрикожную и эпикутанную пробы.

При конъюнктивальном тестировании сенсибилизированным и контрольным морским свинкам закапывали в правый глаз под веко каплю испытуемого препарата, а в левый глаз (контроль) вводили тем же способом растворитель. Реакцию учитывали через 15 минут (реакция немедленного типа) и через 24 часа (реакция замедленного типа). Оценку реакции проводили визуально под лупой при двукратном увеличении по балльной шкале: 0 - видимой реакции нет; 1 - легкое покраснение слезного протока; 2 - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; 3 - покраснение всей конъюнктивы и склеры.

При эпикутанном тестировании сенсибилизированным и контрольным животным на выстриженный участок боковой поверхности тела размером 2x2 Имидокарб 5% наносили ежедневно. Тестирование проводили после 10 и 20 аппликаций. Реакцию кожи оценивали через 15, 30 минут и через 24, 48, 72 часа в баллах по следующей шкале:

0 - видимой реакции нет; 1 -бледно-розовая эритема по всему участку или по его периферии; 2 - ярко-розовая эритема по всему участку или по его периферии; 3 - красная эритема по всему участку; 4 - инфильтрация и отек кожи; 5 - выраженная инфильтрация, очаговые изъязвления.

При внутрикожном тестировании подопытным и контрольным животным раствор изучаемого препарата вводили в объеме 0,1 мл внутрикожно, а растворитель в том же объеме на расстоянии 2 см.

Реакцию учитывали через 20-30 мин (немедленного типа), через 4-6 часов (немедленно-замедленного типа) и через 24-48 часов (замедленного типа) по следующим показателям: эритема, инфильтрат или отек, толщина кожной складки, некроз.

Кроме того, у декапитированных животных брали кровь и проводили непрямую реакцию дегрануляции тучных клеток и подсчет абсолютного количества эозинофилов в крови. Реакцию дегрануляции тучных клеток оценивали как отрицательную, если процент дегранулированных тучных клеток не превышал 10.

Переносимость и субхроническую токсичность Имидокарба 5% изучали в виварии клиники «Шанс» (Москва) на 8 беспородных, собаках обоего пола в возрасте от 4 до 6 лет.

Подопытных животных разделили на 2 группы по 4 головы в каждой. Препарат вводили собакам внутримышечно 1 раз в сутки, в течение 7 дней. Первой группе в дозе 8 мг/кг массы животного (двукратная терапевтическая); второй группе - в дозе 10 мг/кг массы животного (2,5-кратная терапевтическая). В процессе опыта учитывали клиническое состояние собак, болезненность в месте введения препарата, аппетит, отправление физиологических функций, определяли морфологические и биохимические показатели крови.

Клиническое и биохимическое исследование крови проводили на биохимическом и гематологическом анализаторах «HUMALYZER JUNIOR» и «IBX MICROS» (Германия) до введения препарата, на 4 и 8 сутки опыта.

Влияние лекарственного средства на функции печени оценивали по изменению активности гепатоспецифических ферментов: аланинаминотрасферазы (АЛТ), аспартатаминострасферазы (ACT), щелочной фосфатазы (ЩФ), гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТ), а также концентрации глюкозы в сыворотке крови; на функции почек - по изменению сывороточных концентраций мочевины и креатинина, а также активности амилазы.

Изучение фармакокинетики имидокарба проводили на 4 беспородных собаках массой 14-17 кг. Препарат животным вводили однократно, внутримышечно в дозе 4 мг/кг. Кровь брали из периферических вен через 15, 30, 45 минут и далее через 1, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 48, 72, 96 и 120 часов после введения.

Для определения имидокарба в плазме крови собак использовали: жидкостной хроматограф высокого давления Bischoff с УФ-детектором Lambda 1000. Принцип метода заключается в экстрагировании действующего вещества из проб плазмы крови соляной кислотой с метанолом, переэкстракции в диэтиловый эфир, выщелачивании, упаривании экстракта и хроматографировании на жидкостном хроматографе высокого давления с использованием обращеннофазовой колонки и компьютерной программы обработки данных Мультихром (версия 1.52).

Изучение профилактических свойств Имидокарба 5% при экспериментальном заражении щенков собак B canis проводили на 10 спленэктомированных беспородных щенках в возрасте 2-3,5 месяца, массой от 3,5 до 4,7 кг в ОПХ «Манихино» ФГУ «ВГНКИ». Животных разделили на 4 группы (две опытные и две контрольные) по 2 особи в опытных и по 3 в контрольных группах. За 15 и 30 суток до экспериментального заражения бабезиозом щенкам опытных групп ввели внутримышечно Имидокарб 5% в дозе 4 мг/кг массы животного. Двух щенков контрольной группы (по одному на каждый срок опыта) оставили для контрольного заражения, а на четырех оставшихся контрольных щенках (по два на каждый срок опыта) на 5 сутки ставили биопробу (вводили кровь от щенков опытной группы, после введения им Имидокарба 5%).

