Размещено на http://www.allbest.ru/

[Введите текст]

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий

Колоскова Элеонора Леонидовна

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Москва - 2007

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук

Научные руководители:

- доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный

деятель науки Российской Федерации Овдиенко Николай Павлович

- доктор ветеринарных наук Альбертян Мкртич Погосович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Стрельников Алексей Павлович (МГАВМ и Б)

кандидат ветеринарных наук

Барабанов Иван Иванович (ВИЭВ)

Ведущая организация - ФАО ГОУ ВПО Московский государственный университет прикладной биотехнологии

Защита состоится « 30» мая 2007 г. в 14 ⁰⁰ часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, корп. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ

Автореферат разослан «26» апреля 2007г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

профессор Н.П.Овдиенко

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Задачи, стоящие в области ликвидации туберкулеза человека и животных, зависят от полноты учета всех возможных источников возбудителей туберкулеза и тесно связаны с видами микобактерий, патогенетическая роль которых привлекает все большее внимание медицинских и ветеринарных исследователей (Я.А.Благодарный, 1980; К.А.Туркебаева, Я.А.Благодарный, 1981; Н.П.Овдиенко с соавт., 1990; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005, и др.).

После открытия возбудителя туберкулеза (Р.Кох, 1882) и установления антропозоонозной природы заболевания встал вопрос о взаимоотношении между восприимчивыми видами животных и определенными видами микобактерий.

Заражение людей и животных обычно происходит свойственным для них видами возбудителя туберкулеза, но возможна и межвидовая миграция микобактерий (J.Sigurdson, 1945; В.Devulder, 1966; А.И.Каграманов, 1967; Я.А.Благодарный, 1972; Д.Д.Новак, 1977; В.Е.Щуревский, 1980, и др.).

Наряду с совершенствованием мер по ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных, возрастает роль различных видов нетуберкулезных микобактерий, и вызываемых ими микобактериозов, которые нередко принимают за туберкулезную инфекцию (Stoll, 1972). Это объясняют тем, что при определенных условиях нетуберкулезные микобактерии могут проявлять патогенные свойства (C.P.Xalabarder, 1961; О.В.Мартма, 1982; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005, и др.). Установить этиологическую значимость нетуберкулезных микобактерий чрезвычайно сложно. Дискутабельна причастность их к патологическому процессу.

Научными исследованиями доказано клинико-анатомическое многообразие проявления туберкулеза и микобактериозов у людей, вызванные разными видами микобактерий (К.М.Маскеев, 1972; Е.П. Ченских, 1972; К.А.Туркебаева, Я.А.Благодарный, 1981; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005). В ветеринарии этот вопрос недостаточно изучен, в частности патологическая анатомия и патогенез. Разноречивы данные о том, как реагируют животные на микобактерии разных видов, изменяется ли стереотип защитной тканевой реакции при заражении возбудителем несвойственного вида, это порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызванном различными видами туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий, недооценку роли инфицированных животных в эпизоотологии туберкулеза и микобактериозов.

С.И. Антипова и соавторы (1987) полагают, что проблема эпидемиологической и эпизоотологической значимости микобактериозов может быть решена с учетом вида микобактерий, так как в организме животных биологическая активность микобактерий разных видов неодинакова (М.П.Зыков, Т.Б.Ильина, 1978; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев , 2005).

Для определения вирулентности нетуберкулезных микобактерий используют лабораторных животных, совершенствуют методы заражения, изменяя реактивность организма животных (О.В.Мартма, Э.И.Тюри, 1968; М.П.Зыков, Т.Б.Ильина, 1978; Е.А.Финкель, Л.В.Михайлова, 1978;Э.И.Тюри и соавт., 1986; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005; Н.Г.Толстенко, 2006; F.Kuze, K.Lee, 1984; M.Palvas et all., 1991; A.Saenz et all., 1985 и др.).

В ветеринарной практике основным моментом является определение вида возбудителя туберкулеза. Для этого применяется биологическая проба с использованием морских свинок, кроликов и кур.

Для сокращения срока биопробы совершенствуют методы и дозы заражения, изменяют реактивность организма животных.

