Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения гамавитфорте при лечении больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения гамавитфорте при лечении больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак

06.02.01 - «Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных»

Чермошенцева Галина Владимировна

Саратов - 2012

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Анников Вячеслав Васильевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор кафедры терапии, клинической диагностики, фармакологии и радиобиологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» Калюжный Иван Исаевич

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой терапии и клинической диагностики с рентгенологией ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» Зухрабов Мирзабек Гашимович

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

гамавитфорте бабезиоз энтерит

Актуальность темы. Бабезиоз собак в последнее время приобретает массовый характер и наносит существенный ущерб здоровью животных, а развивающиеся при этом вторичные иммунодефицитные состояния также обуславливают повышенную восприимчивость организма к бактериальным и вирусным инфекциям (Кошелева М.И., 2006).

В настоящее время парвовирусный энтерит входит в группу пяти самых распространенных инфекционных болезней собак России (Фомин В.Ю., 2007). Болезнь сопровождается сильной лейкопенией, следствием чего являются иммунный дисбаланс и развитие вторичных патологий, нередко приводящих к летальному исходу (Тумина И.В., Анников В.В., 2006).

Анализ обобщенных литературных данных свидетельствует о ведущей роли иммунологических нарушений в механизмах возникновения и развития многих патологий у животных (Верховский О.А., 1996; Федоров Ю.Н., 2000; Игнатов П.Е., 2002; Логинов С.И., 2001).

Предлагаемый компанией ЗАО «Гамаветфарм» комплексный препарат гамавитфорте, который содержит в качестве действующих веществ интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный, среду 199 и воду для инъекций, призван решить проблему вторичного иммунодефицита. Гамавитфорте содержит физиологически сбалансированную смесь 20 аминокислот, 17 витаминов, фрагментов нуклеиновых кислот, важнейшие минералы и микроэлементы, а также экстракт плаценты и иммуностимулятор (нуклеинат натрия). In vitro установлено, что благодаря этому составу он оказывает мощное общеукрепляющее и трофическое действие на организм, стимулирует неспецифический иммунитет и кроветворение, способствует снятию интоксикации, нормализует кислотно-щелочной баланс, биохимические показатели и формулу крови, снимает последствия окислительного стресса.

При этом в литературе нами не обнаружено данных, подтверждающих вышесказанное предположение на практике (in vivo).

Приведенные выше рассуждения обозначили актуальность и направления настоящей работы.

Цель исследования. На основании клинико-морфологических и биохимических исследований обосновать эффективность применения гамавитфорте при бабезиозе и парвовирусном энтерите собак.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Выявить клинико-морфологические изменения при бабезиозе и парвовирусном энтерите собак как факторы, способствующие развитию вторичного иммунодефицита.

2. На основании динамики биохимических изменений оценить детоксикационные свойства гамавитфорте.

3. Оценить состояние и динамику клеточного звена иммунитета при использовании гамавитфорте.

4. Оценить состояние и динамику гуморального звена иммунитета при лечении собак, больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом.

5. На основании клинико-гематологических, биохимических и иммунологических изменений дать рекомендации к применению гамавитфорте.

6. Оценить экономическую эффективность включения в схему терапии гамавитфорте.

Научная новизна. Впервые:

- определено с помощью исследований количества Т-лифоцитов и С-реактивного белка, что гамавитфорте активизирует клеточное звено иммунитета собак, больных парвовирусным энтеритом и бабезиозом;

- установлено на основании исследований количества В-лимфоцитов и иммуноглобулинов А, М, G, что гамавитфорте активизирует гуморальное звено иммунитета собак, больных парвовирусным энтеритом и бабезиозом;

- доказано на основании клинико-гематологических исследований, что гамавитфорте способствует ранней нормализации гемопоэза;

- установлено на основании биохимических исследований, что гамавитфорте способствует ускорению детоксикации организма собак, больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом.

Теоретическая и практическая значимость.

Полученные данные расширяют представление о клинико-морфобиохимических изменениях при парвовирусном энтерите и бабезиозе собак, особенностях развивающегося иммунного дисбаланса и механизме коррекции возникающих осложнений, открывают новые возможности для научно обоснованного подхода к коррекции и профилактике осложнений, возникающих вследствие снижения резистентности. Разработанная технология лечения предусматривает наряду со специфической терапией, коррекцией водно-солевого баланса быстрое устранение развивающегося иммунного дисбаланса путем включения в схему терапии комплексного полиаминокислотного препарата.

Результаты гематологических, биохимических и иммунологических исследований легли в основу положения о возможности устранения и профилактики иммунного дисбаланса, развивающегося вследствие парвовирусного энтерита и бабезиоза собак.

Результаты исследований используются в практической работе ветеринарных врачей г. Москвы, Пензы, Волгограда, Саратова и Саратовской области, а также при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах «Эпизоотология», «Паразитология и инвазионные болезни» для студентов специальности 111801 - «Ветеринария» ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов», «Эпизоотология», «Анатомия», «Терапия и клиническая диагностика с рентгенологией» ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» для студентов факультета ветеринарной медицины, «Терапия, клиническая диагностика, фармакология и радиобиология» ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

Разработаны «Методические положения по комплексному лечению больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак с использованием современных иммуномодулирующих препаратов», рассмотренные и одобренные 20 октября 2011 г. на секции «Ветеринарная биотехнология» ОВМ РАСХН.

Связь исследования с научной программой.

Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова», регистрационный номер 313-С от 09.03.2010 г.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы отражены в итоговых отчетах кафедры паразитологии, эпизоотологии и ВСЭ Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова за 2009-2011 гг. Материалы диссертации доложены и обсуждены на конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (2010-2011), а также на 7-й и 8-й Всероссийских научно-практических конференциях «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (Ростов на Дону, 2010-2011); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства» (Самара, 2010); Международном научно-практическом симпозиуме (Саратов, март 2011; V Международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития медицины (Одесса (Украина) и Лондон (Великобритания), 2011); заседании секции «Ветеринарная биотехнология» ОВМ РАСХН (п. Биокомбинат, Щелковский р-н, Московская обл. октябрь 2011).

Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Общий объем работ составляет 3,26 печ. л., из них 1,54 печ. л. принадлежат лично автору.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Особенности динамики клинико-морфобиохимических изменений при лечении собак, больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом.

2. Состояние клеточного звена иммунитета при использовании гамавитфорте.

3. Состояние гуморального звена иммунитета при использовании гамавитфорте.

4. Терапевтическая эффективность применения гамавитфорте.

Объем и структура диссертации. Рукопись диссертации состоит из введения, четырех глав, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Изложена на 122 страницах машинописного текста. Приложения содержат сведения о проделанной работе. Иллюстрирована 20 рисунками, 14 таблицами. Список литературы включает в себя 205 источников, из них отечественных - 123, зарубежных - 82.

Предмет, материалы и методы исследований.

Структура опыта

Работа основана на результатах клинических исследований, проведенных в период с 2009 по 2012 г. на базе кафедры «Паразитология, эпизоотология и ВСЭ» ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова», ветеринарной клиники ООО «ХАКС +» и ветеринарной клиники ООО «Универ» (Москва).

Структура опыта

Клинически больные бабезиозом собаки (n = 68)		Клинически больные парвовирусным энтеритом собаки (n=60)

Клиническое исследование (n = 340)		Клиническое исследование (n = 600)

Гематологическое исследование (n = 272)		Гематологическое исследование (n =300)

Биохимическое исследование (n = 272)		Биохимическое исследование (n = 300)

Иммунологическое исследование (n = 340)		Иммунологическое исследование (n = 300)

Микроскопическое исследование мазков крови (n = 68)		Иммунохроматографическое исследование (n = 60)

Ультразвуковое исследование (n = 136)		Ультразвуковое исследование (n = 120)

Серологическое исследование (n = 136)

Терапия больных бабезиозом собак (n = 68)		Терапия больных парвовирусным энтеритом собак (n = 60)

Рис. 1. Структура исследований

Предметом для исследований послужили больные бабезиозом (n = 68) в возрасте от 1 года до 5 лет и парвовирусным энтеритом собаки (n = 60) в возрасте от 2 до 6 мес. Животные были подобраны в 2 группы следующим образом: по 34 головы при бабезиозе собак и по 30 голов при парвовирусном энтерите в каждой по принципу аналогов. Содержание - домашне-выгульное, кормление - фабричные сухие корма.

Материалом для исследований послужили кровь и каловые массы больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак.

При выполнении поставленных задач проводили клинические (n = 940), визуально-диагностические (УЗИ) (n = 256), гематологические (n = 572), биохимические (n = 572), иммунологические (n = 640), иммунохроматограчические (n = 60) и серологические (n = 136) исследования, а также микроскопическое исследование мазков крови (n = 68).

Клинические исследования проводили по общепринятым методикам (Постников В.С., 1986); визуально-диагностические (УЗИ) - на аппарате Mindray DP-6600 по стандартной технологии (Бушарова Е.В., 2011). При этом изучали состояние и границы печени, желчного пузыря, почек. Общий анализ крови проводили на автоматическом гемоанализаторе «Hemascrin», подсчет лейкограммы - по общепринятой методике (Быкова Н.Д., 2007). Биохимические исследования сыворотки крови выполняли на автоматическом анализаторе «BTS-358». Серологические исследования проводили для дифференциальной диагностики бабезиоза от инфекционного гепатита и лептоспироза плотоядных. Инфекционный гепатит плотоядных исключали методом полимеразной цепной реакцией в лаборатории «Артвет» (Москва). Лептоспироз - в реакции микроаглютинации. При этом исключали наличие таких серовариантов, как Leptospira Canicola, L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa и L. Pomona. Исследования проводили в лаборатории «Артвет» (Москва). Иммунологические исследования сыворотки крови выполняли на автоматическом анализаторе «Stat Fax 4700». При иммунологических исследованиях определяли состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета (Т- и В-лимфоциты методом розеткообразования, иммуноглобулины А, М, G - методом ИФА с помощью стрипов Dya Sys (Германия) (Фролов В.М., 1991)). При бабезиозе собак клинический диагноз подтверждали исследованием мазков из периферической крови, окрашенных лейкодивом с целью обнаружения в эритроцитах бабезий (Ятусевич А.И., Заблоцкий В.Т., 1995). Клинический диагноз при парвовирусном энтерите собак подтверждали экспресс-диагностикой VetExpert CPV Ag (Япония) для парвовирусных инфекций плотоядных, с помощью которых выявляли антиген парвовирусного энтерита в фекалиях инфицированных животных. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы Statistika 6 на компьютере Intel Celeron.

Результаты собственных исследований.

Динамика гематологических и биохимических показателей при лечении больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак

Клинико-гематологические и биохимические показатели организма больных

бабезиозом собак

Клинически начало бабезиоза характеризовалось повышением температуры тела, тахикардией, одышкой, отсутствием аппетита. Через сутки болезни видимые слизистые оболочки становились анемичными, а позже цианотичными.

К исходу третьих суток появлялось иктеричное окрашивание слизистых оболочек ротовой полости, конъюнктивы и даже кожи вследствие гемолиза эритроцитов и снижения экскреции билирубина в желчные капилляры. Снижение детоксикационной функции печени приводило к нарастанию интоксикации, дегидратации и активизации вторичной микрофлоры, что клинически проявлялось саливацией, рвотой, дегидратацией, реже диареей.

При исследовании мазка крови в день поступления животных в клинику была обнаружена локализация бабезий как внутри эритроцита (в количестве 2-8 экземпляров), так и вне клетки.