Заражение одного щенка контрольной группы и двух животных опытной группы на каждый срок исследования (15 и 30 день) проводили внутривенным введением крови, полученной от больных животных со степенью поражения эритроцитов 30 на 1000 и 57 на 1000 соответственно, в дозе 3 мл на животное.

Через 2 - 3 суток после каждого заражения делали мазки периферической крови из уха подопытных и контрольных животных для обнаружения бабезий. На 5 сутки после заражения у щенков опытной группы брали кровь для биопробы в количестве 3 мл, которую вводили животным контрольной группы. Далее на 3, 5, 10, 20 и 30 сутки после постановки биопробы проводили микроскопию мазков крови на предмет обнаружения бабезий.

Клинические испытания лечебно-профилактической эффективности Имидокарба 5% проводились с мая 2004 по октябрь 2008 года на базе ветеринарных клиник г. Москвы и Московской области.

Бабезиоз диагностировали путем микроскопических исследований мазков периферической крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

По результатам данных анамнеза и клиническому состоянию животных на момент обращения в клинику собак условно разделили на 3 группы, для каждой группы подобрали схему лечения.

1. Первая группа животных (299 голов - в начальной стадии болезни) без проявления специфической картины бабезиоза, на 1-2 день повышения температуры. После обнаружения в периферической крови паразитов животным вводили внутримышечно Имидокарб 5% в дозах 2 мг/кг (135 голов) и 4 мг/кг (164 головы) массы животного, а за 15 мин до применения Имидокарба 5% - Димедрол. Через сутки у собак повторно исследовали кровь и при наличии паразитов препарат вводили повторно в тех же дозах. Первые 2 - 3 дня лечения собакам вводили комплексные препараты витаминов и железа.

2. Вторая группа собак (343 головы с клиническими признаками бабезиоза)- время от начала заболевания до обращения в клинику составляло от 2 до 5 дней. Животным одновременно с постановкой диагноза проводили симптоматическую терапию. После подтверждения диагноза в лаборатории Имидокарб 5% вводили собакам внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного. При обнаружении бабезий в мазках крови препарат применяли повторно в той же дозе. Дальнейшее симптоматическое лечение проводили в зависимости от клинического состояния животных.

3. Третья группа собак (99 голов с тяжелой формой полиорганной недостаточности) - время от начала заболевания до обращения в клинику составляло 5-7 дней. Для выведения животного из интоксикационного шока немедленно начинали проведение комплексной интенсивной терапии, включающей применение инфузионных растворов, кортикостероидов, анальгетиков, спазмолитиков, диуретиков, аналептиков и гормональных препаратов.

Имидокарб 5% применяли только после восстановления у собак стойкого положительного диуреза, внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного.

Дальнейшая терапия животных после переболевания бабезиозом зависела от клинического состояния, вида осложнений, и включала применение витаминных препаратов, спазмолитиков, стимуляторов эритропоэза, гепатопротекторов и диуретиков.

С целью профилактики бабезиоза на базе БВЗЖ «Бим» в июне 2006 г. провели испытание Имидокарба 5% на 30 собаках, которых ежедневно выгуливали в парковой зоне (месте обитания переносчиков заболевания - иксодовых клещей). Препарат вводили внутримышечно в дозе 4 мг/кг (по ДВ). Наблюдение за животными вели ежедневно в течение 30 суток после применения препарата.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для стандартизациии и контроля качества Имидокарба 5% были определены стандартные показатели, предъявляемые к инъекционным растворам (Государственная фармакопея Х1, 1987).

Для идентификации и количественного определения имидокарба в Имидокарбе 5% методом ВЭЖХ были подобраны следующие оптимальные условия хроматографирования: подвижная фаза - смесь 0,02 М раствора калия фосфорнокислого однозамещенного и ацетонитрил в соотношении 180/850; температура термостатирования колонки - комнатная; скорость протекания элюента - 0,6 мл/мин; длина УФ (ультрофиолетовой) - волны анализа - 240нм. Установлено, что при данных условиях время выхода пика имидокарба составляет 7,5 минут. Подлинность имидокарба подтверждалась по соответствию времени выхода пиков стандартного образца.

Для определения бензилового спирта в препарате были подобраны следующие оптимальные условия хроматографирования: подвижная фаза - смесь 0,02 М раствора калия фосфорнокислого однозамещенного и метанола в соотношении 1/1; температура термостатирования колонки - комнатная; скорость протекания элюента - 0,8 мл/мин; длина УФ - волны анализа - 258 нм. Установлено, что при данных условиях время выхода пика бензилового спирта составляет 5 - 7 минут.

Качественные и количественные характеристики и нормы Имидокарба 5% представлены в таблице 2.

Изучение стабильности Имидокарба 5% при естественном хранении в течение 3 лет изменений показателей качества лекарственного средства не происходило. Продуктов распада имидокарба в период установленного срока годности методом ВЭЖХ не обнаружено.

