Размещено на http://www.allbest.ru

На правах рукописи

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДОВ БИОТЕХНОЛОГИИ В СЕЛЕКЦИИ ЯРОВОГО РАПСА (BRASSICA NAPUS L.)

06.01.05 - Селекция и семеноводство

Котлярова Екатерина Борисовна

Рамонь 2007

Диссертационная работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский и проектно-технологический институт рапса»

Научный руководитель:

доктор сельскохозяйственных наук Подвигина Ольга Анатольевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Буторина Анастасия Константиновна

доктор сельскохозяйственных наук Ошевнев Валерий Павлович

Ведущая организация - ФГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт масличных культур им. В.С. Пустовойта» РАСХН

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт сахарной свеклы и сахара имени А.Л. Мазлумова»

Ученый секретарь

диссертационного совета, к. с.-х. н. Путилина Л.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Рапс яровой (Brassica napus L.) - ценная масличная и кормовая культура, хорошо приспособленная к умеренному климату. В России рапс является одной из перспективных масличных культур, увеличение объемов производства семян которой позволит полнее обеспечить население растительным маслом, животноводство - кормовым белком, а промышленность - сырьем (Карпачев, 2006).

Создание новых сортов рапса, соответствующих требованиям современного производства, во многом зависит от разнообразия исходного материала, который можно создавать с помощью методов биотехнологии. Одним из них является метод получения гаплоидов из репродуктивных клеток в условиях in vitro, ускоряющий процесс формирования гомозиготных линий по сравнению с традиционными методами селекции в 5-10 раз. У ярового рапса достаточно подробно разработан метод культуры изолированных пыльников. Однако, в гетерозисной селекции на основе цитоплазматической мужской стерильности необходимо сохранение материнской цитоплазмы, что возможно только с помощью культивирования in vitro неоплодотворённых семязачатков. Кроме того, растения, полученные данным методом, свободны от некоторых вирусов и нежелательных генов, передающихся по мужской линии. Сведений о получении гаплоидных растений в культуре неоплодотворённых семязачатков ярового рапса в доступной нам литературе не выявлено. яровой рапс реституционный

Метод культуры незрелых зародышей дает возможность получать отдаленные гибриды, что играет немаловажную роль в селекции рапса, так как перенос ценных генов из других видов и родов Brassicaceae расширяет его генетический потенциал, который отличается крайней узостью.

В связи с этим в селекции рапса применение биотехнологических методов, в том числе эмбриокультуры и гаплоидии, позволяющих расширить генетический потенциал и ускорить создание новых сортов и гибридов, является актуальным.

Цель исследований - обосновать приемы культивирования in vitro неоплодотворённых семязачатков и незрелых зародышей в процессе создания нового исходного материала ярового рапса.

Задачи исследований:

1. Изучить влияние экзогенных и эндогенных факторов на индукцию гаплоидных регенерантов из неоплодотворённых семязачатков и формирование реституционных линий ярового рапса.

2. Разработать способ получения нового исходного материала ярового рапса, в том числе восстановителей фертильности, с использованием метода культуры неоплодотворённых семязачатков.

3. Изучить влияние направления скрещиваний (генотипа материнской и отцовской формы) и условий культивирования на развитие зародышей отдаленных гибридов в условиях in vitro.

4. Выявить ценные и хозяйственно-полезные признаки полученных реституционных линий и гибридных растений.

Научная новизна. Впервые установлено, что при культивировании неоплодотворенных семязачатков ярового рапса тотипотентность клеток каллуса различается, и реализация морфогенеза происходит по пути гистогенеза и органогенеза, приводящего к формированию ростовых почек и корней. В культуре незрелых зародышей морфогенез осуществляется через прямую регенерацию, ведущую к формированию ростовых побегов. Данные наблюдения имеют теоретическое значение, так как расширяют научные представления о регуляции ростовых процессов у растений рапса при воздействии стрессовых условий культуры in vitro.

Впервые разработан метод получения гомозиготных линий рапса путем индуцирования гаплоидии в культуре неоплодотворенных семязачатков in vitro, позволяющий установить влияние эндо- и экзогенных факторов на индукцию гаплоидии, определить оптимальные стадии развития эксплантов, выявить состав и последовательность чередования питательных сред на этапах стабилизации и микроразмножения гаплоидных и реституционных линий ярового рапса. Установленные параметры культивирования неоплодотворенных семязачатков ярового рапса in vitro дали возможность впервые разработать способ, позволяющий ускоренно (в 5-10 раз) получать исходный материал для гетерозисной селекции, на который подана заявка на патент «Способ получения восстановителей фертильности ярового рапса».

Впервые модифицирован состав питательной среды для получения гибридов от межвидовых и межродовых скрещиваний путем прямой регенерации из незрелых зародышей в условиях in vitro. Установлен оптимальный срок введения зародышей изучаемых отдалённых гибридов семейства Brassicaceae в культуру. Использование метода эмбриокультуры позволило получить межродовые гибриды между рапсом яровым и горчицей белой при использовании последней в качестве опылителя, что представляет определенный теоретический интерес для отдаленной гибридизации рапса.

Практическая значимость результатов исследований. С помощью культуры неоплодотворенных семязачатков получено 5 реституционных линий ярового рапса, которые были переданы в лабораторию селекции рапса ВНИПТИР и включены в её научно-исследовательскую работу.

Данные линии представляют ценность для использования в гетерозисной селекции в качестве восстановителей фертильности и как перспективный исходный материал для селекции ярового рапса на скороспелость, качество семян и масла, устойчивость к полеганию и другие признаки.

Полученный в ходе применения эмбриокультуры гибридный материал может использоваться в практической селекции и дальнейших фундаментальных и прикладных исследованиях. Среди полученных гибридов выявлены образцы, устойчивые к тле и с желтой семенной оболочкой.

Разработанные в процессе исследований методические подходы могут использоваться в учебных программах по биологии и селекции в высших и средних учебных заведениях и в различных областях биотехнологии.

Апробация работы. Основные положения исследовательской работы доложены и обсуждены на школах-семинарах молодых учёных Липецкой области: «Актуальные проблемы современной науки» (Липецк, 2004), «Актуальные проблемы естественных наук и их преподавания» (Липецк, 2005, 2006); III и IV Международных конференциях молодых учёных и специалистов «Актуальные вопросы селекции, технологии и переработки масличных культур» (Краснодар, 2005, 2007), школе молодых учёных «Экологическая генетика культурных растений» (Краснодар, 2005), Международной научно-практической конференции «Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели» (Липецк, 2005), Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы преподавания молекулярной биологии, биотехнологии и вирусологии в высших педагогических учебных заведениях» (Орехово-Зуево, 2006), I (IХ) Международной конференции молодых ботаников (Санкт-Петербург, 2006), Международной научной конференции «Проблемы биологии, экологии и образования: история и современность» (Санкт-Петербург, 2006), IX Международной научно-практи-ческой экологической конференции «Современные проблемы популяционной экологии» (Белгород, 2006), на межвузовских научных конференциях преподавателей, аспирантов и студентов (Липецк, 2003 - 2006 гг.) и заседаниях Учёного совета ГНУ ВНИПТИР (Липецк, 2004 - 2007 гг.).