Анализ крови показал снижение уровня гемоглобина (до 74,7 ± 0,2г/л), существенное снижение количества эритроцитов (3,3 ± 0,1Ч10¹²/л), цветного показателя (0,7 ± 0,01) и гематокрита (28,6 ± 0,2 %).

Отмечался сдвиг ядра лейкограммы влево, о чем свидетельствовало появление в циркуляторном русле юных нейтрофилов (4,2 ± 0,2 %), наблюдались эозинофилия (11,2 ± 0,2 %), снижение сегментоядерных клеток (39,1 ± ± 0,2 %). Также отмечали повышение количества лимфоцитов (31,6 ± 0,2 %) и моноцитов (13,6 ± 0,2 %) по сравнению с нормой.

Результаты исследований показали, что бабезиоз сопровождался глубокими деструктивными процессами в печени, а также в почках.

Бабезиоз сопровождался холестатическими отклонениями, о чем свидетельствовало увеличение уровня холестерола (норма 2,9-6,5 ммоль/л, у больных 9,4 ± 0,1 ммоль/л), гаммаглютаминтрансферазы (норма 1,0-10,0 U/L, у больных 13,5 ± 0,4 U/L) и билирубина (норма 0,1-10,3 мкмоль/л, у больных 21,1 ± 1,3 мкмоль/л). Это привело к нарушению образования и оттока желчи и, как следствие, желтушному окрашиванию слизистых и кожи.

При данной патологии отмечали также нарушение мембран гепатоцитов, о чем свидетельствует увеличение содержания количества аспартатаминотрансферазы (127,6 ± 2,3 U/L), аланинаминотрансферазы (190,0 ± 5,6 U/L), гаммаглютаминтрансферазы (13,5 ± 0,4 U/L), щелочной фосфатазы (111,9 ± ± 0,4 U/L).

Динамика гематологических и биохимических показателей при лечении больных бабезиозом собак

Схема лечения больных бабезиозом собак включала в себя имидосан, эссенциале форте, 0,9%-й раствор натрия хлорида или 5%-й глюкозы с 5%-й аскорбиновой кислотой, 5%-й энрофлоксацин. Дополнительно в комплекс лечебных мероприятий животным первой (опытной) группы в схему лечения для снятия интоксикации и стабилизации мембран клеток включили гамавитфорте, собакам второй (контрольной) - гамавит.

Уже через сутки терапии в обеих группах отмечали исчезновение саливации, а у животных первой группы исчезла рвота. Во второй группе у 9 из 34 собак отмечалась рвота. Ректальная температура и прием воды нормализовались в обеих группах. Цвет слизистых по-прежнему был иктеричный у животных обеих групп. Отсутствие саливации и рвоты у животных первой группы, по нашему мнению, объяснялось более выраженными детоксикационными свойствами, которые проявил гамавитфорте.

Через трое суток терапии у собак первой группы нормализовался аппетит, животные были активны, слизистые оболочки по-прежнему иктеричны. У животных второй группы наблюдали слабый аппетит, видимые слизистые оболочки оставались иктеричными, они были малоподвижны.

По истечении пятых суток проводимого лечения в первой группе животных клинические симптомы болезни практически исчезли, кроме иктеричного окрашивания слизистых оболочек. Во второй группе собак улучшений не произошло.

Исследования, проведенные в более поздние сроки, позволили ощутимее оценить детоксикационное влияние гамавитфорте на организм больных животных.

На первые сутки терапии значимых изменений в гематологических показателях в обеих группах не наблюдали.

На третьи сутки лечения в крови первой группы животных, получавших гамавитфорте, наблюдали повышение уровня гемоглобина (86,5 ± 0,2 г/л), количества эритроцитов (3,8 ± 0,03Ч10¹²/л) и, соответственно, гематокрита (31,2 ± 0,3 %) (рис. 2, 3). Что касается лейкограммы, то в ней произошло увеличение количества сегментоядерных клеток (45,7 ± 0,2 %). Остальные показатели оставались на прежнем уровне.

Во второй группе произошло незначительное повышение уровня гемоглобина (78,3 ± 0,4г/л), гематокрита (29,2 ± 0,2 %) и количества эритроцитов (3,4 ± 0,01Ч10¹²/л).

К пятым суткам проводимой терапии у животных первой группы гематологические показатели находились в границах физиологической нормы. Так, уровень гемоглобина составил 117,7 ± 0,2 г/л, количество эритроцитов возросло до 5,0 ± 0,02Ч10¹²/л. Соответственно увеличились уровень гематокрита (37,7 ± 0,2 %) и цветной показатель (0,9 ± 0,01). Уменьшилось количество юных нейтрофилов (2,2 ± 0,2 %), произошло увеличение количества сегментоядерных клеток (до 62,7 ± 0,3 %), что привело к нормализации лейкограммы. Отмечали снижение количества лимфоцитов (21,3 ± 0,2 %) и моноцитов (7,6 ± 0,2 %) до нормы.

Гематологические показатели у собак второй группы к этому сроку приходили в соответствии с физиологической нормой менее заметно.

При проведении биохимического исследования крови собак на 1-е, 3-и и 5-е сутки терапии после назначения гамавитфорте получили следующие результаты.

Из результатов, представленных на рис. 4, следует, что комплексная терапия уже через сутки дала явно выраженный положительный эффект как в 1-й, так и во 2-й группе. Однако у собак первой группы биохимические показатели функций печени и почек нормализовывались быстрее, что позволило через 5 суток интенсивной терапии снизить до нормы уровень общего билирубина (9,8 ± 0,6 мкмоль/л), ГГТ (8,7 ± 0,4 U/L) и холестерола (6,0 ± ± 1,4 ммоль/л). У собак контрольной группы уровень холестерола (7,3 ± ±1,1 ммоль/л) и креатинина (142,0 ± 6,3 ммоль/л) оставался выше физиологической нормы.