Таим образом, при соблюдении регламентированных условий хранения гарантированный срок годности Имидокарба 5%, в течение которого не происходит изменений заявленных показателей качества лекарственного средства, составляет 3 года со дня изготовления.

Таблица 2

Показатели качества и стабильность Имидокарба 5% при хранении (комнатная температура, серия 01)

Наименование показателя	Норма	Исходный	6 мес.	12 мес.	18 мес.	24 мес.	30 мес.	36 мес.
Внешний вид	Прозрачный раствор светло-желтого цвета	Прозрачный раствор светло-желтого цвета
Прозрачность раствора	Должен выдерживать сравнение с эталоном № I	Выдерживает сравнение с эталоном № I
Окраска	Не должна по интенсивности превышать эталон № 4б	Не превышает по интенсивности эталон № 4б
Наличие механических включений	Должно соответствовать требованиям инструкции	Не обнаружены
Подлинность имидокарба дипропионата	Время выхода пика образца должно соответствовать времени выхода пика стандарта	Время выхода пика образца соответствует времени выхода пика стандарта
Подлинность бензилового спирта	Время выхода пика образца должно соответствовать времени выхода пика стандарта	Время выхода пика образца соответствует времени выхода пика стандарта
рН	4,5-5,5	4,79	4,88	4,89	4,87	4,88	4,86	4,87
Содержание имидокарба	4,5-5,5 г/100 мл	4,88	4,61	4,73	4,85	4,57	4,71	4,76
Содержание бензилового спирта	0,9-1,1%	0,97	0,99	0,95	0,98	0,94	0,99	0,93
Пирогенность	Должен быть апирогенным	Апирогенный
Стерильность	Должен быть стерильным	Стерильный

Острая токсичность Имидокарба при введении в желудок белым крысам и подкожном введении белым мышам.

Введение препарата внутрижелудочно в дозах 500 и 1000 мг/кг гибели крыс не вызывало. Повышение дозы до 2000-2500 мг/кг приводило через 20-30 минут к возникновению у части животных признаков острого отравления, проявляющихся атаксией, клоническими судорогами, отсутствием двигательной активности и резко выраженным угнетением, заканчивающимся гибелью части подопытных животных в течение 12-15 часов. У выживших животных клиническое состояние приходило в норму через 20-24 часа. После введения препарата в дозах 3000-4000 мг/кг симптомы угнетения развивались в течение 7- 10 минут и быстро нарастали. Препарат в дозе 4000 мг/кг вызывал гибель всех подопытных крыс.

Результаты исследования острой токсичности Имидокарба 5% при подкожном введении белым мышам показали, что препарат в дозах 25 мг/кг и 50 мг/кг не вызывал клинических признаков отравления, все животные этих групп остались живыми. При введении препарата в дозах от 100 до 200 мг/кг у белых мышей отмечали клинические признаки острого отравления, приводившие к гибели части подопытных животных. Картина интоксикации после введения Имидокарба 5% характеризовалась угнетением, нарушением двигательной активности, при этом выраженность указанных симптомов зависела от величины введенной дозы, гибель мышей наступала в течение первых суток после введения препарата.

Токсикологические параметры токсичности препарата, рассчитанные графическим методом Миллера, Тейтнера (1941), приведены в таблице 3.

Таблица 3

Параметры острой токсичности Имидокарба 5% для лабораторных животных

Вид животного/ способ введения	Параметры токсичности, мг/кг (по ДВ)
	LD0	LD16	LD50	LD84	LD100
Мыши/ подкожно	56,9	70,0	139,0	177,5	257,1
Крысы/ внутри-желудочно	1000	1600	2500	3400	4000

бабезиоз собака имидокарб



Согласно общепринятой гигиенической классификации Имидокарб 5% по степени воздействия на организм при однократном введении относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).

В опытах по изучению субхронической токсичности на белых мышах при ежедневном подкожном введении в течение 15 суток Имидокарба 5% в дозе 55,5 мг/кг/день на 3 сутки пало 70% мышей, а в течение 5 суток -- пали все животные опытной группы.

При введении препарата в дозе 22,2 мг/кг/день на 5 сутки пало 30% подопытных мышей.

В процессе эксперимента было отмечено явное замедление динамики прироста массы тела у мышей, получавших препарат в дозах 22,2 и 11,1 мг/кг/день. В тоже время показатель относительного изменения массы тела мало отличался от контрольного значения у мышей, получавших препарат в дозе 5,55 мг/кг/день, и он был, сравним с контролем и мышами, которым вводили Имидокарб в самой низкой дозе 2,22 мг/кг.

При введении Имидокарба 5% в дозах 22,2 и 11,1 мг/кг/день достоверному изменению подверглись значения массовых коэффициентов ряда органов. Имело место статистически достоверное повышение относительной массы печени и селезенки: соответственно для доз 22,2 и 11,1 мг/кг/день 61,902,78; 62,363,15 и 20,542,37; 13,601,33 против 50,990,63; 9,550,76 в контроле.