При оценке результатов биопробы у морских свинок, кроликов и кур иногда обнаруживают узелковые изменения, которые являются основополагающими в определении вида возбудителя туберкулеза. Некоторые исследователи склонны объяснять возникновение таких изменений инфицированностью животных нетуберкулезными (атипичными) микобактериями.

В последнее время в качестве экспериментальной модели для изучения патогенеза туберкулеза, а также определения специфичности и активности туберкулина используют коз. Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно (Н.А.Налетов, 1949; П.И.Кокуричев, 1953; В.Е.Щуревский с соавт., 1991), то сведения о козах малочисленны и противоречивы.

Исходя из вышеизложенного, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, является актуальной задачей и представляет значительный научный и практический интерес.

Целью исследований являлось сравнительное изучение в динамике патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, зараженных в эксперименте разными видами микобактерий.

Основные задачи исследований:

- изучить патологоанатомические и патоморфологические изменения у морских свинок экспериментально зараженных подкожно M.phlei, M.smegmatis, M.avium в сравнении с M.bovis, M.tuberculosis;

- изучить патологоанатомические и гистологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных разными методами M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi в сравнительном аспекте с зараженными M.bovis;

- изучить патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis в сравнении с зараженными M.bovis, M.tuberculosis и M.avium;

- изучить патоморфологических изменений у кур, зараженных M.phlei, M.smegmatis и M.tuberculosis в сравнении с зараженными M.avium;

- определить характер и локализацию патологоанатомических и патоморфологических изменений у коз, экспериментально зараженных M.bovis, M.tuberculosis, M.avium.

Научная новизна: Показаны в динамике патоморфологические изменения у морских свинок, экспериментально зараженных разными методами M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi, M.phlei, M.smegmatis и M.avium в сравнении с изменениями при заражении M.bovis и M.tuberculosis. Установлено, что отмеченные изменения, вызванные нетуберкулезными микобактериями, характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза. Однако отсутствие обострения процесса и последующая склонность к редукции отличают их от патологии, наблюдаемой у морских свинок при заражении M.bovis и M.tuberculosis.

У кур, зараженных микобактериями M.phlei, M.smegmatis и M.tuberculosis, на ранних стадиях развиваются единичные изменения, гистологически сходные с туберкулезными, которые не склонны к прогрессированию и с увеличением сроков содержания животных, в отличие от патологии, вызванной M.avium, подвергаются редукции. У единичных кур, зараженных M.smegmatis и М.phlei в поздние сроки патоморфологические изменения имеют значительное сходство с туберкулезной патологией, однако подобные гранулематозные поражения могут быть полиэтиологичны, либо обусловлены другим возбудителем.

Показано, что у кроликов, зараженных M.smegmatis и M.phlei, на 21 день возникает клеточная реакция в органах, склонная к редукции в течение 3 месяцев, в отличие от туберкулезной патологии, вызванной M.bovis, M.tuberculosis, M.avium.

Охарактеризованы патологоанатомические и гистологические изменения у коз, экспериментально зараженных M.bovis, M.tuberculosis, M.avium. Показана чувствительность коз ко всем вышеперечисленным микобактериям и отмечены различия в степени выраженности патологического процесса.

Практическая значимость. Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М.И.Гулюкиным 22 марта 2007 г.

Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов на морских свинках, кроликах и курах, послеубойной оценке патанатомических изменений, экспериментально зараженных лабораторных животных и коз, а также приготовлении и изучении гистологических препаратов из тканей и органов животных, сравнительном анализе и обобщении результатов исследований.

Апробация работы. Материалы работы доложены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я.Р.Коваленко (М., 2006г), Международной научно-практической конференции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней крупного рогатого скота» (Киев, 2006г.), на заседании ученого совета ВИЭВ (2005, 2006гг.). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2007 г.).

Основные положения, выносимые на защиту. Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения: микобактериальный инфекция свинка гистологический

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований морских свинок, кроликов и кур, зараженных нетуберкулезными микобактериями разными методами в сравнении с изменениями, вызванными возбудителями туберкулеза;

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований коз, зараженных M.bovis, M.tuberculosis, M.avium;

- использование в дифференциальной диагностике туберкулеза результатов сравнительного изучения патологоанатомических и гистологических особенностей у разных животных при заражении туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано семь научных статей.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 151 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа иллюстрирована 35 фотографиями и 11 таблицами. Список литературы включает 208 источника, в том числе 35 иностранных авторов.

