Нужна ли России диагностика вирусных инфекций сельскохозяйственных растений на молекулярном уровне?

Размещено на http://www.allbest.ru/

Нужна ли России диагностика вирусных инфекций сельскохозяйственных растений на молекулярном уровне?

Юрий Федорович Дрыгин, зав.лабораторией, НИИ физико-химической биологии им. А,Н,Белозерского МГУ, звание - с.н.с. , д.х.н.

Аннотация

вирусный инфекция сельскохозяйственный растение

Ю.Ф Дрыгин, НИИ физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского МГУ

В статье затронута проблема зараженности сельскохозяйственных растений фитопатогенами (вирусами, вироидами, бактериями) и решение ее в России путем массовой молекулярной диагностики вирусных и бактериальных инфекций растений с помощью иммунохроматографических тест-полосок и разработанного иммуночипа низкой плотности на примере диагностики вирусных и бактериальных инфекций картофеля.

Обсуждаются организационные проблемы повышения культуры растениеводства с помощью доступных даже рядовому обывателю иммунохроматографических тест-систем для массовой диагностики инфекций растений на молекулярном уровне.

Ключевые слова: вирусы растений, вироиды, молекулярная диагностика, массовая диагностика, иммунохроматография, тест-полоска, иммуночип, картофель

Сельское хозяйство - область хозяйственной деятельности человека с наиболее быстрой отдачей прибыли. В растениеводстве размер прибыли зависит: от научного и технического уровня культивирования сельскохозяйственных растений; климатических условий; эффективности борьбы с вредителями культурных растений: животными, насекомыми, сорняками и микроорганизмами: грибками, бактериями, вирусами и вироидами.

Обычно вирусы растений потребителя не беспокоят, они не опасны для здоровья. Аграрий, занятый культивированием растений, встречается с необходимостью разобраться в чем дело только тогда, когда затраченный им труд не получает ожидаемой отдачи. Например, приносящие доход красивые цветы завяли, а любимые ягоды на гла.рзах почернели и погибли. Еще неприятнее прощание с внезапно засохшими деревьями, радовавшими уже несколько лет хозяина замечательным вкусом своих плодов.

Вирусные и вироидные инфекции злаковых, овощных, плодовых, ягодных и декоративных растений распространены повсеместно. Заражение происходит при проникающем ранении клеточной стенки растения либо насекомыми и другими вредителями, либо механически (инвентарем или механизмами).

К сожалению, проводимое массово оздоровление растений через получение апикальной меристемы не гарантирует 100%-ное освобождение от вирусов, и, тем более, от вироидов. Именно это, в совокупности с отсутствием доступной диагностики вироидной инфекции, и привело к массовому распространению вироида картофеля в 80-х гг. прошлого века за пределами природных очагов этой инфекции в России.

Вирусные и вироидные инфекции наносят значительный ущерб урожаю, причем наиболее вредны смешанные инфекции, так, например, инфекция картофеля вирусом X приводит к 10% потере урожая, а смешанная инфекция вирусами X и Y.уже приводит к 50-70% потере.

Наибольший ущерб инфекции приносят хозяйствам, культивирующим многолетние растения. Массовое заражение (эпифитотия) кокосовых пальм, которые начинают плодоносить лишь на седьмом-девятом году жизни, вироидом каданг-каданг нанесло экономике Филиппин и о. Гуам катастрофический ущерб от потери 30 миллионов (!) пальм [1].

В настоящее время растения, зараженные вирусами (вироидами), не лечат, поставив диагноз, их выбраковывают. В случае карантинной инфекции зараженные растения подлежат уничтожению. Поэтому для эффективной борьбы с ущербом от инфекций, необходимо определить какие семена, или какое растение будут расти и размножаться в хозяйстве - здоровое или больное.

Очевидно, что эффективность борьбы с инфекциями многократно выше на начальных ее стадиях. Окончательный и наиболее точный диагноз инфекций вирусами и вироидами ставится на молекулярном уровне.

Таким образом, диагностика вирусных и вироидных заболеваний является ключевым звеном в производстве оздоровленного семенного материала. Помимо сертификации семян и посадочных растений, в массовых масштабах она применяется для контроля процесса оздоровления растений от вирусов, фитосанитарного мониторинга посевов, фитосанитарной селекции и карантинной проверки импортируемого семенного материала.