Введение препарата в дозах 5,55 и 2,22 мг/кг/день не привело к изменению значений массовых коэффициентов всех исследованных органов.

Гематологическими исследованиями показано достоверное снижение количества эритроцитов и лейкоцитов, а также уровня гемоглобина при введении имидокарба животным в дозах 22,2; 11,1 и 5,55 мг/кг/день. Количество эритроцитов и содержание гемоглобина у мышей при введении препарата в указанных дозах составили соответственно 3,860,10 • 10⁹/л; 3,830,15 • 10⁹/л; 3,96±0,14 • 10⁹/л и 104,002,65 г/л; 103,405,61 г/л; 127,20±5,19 г/л против 4,530,18 • 10⁹/л и 127,202,60 г/л в контроле.

Препарат в дозе 2,22 мг/кг/день не вызвал у мышей достоверных изменений тестируемых показателей периферической крови.

Изменений лейкоцитарной формулы крови белых мышей при введении препарата во всех тестируемых дозах не наблюдалось.

Исследованиями биохимических показателей установлено, что препарат в дозе 22,2 мг/кг/день вызывал достоверное повышение активности АСТ до 195,3010,36 против 155,307,61 Е/л в контроле, а при введении в дозе 11,1 мг/кг/день отмечалась тенденция к повышению активности фермента по сравнению с контролем, но выявленное изменение не носило статистически значимого характера.

Более низкие дозы лекарственного средства - 5,55 и 2,22 мг/кг/день не оказали влияния на активность двух указанных ферментов печени.

Из приведенных данных следует, что препарат в дозах 22,2 и 11,1 мг/кг/день не вызывал нарушений функций печени, повышая активность печеночных трансаминаз.

Результаты изучения иммунотоксическиех свойств Имидокарба 5% показали, что введение препарата мышам в терапевтической дозе практически не повлияло на процесс антителообразования в селезенке: число АОК (зон гемолиза) в пробе опытных животных составило 26,6, а в контроле 28,4, т.е. наблюдалось незначительное снижение индекса стимуляции до 0,93. Препарат не вызывал подавление гуморального иммунного ответа: на 7-й день после введения установлено, что титры агглютининов в сыворотке крови мышей находились на уровне 4,68±0,29 log2. У контрольных животных этот показатель составил 4,57+0,41 log2 и ИС был равен 1,02.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что внутримышечное введение Имидокарба 5% не сопровождается угнетением иммунного ответа на тимусзависимый антиген (ЭБ). По-видимому, в данном случае отсутствует подавление Т-супрессорами активности В-лимфоцитов в отношении Т-зависимого антигена.

Препарат не вызывал угнетения клеточного иммунитета у подопытных животных и ИВ составил 15,72 +3,15%, что достоверно не отличалось от показателей контроля - 16,58 +2,32%.

Опытами установлено, что Имидокарб 5% в терапевтической дозе вызывает индукцию ГЗТ у мышей, т.е. местную воспалительную реакцию, аналогичную введению ЭБ. Это свидетельсвует о том, что препарат не угнетает продукцию лимфокинов - медиаторов клеточного иммунитета.

Интенсивность синтеза и секреции лимфоцитами факторов клеточного иммунитета соответствует степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ).

При изучении динамики ауто-РОК у мышей было установлено (таблица 4), что относительное и абсолютное количество ауто-РОК, зарегистрированное у животных опытной группы, было таким же, как и у интактных (контрольных) животных, которым препарат не вводили. Значения показателей соответственно колебались в пределах 1,2±0,19 - 1,6±0,17% (49,2±3,8 - 68,6±5,8 кл/мкл) и 1,2±0,09 - 1,5±0,15% (39,8±2,9 - 54,1 ±5,3 кл/мкл).

Таблица 4

Динамика ауто-РОК в периферической крови мышей (Р>0,05)

Препарат	Фон	5-й день	10-й день	15-й день	20-й день
Имидокарб 5%	*1,4+0,11 **57,2+5,0	1,4+0,32 59,6+7,4	1,2+0,19 49,2+3,8	1,6+0,17 68,5 +5,8	1,5+0,35 56,2+6,4
Контроль	1,3+0,12 44,8+5,7	1,2+0,09 39,8+2,9	1,4+0,27 45,4+7,5	1,5+0,15 54,1+5,3	1,4+0,09 41,9+3,7

* * относительное количество (%)

* абсолютное количество (клеток в 1 мкл крови)

Таким образом, экспериментально установлено, что Имидокарб 5% в терапевтической дозе - 4 мг/кг массы животного (по ДВ) не проявляет иммунотоксической активности в отношении гуморального и клеточного иммунного ответа.