На защиту выносятся следующие положения:

1. Экспериментальное обоснование влияния эндогенных и экзогенных факторов на индукцию гаплоидии в культуре неоплодотворенных семязачатков в условиях in vitro, позволяющее ускоренно получать новый исходный материал ярового рапса.

2. Способ создания реституционных линий рапса, основанный на индукции гаплоидии из неоплодотворенных семязачатков, стабилизации, микроразмножении и диплоидизации полученных регенерантов.

3. Параметры эмбриокультуры, заключающиеся в определении влияния направления скрещиваний и оптимизации условий культивирования зародышей отдаленных гибридов.

4. Ценные признаки полученных гибридных растений и реституционных линий.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 128 страницах и состоит из введения, 4 глав, выводов и рекомендаций для практического использования. Работа иллюстрирована 53 рисунками, включая фотоснимки, и содержит 19 таблиц. Библиография включает 222 литературных источника, из которых 135 на иностранных языках.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, кроме того, 3 работы находятся в печати.

Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории биотехнологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт сахарной свеклы и сахара имени А.Л. Мазлумова».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал, методика и условия проведения опытов

Исходный материал. Настоящая работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском и проектно-технологическом институте рапса (г. Липецк) в 2003 - 2006 гг. в рамках тематических планов 04.03.04.01.03 «Создать исходный материал для гетерозисной селекции на основе ЦМС с применением метода культуры неоплодотворенных семязачатков рапса» и 04.03.04.01.04 «Создать новый исходный материал от межвидовых и межродовых скрещиваний растений семейства Brassicaceae методом эмбриокультуры». Цитоэмбриологические исследования проводились в лабораторных условиях отдела биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института сахарной свёклы и сахара им. А.Л. Мазлумова (п. Рамонь, Воронежской области).

В качестве исходного материала для индуцирования гаплоидии использовались сорта ярового рапса (Ратник, Липецкий, Hanna, Galaxy), полученные на их основе самоопылённые линии на стерильной цитоплазме и гибриды с генами восстановления фертильности.

С целью получения отдаленных гибридов в полевых и тепличных условиях проводили реципрокные межвидовые скрещивания рапса (Brassica napus L., 2n=38, F₅ (Харьковская 6 Hanna)) с горчицей сарептской (B. juncea (L.) Сzern., 2n=36, сорт ВНИИМК 13) и межродовые скрещивания рапса (F₃ (6B (CHk198 L159) (ВНИИМК 162 ВНИИМК 109)) с горчицей белой (Sinapis alba L., 2n=24, сорт R 166), а также сурепицы яровой (B. campestris L. var. oleifera, 2n=20, сорт Восточная) и декоративной капустой (B. oleracea var. capitata, 2n=18).

Условия и методика проведения опытов. Индуцирование гаплоидии. Растения ярового рапса выращивались в теплице и на полях ВНИПТИР, расположенных в 10 км к северу от г. Липецка. Семязачатки изолировали из 1-30 бутонов от первого цветка, длиной от 2 до 6 мм, с центральной кисти и побегов первого и второго порядков. Введение в культуру проводилось в летний период с растений, выращенных в поле, в зимне-весенний - с доноров, выращенных в теплице. Закладка опытов, фенологические наблюдения, уход за посевами, гибридизация проводились согласно общепринятым методикам (Пустовойт, 1967).

Для стерилизации бутонов ярового рапса применяли растворы веществ: хлорамин Б и Domestos в различных концентрациях, анолит (рН=6) и смесь анолита с католитом (рН=7 и рН=9). Экспозиция бутонов в исследуемых растворах составляла 10 мин.

Извлечение семязачатков из завязи и введение их в культуру проводили в стерильных условиях пылезащитного бокса под бинокулярным микроскопом МБС-9 (кратность увеличения 12,8). Всего культивировалось более 10 тыс. неоплодотворённых семязачатков.

В исследованиях использовалась общепринятая техника приготовления и стерилизации питательных сред (Бутенко, 1964, 1999). Для культивирования эксплантов применялись среды Мурасиге-Скуга (MS) (Murashige, Skoog, 1962) и Гамборга (В₅) (Gamborg, Eveling, 1968). В питательную среду добавляли витамины по Уайту (White, 1963), 100 мг/л мезоинозита, 20-40 г/л сахарозы. Индукция гаплоидных растений достигалась добавлением гормонов: 6-бензиламинопурина (6-БАП), гиббереллина (ГК), кинетина, -нафтилуксус-ной кислоты (НУК), индолилуксусной кислоты (ИУК) в различных концентрациях (0,01 - 3 мг/л) и сочетаниях. рН среды поддерживался на уровне 5,8-6,0. В качестве контроля применяли безгормональную питательную среду.

Обработку материала пониженной температурой (+4-6 ^оС) при экспозиции 1-3 суток проводили в бытовом холодильнике.

Культивирование неоплодотворённых семязачатков проводили в термальной комнате на свету при 16-часовом фотопериоде и в темноте, при температуре 23 - 26 єС, освещённости 5 тыс. люкс и влажности воздуха 70 %.

Перевод гаплоидных регенерантов на диплоидный уровень в условиях in vitro проводили на основе безгормональной питательной среды с добавлением 0,005 - 0,01 % водного раствора колхицина в течение 2-х суток в условиях темноты. Затем растения пересаживали на питательную среду, содержащую 0,25 мг/л кинетина и культивировали 1 месяц на свету. Определение уровня плоидности производили методом подсчёта числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и числа хромосом в точках роста. Хорошо развитые пробирочные растения пересаживали в теплицу в смесь песка и почвы в соотношении 1:3 и накрывали стеклянными стаканчиками для прохождения акклиматизации.

Жирнокислотный состав масла определялся в биохимической лаборатории отдела селекции ВНИПТИР н.с. Германенко Г.В. по методике Демьянчук Г.Т. (1988) методом газожидкостной хроматографии по ГОСТ 30089-93, содержание глюкозинолатов в семенах - экспересс-методом (ГОСТ 9824-87, п. 3.5).

Эмбриокультура. Незрелые зародыши межвидовых и межродовых гибридов вводили в культуру in vitro на разных стадиях развития (5, 7, 10, 13 и 17 дни после опыления). Культивирование зародышей проводили на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением 30 г/л сахарозы, БАП, ГК по 0,2 мг/л, 0,1 мг/л НУК и 300 мг/л гидролизата казеина.