Диагностика вирусных и вироидных инфекций на молекулярном уровне

Автор ограничивает круг технологий молекулярной диагностики лишь методами, оправдавшими их массовое применение на практике.

Молекулярная диагностика инфекций в молекулярной биологии и медицине - это частный случай задачи определения целевой нуклеотидной последовательности или целевого антигена. Другими словами, молекулярная диагностика базируется на двух принципах молекулярного узнавания: «нуклеиново-нуклеинового» по правилам комплементарного спаривания гетероциклических оснований нуклеиновых кислот (с применением, например, ДНК и РНК-зондов, ДНК- или олигонуклеотидов-чипов, ПЦР технологии) и белок- белкового - «белковый антиген - антитело» с использованием методов иммунохимического (иммуно-ферментного) анализа (ИФА) как на иммунопланшетах, на мембранных фильтрах, так и на тест-полосках.

Методы диагностики на молекулярном уровне не зависят от природы инфицированного организма, будь то микроб, растение, животное или человек. Для диагностического анализа требуются микроколичества (капля) клеточного сока листовой ткани или проростков растения.

Автор рукописи совместно с вирусологами и коллегами ЗАО НВО «Иммунотех» МГУ им. М.В. Ломоносова, коллегами из НИИ картофельного хозяйства им. А.Г. Лорха и Института биохимии РАН более 30 лет занимался разработкой методов как лабораторной, так и массовой практической диагностики вирусных и вироидных инфекций картофеля [2-6]. Были решены задачи достижения максимальной чувствительности определения вирусов и вироида скручивания листьев картофеля и созданы диагностические чипы как для одновременного определения РНК шести экономически важных вирусов и вироида картофеля, так и капсидных белков-антигенов этих вирусов.

На практике для обнаружения вирусного заражения наибольшее распространение в растениеводстве получили иммунохимические методы, в частности, количественный метод твердофазного иммуноферментного анализа на планшетах. Этот метод пригоден для массовой диагностики в лаборатории, для него необходимы приборы и квалифицированный персонал. Основные затраты в этом методе связаны с выделением и очисткой вирусов или вирусных антигенов (как правило, белков оболочки вирусов) и получением к ним антисывороток (антител). Иммуноспецифические реагенты, диагностические наборы и приборы для выполнения ИФА производятся многими фирмами и широко представлены на рынке.

Массовая молекулярная диагностика инфекций и в лаборатории, и в поле

Повсеместный массовый мониторинг зараженности посевного и полевого материала сельскохозяйственных растений вирусами возможен только на основе простых, надежных, доступных, высокоспецифичных и высокочувствительных экспресс-методов применимых для определения широкого круга вирусов (значительно различающихся по морфологии, структуре и физико-химическим свойствам), позволяющих проводить экспресс-диагностику в полевых условиях без специальных навыков и оборудования. Поэтому одним из основных коммерческих требований, предъявляемых ко всем современным методам внелабораторной иммунодиагностики (используемых в медицине, ветеринарии и сельском хозяйстве), является полная готовность набора к проведению тестирования. Такой набор должен включать все необходимые реагенты. Для проведения анализа достаточно лишь добавить анализируемый растительный экстракт (клеточный сок), что инициирует иммунохимические взаимодействия и формирование регистрируемого сигнала в контрольной и аналитической областях. Идеальным в таких тест-системах является использование меток, позволяющих проводить детекцию путем простого визуального считывания (окрашенные латексы, красители, коллоидное золото, липосомы с красителем, углеродные частицы и т.д.) без необходимости добавления каких-либо проявляющих компонентов. С целью дальнейшего повышения чувствительности метода могут быть использованы как флуоресцентные маркеры, так и различные усилители регистрируемого сигнала.

Этим требованиям отвечает быстро развивающаяся современная аналитическая технология иммунохроматографического анализа (ИХА) широкого спектра биологически активных соединений различной природы на тест-полосках, вытесняющая в силу своей простоты и скорости анализа традиционные твердофазные методы ИФА. В литературе такой подход получил обобщенное название «проточный латеральный иммуноанализ». Быстрые и простые аналитические иммунохроматографические тест-системы (ИХТС) позволяют проводить высокочувствительные полуколичественные измерения визуально без специальных навыков и оборудования даже в полевых условиях. Являясь эффективным средством диагностирования, иммунохроматографические экспресс-тесты позволяют в течение нескольких минут визуально определить и оценить содержание различных диагностически важных фитопатогенов. При производстве ИХТС используются наночастицы, например, коллоидного золота (20-40 нм).