Изучение аллергизирующих свойств показало, что конъюнктивальные пробы у подопытных морских свинок на 12-й день после внутрикожной сенсибилизации Имидокарбом 5% не отличались от аналогичных показателей контрольных животных. Не было отмечено каких-либо изменений сосудистого рисунка конъюнктивы глаз через 15 минут и 24 часа.

При внутрикожном тестировании реакции на месте введения препарата как у сенсибилизированных, так и у контрольных морских свинок не было отмечено.

При исследовании сыворотки крови сенсибилизированных и контрольных морских свинок в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток установлено, что процент дегранулированных тучных клеток у подопытных животных находился в пределах 5,06+0,34 - 6,03+0,25 %, у контрольных - 4,96+0,38 5,86+0,71 %, что соответствует отрицательной оценке теста.

Результаты проведенных исследований показали, что внутримышечное введение препарата в терапевтической дозе - 4 мг/кг не приводит к сенсибилизации организма животных.

Исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств Имидокарба 5% в опытах на крысах показало, что внутримышечное введение Имидокарба 5% в дозе 12 мг/кг в критические сроки беременности не отразилось отрицательно на общем состоянии и поведении крыс-самок. Животные были подвижны, активны, адекватно реагировали на внешние раздражители.

Общая эмбриональная смертность плодов при воздействии препарата на 1-6; 7-14 и 15-19 дни эмбриогенеза соответственно составила 10,00±2,72 против 10,02±2,56% в контроле; 8,76±2,17 против 7,72±2,15% в контроле и 6,10±2,47 против 7,42±2,78% в контроле. Не отмечали достоверных различий в гибели плодов в пред- и постимплантационный период.

При сравнении массы и размеров плодов было установлено, что указанные показатели достоверно не отличались от контрольных значений, что дает основание заключить об отсутствии у Имидокарба 5% эмбриотоксических свойств.

Результаты исследования эмбрионов на наличие внешних и внутренних аномалий развития показали, что тератогенного эффекта препарат не оказал.

Таким образом, внутримышечное введение Имидокарба 5% в дозе 12 мг/кг на 1-6; 7-14 и 15-19 дни беременности крысам-самкам не приводит к повышенной гибели плодов, снижению массы и размеров эмбрионов; не индуцирует развитие внешних и внутренних аномалий.

Анализ полученных результатов позволяет заключить, что препарат в трехкратной терапевтической дозе не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия при введении крысам в критические сроки эмбриогенеза.

Изучение переносимости и субхронической токсичности Имидокарба 5% на собаках при однократном 7-кратном внутримышечном введении в дозах 8,0 и 10,0 мг/кг не вызывало видимых клинических изменений в организме. Животные были активны, охотно поедали корм, болезненности в месте инъекции отмечено не было.

Основные клинические (эритроциты, гемоглобин, гематокрит, лейкоциты, тромбоциты, лейкограмма) и биохимические (мочевина, креатинан, амилаза, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфотаза, ГГТ, альбумин, глюкоза) показатели крови собак обеих групп на 4 и 8 сутки введения и через сутки после отмены препарата находились в пределах физиологической нормы и достоверно (Р > 0,05) не отличались от фоновых показателей.

Лейкограмма животных после 7-дневного введения Имидокарба 5% достоверно (р>0,05) не отличалась от лейкограммы крови собак до введения препарата.

Таким образом, результаты изучения токсичности Имидокарба 5% показало, что его одно- и семикратное применение в дозах, превышающих терапевтическую в 2 и 2,5 раза, хорошо переносится животными и не вызывает клинических и биохимических изменений в крови животных.

Результаты изучения фармакокинетики имидокарба в организме собак свидетельствуют, о том, что препарат быстро всасывается из места инъекции и уже через 15 минут после введения имидокарб обнаруживается в крови в высоких концентрациях (0,718 мкг/мл), достигая максимума (1,224 мкг/мл) через 1 час. К 6 часу концентрация имидокарба в крови снижалась до 0,108-0,186 мкг/мл и сохранялась на этом уровне в течение суток. В последующие 4 суток содержание имидокарба сохранялось на минимальном уровне (таблица 5).

С целью изучения профилактической эффективности Имидокарба 5% опыты проведены на спленэктомированных щенках собак, экспериментально зараженных B. Сanis.

Содержание имидокарба в плазме крови собак после однократного внутримышечного введения Имидокарба 5%

Таблица 5

Сроки ис-		Концентрация имидокарба, мкг/мл
следования	1	2	3	4	Среднее
15 мин	0,849	0,948	0,517	0,560	0,718+0,21
30 мин	0,794	1,145	0,791	0,995	0,931+0,17
45 мин	0,623	1,332	1,020	0,861	0,959+0,29
1 ч	0,876	1,361	1,045	1,613	1,224+0,33
3 ч	0,506	0,341	0,387	0,304	0,384+0,09
6 ч	0,106	0,184	0,120	0,158	0,142+0,04
9 ч	0,204	0,122	0,088	0,198	0,153+0,06
12 ч	0,156	0,104	0,188	0,237	0,171+0,06
15 ч	0,216	0,182	0,194	0,154	0,186+0,03
18 ч	0,076	О	0,226	0,132	0,108+0,09
21 ч	0,244	0,091	0,058	0,070	0,116+0,08
24 ч	О	0,068	0,086	0,138	0,073+0,05
48 ч	0,072	О	О	О	0,018+0,01
72 ч	0	О	0	0,062	0,015+0,01
96 ч	О	0,061	О	О	0,015+0,01
120 ч	0,060	О	О	О	0,015+0,01