Морфологическое описание гибридов осуществляли по методике ВИР (Корнейчук, 1983). Для цитологического изучения на всех этапах работы использовались общеизвестные методики (Паушева, 1988). Цитологические препараты просматривали на микроскопах МБИ-6, МБИ-15, Ienaval. Фотографирование препаратов и объектов исследования осуществляли с помощью фотоаппарата Olympus 400 Digital на микроскопах МБИ-15 и Ienaval (окуляр 8-10^х, объектив - 12,5-40^х).

Повторность опытов двух-трехкратная. При обработке экспериментальных данных использовали однофакторный и двухфакторный дисперсионный анализ (Доспехов, 1985), программы Excel и Statistica v. 6.0.

ИНДУЦИРОВАНИЕ ГАПЛОИДИИ ИЗ НЕОПЛОДОТВОРЁННЫХ СЕМЯЗАЧАТКОВ ЯРОВОГО РАПСА В УСЛОВИЯХ IN VITRO

Влияние эндогенных факторов на индукцию гаплоидии

Влияние генотипа. Определяющим из комплекса лимитирующих факторов в культуре неоплодотворенных семязачатков являлся генотип растения-донора. Проведенные исследования показали, что реализация морфогенеза происходила по пути гистогенеза и органогенеза, приводящего к формированию ростовых почек и корней.

При введении в культуру семязачатки имели светло-зеленый цвет, затем становились матово-белыми, а в дальнейшем бурыми, и 37 % образовывали каллусы небольшого размера молочного или желтого цвета. При этом обнаруживалось образование двух типов каллусной ткани. Каллус первого типа (неморфогенный) формировался на 10 - 14-й день культивирования и представлял собой водянистую массу клеток рыхлой консистенции и жёлтого или мутно-серого цвета. На таких каллусах наблюдался некроз тканей или ризогенез, и они не были способны к регенерации.

Каллус второго типа (морфогенный) становился визуально заметным на 18 - 20-й день культивирования и имел белую или бледно-жёлтую окраску, плотную консистенцию и зернистую или глобулярную структуру. Массовое формирование и развитие каллуса наблюдали за период с 30-го по 45-й день после изоляции, что согласуется с данными других исследователей (Славова, Рафаилова, 1991). В процессе культивирования в нем образовывались проэмбриогенные массы или меристематические зоны. В дальнейшем из этих меристематических очагов путем последующей дифференциации формировались сначала ростовые почки, а затем растения.

Следует отметить, что в 98 % случаев наблюдался процесс развития вегетативной почки (вегетативный геммогенез). Формирующиеся регенеранты имели слабо развитый гипокотиль с двумя-тремя узкими листовыми пластинками бледно-зеленого цвета. Отмечались единичные случаи генеративного геммогенеза, когда растение высотой не более 2,5 см образовывало бутоны.

Из 16 изученных генотипов ярового рапса 15 были способны к каллусообразованию, 10 обладали способностью к индукции ростовых почек и только у пяти генотипов почки развивались в растения.

Частота индукции каллусных структур колебалась от 0 до 7,10 % в зависимости от генотипа донорского растения. У сортов и самоопыленных линий со стерильной цитоплазмой выявили самую низкую частоту каллусообразования, которая составила 1,15 % и 2,43 %, и регенерации (1,67 % и 3,85 % соответственно). Сорта и линии более чем в 2 раза уступали материалу гибридного происхождения по количеству ростовых почек (12,46 %). Гибриды обладали наибольшей склонностью к индукции каллуса и регенерации проростков, составивших в среднем 3,55 % и 4,72 %. Кроме того, у материала гибридного происхождения были обнаружены максимальные значения частоты образования каллуса (7,1 %) у генотипа № 3, ростовых почек (29,41 %) у № 7 и регенерантов (17,65 %) у № 8 (табл. 1).

Таблица 1 - Влияние генотипа донорского материала на регенерационную способность неоплодотворённых семязачатков ярового рапса (2003 - 2005 гг.)

№ материала	Характеристика материала	Введено семязачатков, шт.	Получено каллусов	Сформировано из каллусов
				Ростовых почек	проростков
			шт.	%	шт.	%	шт.	%
1.	Гибриды	1055	43	4,08	0	0	0	0
2.		1048	28	2,67	2	7,14	0	0
3.		507	36	7,10	4	11,11	3	8,33
4.		936	28	2,99	3	10,71	0	0
5.		585	8	1,37	1	12,5	0	0
6.		1119	19	1,70	1	5,26	0	0
7.		811	17	2,34	5	29,41	2	11,76
8.		551	34	6,17	8	23,53	6	17,65
9.	Сорта	656	15	2,29	2	13,33	1	6,67
10.		541	6	1,11	0	0	0	0
11.		762	9	1,18	1	11,11	0	0
12.		298	0	0	0	0	0	0
13.	Линии	443	13	2,94	3	23,08	2	15,38
14.		234	2	0,85	0	0	0	0
15.		222	9	4,05	0	0	0	0
16.		375	7	1,87	0	0	0	0
НСР0,05 = 0,03	НСР0,05= 0,25	НСР0,05= 0,23

Максимальную частоту регенерации среди линий наблюдали у № 13 - полученной на основе сорта Hanna самоопыленной линии со стерильной цитоплазмой (15,38 %). Сорт Hanna (№ 10) также проявил способность к индукции морфогенного каллуса и образованию ростовых почек (11,11 %). Наибольшей склонностью к индукции гаплоидии среди сортов ярового рапса обладал № 9 (Липецкий) - 6,67 %.

Часть генотипов (№ 1, 10, 14, 15, 16) формировала нерегенерационный каллус. Многие генотипы, например, № 4, 5, 11, обнаруживали относительно высокий выход ростовых почек (10,71 %, 12,5 % и 11,11 % соответственно), однако, при пересадке их на среду для регенерации дальнейшего развития отмечено не было. Таким образом, у ярового рапса способность к каллусообразованию и регенерации растений в культуре неоплодотворённых семязачатков зависела от генотипа донорского растения.

Маркерные признаки растений-доноров. Результаты исследований показали, что гетеростилия третьего и четвертого типов и недоразвитость пыльников встречаются у генотипов №№ 3, 7, 8, 13, обладающих лучшей регенерационной способностью в культуре неоплодотворенных семязачатков in vitro. Частота встречаемости аномальных форм цветка колебалась в зависимости от происхождения материала и достигала 73% у линии № 13, в то время как в норме она составляла не более 35,3 %. Кроме того, у гибрида № 8 отмечались случаи срастания соседних цветоножек и уменьшение их длины с 2,1 см до 1,2 см, т.е. почти в 2 раза.

Цитологические наблюдения показали, что данный селекционный материал отличался наличием изменений при формировании мужских гамет. Аномалии проявлялись в формировании микроспор, где были отмечены триады и тетрады с аномальным развитием. Также было отмечено наличие пыльцевых зерен измененной формы и увеличенного размера до 49,5 мкм, что превышало размеры нормальных зерен примерно в 1,5-2 раза.