Собственные исследования

Материалы и методы. Работа выполнена в период с 2002 г. по 2005 г. в лаборатории микобактериозов и секторе патоморфологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко и на опытной базе острова Лисий Вышневолоцкого отдела ВИЭВ, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и прикладных исследований по заданию 02.01.01.

Патологоанатомическому и гистологическому исследованию подвергнут материал от 368 морских свинок, 32 кроликов, 42 кур и 12 коз. Животные находились в комплексных опытах в лаборатории микобактериозов ВИЭВ с целью изучения патогенности нетуберкулезных микобактерий для лабораторных животных и восприимчивости коз в эксперименте к M.bovis, M.tuberculosis и M.avium.

В соответствии с задачами исследований, изучали в динамике патологоанатомические и морфологические изменения у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами M.phlei, M.smegmatis и M.avium в сравнении с зараженными M.tuberculosis и M.bovis. 48 морских свинок разделили на 8 групп и заразили подкожно. Первую группу - M.phlei, вторую - M.smegmatis, третью - M.avium, четвертую - M.tuberculosis, пятую - M.bovis - в дозе 1мг/мл, шестую - M.phlei, седьмую - M.smegmatis - в дозе 10 мг/мл, восьмая группа была контрольной.

Животных содержали в течение 90 дней в отдельных боксах блока № 3 Вышневолоцкого отдела ВИЭВ. Через 15 дней после заражения была проведена туберкулинизация морских свинок согласно узаконенной методики. Убивали животных через 21 и 90 дней после заражения, с последующим вскрытием и взятием патологического материала для гистологических, бактериологических и ПЦР исследований.

Во втором опыте использовали 320 морских свинок, которых разделили на группы по 80 голов.

Животных первой группы (80 голов) подразделили на 4 подгруппы (по 20 голов). Первой подгруппе ввели культуру M.kansasii подкожно в дозе 1 мг/мл, второй - внутрибрюшинно в той же дозе и третьей - интратестикулярно в дозе 1 мг в 0,2 мл физиологического раствора, 4 подгруппа была контролем. Аналогичными методами и дозами заразили вторую, третью и четвертую подгруппы морских свинок культурами M.fortuitum, M.xenopi и M.bovis соответственно.

Через 10, 20, 30 и 60 дней после заражения убивали по 5 морских свинок, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических и бактериологических исследований.

В третьем опыте использовали 32 кролика, которые были разделены на 8 групп. Первая группа была заражена M.phlei, вторая - M.smegmatis, третья - M.bovis, четвертая - M.tuberculosis, пятая - M.avium - все в дозе по 1мг/мл. В шестой группе животных заражали M.phlei, в седьмой - M.smegmatis - увеличив заражающую дозу до 10мг/мл, восьмая группа служила контролем. Аллергическое исследование было проведено через 15 дней после заражения, согласно существующей методике.

Животных убивали через 21 и 90 дней после заражения, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических, бактериологических и ПЦР исследований.

В четвертом опыте были взяты 42 курицы, которых разделили на 7 групп и заразили внутривенно в дозе по 1 мг/мл. Первую группу - M.phlei, вторую - M.smegmatis, третью - M.tuberculosis, четвертую - M.avium, пятая - контроль. Аналогичные две группы кур (шестую и седьмую) заразили десятикратной дозой M.phlei и M.smegmatis соответственно. Через 15 дней после заражения кур подвергли аллергическому исследованию по общепринятым методикам.

Птицу убивали через 21 и 90 дней после заражения с последующим исследованием патологического материала патоморфологическим, бактериологическим и ПЦР методами.

В пятом комплексном опыте, который провели совместно с аспирантом лаборатории микобактериозов В.И.Строгоновым на 12 козах в возрасте 1 года, животных разделили на 4 группы по 3 головы.