Первое заражение одного щенка контрольной группы и двух животных 1-ой опытной группы проводили на 15 сутки после введения Имидокарба. На третьи сутки после заражения у щенка контрольной группы отмечалось повышение температуры до 39,8⁰ С, вялость, отказ от корма, но жажда при этом была сохранена. При микроскопии мазков периферической крови паразитемия (поражение эритроцитов) составляла 9 на 1000.

У двух подопытных животных на 3 и 5 сутки после заражения паразитов в крови не обнаружили. Клиническое состояние щенков находилось в пределах физиологической нормы.

На пятые сутки после заражения у этих двух подопытных животных была взята кровь и введена внутривенно двум незараженным животным 1-ой контрольной группы по 3 мл/животное (биопроба).

На 3, 5, 10, 20 и 30 сутки после биопробы в мазках крови щенков контрольной группы бабезий не обнаружили. Температура тела животных находилась в пределах физиологической нормы, отклонений в клиническом состоянии не отмечалось. У одного щенка контрольной группы (до заражения имидокарб не вводили) с нарастанием паразитемии развивались клинические признаки заболевания, в целях предотвращения гибели животного провели курс интенсивной терапии с внутримышечным введением Имидокарба 5% в дозе 4 мг/кг массы.

Заражение контрольного щенка и двух животных 2-ой опытной группы проводили на 30 день после введения Имидокарба 5%. У щенка контрольной группы первые бабезии в мазках периферической крови были обнаружены на вторые сутки, температура тела колебалась в пределах 40⁰С - 40,3⁰С. В период нарастания паразитемии у животного отмечали сильно выраженное угнетение, отказ от корма. На 3 сутки поражение эритроцитов составляло 16 на 1000.

У щенков 2-ой опытной группы отклонений в физиологическом состоянии не выявлено, при микроскопии мазков периферической крови на 3 и 5 день после заражения бабезий не обнаружено.

На 5 сутки у этих щенков были взяты пробы крови, которую ввели по 3 мл двум незараженным щенкам 2 контрольной группы. На 3, 5, 10, 20 и 30 сутки при микроскопии мазков кровепаразитов обнаружено не было.

У одного щенка контрольной группы, которому перед заражением имидокарб не вводили, на 4 сутки отмечалось крайне тяжелое клиническое состояние, с выраженными признаками бабезиоза. Для предотвращения гибели животному ввели внутримышечно Имидокарб 5% в дозе 4 мг/кг и параллельно провели комплексную симптоматическую терапию.

Полученные результаты исследований показали, что Имидокарб 5% при однократном внутримышечном введении собакам в дозе 4 мг/кг за 30 суток до заражения профилактирует бабезиоз и стерилизует организм животного от кровепаразита Babesia canis.

Клинические испытания Имидокарба 5% при бабезиозе проведены в 2004 - 2005 г.г. на базе ветеринарной клиники «Бэмби» (г. Москва) на 237 собаках разных пород и возраста. В качестве препарата сравнения использовали широко применяемый в клинической практике Верибен (ДВ - диазомино-дибензамидина диацетурат), производства фирмы «Сева» (Франция).

С лечебной целью Имидокарб 5% вводили собакам однократно внутримышечно в дозах 2 и 4 мг/кг массы животного, Верибен - согласно наставлению по применению в дозе 7,8 мг/кг массы животного.

Собак, проходивших лечение Имидокарбом, условно делили на три группы: 1 группа - начальная стадия заболевания (79 голов), 2 группа - заболевание средней тяжести с клиническими признаками бабезиоза (91 голова) и 3 группа - тяжелая форма заболевания (67 голов). Животным 1 группы препарат применяли в дозе 2 мг/кг, животным 2 и 3 групп - в дозе 4 мг/кг массы животного. В результате испытания было установлено, что эффективность лечения собак Имидокарбом 5% по группам соответственно составила 100, 95,6 и 92,5%, а эффективность лечения Верибеном - 87,5%.

В ветеринарной клинике «СМАВЗ» (г. Москва) в период с апреля 2004 по октябрь 2005 года клинические испытания провели на 367 больных бабезиозом собаках. Животных, которым в качестве противобабезиозного средства применяли Имидокарб 5% (273 головы) условно делили на три группы: 1 группа - начальная стадия заболевания (164 собаки), 2 группа - заболевание средней тяжести (77 собак) и 3 группа - тяжелая форма течения болезни (32 собаки). Имидокарб 5% применяли однократно в дозе 4 мг/кг массы животного, Верибен применяли на 94 собаках на разных стадиях заболевания согласно наставлению по применению. Испытания показали, что терапевтическая эффективность Имидокарба 5% была выше, чем эффективность Верибена, и составила в 1 опытной группе - 100%, во 2 опытной группе - 96,1% и в 3 опытной группе - 93,7%. Эффективность Верибена составила 87,2%.