Проведенные исследования позволили выявить зависимость регенерационной способности селекционного материала от количества аномальных пыльцевых зерен. Так, у гибрида № 3 при наличии 3,5 % аномальных пыльцевых зерен регенерационная способность достигала 8,33%, а у гибрида № 8 данные показатели составили соответственно 32,9 % и 17,65 % (рис. 1).

Рис. 1. Зависимость регенерационной способности от количества нарушений при формировании мужских гамет у растений-доноров

Следовательно, морфологические изменения формы цветка и генеративных органов, а также качественные признаки пыльцевых зерен и микроспор можно использовать как маркерные признаки при отборе донорских генотипов для индуцирования гаплоидов.

Зависимость регенерационной способности семязачатков от длины бутонов и расположения ветвей на побеге. Другим существенным фактором, влияющим на регенерационную способность неоплодотворенных семязачатков является стадия развития зародышевого мешка при введении эксплантатов. Анализ полученных результатов показал, что морфогенетическому развитию в большей степени подвержены семязачатки, изолированные из бутонов длиной 2,0 - 4,0 мм, частота образования каллуса у которых составляла 3,3 %, а выход регенерантов колебался от 0,3 до 0,7 %.

Результаты исследований показали, что семязачатки из бутонов с центральной кисти обладали максимальной способностью к каллусообразованию (5,7 %) и регенерации (1,3 %). Экспланты из бутонов с ветвей первого порядка, образовывали в два раза меньше каллусных структур (2,6 %) и регенерантов (0,7 %), а бутоны с побегов второго порядка практически не были способны к регенерации. Возможно, полученные результаты связаны с повышенной активностью всех физиологических процессов, происходящих в основных побегах ярового рапса.

Таким образом, наибольшей способностью к индукции новообразований обладают семязачатки, эксплантированные с бутонов центральной кисти основного побега ярового рапса длиной 2 - 4 мм. Данные наблюдения следует использовать при введении в культуру эксплантов с большей регенерационной способностью.

Влияние экзогенных факторов на индукцию гаплоидии

Подбор оптимального стерилизующего агента. Результаты сравнения действия различных стерилизующих агентов показали, что использование 10 %-х растворов хлорамина и Domestos обеспечивало 100 % стерильность материала. Однако, при этом отмечено угнетение развития регенерантов. Наибольшее число регенерантов (8,0 %) и их нормальное развитие наблюдали при стерилизации 7 %-ным раствором Domestos (табл. 2).

Таблица 2 - Эффективность стерилизации бутонов различными дезинфицирующими веществами при введении неоплодотворённых семязачатков ярового рапса в культуру in vitro (2004-2005 гг.)

Дезинфицирующий раствор	Концентрация раствора, %	Введено в культуру семязачатков, шт.	Инфицировано семязачатков, %	Получено регенерантов, %	Развитие регенерантов (по 5-бальной шкале)
			Грибной инфекцией	Бактерииальной инфекцией
Хлорамин	7	123	9,8	21,1	0,8	3
	10	119	0	0	2,5	3
Domestos	5	120	0	12,5	4,2	3
	7	125	0	0	8,0	5
	10	198	0	0	5,1	4
Анолит	рН=6	118	0	0	12,7	5
Анолит+католит	рН=7	200	0	0	21,0	5
	рН=9	124	0	0	14,5	5
Итого:	1278	0,9	6,9	8,1

Выявлено, что количество семязачатков, поражённых бактериальной инфекцией, составило 6,9 % против 0,9 % эксплантов, подверженных воздействию грибной инфекцией.

Обработка бутонов ярового рапса раствором анолита и смесью анолита с католитом не только уничтожила инфекцию, но и стимулировала развитие семязачатков. При стерилизации бутонов смесью анолита с католитом (рН=7) у каллусов получили максимальное количество регенерантов - 21,0 %. При этом образование каллуса и ростовых почек наблюдалось на 7 - 10 дней раньше, чем при использовании других дезинфицирующих веществ, что согласуется с отмеченным другими исследователями благоприятным влиянием на растения активированной воды (Васильченко, 2005).

Таким образом, при культивировании неоплодотворённых семязачатков in vitro наряду с 7 %-ным раствором Domestos эффективными дезинфицирующими агентами являются экологически чистые электроактивированные водные растворы анолит и смесь анолита с католитом (рН=7), ускоряющие развитие неоплодотворённых семязачатков ярового рапса в культуре in vitro.

Влияние сроков введения в культуру и предобработки бутонов на индукцию гаплоидии. При изучении регенерационной способности неоплодотворенных семязачатков ярового рапса, выращенного в условиях теплицы и поля, выявлено, что количество каллусных структур в 2004 - 2005 гг. колебалось от 5, 6 % до 0,58 % при введении эксплантов с донорских растений, вегетировавших в поле. Условия теплицы были более стабильными, в связи с чем и частота каллусообразования колебалась незначительно и составляла в среднем 2,34 %.

Наибольшее количество проростков (0,26 %) было получено в 2004 г. при эксплантации семязачатков с растений, При зимне-весенней эксплантации частота образования проростков была меньше и составляла 0,03 %, в 2005 г. - 0,19 %.

Экспериментальные данные по обработке неоплодотворённых семязачатков холодом в течение 24 часов показали максимальную склонность эксплантов к образованию каллусов - до 61,1 % и наибольшее количество регенерантов (3,1 %). Частота регенерации находилась в прямой зависимости от экспозиции обработки и понижалась с 3,1 % (1 день) до 0,8 % (3 день воздействия). Следовательно, обработка холодом в течение суток повышала морфогенную способность семязачатков.

Зависимость регенерационной способности неоплодотворённых семязачатков от условий культивирования. Еще одним экзогенным фактором, от которого зависит эффективность получения гаплоидных растений в культуре in vitro, является состав питательной среды.

Максимальная частота каллусообразования (5,7 %) была получена при добавлении в питательную среду 20 % сахарозы. Увеличение концентрации сахарозы до 30 г/л снижало частоту каллусообразования до 1,2 %, а наличие в питательной среде 40 г/л сахарозы оказывало ингибирующий эффект, что согласуется с данными других исследователей (Zhou, Yang, 1981).

При изучении влияния минерального состава среды на регуляцию роста и развития культивируемых семязачатков ярового рапса не было выявлено достоверных различий по частоте каллусообразования на средах с минеральной основой В₅ и MS при 5 %-ном уровне значимости по результатам дисперсионного анализа двухфакторного опыта (рис. 3).

Размещено на http://www.allbest.ru

Рис. 3. Действие гормональных добавок на частоту каллусообразования в зависимости от минерального состава среды

В результате исследований было выявлено, что наибольшая частота образования каллуса (5,81 %) и достоверные различия по сравнению с контролем наблюдались в варианте № 5 питательной среды MS с добавлением 0,3 мг/л 6-БАП, 0,01 мг/л ИУК и 0,3 мг/л ГК. На остальных вариантах сред частота каллусообразования существенно не превышала стандарт и находилась на одном с ним уровне. В связи с этим в дальнейших исследованиях применялась среда с минеральной основой MS.