Основным компонентом ИХТС является мультимембранная тест полоска, на которую нанесены иммунореагенты.

На полоске в определенных зонах нанесены иммунореагенты: первичные антитела, связанные с флуоресцентным красителем или меченные окрашенными наночастицами (например, коллоидного золота), способные связаться с детектируемым вирусом.

При нанесении клеточного экстракта зараженного растения, вирус капиллярными силами

перемещается вместе с фронтом жидкости вдоль полоски. Попав в зону первичных меченых антител вирус образует с ними иммунохимические комплексы, которые продолжают мигрировать дальше с фронтом жидкости. Достигнув зоны фиксированных в виде поперечной линии первичных антител к вирусу, комплекс вируса и меченых первичных антител концентрируется за счет образования тройного комплекса «иммобилизованные первичные антитела - вирус - меченые первичные антитела». В аналитической зоне происходит концентрирование связанных с вирусом частиц коллоидного золота и формируется окрашенная линия. При отсутствии вируса в экстракте (здоровое растение) меченые первичные антитела свободно проходит через линию иммобилизованных антител к вирусу, и окрашенная полоса в аналитической области не образуется, она образуется дальше, где в виде поперечной линии (контрольная линия) фиксированы вторичные, антивидовые антитела. Эта контрольная зона является внутренним контролем для определения рабочего состояния иммунокомпонентов. Таким образом, при анализе зараженного растения данным вирусом видим две красные поперечные линии в аналитической и контрольной зонах, если растение здорово - видим одну красную полосу в контрольной зоне (Рис. 2). Чувствительность определения содержания вируса находится в диапозоне 1-30 нг/мл, время анализа - 5-15 мин. Для подавляющего большинства вирусов этой чувствительности вполне достаточно для выявления явно зараженных растений. Чувствительность можно увеличить на порядок с помощью реакции серебряного усиления, время анализа составит 30-40 мин.

В последние годы на зарубежном рынке появились иммунохроматографические тесты для определения вирусов растений под коммерческими названиями Spot Check LF («Adgen Ltd»., Великобритания), Pocket Diagnostic (Central Science Laboratory, Великобритания), Immunostrips («Agdia», США), QuickStix («EnviroLogics», США), AgriStrip Bioreba (Швейцария) и ряда других фирм. По сравнению с перечнем коммерческих тест-систем на основе ИФА, этот даже объединенный список пока невелик и включает тест-полоски для диагностики инфекций около 30 вирусов, в том числе экономически важных инфекций вирусами ризомании, шарки сливы, тристецы цитрусовых, Y вирусом картофеля, огуречной мозаики, бронзовости томатов и других важнейших патогенов различных сельскохозяйственных культур. Выпускаются мультиспецифичные тест-полоски для одновременного определения в одном образце нескольких вирусов картофеля и нескольких тосповирусов.

Энергично включились в развитие и поддержку молекулярной диагностики инфекций растений и государство, и частный бизнес в Индии, Китае и Бразилии.

Серьезным показателем надежности диагностических тест-систем на основе ИХА является включение этого метода в диагностические протоколы ЕРРО (Европейская организация защиты растений) для определения ряда карантинных объектов. Крупнейшая американская компания Dow Chemical Company в 2012 г. заключила договор с американской диагностической компанией «Agdia» о разработке ридера для автоматического мультиплексного эспресс-анализа инфекций растений, экспрессии целевых белков трансгенных растений и т.п. на тест-полосках, собранных в виде гребенки.

Проблемы массовой молекулярной диагностики вирусных инфекций в России

Практика интенсивного культурного растениеводства в развитых странах западных соседей РФ опирается на тотальную сертификацию исходного материала (сортообразцов) и систематический контроль его качества со стороны аккредитованных инспекций без ущерба для дисциплинированных собственников.

В России система сертификации оригинального (предбазисного) семенного материала предусматривает его обязательную лабораторную проверку на зараженность возбудителями наиболее вредоносных вирусных и бактериальных болезней в испытательных лабораториях по сертификации семян, аккредитованных для выполнения такого рода работ [7].

Формирование цивилизованного рынка семенного картофеля в России, вызвало необходимость коренного улучшения системы сертификации семенного материала. В силу этого, перспективы развития безвирусного картофелеводства прямо зависят от обязательного регулярного применения эффективных методов лабораторной и полевой диагностики вирусных и вироидной инфекций.