Первую группу животных (№ 1,2,3) заразили орально вначале взвесью патологического материала павшей от туберкулеза курицы (печень, селезенка) и павшего кролика (печень, селезенка), которые ранее были заражены культурой M.avium (шт. К). Затем через 18 дней каждой козе так же орально ввели взвесь культуры M.avium (шт. К) в дозе 1 мг на кг живой массы.

Вторая группа (№ 4,5,6) была заражена орально M.bovis. Сначала каждой козе вводили через зонд суспензию печени и селезенки одной морской свинки, павшей от генерализованной формы туберкулеза и суспендированные печень и селезенку одного кролика с аналогичными поражениями. Через 18 дней каждую козу так же орально заражали культурой M.bovis (шт. «С») в дозе 1 мг на 1 кг живой массы.

Третью группу коз (№ 7,8,9) заражали аналогично M.tuberculosis. Первоначально взвесью материала павшей от туберкулеза морской свинки (селезенка, печень), ранее зараженной культурой M.tuberculosis (штамм Н37Rv). Через 18 дней каждая коза была заражена повторно орально этой же культурой в дозе 1мг на 1 кг живой массы.

Четвертая группа животных (№ 10, 16, 17) была контрольной.

Животных содержали в отдельных боксах в течение 9 месяцев. Одна коза пала через 2,5 месяца, остальные животные убиты по окончанию опыта.

Животных в процессе опыта через каждые 30 - 60 дней исследовали пальпебральной туберкулиновой пробой, ППД-туберкулин вводили в нижнее веко глаза, отступя от его края 1,5 - 2 см.

Для бактериологического исследования патматериал обрабатывали по методу А.П.Аликаевой, с последующим посевом на среды ФАСТ-ЗЛ и Левенштейна-Йенсена. От 210 животных материал обрабатывала кандидат ветеринарных наук Н.Г.Толстенко, а от 15 животных - самостоятельно. Из этого же центрифугата (при обработке материала по Аликаевой) брали пробы для ПЦР - исследований, которые были проведены научным сотрудником М.С.Калмыковой и кандидатом ветеринарных наук Е.П.Вангели.

При проведении гистологических исследований использовали «Методические указания по патогистологической технике» (Москва, 2005). Кусочки органов и тканей фиксировали в 10 % растворе формалина. Гистологические препараты были изготовлены методом заливки в целлоидин и парафин. В ходе гистологических исследований использовали стандартный метод окраски гематоксилин-эозином, а также сложные окраски: на соединительную ткань по Ван-Гизону и по Маллори, на выявление микобактерий в срезах по Циль-Нильсену. Работа была проведена при консультативной помощи кандидатов ветеринарных наук О.В.Якушевой и В.С.Суворова.

Результаты изучения в динамике патологоанатомических и патоморфологических изменений у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами M.phlei, M.smegmatis, M.avium в сравнении с M.tuberculosis и M.bovis.

На 21 день патоморфологические изменения у морских свинок, вызванные M.bovis и M.tuberculosis, характеризовались образованием язвы на месте введения, дно которой было покрыто казеозными массами, увеличением регионарных лимфатических узлов, с формированием некроза. Селезенка и печень увеличены, с множеством серых милиарных узелков. В легких серые бугорки на фоне катарально-гнойной пневмонии. Трахеобронхиальные лимфоузлы увеличенные, плотные с участками некроза. Гистологически в паренхиматозных органах и лимфоузлах отмечали образование множественных гранулем с центральным некрозом и распадом ядер путем кариорексиса.

У морских свинок, зараженных M.avium в дозе 10 мг/мл, на 21 день на месте введения находили уплотнение подкожной клетчатки, увеличение регионарного лимфатического узла. У одной свинки в селезенке гистологически находили единичные скопления из ретикулярного типа клеток, формирующих гранулему, в печени - пролиферацию клеток Купфера, лимфоидных и ретикулоэндотелиальных в виде мелких скоплений, в легких - утолщение стенок альвеол за счет пролиферации клеток стромы.