Превышение показателей ЩФ (93,3 ± 0,9 U/L), АСТ (51,0 ± 1,4U/L), АЛТ (71,0 ± 1,3U/L) во второй группе говорит о незавершенности детоксикационных и репаративных процессов у больных животных. У собак опытной группы, получавших гамавитфорте, вышеназванные показатели были близки к референтным (ЩФ - 78,2 ± 1,3 U/L; АСТ - 47,4 ± 0,8 U/L; АЛТ - 64,8 ± ± 1,6 U/L).

Клинико-гематологические и биохимические показатели организма больных парвовирусным энтеритом собак

Клинически начало парвовирусного энтерита характеризовалось повышением температуры тела, депрессией, вялостью, отсутствием аппетита, саливацией, рвотой, диарей сероватого цвета с примесью крови и резким специфическим запахом, беспокойством животных при пальпации мягкой брюшной стенки.

При проведении гематологических исследований на момент обращения за ветеринарной помощью (3-и сутки болезни) отмечали эритропению (3,3 ± ± 0,6Ч10¹²/л), анемию (79,3 ± 1,6 г/л) при значительном лейкоцитозе (19,5 ± ± 1,5Ч10⁹/л). Эритропения и анемия, очевидно, являются патогномоничными для начала парвовирусного энтерита, что обусловлено негативным влиянием продуктов распада и бурного размножения парвовируса в пейеровых бляшках и красном костном мозге. Повышенный гематокрит указывает на обезвоживание организма и необходимость проведения регидратационных мероприятий (62,3 ± 1,1 %). Значительный лейкоцитоз (19,5 ± 1,5Ч10⁹/л) свидетельствовал о включении и состоятельности на этом этапе защитно-приспособительных реакций организма. Полученные данные противоречат сложившемуся мнению о том, что начало парвовирусного энтерита сопровождается лейкопенией. Однако, в ходе дальнейшего исследования (4-5-е сутки) это мнение подтвердилось. СОЭ повысилась до 29,8 ± 0,3 мм/ч. Кроме того, отмечался сдвиг регенеративного ядра лейкограммы влево (юных - 3,3 ± 0,3 %, палочкоядерных нейтрофилов - 8,2 ± 0,3 %, базофилов - 2,1 ± 0,2 %). Остальные показатели оставались в пределах физиологической нормы.

При биохимическом исследовании крови отмечали двукратное повышение содержания трансфераз (АЛТ - 103,2 ± 1,3 U/L, ACT - 88,3 ± 2,3 U/L); кроме того, незначительную гиперкальцемию (4,3 ± 0,5 ммоль/л) и гиперфосфатемию (5,6 ± 0,4 ммоль/л). При этом кальций-фосфорное отношение было нарушено (0,8). Следует отметить, что уровень щелочной фосфатазы был повышен (332,8 ± 8,9 U/L). Данное состояние можно объяснить как и возрастными особенностями собак (возраст 2-6 мес.), так и начинающимися нарушениями процессов реадсорбции кальция в кишечнике.

Обращает на себя внимание более чем двукратное повышение уровня лактатдегидрогеназы (753,8 ± 8,4 U/L), что характеризует, очевидно, начало яркого воспалительного процесса в стенках кишечника.

Динамика гематологических и биохимических показателей организма при лечении больных парвовирусным энтетритом собак

Схема лечения больных парвовирусным энтеритом собак включала в себя Гискан-5, 0,9%-й физиологический раствор, цефтриаксон, метрогил, преднизолон, но-шпу, контрикал, омепразол. При снижении уровня общего белка ниже нормы (55 г/л) дополнительно вводили инфезол-40.

В комплекс лечебных мероприятий животным первой (опытной) группы в схему лечения для снятия интоксикации, стабилизации мембран клеток и повышения резистентности организма включили гамавитфорте, а собакам второй (контрольной) - гамавит в дозах, рекомендованных производителем.

Уже через сутки терапии при гематологическом исследовании крови у собак опытной (первой) группы отмечали повышение содержания эритроцитов с 3,3 ± 0,6 до 3,8 ± 0,2Ч10¹²/л, ослабление лейкоцитоза с 19,5 ± 1,5 до 10,6 ± 1,6Ч10⁹/л, СОЭ - с 29,8 ± 0,3 до 26,3 ± 1,0 мм/ч. Примечательно, что количество гемоглобина продолжало снижаться (79,3 ± 1,6 г/л в начале лечения и 71,4 ± 1,1 г/л через сутки терапии). Количество юных нейтрофилов с 3,3 ± 0,3 возросло до 4,0 ± 0,9 %. Гематологические изменения крови у собак второй (контрольной) группы выглядели следующим образом. Усилились эритропения (3,3 ± 0,6Ч10¹²/л до лечения и 3,0 ± 0,2Ч10¹²/л через сутки), анемия (79,3 ± 1,6 г/л до лечения и 72,4 ± 1,3 г/л через сутки) (рис. 5, 6).



На третьи сутки терапии при общеклиническом анализе крови отмечали незначительный эритроцитоз у животных опытной группы (4,3 ± 0,3Ч10¹²/л), незначительно возросла СОЭ относительно первых суток терапии (с 26,3 ± ± 1,0 до 27,0 ± 0,8 мм/ч). Количество лейкоцитов резко снизилось (в первой группе - 4,9 ± 0,9Ч10⁹/л, во второй 3,8 ± 0,3Ч10⁹/л). Существенных изменений в лейкограмме к этому сроку не наблюдали. Очевидно, значительная лейкопения обусловила иммунодепрессию и развившиеся в последствие клинические признаки.

При исследовании крови на 5-е сутки лечения у животных опытной (первой) группы отмечали нормализацию содержания эритроцитов и гемоглобина (5,6 ± 0,7Ч10¹²/л и 120,8 ± 3,3 г/л соответственно). К указанному сроку у собак второй группы эти показатели составили 4,0 ± 0,9Ч10¹²/л и 98,3 ± ± 2,1 г/л соответственно.