При наблюдении за животными после применения Имидокарба 5% в дозе 4 мг/кг массы гепатонефротоксический эффект отсутствовал, что благоприятно влияло на процесс выздоровления животных и сокращало курс лечения. При применении Верибена у 53 собак наблюдался гепатонефротоксический синдром.

На базе Благотворительного Фонда Защиты животных «Бим» в 2004-2006 гг. провели испытания Имидокарба 5% и Верибена на 279 собаках больных бабезиозом.

Животных, которым в качестве противобабезиозного средства применяли Имидокарб 5% (227 голов), условно делили на 2 группы: 1 группа - начальная стадия заболевания (52 собаки), 2 группа - заболевание средней тяжести (175 собак). Животных относящихся к 3 группе - с тяжелой формой течения болезни не было. Имидокарб 5% применяли однократно в первой группе в дозе 2 мг/кг, во второй группе в дозе 4 мг/кг массы животного, Верибен применяли в 52 случаях на разных стадиях заболевания согласно наставлению по применению.

Испытания показали, что терапевтическая эффективность Имидокарба 5% в первой группе состовляла 100%, во второй группе - 95,4%. Терапевтическая эффективность Верибена составила 88,4%.

Таким образом, в результате проведенных клинических испытаний было установлено, что терапевтическая эффективность Имидокарба 5% при бабезиозе собак в зависимости от тяжести заболевания составляет 92-100% и превышает терапевтическую эффективность препарата - сравнения Верибена.

Профилактическую эффективность Имидокарба 5% испытывали в период с 1 мая по 15 июня 2006 года на 30 животных, которых ежедневно выводили на прогулки в парковую зону (места обитания иксодовых клещей - переносчиков кровепаразитарных болезней). У 4 собак были выявлены клинические признаки бабезиоза и в мазках крови обнаружены бабезии. Паразитемия у собак соответственно составила: 17 на 1000; 3 на 1000; 11 на 1000 и 41 на 1000 эритроцитов. После применения Имидокарба в дозе 2 мг/кг и препаратов симптоматической терапии все животные выздоровели.

В целях профилактики заболевания бабезиозом 26 собакам, которых выводили на прогулку в ту же парковую зону, препарат ввели внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного. При наблюдении за животными в течение месяца признаков заболевания бабезиоза зарегистрировано не было.

Обобщенные результаты клинических испытаний терапевтической и профилактической эффективности Имидокарба 5% представлены в таблице 6.

Полученные результаты исследований обработаны статистически, достоверность различий оценивали по Стьюденту.



Таблица 6

Результаты клинических испытаний терапевтической эффективности Имидокарба 5% и Верибена

Группы животных	Место испытаний	Количество животных в опыте	Препарат, доза мг/кг ДВ	Кратность введения по группе	Количество выздоровевших животных/ %	Количество павших животных/%	Срок выздоровления дни
Без клинических признаков бабезиоза	Приют Бим	52	Имидокарб 2,0	1,02	56/100	нет	3 - 5
	Клиника СМАВЗ	164 94	Имидокарб 4,0 Верибен 7,8	1,0 1,5	164/100 94/100	Нет нет	5 - 6 5 - 7
	Клиника Бемби	79	Имидокарб 2,0	1,24	79/100	нет	3 - 4
С клиническими признаками бабезиоза	Приют Бим	175 52	Имидокарб 4,0 Верибен 7,8	1,05 1,66	167/95,4 46/88,4	8 6	5 - 7 8 - 10
	Клиника Бемби	91 56	Имидокарб 4,0 Верибен 7,8	1,09 1,66	87/95,6 49/87,5	4 7	5 - 7 8 - 11
	Клиника СМАВЗ	77	Имидокарб 4,0	1,08	72/93,5	5	6 - 9
С тяжелой полиор-ганной недоста-точностью	Клиника СМАВЗ	32	Имидокарб 4,0	1,06	28/87,5	4	6 - 10
	Клиника Бемби	67	Имидокарб 4,0	1,12	62/92,5	5	6 - 12



ВЫВОДЫ

1. Разработан новый лекарственный препарат на основе имидокарба для лечения и профилактики бабезиоза собак, определены показатели качества и методы их контроля. Экспериментально обоснованный срок годности препарата при хранении составляет 3 года.

2. Имидокарб 5% по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности): LD₅₀ при введение белым крысам в желудок составляет 2500 мг/кг, при подкожном введение белым мышам - 139 мг/кг животного (по ДВ).

3. В субхроническом эксперименте на белых мышах при ежедневном в течение 15 дней подкожном введении имидокарба установлено, что дозы 0,4 и 0,15 LD₅₀ являются токсическими; 0,04 LD₅₀ - пороговой, а 0,015 LD₅₀ - недействующей.

4. Имидокарб 5% в дозе 12 мг/кг массы животного (3-кратная терапевтической доза для собак) не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия при ежедневном введении беременным крысам в критические периоды эмбриогенеза.

5. Имидокарб 5% в терапевтической дозе не проявляет иммунотоксической активности в отношение гуморального и клеточного иммунного ответа, не приводит к сенсибилизации организма животных.

6. Имидокарб 5% при однократном и 7-кратном парентеральном введении собакам в превышающей 2,5 раза терапевтическую дозу, хорошо переносится животными и не вызывает изменений в клиническом состоянии, гематологических и биохимических показателях.

7. Имидокарб в разовой дозе 4 мг/кг массы животного при экспериментальном заражении щенков собак бабезиозом оказывает выраженный профилактический эффект в течение 30 суток.

8. Клиническими испытаниями на собаках, спонтанно зараженных бабезиозом, установлено, что Имидокарб 5% при однократном внутримышечном введении в дозе 4 мг/кг массы животного (по ДВ) обеспечивает 93-100% терапевтическую эффективность и не оказывает гепатонефротоксических эффектов.

Практические предложения

1. В результате проведенных исследований Разработано, изучено и предложено для применения в клинической практике лечения и профилактики бабезиоза собак лекарственное средство в форме 5% раствора для инъекций на основе имидокарба под торговым названием Фортикарб.

2. Определены показатели качества, методы их контроля, гарантированный срок годности лекарственного средства на основе имидокарба и разработана Инструкция по его применению для лечения и профилактики бабезиоза собак (Утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минсельхоза РФ 22.05.2008 г., регистрационный номер: ПВИ 2-3.8/02419).



СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зверев А.А. Острая токсичность 5%-ной инъекционной формы Фортикарба // Материалы докладов научной конференции РАСХН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва,2006. - № 7. - С. 156-157.

2. Зверев А.А., Русаков С.В. Изучение фармакокинетики 5%-ной инъекционной формы Фортикарба на собаках // Материалы докладов научной конференции РАСХН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва,2006. - № 7. - С. 157-159.

3. Зверев А.А. Применение лекарственного средства Фортикарб в комплексном лечении собак, больных бабезиозом // Ветеринарная практика. - 2007. - № 1. - С. 33 - 36.

4. Зверев А.А. Изучение фармакокинетики имидокарба в организме собак// Ветеринарная Патология. - М., 2008 - № 3. - С. 112-113.

Список литературы

1. Абрамов И.В., Дьяконов Л.П. Современные данные по систематике пироплазмид // Арахнозы и протозойные болезни е.- х. животных: Науч. тр. / ВАСХНИЛ М.:Колос, 1977.-С.87-96.

2. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е., Ятусевич А.И., Пашкин П.И., Василевич Ф.И. Паразитология и инвазионные болезни животных. // М. 1998. С. 744.

3. Аскеров А. А., Годжаев Э.К. Влияние естественной резистентности на течение пироплазмидозов. / Доклад 5 Всесоюзный съезд протозоологов. Витебск, 1992. -М 4 - С. 21 - 22.

4. Балагула Т.В. Автореф. дис. канд. вет. наук/ МГАВМиБ им. К.И. Скрябина 2000г.- С. 24.

5. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта/ Ленинград: Госмедиздат, 1963. С. 43-45.

6. Белозеров В. Н., Богданов В. Е., Квитко Н. В. Сезонные изменения температурных реакций насосавшихея самок клещей Ixodes ricinus L. (Ixodidae)./ Вестник Ленинградского университета. 1966. - №3. С. 37 - 44.

7. Белов А.Д., Данилов Е.П., Дукур И.И. Болезни собак: справочник./Москва; Агропромиздат, 1990. 320 с.

8. Бойко В.Д. Болезни плотоядных. / Справочник ветврача, 1990. -С. 143.

9. Бурмистров Е.Н. Шанс био: лабораторная диагностика. // М. 2006. С. 32-41.

10. Вершинина Т. А. Эпидемиологически значимые виды иксодовых клещей в Западной Сибири. / / Материалы 2 семинара -конференции Обь Иртыш. / Энц. вып. №1. - Иркутск. - 1970. - С. 72 -76.

11. Вечеркин С.С. Пироплазмидозы КРС в Киргизии и меры борьбы с ними: Автореф. дис. докт. биол. наук/ ВАСХНИЛ. М. 1971. С. 35.

12. Воробьев В.В. Эпизоотология и некоторые вопросы профилактики бабезиоза КРС в Ленинградской области: Автореферат диссертации доктора биологических наук ЛВИ. Ленинград. 1970. - С. 15.

...