У морских свинок, зараженных M.phlei, M.smegmatis в дозе 10 мг/мл, и убитых на 21 день, на месте заражения обнаружен участок уплотнения, регионарный лимфоузел немного увеличен. Только гистологически: в печени отмечали не резко выраженную пролиферацию гистиоцитов и лимфоидных клеток по триадам, в селезенке гиперплазию фолликулов. В легких стенки альвеол утолщены за счет пролиферации ретикулярного типа клеток, встречались и небольшие очаги лимфоидной инфильтрации. К 90 дню патанатомические и гистологические изменения у животных отсутствовали.

Все морские свинки, зараженные M.bovis, пали в течение месяца от генерализованной формы туберкулеза. Свинки, зараженные M.tuberculosis, убиты по окончанию опыта с генерализованной формой туберкулеза. У животных, зараженных M.avium, кроме некроза в месте заражения, иногда обнаруживали увеличение селезенки, в печени и селезенке находили единичные казеозные узелки.

Таким образом, морфологически реакция у морских свинок на заражение M.phlei и M.smegmatis к 21 дню проявлялась пролиферацией ретикулоэндотелиальной стромы органы, а с удлинением срока содержания практически исчезала. Изменения у свинок, зараженных десятикратной дозой M.avium, к 21 дню проявлялись в виде уплотнения в месте заражения, увеличения регионарного лимфатического узла и единичных узелков в печени и селезенке, не имеющие тенденции к усугублению патологии, в отличие от патологии, вызванной M.tuberculosis и M.bovis.

Патологоанатомические и патоморфологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi подкожным, внутрибрюшинным и интратестикулярным методами.

Изменения у животных, зараженных подкожно нетуберкулезными микобактериями, в начальные сроки были идентичны с минимальной разницей в степени выраженности по видам микобактерий - это уплотнение в месте заражения размером с горошину, незначительное увеличение регионарного лимфатического узла и селезенки, а иногда единичные узелки в печени.

При заражении интратестикулярно на ранних сроках отмечали увеличенный и гиперемированный семенник, в который вводили культуру, увеличенный регионарный правый паховый лимфатический узел, иногда единичные узелки в печени.

У свинок, зараженных внутрибрюшинно, иногда в брюшной полости содержалось повышенное количество транссудата, а стенка брюшины и сальник очагово уплотнены. В печени и селезенке встречались единичные, милиарные очажки. К 60 дню у большинства животных изменений не обнаруживали. У отдельных особей обнаруживали в печени или селезенке единичные узелки. В то время как у морских свинок, зараженных M.bovis, отмечали характерные туберкулезные изменения во всех органах.

Высеваемость культур M.xenopi и M.kansasii на ранних сроках составляла от 70 до 100 %, а с увеличением сроков содержания снижалась до 4 % .

Полученные результаты по сравнению в динамике патоморфологических изменений в органах морских свинок, зараженных нетуберкулезными микобактериями подкожно, интратестикулярно и внутрибрюшинно, выявили однотипность морфологической реакции. В месте введения культур, регионарных им лимфатических узлах и органах отмечены выраженные в разной степени альтеративные процессы с ранним инкапсулированием. В печени, селезенке и лимфатических узлах выявлена активация мезенхимальных элементов органов, выраженная в пролиферации ретикулоэндотелиальных клеток. Эти процессы более выражены и дольше сохраняются при интратестикулярном и внутрибрюшинном заражении M.kansasii и M.xenopi.

Отмеченные изменения характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза. Однако отсутствие склонности к обострению процесса с формированием дочерних некрозов не позволяет провести полной аналогии с туберкулезной патологией.

Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis, в сравнении с зараженными M.tuberculosis, M.bovis и M.avium.

Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis дозой 1мг/мл были незначительны и мало специфичны, а через 90 дней отсутствовали. При увеличении заражающей дозы в 10 раз, к 21 дню в печени находили пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам, в легких - единичные лимфомы, в почках лимфоидную инфильтрацию. К 90 дню у большинства кроликов изменения редуцировались, а у одного кролика в селезенке находили скопления эпителиоидных клеток, в легких единичные гранулемы, в почках единичные лимфомы, в печени пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам. Кролики, зараженные M.avium, пали от туберкулезного сепсиса, принятого как болезнь Йерсена, в течение месяца. Животные, зараженные M.bovis, пали с генерализованной формой туберкулеза. У кроликов, зараженных M.tuberculosis и убитых по окончанию опыта, находили единичные гранулемы в печени, легких и почках и очаги эпителиоидных клеток в селезенке.