Лейкопения в обеих группах продолжалась. Однако следует отметить, что у собак второй группы эти показатели снизились до 1,5 ± 0,4Ч10⁹/л, что в 4 раза ниже нормы. Очевидно, это стало причиной гибели одной собаки из второй группы.

В анализе крови собак первой группы на 7-е сутки лечения отмечали повышение содержания лейкоцитов до нижней границы физиологической нормы (6,4 ± 0,3Ч10⁹/л), в то время как во 2-й группе этот показатель составлял 4,6 ± 0,2Ч10⁹/л при уровне эритроцитов и гемоглобина в пределах физиологической нормы в обеих группах.

При биохимическом исследовании (рис. 7) через трое суток терапии отмечали нормализацию уровня трансфераз в обеих группах. Следует отметить, что во второй группе эти показатели находились на верхних границах физиологической нормы (АЛТ - 60,2 ± 2,7 U/L, ACT - 56,8 ± 1,2 U/L). Содержание кальция через трое суток составило 2,7 ± 0,2 ммоль/л в обеих группах, фосфора в первой группе - 2,4 ± 0,4 ммоль/л, во второй - 2,6 ± 0,4 ммоль/л. При этом нормализовалось кальций-фосфорное отношение. Уровень щелочной фосфатазы оставался высоким (в первой группе - 339,2 ± 6,1 U/L, во второй - 487,4 ± 7,6 U/L). Очевидно, это связано с процессами катаболизма растущего организма (возраст щенков 2-6 мес.). Уровень ЛДГ в первой группе снизился до 487,5 ± 9,2 U/L, во второй - до 628,3 ± 10,9 U/L. Столь значительное снижение уровня ЛДГ у животных второй группы можно считать хорошим диагностическим показателем, указывающим на ослабление воспалительных явлений в кишечнике. Содержание общего белка в крови животных первой группы повысилось до 53,6 ± 0,5 г/л, во второй - до 50,2 ± 0,6 г/л. Однако, следует отметить, что клинически начало выздоровления к этому сроку не наблюдали. Более того, через 5 суток терапии констатировали отсутствие рвоты у собак опытной (первой) группы и ослабление этих же симптомов у животных контрольной (второй). По-прежнему у животных отсутствовали аппетит и жажда.



Биохимические исследования крови к этому сроку лечения (5-е сутки) показали, что у собак первой группы нормализовалось содержание кальция и фосфора (2,6 ± 0,3 ммоль/л и 1,6 ± 0,1 ммоль/л в первой и 2,8 ± 0,4ммоль/л и 3,2 ± 1,2 ммоль/л во второй группах соответственно). В первой (опытной) группе пришло в соответствие кальций-фосфорное отношение, снизился уровень ЩФ (167,7 ± 5,3 U/L), тогда как в контрольной группе ее уровень составлял 418,3 ± 6,4 U/L. Незначительно уменьшился уровень б-амилазы (1313,8 ± 8,5U/L в первой группе). Остальные показатели (ACT, АЛТ, ЛДГ, липаза) находились в пределах физиологической нормы у собак первой (опытной) группы.

У собак контрольной группы также отмечали тенденцию к нормализации содержания основных биохимических показателей. Однако возросший уровень б-амилазы (1853,2 ± 7,9 U/L) потребовал значительного увеличения дозы ингибитора протеаз, блокатора Н² гистаминовых рецепторов, а также блокатора протонной помпы. Остальные показатели находились либо около, либо в пределах физиологической нормы.

Через 7 суток терапии в первой группе животных отмечали появление аппетита, приема воды, исчезновение диареи; во второй группе - только отсутствие рвоты и ослабление диареи.

При биохимическом анализе крови животных опытной группы отмечали нормализацию содержания основных биохимических показателей.

У собак второй группы по-прежнему отмечался значительно повышенный уровень ЩФ - 306,8 ± 6,7 U/L, ACT - 66,2 ± 0,7 U/L, АЛТ - 70,5 ± ± 1,1 U/L. Содержание б-амилазы находилось на верхнем уровне нормы 1518,8 ± 4,3 U/L, что свидетельствует о сохраняющихся воспалительных процессах и интоксикации организма.

Динамика иммунологических показателей организма собак

Динамика иммунологических показателей при лечении больных бабезиозом собак

Состояние иммунной системы также оценивали на третьи сутки болезни (до лечения) через 1, 3, 5 и 7 суток терапии (табл. 1). Гиперпротеинемия (83,4 ± 0,2г/л) на 3-и сутки болезни у больных бабезиозом собак, очевидно развилась вследствие отчасти дегидратации при потере некоторого количества внутрисосудистой жидкости, активации иммунологического ответа, развития гепатита, спровоцированного бабезиями и продуктами распада эритроцитов и кровепаразитов. На третьи сутки болезни количество IgА снизилось (2,0 ± 0,5 г/л), а IgМ и IgG повышалось и продолжало расти (IgМ - 11,9 ± 1,0 г/л и IgG - 22,6 ± 1,3 г/л), что характерно для активации гуморального иммунного ответа на антигены бабезий.

Влияние бабезий вызвало ослабление функций клеточного иммунитета. На третьи сутки болезни количество Т- и В-лимфоцитов было снижено (Т-лимфоциты - 38,3 ± 1,2 %, В-лимфоциты - 11,3 ± 1,2 %), рис. 8.

На 5-е сутки лечения показатели IgM и IgG оставались еще высокими (IgМ - 15,6 ± 1,6 г/л, IgG - 19,4 ± 0,9 г/л в опытной группе, IgМ - 13,2 ± 1,8 г/л, IgG - 18,3 ± 1,3 г/л в контрольной).

Показатель IgA продолжал увеличиваться, что говорит об активизации защитных функций слизистых оболочек (3,4 ± 0,8 г/л в опытной и 3,0 ± 0,5 г/л в контрольной группах).