Изучение гормонального состава питательной среды показало, что наибольшая способность к каллусообразованию (15 %) и достоверные различия по сравнению с контролем наблюдались в варианте № 21 питательной среды (табл. 3).

Таблица 3 - Влияние ростовых веществ в питательной среде на каллусогенез ярового рапса в культуре неоплодотворённых семязачатков (2004 - 2005 гг.)

Вариант сред	Соотношение БАП:кин:ИУК:ГК:гидр.каз.:2,4-Д	Введено семязачатков, шт.	Образование каллуса
			шт.	%
1.(st)	Без гормонов	561	2	0,36
13	1: 0,1 : 0 : 0,5 : 0 : 0	300	1	0,33
14	2: 0,1 : 0 : 0,5 : 0 : 0	300	0	0
15	3 : 0,1 : 0 : 0,5 : 0 : 0	300	0	0
16	1 : 0,1 : 0,01 : 0,5 : 0 : 0	300	16	5,33
17	2 : 0,1 : 0,01 : 0,5 : 0 : 0	300	9	3,00
18	3 : 0,1 : 0,01 : 0,5 : 0 : 0	300	4	1,33
19	0,5 : 0,1 : 0,1 : 0 : 100 : 0	200	2	1,00
20	0,5 : 0,1 : 0,1 : 0 : 300 : 0	240	2	0,83
21	0 : 1 : 0,1 : 1 : 10 : 0	200	30	15,00
22	0 : 1 : 0,1 : 1 : 0 : 0	140	10	7,14
23	0,5 : 1 : 0,5 : 0,5 : 0 : 0,5	215	3	1,40
24	1 : 0,5 : 1 : 1 : 0 : 1	244	2	0,82
25	0,5 : 1 : 0,5 : 0,5 : 0 : 0,1	680	28	4,12
26	0 : 1 : 0,1 : 0,5 : 0 : 0,5	275	5	1,82
НСР0,05=4,03

Только морфогенные каллусы, образовавшиеся на средах № 16 и 23 - 26 обладали способностью к формированию ростовых почек. Максимальное количество ростовых почек (71,4 %) формировалось на питательной среде (вариант № 25) с превышением концентраций цитокининов по отношению к ауксинам более, чем в 2 раза (1,5 : 0,6).

Оптимальной для индукции проростков оказалась среда № 25, частота регенерации на которой составила 58,8 % (табл. 4).

Таблица 4 - Формирование регенерантов из каллусных структур в зависимости от состава питательной среды (2004 - 2006 гг.)

Вариант среды, №	Число каллусных образований, шт.	Получено	Характеристика состояния
		Ростовых почек	регенерантов из ростовых почек
		шт.	%	шт.	%
1.(st)	2	0	0	0	0	-
16	16	5	31,3	0	0	Бесцветные почки, нет развития
23	3	2	66,7	1	50,0	Проростки с листьями
24	2	1	50,0	1	100,0	Витрифицированные проростки с широкими листьями и утолщенным стеблем
25	28	20	71,4	11	58,8	Нормально развивающиеся проростки с листьями
26	5	2	40,0	1	50,0
Итого:	54	30	64,5	14	25,0	-

Бульшее количество кинетина и меньшая концентрация 6-БАП (превосходящего кинетин по активности) в составе данной среды способствовало росту регенерантов и их нормальному развитию из ростовых почек.

При пересадке на среду для регенерации не все ростовые почки, полученные в культуре неоплодотворенных семязачатков, развивались в растения. Частота регенерации широко варьировала в зависимости от генотипа и составляла от 0 до 100 %.

Регенеранты с признаками обводнения погибали в течение 2-х недель от появления проростка. Больше 50 % растений с изменённым морфотипом обладало способностью к образованию вторичных регенерантов на разросшихся тканях гипокотиля. Ростовые почки формировались в количестве от 1 до 7 на первичный регенерант. При пересадке вторичных регенерантов на безгормональную среду В₅ они развивались в нормальные растения.

При изучении светового режима культивирования эксплантов выявлено, что в темновых условиях активнее, чем на свету проходило формирование каллусов - 59,5 % и 44,3 % соответственно. Однако при этом наблюдалось угнетение развивающихся эксплантов, а количество регенерантов сокращалось в 2,2 раза, что составляло 1,0 %.

Таким образом, процесс воспроизведения гаплоидных растений в условиях in vitro определяется прежде всего на генетическом уровне, но реализуется в зависимости от конкретных физиологических условий и различных по действию индуцирующих факторов.

ГАПЛОИДИЯ КАК УСКОРЕННЫЙ МЕТОД СОЗДАНИЯ ГОМОЗИГОТНЫХ ЛИНИЙ ЯРОВОГО РАПСА

Формирование гаплоидных линий. Исследования показали, что на начальных стадиях роста гаплоидные регенеранты отличались слабым развитием и жизнеспособностью вследствие одинарного набора хромосом. Гибель регенерантов на этой стадии составляла в зависимости от генотипа растений-доноров до 62 %.

Культивирование гаплоидных проростков с признаками витрификации на средах с гормонами не приводило к формированию нормальных растений, а чаще всего влекло за собой их гибель. Для формирования гаплоидных линий многими исследователями было предложено проведение этапа стабилизации, (Таратонов, 1999). Согласно нашим исследованиям, использование чередования гормональной и безгормональной сред позволяло регенерантам приобрести способность образовывать пазушные побеги, благодаря чему количество регенерантов гибрида № 3 увеличилось от 3 до 32 растений к 4 пассажу.

Установлено, что для нормально развитых гаплоидных растений этап стабилизации заключался в чередовании следующих сред: гормональная - безгормональная - гормональная. Для слабо развитых или витрифицированных адвентивных побегов необходимо сначала культивирование на безгормональной среде, а затем на гормональной.

Доказательством стабилизации и выравненности гомозиготных линий является анализ плоидности. У каждого из полученных регенерантов в 100 клетках была определена длина замыкающих клеток устьиц и подсчитано число хлоропластов в них. Установлено различие в размерах замыкающих устьичных клеток у растений с разным уровнем плоидности. Отношение длины замыкающих клеток устьиц листа гаплоидов к клеткам ди- и триплоидной форм составило 1 : 1,58 и 1 : 2,21 соответственно.

В результате подсчёта числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц выявлено, что у гаплоидных растений встречалось от 8 до 11 хлоропластов на две замыкающие клетки устьица, у диплоидных - от 12 до 14. У триплоидных форм отмечалось более 14 хлоропластов (табл. 5).