Патоморфологические изменения у кур, зараженных M.phlei, M.smegmatis и M.tuberculosis, в сравнении с зараженными M.avium Куры, зараженные M.avium пали в течение месяца от туберкулезного сепсиса. Селезенка и печень были резко увеличены, с четко выраженной зернистостью. На поверхности легких множественные белые очаги. Гистологически структура печени, селезенки и легких плохо просматривалась из-за множественных неограниченных, конгломерированных гранулем, состоящих из эпителиоидных клеток.

Патологоанатомические и гистологические изменения у коз, экспериментально зараженных алиментарно M.bovis, M.tuberculosis и M.avium.

Все экспериментальные козы оказались чувствительны к использованным в опыте микобактериям. Но степень выраженности патологического процесса была различной.

У коз, зараженных M.bovis, одна пала, другая убита в агональном состоянии. На вскрытии отмечены генерализованный туберкулез с поражением плевры, легких, печени, селезенки и региональных им лимфатических узлов, миндалин, стенки тонкого отдела кишечника с тотальным поражением всех лимфатических узлов брыжейки с образованием лучистого казеоза.

Гистологически структура легких едва различима, выявлена тяжелейшая казеозная крупозная пневмония, туберкулезный плеврит, лучистый казеоз лимфатических узлов. В легких большая часть альвеол заполнена фибрином и клеточным детритом, границы альвеол едва заметны, множественные некрозы по всему полю зрения с выпотом фибрина и с кариорексисом, не имеющие отложений извести. Участки остро текущей крупозной пневмонии соседствуют с катаральным воспалением. В очагах поражения отсутствует свойственная хронической туберкулезной пневмонии воспалительная специфическая клеточная реакция: отсутствуют гранулемы, эпителиоидные и гигантские клетки. В печени и селезенке - множественные гранулемы с центральным некрозом и слабо выраженной или отсутствующей специфической капсулой.

У коз, зараженных M.tuberculosis, изменения носили более локальный характер. Туберкулезные поражения находили в лимфатических узлах, легких, печени, кишечнике, селезенке. Гранулемы были ограничены мощной соединительнотканной капсулой.

Гистологически в легких отмечали образование гранулем, окруженных фиброзной капсулой и зоной специфической для туберкулеза грануляционной ткани из эпителиоидных и гигантских клеток. В центре гранулем некроз с обломками ядер, распадающихся кариорексисом, в некоторых некрозах содержится большое количество извести. Участки пневмонии небольшие, вокруг гранулем небольшие участки реактивного воспаления. Сохранившиеся участки легочной ткани в состоянии ателектаза.

В группе коз, зараженных M.avium, изменения характеризовались наличием мелких, единичных гранулем в легких, селезенке, печени и лимфатических узлах, отграниченные выраженной соединительнотканной капсулой. Гистологически гранулемы отличались продуктивностью и перемежались с паразитарными поражениями.

Результаты проведенных ПЦР-исследований патологического материала от коз и лабораторных животных полностью коррелируют с данными патологоанатомических и гистологических исследований.

Выводы

1. Патоморфологически установлена однотипная клеточная воспалительная реакция в месте введения культуры, регионарных лимфатических узлах и паренхиматозных органах, выраженная в развитии катарально-гнойного воспаления в месте введения культуры, пролиферации ретикуло-эндотелиальных элементов стромы в лимфатических узлах, селезенке, легких, печени.

2. Степень выраженности компонентов воспаления зависела от патогенности культуры нетуберкулезных микобактерий для данного вида животных, метода заражения, дозы, и во всех случаях не соответствовала туберкулезной патологии.

3. Изменения у морских свинок, зараженных M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi, различными способами, не имеют тенденцию к распространению, не привели к гибели животного, наиболее выражены при заражении M.kansasii и M.xenopi внутрибрюшинно и интратестикулярно, чаще встречаются в виде лимфоидной инфильтрации или небольших гранулем, состоящих из макрофагов, окруженных лимфоидными элементами, реже с некрозом в центре, в печени, селезенке легких.

4.Заражение кур M.smegmatis и М.phlei на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени. Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения. Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при заражении M.avium. В поздние сроки отмечены гранулемы, имеющих большое сходство с туберкулезными, наличие в которых кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Циль-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий для птиц до установления диагноза на туберкулез.

5. Данные проведенных патоморфологических, аллергических, бактериологических и ПЦР исследований в комплексных опытах с использованием различных видов микобактерий предостерегают от преждевременного ложноположительного диагноза туберкулеза.

6. Заражением в эксперименте коз M.bovis, M.tuberculosis и M.avium, воспроизведены патоморфологические изменения, характерные для туберкулеза. Наиболее тяжелые с выраженным альтеративным компонентом, ведущие к гибели при заражении M.bovis, с преобладанием продуктивного компонента воспаления с петрификацией и инкапсулированием некрозов - при заражении M.tuberculosis и образованием мелких, единичных, инкапсулированных узелков при заражении M.avium.

Практические предложения

1. По окончании срока биопробы рекомендуем в любом случае проведение гистологических исследований. В случае гибели морской свинки и независимо от наличия видимых изменений на вскрытии, предлагаем брать регионарные лимфатические узлы, а также кусочки печени, селезенки и легких для гистологических и культурально-морфологических исследований.

2. При постановке диагноза на туберкулез птиц учитывать, что обнаружение кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Циль-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий в биологической пробе.

3. Использовать результаты исследований в лекциях и семинарах повышения квалификации ветеринарных специалистов, по проблеме туберкулеза и микобактериозов животных.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Колоскова Э.Л. К оценке патологоанатомических изменений в диагностике туберкулеза/Якушева О.В., Суворов В.С., Колоскова Э.Л.//Ветеринарная патология. № 1- 2. 2004. С. 79-80.

2. Колоскова Э.Л. О патогенности атипичных микобакетрий для лабораторных животных/ Овдиенко Н.П., Косенко В.И., Толстенко Н.Г., Суворов В.С., Якушева О.В., Колоскова Э.Л.// Ветеринарная

патология № 1-2. 2004. С. 150-153.

3. Колоскова Э.Л. Патоморфологические изменения у лабораторных животных, зараженными нетуберкулезными микобактериями/ Колоскова Э.Л., Якушева О.В., Суворов В.С., Толстенко Н.Г., Соколова Е.Э.// Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я.Р.Коваленко. Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных. - М., 2006. С.252.

4. Колоскова Э.Л. Туберкулез коз// Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Осипова Е.П., Калмыкова М.С., Строганов В.И., Толстенко Н.Г., Якушева О.В., Суворов В.С., Степнова С.Н., Колоскова Э.Л..// Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я.Р.Коваленко. Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных. - М., 2006. С. 312.

5. Колоскова Э.Л. О патогенности нетуберкулезных микобактерий для морских свинок и белых мышей//Толстенко Н.Г., Колоскова Э.Л., Суворов В.С., Касьянова Е.А., Соколова Е.Э.// Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я.Р.Коваленко. Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных. - М., 2006. С. 390.

6. Колоскова Э.Л. Экспериментальный туберкулез коз// Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Якушева О.В., Строганов В.И., Строганов И.В., Суворов В.С., Осипова Е.П., Калмыкова М.С., Толстенко Н.Г., Чебан С.С., Колоскова Э.Л. // Мiжнародна наук.-практ. конф. «Эпизоот. i профiлактика iнфекц. хвороб великоi рогатоi худоби», Тези доповiдей, 14-17 березня 2006 року, НАУ, КuiB, Украiна, 2006 г., стр. 64.

7. Колоскова Э.Л. Результаты патоморфологического исследования подопытных животных, зараженных М.phlei и M.smegmatis// Мiжнародна наук.-практ. конф. «Эпизоот. i профiлактика iнфекц. хвороб великоi рогатоi худоби», Тези доповiдей, 14-17 березня 2006 року, НАУ, Кuiв, Украiна, 2006 г., стр.

Размещено на Allbest.ru