У животных опытной группы, которым вводили гамавитфорте, к 7-м суткам лечения показатели общего белка были близки к нормам (78,2 ± 3,1 г/л), тогда как у животных второй (контрольной) группе он оставался высоким (81,9±1,6г/л).

Таблица 1

Динамика иммунологических показателей крови у больных бабезиозом собак в процессе лечения (n = 68, М ± m, ^*Р ? 0,001, ^** Р ? 0,005, ^***Р ? 0,05, ^**** Р ? 0,001)

Показатель	Референтные величины	1-е сутки лечения	3-и сутки лечения	5-е сутки лечения	7-е сутки лечения
		опыт	контроль	опыт	контроль	опыт	контроль	опыт	контроль
Белок общий, г/л	50,8-77,2	87,3±6,4*	88,6± ±0,5**	82,6±4,2*	86,1± ±0,6***	80,6± 2,0*	85,4±1,7**	78,2± 3,1	81,9± 1,6*
СРБ, мг/л	0,9-1,1	14,2±0,5***	17,2± ±1,3****	7,4± ±2,0 ****	13,2± ±2,2****	7,0± ±1,2 ****	11,0± ±0,8****	4,4± ±0,6***	9,2± ±1,3 ****
Т-лимфо-циты, %	40,3	38,6±2,2	38,1±1,3	39,1±0,9	39,2±1,1	39,2± 2,0	39,6± 3,1	40,1± 1,0	39,0± 1,3
В-лимфо-циты, %	12,6	11,2±0,8	11,0±1,3	12,6±2,6	11,3±3,4	12,8± 1,8	11,9± 0,9	12,2± 1,0	11,9± 0,8
Ig А, г/л	2,7	2,0± 0,09 **	2,0± 1,4**	2,8± 0,5	2,3± 0,3**	3,4± 0,8	3,0± 0,5**	3,8±0,4*	3,3± 1,7**
Ig М, г/л	11,1	12,6±0,4*	12,1±0,8*	14,3± ±0,9****	12,0±0,9*	15,6± ±1,6 ****	13,2±1,8*	15,0± ± 3,2 ****	14,5± ±1,7 ****
Ig G, г/л	13,5	21,8±0,2****	25,4± ±1,2****	20,1± ±1,2****	22,0± ±0,3****	19,4± ±0,9 ****	18,3± ±1,3****	18,7± ±0,8 ****	17,4± ±3,1 ****
Альбумины, г/л	23-34	25,1±0,8	27,2±1,4	24,8±0,9	26,1±1,8	22,3± 1,6	28,2± 0,8	29,6± 1,4	32,3± 1,6
Глобулины, г/л	27-44	48,0±2,6*	44,2±0,5	50,4± 1,8***	46,8±3,3*	51,3±2,1***	46,2±3,4*	44,2± 0,5	40,4± 0,8
Соотно-шение Ал./Гл.	0,7-1,9	0,5	0,6	0,5	0,5	0,4	0,6	0,7	0,8

С-реактивный белок (СРБ) на 3-и сутки болезни присутствовал в сыворотке крови в значительном количестве (10,8 ± 1,5 мг/л) (рис. 9). Но к 7-му дню лечения у собак опытной группы его количество заметно снизилось (4,4 ± 0,6 мг/л), что указывает на ослабление воспалительных процессов, тогда как у животных контрольной группы, не получавших гамавитфорте, динамика изменения этого показателя была незначительной (9,2 ± 1,3 мг/л).

На фоне лечения положительную динамику отмечали в обеих группах. Однако в опытной группе к концу курса лечения (7-е сутки) наблюдалась нормализация этих показателей (Т-лимфоциты - 40,1 ± 1,0 %, В-лимфоциты - 12,2 ± 1,0 %), тогда как в контрольной группе оба показателя к этому времени оставались ниже нормы. Это, на наш взгляд, еще раз показывает положительную динамику применения гамавитфорте как иммуномодулятора и нормализацию функций гуморального и клеточного звеньев иммунитета.

Динамика иммунологических показателей при лечении больных парвовирусным энтеритом собак

Действие вируса вызвало ослабление функций как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета. В частности, были существенно снижены все показатели работы иммунной системы (количество Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов) (табл. 2).

Повышение к 5-м суткам терапии уровня Т-лимфоцитов в первой группе с 31,2 ± 1,3 до 38,7 ± 0,2 %, В-лимфоцитов с 2,4 ± 0,5 до 8,7 ± 0,6 % свидетельствует об активации гамавитфорте Т- и В-клеточных звеньев иммунитета (рис. 10).

В крови животных исследуемых групп до лечения С-реактивный белок присутствовал в сыворотке крови в значительных количествах (11,3 ± 0,5 мг/л) и на начало терапии продолжал увеличиваться (на первые сутки терапии 12,0 ± 0,3мг/л в опытной группе и 14,9 ± 0,2 мг/л в контрольной). К 7-м суткам лечения у собак первой группы его содержание снизилось (9,0 ± 0,1 мг/л), что указывает на ослабление воспалительных процессов, тогда как у животных второй группы динамика снижения была незначительной (до 10,6 ± ± 0,9 мг/л).

У животных первой группы к 7-м суткам лечения показатели общего белка (68,3 ± 0,8 г/л), альбуминов (29,6 ± 0,8 г/л), глобулинов (29,7 ± 0,4 г/л) нормализовались; у животных 2-й группы они были заметно снижены (белок - 61,3 ± 0,6 г/л, альбумины - 21,9 ± 0,6 г/л) (рис. 11).