Таблица 5 -Число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц листа и длина клеток у растений ярового рапса при различных уровнях плоидности

Уровень плоидности	Количество хлоропластов, шт.	Длина замыкающих устьичных клеток, мкм
	Среднее значение	Мини-максимальные средние
Гаплоидный (n)	9,8 ± 1,45	8,3 - 11,2	14,6 ± 1,12
Диплоидный (2n)	13,0 ± 1,05	11,9 - 14,0	23,1 ± 1,87
Триплоидный (3n)	15,2 ± 1,10	14,1 - 16,2	32,2 ± 1,65

Кроме того, у гаплоидных растений наблюдалось возникновение деформированных устьичных клеток и отсутствие в них хлоропластов.

Данные признаки можно использовать в качестве морфологических маркеров для отбора гаплоидных регенерантов на самых ранних этапах развития, когда анализ хромосомного набора крайне затруднителен.

Диплоидизация гаплоидов и формирование реституционных линий. Для создания гомозиготных линий, способных участвовать в селекционном процессе, гаплоидные растения необходимо перевести на более высокий уровень плоидности. В связи с этим изучалась возможность колхицинирования в культуре in vitro.

Исследования показали, что выживаемость регенерантов, подвергнутых воздействию колхицином в зависимости от генотипа составляла от 50 % до 100 %. Для предотворащения возврата регенерантов на гаплоидный уровень их культивировали на среде с кинетином. Наиболее развитые диплоидные растения размножали на среде с БАП, кинетином и гиббереллином до необходимого количества и укореняли на среде с 1 мг/л НУК. Процесс корнеобразования длился 2-4 недели, при этом частота формирования корней зависела от генотипа и колебалась в пределах 35,6 - 97,4 %. Затем растения переносили в грунт теплицы или в полевые условия.

В результате проведенных нами исследований был разработан метод получения гомозиготных линий ярового рапса на основе индуцирования гаплоидии в культуре неоплодотворенных семязачатков, заключающийся во введении неоплодотворенных семязачатков в культуру, формировании каллуса и регенерации на нем ростовых почек, стабилизации и микроразмножении гаплоидов, их колхицинировании in vitro (диплоидизации); стабилизации, микроразмножении полигаплоидов и корнеобразовании; пересадке в грунт теплицы, акклиматизации и высадке в полевые условия.

Способ получения восстановителей фертильности ярового рапса. В результате применения метода культуры неоплодотворенных семязачатков было получено 5 реституционных линий, в том числе линии РЛ 7 и РЛ 8, донорские растения которых имели стерильную цитоплазму типа Polima и гены восстановления фертильности. В условиях теплицы и поля полученные растения цвели, и после опыления пыльцой линии РЛ 8 формы, обладающей цитоплазматической мужской стерильностью, завязались семена. Эффективность гибридизации при этом достигала 65,3 %.

Семена реституционных линий были высеяны в теплице, и у растений в период цветения проведен анализ фертильности. Установлено, что фертильность донорского растения № 8 повысилась в результате индуцирования гаплоидии в культуре неоплодотворенных семязачатков in vitro с 78,7 % до 94,5 %, что свидетельствует о том, что линия РЛ 8 может быть использована в качестве восстановителя фертильности в гетерозисной селекции ярового рапса.

Полученные данные позволили разработать способ получения восстановителей фертильности рапса, состоящий из следующих этапов:

1. Получение гомозиготных линий ярового рапса от исходных форм, обладающих свойством восстановления фертильности, с помощью индуцирования гаплоидии посредством культуры неоплодотворенных семязачатков in vitro. 2. Посев семян полученных реституционных линий в поле и обычный уход за растениями. 3. Опыление форм с цитоплазматической мужской стерильностью пыльцой реституционных линий. 4. Посев полученных семян в поле и анализ фертильности пыльцевых зерен.

Характеристика полученных реституционных линий

Каждую линию по средним значениям показателей в зависимости от того, насколько они превышают значения донорских растений, оценивали по пятибалльной системе. В результате выявили, что по всем исследованным элементам структуры урожая выделилась линия РЛ 8 с максимальным количеством баллов (44). Минимальную оценку получила РЛ 7 (29 баллов), значения которой резко колебались по разным показателям.

Сравнение реституционных линий, полученных в культуре неоплодотворенных семязачатков, с донорами по элементам структуры урожая показало уменьшение высоты полученных растений примерно в 1,5 раза, повышающее устойчивость растений к полеганию с 3 до 5 баллов.

Кроме того, у полученных линий ярового рапса интерес представляло изучение качества масла и семян. Основным требованием, предъявляемым к современным сортам, принимаемым в производство пищевого рапсового масла, является содержание менее 0,6 % глюкозинолатов в семенах и снижение практически до нуля эруковой кислоты в масле.

Биохимический анализ семян полученных линий выявил, что у трех из пяти линий (РЛ 3, РЛ 8, РЛ 9) содержание глюкозинолатов не превышает 0,6 %. При этом две из них (РЛ 3, РЛ 8) являются и низкоглюкозинолатными, и безэруковыми, т.е. принадлежат к «00» типу и имеют увеличенное содержание линолевой кислоты (23,7 и 20, 0 % соответственно) по сравнению со стандартом (18,5 %) и пониженное содержание линоленовой кислоты по сравнению с сортом-стандартом Ратник (9,4 %) - 8,4 и 8,1% соответственно. Помимо этого, у данных линий суммарное содержание олеиновой и линолевой кислот составляет более 80,0 %, что представляет большой интерес для селекции на качество пищевого масла. Кроме того, линия РЛ 8 отличалась повышением содержания олеиновой кислоты по сравнению с гибридом-донором с 63,1 % до 66,0 %.

Линия ГЛ 9 с содержанием эруковой кислоты 39,9 % может быть рекомендована в качестве исходного материала для селекции высокоэруковых сортов рапса для производства биотоплива, где высокое содержание эруковой кислоты важно для устойчивости топливной смеси к окислению (Дубовская и др., 2005).

Таким образом, полученные линии являются перспективным исходным материалом для создания высокопродуктивных линейных сортов типа «00», а также для использования в гетерозисной селекции.

ЭМБРИОКУЛЬТУРА В УСЛОВИЯХ IN VITRO

Влияние направления скрещивания на выживаемость гибридных зародышей в условиях in vitro

Основной задачей межвидовых и межродовых скрещиваний являлся перенос рапсу признаков крупности семян и желтой окраски семенной оболочки, а также устойчивости к альтернариозу.

Получение истинных межродовых гибридов горчицы белой с рапсом в полевых условиях затруднено. Проведенные исследования показали, что эффективность гибридизации находилась на низком уровне и достигала 1,2 % в прямом и 0,2 % в обратном скрещивании. Предполагается, что низкая завязываемость семян обусловлена несовместимостью пыльцы и рылец (Ripley, Arnison, 1990). Применяя культуру незрелых зародышей, удалось получить гибридные проростки (1,9 %) при использовании рапса в качестве материнской формы, в обратных скрещиваниях регенерация гибридных зародышей не отмечалась. Морфогенез осуществлялся через прямую регенерацию, ведущую к формированию ростовых побегов.