Однако основная проблема в России - отсутствие тотального систематического контроля качества сертифицированных семян и исходного посадочного материала для повсеместного культивирования со стороны аккредитованных служб России. Положение усугубляется тем, что контроль посадочного материала (и далеко неполный) проводится карантинной службой РФ в крупных семеноводческих хозяйствах, а в производстве сельскохозяйственной продукции значительную (часто большую) часть занимают хозяйства мелких собственников. Чтобы включить последних в культурное ведение хозяйства надо сначала снабдить их необходимым доступным инструментом контроля качества покупаемого (и выращенного!) ими растительного материала, а затем уже вести систематический контроль культуры хозяйствования в подсобном огороде, саду, цветнике и т.п.

Актуальные проблемы дигностики на молекулярном уровне

Огромное разнообразие вирусов, поражающих плодовые, ягодные, овощные и декоративные культуры и наносящих много миллиардные рублевые убытки, рано или поздно заставит вкладывать деньги в развитие отечественной молекулярной диагностики инфекций вышеупомянутыми вирусами. Убытки можно значительно сократить, если организовать (модернизировать) аккредитованные региональные диагностические центры (лаборатории). Чтобы вернуть затраты, необходима организация районных инспекций, помогающих сельхоз производителям в приобретении элитного семенного и здорового посадочного материала и отвечающих за фитосанитарный контроль в районе, и работу которых законодательно поддерживает местная администрация.

Актуальной проблемой молекулярной диагностики является одновременное выявление множества патогенов вирусной и вироидной природы сельскохозяйственныхрастений и животных. Мультипараметричекую диагностику производят обычно на молекулярных чипах. В зависимости от плотности нанесения детекторов их классифицируют как чипы низкой плотности для анализа единиц-десятков мишеней или высокой плотности до нескольких миллионов мишеней. В нашем случае речь идет об иммуночипах низкой плотности (макрочипы), на которые нанесены антитела, а мишенями являются вирусные антигены.

Поскольку производители с/х продукции специализированы по объектам производства и сбыта, экономически целесообразно готовить диагностический иммуно-чип на местные, районированные инфекции конкретной культуры растений или животных. На практике для данной с/х культуры в конкретном районе/области/крае или даже стране опасность представляет небольшое число (10-20) патогенов вирусной, бактериальной или грибковой природы. В частности для культуры картофеля на территории РФ наибольшую опасность представляют 7 вирусных, одна вироидная инфекции и две бактериальные инфекции, для определения которых разработаны диагностикумы, в которых используются поликлональные антитела. Сложнее с грибковыми инфекциями. Для их определения лучше использовать моноклональные антитела. В этом случае выгодно использовать достоинства ДНК-чиповой технологии молекулярной диагностики или технологии ПЦР (полимеразной цепной рекции), когда в одном анализе можно получить практически полную информацию о зараженности растения грибками с учетом их штаммового разнообразия.

В перспективе для каждой сельскохозяйственной культуры необходимо получить иммуночипы, позволяющие одновременно и быстро определять наиболее экономически опасные патогены вирусного, бактериального и грибкового происхождения. Далее возможно создание макрочипа для определения всех (или большей части их) экономически важных фитопатогенов, инфицирующих районированные культурные растения для отдельных регионов России.

Заканчивая эту рукопись ответом на вопрос в заглавии, можно заметить, что от затрат на наведение порядка в культурном растениеводстве страны в ближайшей перспективе не избежать. Опыт стран с развитым сельским хозяйством наглядно подтверждает это.

Доступная массовая диагностика инфекций картофеля в России

Тест-полоски предназначены для быстрого качественного определения вирусов в экстрактах из зараженных растений в полевых условиях. Наиболее эффективно они могут быть использованы для экспресс-анализа зараженности, например, при сертификации элитного и репродукционного семенного картофеля, существенно дополняя его визуальную оценку. Кроме того, тест-полоски могут быть использованы для экспресс-анализа импортируемого семенного и товарного картофеля на карантинные и другие особо вредоносные вирусы, а также в личных, подсобных, мелких фермерских хозяйствах, в которых в настоящее время сосредоточено основное производство картофеля в России.

ИХТС незаменимы в чрезвычайных обстоятельствах, когда необходимо срочно определить природу фитопатогена(ов), например, при эпифитотиях.