Таблица 2

Динамика иммунологических показателей крови больных парвовирусным энтеритом собак в процессе лечения (n = 60, М ± m, ^*Р ? 0,001, ^** Р ? 0,005, ^***Р ? 0,05)

Показатель	Референтные величины	1-е сутки лечения	3-и сутки лечения	5-е сутки лечения	7-е сутки лечения
		опыт	контроль	опыт	контроль	опыт	контроль	опыт	контроль
Белок общий, г/л	50,8-77,2	49,0±1,6***	49,6± ±0,5**	53,6±4,2	50,2±0,6	59,6± ±0,9**	58,6±0,6	68,3±0,8	61,3± ±0,6*
СРБ, мг/л	0,9-1,1	12,0±0,3	14,9±0,2	13,3±0,9	13,0±0,9	11,6±0,8	13,1±1,1	9,0±0,1	10,6±0,9
Т-лим-фоциты, %	40,3	31,8±0,9	31,1±1,6	34,6±0,8	33,0±1,9	38,7±0,2	34,2± ±0,6**	40,1±1,1	37,1±0,9
В-лим-фоциты, %	12,6	2,6±0,2	3,2±0,9*	6,4± 0,7	4,7±0,1	8,7±0,6**	7,1±0,9**	12,3±0,1	9,0± ±0,5**
IgА, г/л	2,7	1,0±0,09	1,1±0,05	1,9±0,05*	1,5±0,01	2,6± ±0,7***	1,7±0,1	2,6± ±0,3***	2,3±0,3
IgМ, г/л	1,11	0,9± 0,06	0,7±0,05	0,9± ±0,01**	0,9± ±0,05***	1,2±0,05	1,0±0,01*	1,6±0,1	1,1±0,1
IgG, г/л	13,5	9,7±0,4**	8,3±0,2	9,7±0,4	8,7±0,3	9,8±0,2*	8,8±0,1*	11,3±0,4*	9,6±1,3
Альбуми-ны, г/л	23-34	16,2±0,9	15,3± ±1,3*	16,8±0,9	16,0±1,2	21,9±0,5	19,9±0,3	29,6±0,8	21,9±0,6
Глобули-ны, г/л	27-44	20,8±0,7	19,4± ±0,2***	22,9±0,6*	21,2±0,5	26,1±0,2	25,6± ±0,8**	29,7±0,4*	28,8±0,9
Соотно-шение Ал./Гл.	0,7-1,9	0,8	0,8	0,7	0,7	0,8	0,8	1,0	0,8

К концу курса лечения (7-е сутки) отмечали нормализацию большинства показателей естественной резистентности у собак опытной группы (Т-лимфоциты - 40,1 ± 1,1 %, В-лимфоциты - 12,3 ± 0,1 %, IgА - 2,6 ± 0,3 г/л, IgМ - 1,6 ± 0,1 г/л), тогда как в контрольной группе к указанному времени они оставались ниже нормы (Т-лимфоциты - 37,1 ± 0,9 %, В-лимфоциты - 9,0 ± 0,5 %, IgА - 2,3 ± 0,3 г/л, IgМ - 1,1 ± 0,1 г/л). Таким образом, можно сделать вывод, что в организме собак сохраняются признаки иммунодепрессии или вторичного иммунодефицита.

Экономическая эффективность применения гамавитфорте при лечении больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак

Оценивая экономическую эффективность предложенного способа лечения, подсчитывали его себестоимость, в которую включили стоимость препаратов и материалов, но без учета стоимости работы ветеринарного персонала.

Сумма за лекарства на весь курс лечения при бабезиозе собаке массой 10 кг в опытной группе составила 2666 руб., в контрольной - 4410 руб.

Экономическая эффективность при лечении данной болезни составляет 4410 - 2666 = 1744 руб., или 1,65 раза.

При терапии больных парвовирусным энтеритом собаке массой 10 кг сумма за лекарства на весь период лечения в опытной группе составляет 4286 руб., тогда как в контрольной - 5236 руб. Экономическая эффективность при лечении больных парвовирусным энтеритом собак составила 5236 - 4286 = 950 руб., или 1,2 раза.

Таким образом, можно заключить, что данное лекарственное средство отечественного производства вполне конкурентоспособно.

ВЫВОДЫ

1. Снижение уровня гемоглобина при бабезиозе до 74,7 ± 0,2 г/л, а при парвовирусном энтерите до 79,3 ± 1,6 г/л, количества эритроцитов до 3,3 ± ± 0,1Ч10№І/л при бабезиозе и до 3,3 ± 0,6Ч10№І/л при парвовирусном энтерите, гематокрита до 28,6 ± 0,2 % при бабезиозе и до 62,3 ± 1,1 % при парвовирусном энтерите, сдвиг ядра лейкограммы влево, эозинофилия (11,2 ± 0,2 и 10,2 ± 0,3 % соответственно), снижение сегментоядерных клеток (39,1 ± 0,2 и 54,5 ± 0,6 %), лимфоцитоз (31,6 ± 0,2 %) и моноцитоз (13,6 ± 0,2 %) при бабезиозе свидетельствуют об угнетении гемопоэза и нарушении лейкопоэза.

2. Падение уровня Т-лимфоцитов при бабезиозе до 38,3 ± 1,2 %, а при парвовирусном энтерите собак до 31,2 ± 1,3 %, В-лимфоцитов до 11,3 ± 1,2 % и 2,4 ± 0,5 %, IgA до 2,0 ± 0,5 и 1,1 ± 0,05 г/л соответственно, IgM - до 0,9 ± 0,01 г/л и IgG до 9,6 ± 0,5г/л при парвовирусном энтерите доказывает наличие иммунодепрессии.

3. Снижение уровня билирубина на 5-е сутки терапии при бабезиозе до 9,8 ± 0,6 мкмоль/л в опытной группе по сравнению с 14,1 ± 0,8 мкмоль/л в контрольной, АСТ - 47,4 ± 0,8 и 51,0 ± 1,4 U/L, АЛТ - 64,8 ± 1,6 и 71,0 ± ± 1,3 U/L, холестерола 6,0 ± 1,4 и 7,3 ± 1,1 ммоль/л соответственно свидетельствует о высоких детоксикационных свойствах гамавитфорте.

4. Снижение на 7-е сутки терапии при парвовирусном энтерите уровня АСТ до 45,3 ± 2,9 U/L в опытной группе по сравнению с 66,2 ± 0,7 U/L в контрольной, АЛТ - 52,4 ± 1,8 и 70,5 ± 1,1 U/L соответственно подтверждает высокие детоксикационные свойства гамавитфорте.

5. Повышение концентрации в опытной группе Т-лимфоцитов с 38,3 ± 1,2 % перед лечением до 40,1 ± 1,0 % на 7-е сутки терапии в опытной группе, падение СРБ с 10,8 ± 1,5 до 4,4 ± 0,6 мг/л при бабезиозе свидетельствует об активации гамавитфорте клеточного звена иммунитета.

6. Повышение концентрации в опытной группе Т-лимфоцитов с 31,2 ± 1,3 % до 40,1 ± 1,1 % на 7-е сутки терапии в опытной группе, падение СРБ с 11,3 ± 0,5 до 9,0 ± 0,1 мг/л при парвовирусном энтерите доказывает активацию гамавитфорте клеточного звена иммунитета.

7. Повышение содержания В-лимфоцитов в опытной группе на 7-е сутки терапии при бабезиозе с 11,3 ± 1,2 до 12,2 ± 1,0 %, IgА - с 2,0 ± 0,5 до 3,8 ± ± 0,4 г/л, IgМ - с 11,9 ± 1,0 до 15,0 ± 3,2 г/л свидетельствуют об активации гамавитфорте гуморального звена иммунитета.

8. Повышение содержания В-лимфоцитов в опытной группе на 7-е терапии при парвовирусном энтерите собак с 2,4 ± 0,5 до 12,3 ± 0,1 %, IgА - с 1,1 ± 0,05 до 2,6 ± 0,3 г/л, IgМ - с 0,9 ± 0,01 до 1,6 ± 0,1 г/л, IgG - c 9,6 ± 0,5 до 11,3 ± 0,4 г/л также говорит об активации гамавитфорте гуморального звена иммунитета.

9. Экономическая эффективность применения гамавитфорте в сравнении с гамавитом на весь курс лечения собаки массой 10 кг составляет: при бабезиозе собак 1744 руб., или 1,65 раза, при парвовирусном энтерите - 950 руб., или 1,2 раза соответственно.

Практические предложения

1. В состав комплексной терапии при лечении больных бабезиозом собак для скорейшей нормализации гемопоэза и устранения иммунодепрессии рекомендуется вводить гамавитфорте в дозе 0,5 мл/1 кг живой массы 2 раза в сутки.

2. При терапии больных парвовирусным энтеритом собак в состав схемы лечения рекомендуется с целью устранения развивающегося вторичного иммунодефицита включать гамавитфорте в аналогичной дозировке.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чермошенцева, Г. В. Клинико-биохимическое обоснование эффективности применения гамавитфорте при бабезиозе собак с гепатопривным синдромом / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2011. - № 1. - С.19-24 (0,4/0,2 печ. л.).

2. Чермошенцева, Г. В. Клинико-биохимическая и иммунологическая оценка эффективности применения гамавитфорте при лечении больных парвовирусным энтеритом собак / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2012. - № 1. - С. 64-67 (0,27/0,13 печ. л.).

3. Чермошенцева, Г. В. Перспективы применения гамавита форте при лечении больных парвовирусным энтеритом собак / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Вавиловские чтения-2010: материалы Междунар. науч.-практ. конф. - Саратов, 2010. - Т. 2. - С. 123-125 (0,2/0,1 печ. л.).

4. Чермошенцева, Г. В. Клинико-биохимическая оценка эффективности применения гамавита форте при лечении больных бабезиозом собак с гепатопривным синдромом / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников, И. Г. Мануилова // Вавиловские чтения-2010: материалы Междунар. науч.-практ. конф. - Саратов, 2010. - Т. 2. - С. 126-128 (0,2/0,07 печ. л).

5. Чермошенцева, Г. В. Иммунологическая оценка эффективности применения гамавита форте при лечении больных бабезиозом собак с гепатопривным синдромом / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Ветеринарная медицина: материалы Междунар. науч.-практ. симпозиума. - Саратов, 2010. - С. 285-290 (0,33/0,17 печ. л.).

6. Чермошенцева, Г. В. Иммунологические показатели эффективности применения гамавита форте при лечении больных бебезиозом собак с гепатопривным синдромом / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников, Л. В. Анникова // Vedecky pokrok na prelomu tysyachalety - 2011: Materialy VII mezinarodni vedecko-prakticka conference. - Praha, 2011. - P. 55-59 (0,33/0,1 печ. л.).

7. Чермошенцева, Г. В. Иммунологическая оценка эффективности применения гамавита форте при лечении больных парвовирусным энтеритом собак / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Современные тенденции развития медицины, ветеринарии и фармакологии: V Междунар. науч. конф.; сб. науч. работ. - Украина; Великобритания, заочно-интерактивная форма, 2011 (0,13/0,07 печ. л.).

8. Чермошенцева, Г. В. Клинико-биохимическая оценка эффективности применения гамавита форте при лечении больных бабезиозом собак с гепатопривным синдромом / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства: материалы Межрегион. науч.-практ. конф. - Самара, 2010. - С. 7-12 (0,4/0,2 печ. л.).

9. Чермошенцева, Г. В. Иммунологическое обоснование эффективности применения гамавита форте при бабезиозе собак / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России: материалы восьмой Всерос. дистанционной науч.-практ. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых. - Поселок Персиановский, 2011. - С. 72-75 (0,27/0,13 печ. л.).

10. Чермошенцева, Г. В. Методические положения по комплексному лечению больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак с использованием современных иммуномодулирующих препаратов / Г. В. Чермошенцева, В. В. Анников // ОВМ РАСХН. - Саратов, 2012. - С. 11 (0,73/0,37 печ. л.).

Размещено на Allbest.ru

...