Скрещивания рапса ярового с горчицей сарептской в полевых условиях проходили более успешно, но эффективность гибридизации находилась на невысоком уровне - 5,6 % и 1,7 % в обратных скрещиваниях.

Увеличить жизнеспособность зародышей в 1,8 раза в прямом и в 2,9 раза в обратном скрещивании удалось с применением эмбриокультуры. При использовании рапса в качестве отцовского компонента скрещивания средняя частота образования проростков (16,4 %) была в 5,3 раза больше, чем в прямых скрещиваниях (3,1 %). Кроме того, в обратных скрещиваниях было получено 33,3 % растений с гибридным морфотипом, что составило 4 растения из 12.

Таким образом, в скрещиваниях рапса с горчицей белой наиболее эффективным оказалось культивирование гибридных зародышей от прямых скрещиваний, а с горчицей сарептской - от обратных скрещиваний.

Влияние возраста зародышей и условий культивирования на процесс регенерации

Результаты проведенных исследований показали, что на развитие незрелых зародышей в культуре in vitro оказывает влияние целый комплекс лимитирующих факторов, одним из которых является возраст эксплантов. Недифференцированные гибридные 5-дневные зародыши (ранняя глобулярная стадия) не прорастали на питательной среде ни в одной из комбинаций скрещивания. Наиболее эффективным было введение в культуру недоразвитых зародышей на 10 - 17 дни после опыления.

Для скрещиваний B. napus Ч B. juncea наибольшее количество регенерантов было получено при эксплантировании зародышей через 13 дней после опыления (25 %). В остальных комбинациях скрещивания у зародышей, изолированных на 17 день после опыления, наблюдалась наибольшая частота регенерации как в скрещиваниях рапса ярового с горчицей белой (3,5 %), так и с горчицей сарептской (54,5 %) (рис. 4).

Размещено на http://www.allbest.ru

Количество дней после опыления

Рис. 4. Влияние возраста зародышей на их жизнеспособность в условиях in vitro (2005-2006 гг.)

Максимальная частота регенерации (60 %) была получена у зародышей того же возраста от скрещивания сурепицы яровой и капусты. Данные скрещивания, как и предыдущие, также применялись для получения желтосемянных форм рапса посредством его ресинтеза и увеличения генетического разнообразия внутри рода Brassica. Применение эмбриокультуры в данном случае увеличило жизнеспособность гибридных зародышей, так как эффективность гибридизации была небольшой и составляла всего 3,5 %. Следовательно, на развитие оплодотворенных семязачатков в культуре in vitro большое влияние оказывал возраст экспланта.

При изучении состава питательной среды было установлено, что большое количество цитокининов в варианте среды № 2 (6-БАП - 0,3 мг/л, кинетин -0,1 мг/л) снижало частоту регенерации до 1,1 % и количество нормально развитых проростков - до 0,7 %.

Добавление НУК и ГК стимулировало регенерацию 4,5 % зародышей. Уменьшение концентрации 6-БАП с 0,3 до 0,2 мг/л и увеличение концентрации ГК до 0,2 мг/л позволило получить максимальное количество нормально развитых проростков (12,0 %). Оптимальным являлось содержание в составе среды 0,2 мг/л 6-БАП, 0,1 мг/л НУК и 0,2 мг/л ГК.

Определение светового режима показало, что незрелые зародыши в условиях культуры тканей развивались как в темноте, так и на свету. При относительно равном количестве общего числа полученных проростков (4,0 % и 4,2 % соответственно) образование нормально развитых регенерантов повышалось с 1,3 % в условиях темноты до 3,7 % на световом режиме. Проростки затем проходили этап микроразмножения, укоренения и пересадки в грунт.

Характеристика полученных гибридов

Гибриды рапса ярового и горчицы сарептской. В результате исследований было получено 16 растений, большинство из которых (69 %) имели морфологические признаки материнской формы. Как в условиях in vitro в фазе 2-3 листьев, так и взрослые растения не отличались от горчицы сарептской по окраске, волнистости и зубчатости края листа, его положению на стебле, наличию опушенности и другим признакам.

Гибриды сурепицы яровой и капусты. Растения, полученные в результате ресинтеза, принадлежали либо к материнскому, либо к промежуточному морфотипу. У гибридов доминировали такие признаки отцовской формы, как гофрированность, толщина и темно-зеленая окраска листовой пластинки. Было получено два растения, которые образовали семена, 78 % которых были невыполненными, а остальные нормальные семена имели коричневую окраску.

Гибриды рапса ярового и горчицы белой. Гибридные растения на стадии 2-3 листьев по некоторым морфологическим признакам были аналогичны горчице (отцовской форме): имели сильное опушение, среднюю степень антоциановой окраски семядолей. Данные результаты подтверждают истинность полученных гибридов.

Проведенное в полевых условиях морфологическое описание гибридов F₁ горчицы белой и рапса ярового показало промежуточное наследование некоторых признаков (число долей, волнистость и зубчатость края листа изгиб верхушки листа, опушенность края первого листа). Полученные гибриды отличались большим числом ветвей первого порядка (до 12 шт.) и обильным цветением. При их скрещивании с яровым рапсом наблюдалось завязывание семян и образование стручков с промежуточной между родительскими формами длиной створки (табл. 6).

Таблица 6 - Промежуточное наследование некоторых признаков гибридов F₁ горчицы белой и рапса ярового

Признаки	Brassica napus	Brassica napus Ч Sinapis alba	Sinapis alba	НСР0,05
1. Семядоли: - длина, мм - ширина, мм	6,9 ± 0,27 13,8 ± 0,41	7,2 ± 0,13 15,9 ± 0,74	7,6 ± 0,71 18,1 ± 0,33	0,69 0,81
2. Морфология листа: - число долей - опушенность края первого листа - характер изгиба верхушки	4,5 ± 0,65 редкая средний	4,9 ± 0,73 средняя слабый	5,8 ± 0,17 густая отсутствует	0,34 - -
3. Опушенность стебля	отсутствует	слабая	сильная	-
4. Высота ветвления, см	47,3 ± 1,93	40,0 ± 1,13	35,4 ± 1,65	1,89
5. Длина створки стручка, мм

Подобные документы

• Агротехника возделывания ярового рапса

  Разработка технологии возделывания ярового рапса, система севооборотов, место ярового рапса в севообороте. Удобрение, обработка почвы, уход за посевами и интегрированная система защиты растений. Экологические аспекты внесения удобрений и пестицидов.
  
  реферат [33,1 K], добавлен 28.01.2012
  

• Разработка технологии возделывания ярового рапса

  Биология и технология возделывания ярового рапса, ботанико-морфологическая характеристика и биологические особенности культуры. Краткая технология возделывания рапса, структура посевных площадей и урожайность, система севооборотов и место в севообороте.
  