В настоящее время уровень молекулярной диагностики инфекций в России позволяет реализовать призыв к фундаментальной науке “From Lab to Field” (Из лаборатории - в Поле!). С этой целью учеными Биологического факультета, НИИ ФХБ им. А.Н.Белозерского, ЗАО НВО «Иммунотех» МГУ им. М.В.Ломоносова и НИИ картофельного хозяйства Россельхоз академии были разработаны Технические Условия, Технический Регламент и Инструкции при создании и организации производства ИХТС для диагностики вирусных болезней картофеля.

Иммунохроматографический экспресс-метод исходно является качественным методом. Результат диагностики вирусной зараженности картофеля определяется как «да-нет» визуально при сравнении с отрицательным и положительныи контролями. Для адаптациия качественного анализ («да-нет») к количественному российскими исследователями был разработан портативный отражательный фотометр РЕФЛЕКОМ -анализатор рефлектометрический видеоцифровой иммунохроматический («Окта-Медика», РФ), прошедший испытания и регистрацию в МЗ РФ, с программным обеспечением «Видеотест» (ООО «Азамат», Москва, РФ), с помощью которого можно проводить количественную обработку (в том числе внелабораторную) результатов диагностического анализа вырезанной из тест-полоски аналитической зоны. Инструкция и программное обеспечение прилагается изготовителем к каждому купленному прибору.

Рациональная тактика массовой диагностики семенного материала

Массовая практическая молекулярная диагностика для получения суперэлитных семян стоит немалых денег. Чтобы свести к минимуму затраты, рационально ее проводить в два этапа. На первом этапе, экономически выгоднее провести частичный скрининг семян мультиплексными иммуночипами или тест-полосками. На этой стадии с меньшими затратами можно оценить долю явно зараженных семян (растений - источник семян). Если доля зараженных составляет 25% и более, необходимо всю анализируемую партию семян проанализировать с помощью тест-полосок или иммуночипа. Главная задача этапа - определить явно зараженные растения и убрать их из последующего размножения.

На втором этапе оставшиеся семена (растения) необходимо диагностировать более мощными комбинированными технологиями - ОТ-ПЦР-дотИФА, ОТ-ПЦР в реальном времени или ДНК-чип - дотИФА, разработанными в МГУ. Эти технологии позволяют обнаруживать одиночные молекулы РНК вирусов, вироидов и бактерий в анализируемой пробе, но они лабораторные, требуют большего времени для анализа, для их применения необходимо лабораторное оборудование и квалифицированный персонал.

Экономичексая целесообразность организации в России системы молекулярной диагностики вирусных инфекций сельскохозяйственных растений

Исторически сложившаяся затратная практика ведения сельского хозяйства в овощеводстве и плодоводстве, требующая государственных субсидий, объясняется доступностью просторов сельскохозяйственных угодий России. Например, несмотря на урожайность картофеля в 2-5 раз ниже, чем в западной Европе (включая скандинавские страны с похожим климатом), отечественные производители удовлетворяют потребности населения в товарном картофеле за счет эксплуатации больших, чем в Европе, площадей.

Экстенсивное ведение сельского хозяйства, когда для удовлетворения потребностей населения в продуктах происходит не за счет повышения урожайности, а за счет возможности использовать большие площади земли большой страны, государству экономически невыгодно. Спрос на не занятые в производстве земли сельскохозяйственного назначения растет. Сокращение площади угодий для производства сельхоз продуктов вынудит повысить производительность труда на земле, а это непосредственно связано со снижением потерь урожаев от инфекций.

Благодаря государственным субсидиям РАН и МГУ в виде РНФ грантов было создано производство иммуночипа на тест-полоске для одновременного определения вирусов A, X, Y, M, S и PLRV и двух бактерий, инфицирующих картофель, на базе лаборатории иммунохимии ФИЦ Биотехнология РАН с участием НИИ КХ им. А.Г. Лорха Россельхоз академии [8]. Эта работа соответствует передовому мировому уровню массовой диагностики инфекций картофеля.

В настоящее время в МГУ получены иммунореагенты для определения вируса огуречной мозаики, вируса желтухи свеклы, вируса скручивания листьев картофеля, вируса табачной мозаики, вируса оспы сливы.

Ученые открыты для сотрудничества с заинтересованными производителями, с которыми на договорной основе со взаимными обязательствами, будет организовано производство ИХТС для контроля зараженности вирусами экономически наиболее важных сельскохозяйственных растений.

В заключении автор обращается к расчетливым бизнесменам, пока не определившим сферу вложения денег. Известно, что быструю прибыль приносит государственная поддержка, доступные природные ископаемые и большой спрос на продукт производства. Разработанные в России иммунохроматографические тест-системы ориентированы прежде всего на самого многочисленного потребителя - собственника приусадебного хозяйства, фермерские хозяйства страны и стран бывшего Советского Союза также потенциально являются массовыми потребителями диагностических тест-систем. Положительные отзывы об испытаниях ИХТС и иммуночипа на практике являются предпосылкой для организации их массового производства в стране.

Частные приусадебные хозяйства являются соседями крупных производителей сельскохозяйственной продукции. Не секрет, что культура ведения хозяйства в частном секторе невысока, у частника пока нет возможности контролировать зараженность культивируемых растений фитопатогенами, а переносчики переносят инфекции на соседние крупные культурные хозяйства. Неизбежной становится необходимость повышения культуры и ответственности хозяйствования всех производителей сельскохозяйственной продукции в стране и массовое применение доступных систем диагностики инфекций растений. Существенную роль в этом должны играть районные инспекции фитосанитарного контроля и администрация на местах. Очевидно, что, чем раньше начнется этот непростой процесс, хотя бы с одной культуры, например, картофеля, который является вторым хлебом в России, тем большую экономическую и моральную прибыль приобретет население страны.

Литература

1. 1. J.S. Semancik “Viroids and Viroid-like Pathogens”, CRC Prss (1987).

2. Дрыгин Ю.Ф., Мусин С.М., Кондакова О.А., Савенков Е.И.,

Соломатин С.В.,Можаева К.А., акад. РАСХН Атабеков И.Г. «Молекулярная диагностика зараженности оздоровленных сортообразцов картофеля Российской Федерации вироидом веретеновидности клубней», Доклады РАСХН, (1996), 6, 24-25.

3. Yu. F. Drygin, S. N. Chirkov, O. A. Kondakova, R. A. Zinovkin, P. A. Ivanov,

A.N. Blintsov, E. S. Gavryushina, A. V. Zherdev, N. A. Byzova, B. B. Dzantiev,

j. G. Atabekov «High-sensitive technologies for molecular diagnostics of potato virus and viroid infections». Potato Production and Innovative Technologies (eds. A.J. Haverkort, B.V. Anisimov), Wageningen Acad.Publishers, 2007, pp.274-285.

4. Ю.Ф. Дрыгин, С.Н. Чирков, О.А. Кондакова, Р.А. Зиновкин, П.А. Иванов, A. Н. Блинцов, Е.С. Гаврюшина_, А.В. Жердев, Н.А. Бызова, Б.Б. Дзантиев, И.Г. Атабеков «Высокочувствительные технологии молекулярной диагностики вирусных и вироидной инфекций картофеля», Достижения науки и техники АПК, №7, 20-27 (2007).

5. Ю.Ф. Дрыгин, А.Н. Блинцов, А.П. Осипов, В.Г. Григоренко, И.П. Андреева, А.И. Усков, Ю.А. Варицев, Б.В. Анисимов, В.К. Новиков , И.Г. Атабеков «Высокочувствительный иммунохроматографический экспресс-метод диагностики вирумных инфекций растений на тест-полосках» Биохимия, 2009, т.74, вып. 9, 1212-1220.

6. Y. F. Drygin, A.N. Blintsov, V.G. Grigorenko, I.P. Andreeva, A.P. Osipov, Y.A. Varitzev, A.I. Uskov, D.V. Kravchenko, J.G. Atabekov «Highly sensitive field test lateral flow immunodiagnostics of PVX infection». Appl Microbiol Biotechnol (2012) 93:179-189.

7. Б.В. Анисимов «Фитопатогенные вирусы и их контроль в семеноводстве картофеля». М.: Икар, 2005.

8. I.V. Safenkova, G.K. Pankratova, I.A. Zaitsev, Y.A. Varitsev,Y.Y. Vengerov, A.V. Zherdev, B.B. Dzantiev “Multiarray on a test strip (MATS): rapid multiplex immunodetection of priority potato pathogens” Anal Bioanal Chem., DOI 10.1007/s00216-016-9463-6

Размещено на Allbest.ru