  дипломная работа [72,5 K], добавлен 27.06.2010
  

• Разработка технологии возделывания ярового рапса для получения запрограммированного урожая

  Анализ разработки технологии возделывания рапса на зерно на основе методов программирования урожайности. Биологические особенности рапса. Характеристика почвенно-климатических условий. Разработка структурной модели высокопродуктивного растения и посева.
  
  курсовая работа [134,7 K], добавлен 07.06.2012
  

• Интегрированная система защиты посевов ярового рапса в хозяйстве

  Агротехника выращивания ярового рапса, система защиты растений от вредителей, болезней и сорняков. Структура посевных площадей и урожайность сельскохозяйственных культур. Мероприятия по защите растений, меры борьба с сорняками, вредителями и болезнями.
  
  дипломная работа [71,6 K], добавлен 21.09.2010
  

• Агробиотическое обоснование технологии возделывания рапса ярового на семена в условиях Светлинского района Оренбургской области

  Характеристика сортов и гибридов, особенности роста и развития рапса ярового. Климатическая характеристика территории возделывания. Программирование урожая культуры в условиях Светлинского района. Расчет доз удобрений. Уход за посевами и защита растений.
  
  курсовая работа [633,3 K], добавлен 03.08.2015
  

• Особенности технологии возделывания ярового рапса в условиях Калининградской области

  Морфологическая характеристика культуры. Биологические особенности рапса. Структура посевных площадей хозяйства. Система обработки почвы. Сорта и гибриды, подготовка семян. Уборка, первичная подработка и хранение зерна. Болезни, вредители и гербициды.
  
  дипломная работа [100,2 K], добавлен 13.10.2014
  

• Повышение эффективности производства рапса (на примере СПК "Достоево")

  Народно-хозяйственное значение повышения эффективности производства рапса и характеристика системы показателей ее измерения. Анализ современного состояния экономики производства рапса в Республике Беларусь. Совершенствование технологии производства рапса.
  
  курсовая работа [270,0 K], добавлен 10.01.2015
  

• Технология возделывания озимого рапса в условиях СПК "Негневичи" Новогрудского района Гродненской области

  Определение современного состояния производства рапса в Беларуси. Рассмотрение морфологических и биологических особенностей озимого рапса. Выявление путей совершенствования технологии возделывания рапса. Экономическое обоснование результатов исследований.
  
  дипломная работа [80,2 K], добавлен 14.10.2017
  

• Выращивание озимого рапса

  Анализ биологических особенностей озимого рапса. Характеристика корневой системы культуры. Состав и структура земельных угодий СПК "Им. Димидова". Цели и проблемы программирования урожая озимого рапса. Способы получения урожаев необходимого качества.
  
  курсовая работа [98,8 K], добавлен 07.06.2012
  

• Технология возделывания ярового ячменя

  Народнохозяйственное значение и биологические особенности ярового ячменя. Влияние основных факторов на продуктивность культуры. Технология возделывания ярового ячменя в хозяйстве. Экономическая оценка технологии возделывания культуры и ее значение.
  
  курсовая работа [57,9 K], добавлен 15.02.2008
  

• Анализ производства рапса (на примере предприятия ООО "Северное сияние")

  Современное состояние производства рапса в хозяйствах РФ. Природные условия деятельности, специализация и ресурсный потенциал предприятия. Оценка валового производства и посевной площади рапса, пути повышения его урожайности и снижения себестоимости.
  
  курсовая работа [203,8 K], добавлен 24.09.2012
  

• Изменение агрофизических свойств дерново-подзолистой супесчаной почвы и урожайности ярового рапса под действием разных систем обработки и удобрений

  Преимущества применения влаго- и ресурсосберегающих технологий в основных зонах возделывания сельхозкультур. Влияние удобрений на агрофизические свойства почвы. Действие разных систем обработки и удобрений на урожайность сельскохозяйственных культур.
  
  курсовая работа [471,5 K], добавлен 21.08.2015
  

• Биотопливо

  История появления рапса - известной масличной и кормовой культуры семейства крестоцветных. Основные свойства сырья. Биодизельное топливо, особенности применения и его главные преимущества. Процесс производства биотоплива из рапса, технологическая схема.
  
  презентация [4,8 M], добавлен 16.09.2012
  

• Защита ярового ячменя

  Распространение и вредоносность доминантных болезней ярового ячменя. Установление эффективности фунгицидов различных фирм-производителей против комплекса данных болезней. Определение влияния фунгицидной защиты на урожайность и элементы структуры урожая.
  
  курсовая работа [71,0 K], добавлен 21.03.2014
  

• Особенности сельскохозяйственного выращивания ячменя ярового

  Характеристика ячменя как сельскохозяйственной культуры. Разработка технологии возделывания ярового ячменя сорта Якуб. Определение лучших предшественников, оптимальных доз удобрений, программирование урожая, разработка технологии посадки культуры.
  
  курсовая работа [86,4 K], добавлен 29.11.2010
  

• Экономика производства рапса

  Организационно-экономическая характеристика предприятия. Современное состояние производства рапса в Беларуси. Развитие сельскохозяйственных производственных кооперативов. Структура земельных угодий. Основные показатели финансовой деятельности компании.
  
  курсовая работа [87,0 K], добавлен 22.03.2017
  

• Особенности выращивания рапса

  Биологические и морфологические особенности рапса. Описание элементов программирования урожайности данной сельскохозяйственной культуры. Расчет фотосинтетических показателей, средней и максимальной площади листьев. Технология посева, сбора урожая.
  
  курсовая работа [126,3 K], добавлен 11.11.2015
  

• Разработка технологии производства ярового ячменя "Эльф" в условиях Балтасинского района

  Ботаническая характеристика ярового ячменя сорта "Эльф", биологические и морфологические особенности культуры. Технологическая карта возделывания культуры. Расчет биологической урожайности по формуле А.М. Рябчикова. Размещение культур в севообороте.
  
  курсовая работа [206,4 K], добавлен 04.03.2012
  

• Технология возделывания ярового ячменя

  Биологические основы управления ростом растений, урожаем и качеством продукции. Почвенно-климатическая характеристика агроклиматической зоны. Программирование урожайности ярового ячменя по лимитирующим факторам. Выбор сорта и подготовка семян к посеву.
  
  курсовая работа [86,3 K], добавлен 31.03.2015
  

• Технологии производства рапса и яровой пшеницы

  Почвы и их агрохимическая характеристика. Краткий анализ полеводства. Биологические особенности и сорта рапса. Его размещение в севообороте. Система обработки почвы. Подготовка семян к посеву. Уборка урожая. Технологическая схема возделывания пшеницы.
  
  курсовая работа [81,1 K], добавлен 10.01.2016
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам