Усовершенствование лабораторной диагностики хламидиоза крупного рогатого скота
Анализ эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота (КРС) в Республике Татарстан. Разработка тест-системы для серологической диагностики хламидиоза у КРС иммуноферментным методом. Иммуноферментная индикация хламидийных антител у КРС.
| Рубрика | Сельское, лесное хозяйство и землепользование |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 21.07.2018 |
| Размер файла | 49,3 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
Усовершенствование лабораторной диагностики хламидиоза крупного рогатого скота
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология,
эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
кандидата ветеринарных наук
Банзузи Бадиата Арно Сезар
Казань, 2011
Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Равилов Рустам Хаметович
Официальные оппоненты:
доктор ветеринарных наук, профессор Хазипов Нариман Залилович
доктор ветеринарных наук, профессор Гаффаров Харис Зарипович
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия»
Защита состоится «___» _________ 2011 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 220.034.01 при ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (420029, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (420029, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35).
Автореферат разослан «___» __________ 2011 года.
Ученый секретарь диссертационного совета, д.в.н., профессор А.К. Галиуллин
Общая характеристика работы
иммуноферментный хламидийный скот серологический
Актуальность темы. Хламидийные инфекции широко распространены среди всех видов млекопитающих животных и птиц. Заболевание наносит существенный экономический ущерб различным отраслям животноводства и птицеводства, вызывая гибель животных, патологию их воспроизводительных органов, аборты, рождение мертвого или нежизнеспособного приплода. Распространенность возбудителей хламидиозов в природе среди домашних и диких животных, а также птиц представляет постоянную угрозу спарадических заболеваний для людей, профессионально не занятых в сельском хозяйстве (Шафикова Р.А., 1991; Хамадеев Р.Х. с соавт., 1997; Равилов Р.Х. , 1999; Равилов А.З. с соавт., 2000 и др.).
В 1956 году Schoop G. и Kauker E. в ФРГ впервые серологическим методом подтвердили, что причиной аборта у коров являются хламидии. В настоящее время хламидиоз у этого вида животных достаточно подробно изучен. Большой вклад в изучение хламидийных инфекций у коров внесли ученые Казанской школы хламидиологов. Большое внимание исследователи уделяли совершенствованию методов лабораторной диагностики (Гаффаров Х.З., 1969; Хамадеев Р.Х., 1975, 1984; Равилов А.З. с соавт., 2000 и др.).
Лабораторная диагностика хламидиоза включает обнаружение возбудителя в органах и тканях путем световой и люминесцентной микроскопии, выделение возбудителя на куриных эмбрионах и культурах клеток, выявление в сыворотках крови, больных и переболевших животных комплемент связывающих антител. Эти тест-системы имеют целый ряд недостатков: длительность получения ответа, низкая чувствительность и специфичность, субъективность оценки результатов исследования.
Одно из важных мест в лабораторной диагностике хламидиозов занимают методы выявления в сыворотках крови инфицированных животных специфических антител. В настоящее время вопросы серологической диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота остаются открытыми.
Наиболее широко в ветеринарной практике применяется реакция связывания комплемента. Однако согласно данным J. Schachter et al. (1975) при помощи РСК удается выявить только 50% больных животных. Впервые РСК была использована для обнаружения хламидийных антител в 1935 году, а в современных ветеринарных лабораториях до сих пор используют наборы диагностикумов, технология изготовления которых была разработаны в 70-е годы прошлого столетия.
В последние годы для индикации и идентификации хламидий предложены современные иммунохимические и молекулярно-генетические методы, такие как: иммуноферментный анализ, иммуноблотинг, гибридомные технологии, полимеразная цепная реакция и др. (Engvall E., Perlmann P., 1971; Van Zaane D., Ijzerman J., 1984; Lema F. et al., 1986; Шафикова, Р.А. с соавт., 1987; Белоусов В.И. с соавт., 1995; Гришаев М.П. с соавт, 1998; Сухова Л.П. с соавт., 1998; Обухов И.Л., Яковенко М.В., 2000; Равилов, Р.Х. с соавт., 2000 и др.). Перечисленные методы обладают высокой чувствительностью, специфичностью, воспроизводимостью, возможностью одновременно исследовать большое число проб, простотой постановки и учета результатов, способностью выявлять межвидовые и межштаммовые различия хламидий. До настоящего времени в Российской Федерации не выпускаются наборы для иммуноферментной индикации хламидийных антител у крупного рогатого скота.
Исходя из этого, перспективным является усовершенствование лабораторной диагностики хламидийных инфекций у крупного рогатого скота с учетом достижений современной биотехнологии.
Цель и задачи исследований. Цель исследований - усовершенствовать средства лабораторной диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота.
В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:
- провести анализ эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан;
- провести эпизоотологическое обследование некоторых неблагополучных в отношении хламидийных инфекций сельхозпредприятий Республик Татарстан, Башкортостан и Марий Эл;
- разработать тест-систему для серологической диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота иммуноферментным методом;
- провести сравнительные серологические исследования неблагополучного по хламидиозу крупного рогатого скота хозяйств с использованием РСК и ИФА.
Научная новизна. Впервые проведен комплексный анализ эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан.
Разработан новый метод получения антигена из очищенной культуры хламидий.
Впервые сконструирована и апробирована в лабораторных и производственных условиях иммуноферментная тест-система для индикации в сыворотках крови крупного рогатого скот противохламидийных антител.
С использованием разработанного набора диагностикумов проведен серологический скрининг спонтанно зараженных хламидиями крупного рогатого скота.
Практическая ценность. Результаты исследований позволили установить эпизоотическую ситуацию по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан.
Проведено эпизоотологическое обследование некоторых неблагополучных в отношении хламидийных инфекций сельхозпредприятий Республик Татарстан, Башкортостан и Марий Эл, разработаны рекомендации по их оздоровлению.
Разработана иммуноферментная тест-система для ретроспективной диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота.
Результаты проведенных исследований вошли в следующие разработанные и внедренные в практику нормативно-технические документы: “Временное наставление по применению иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота (в порядке опыта)”, утвержденное ГУВ Кабинета министров РТ 18 мая 2011 г.; “Временную инструкцию по изготовлению и контролю иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота”, утвержденную ректором КГАВМ 18 мая 2011 г.; “Технические условия на опытную партию иммуноферментных тест-систем для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота”, утвержденные ректором КГАВМ 18 мая 2011 г.
Пути реализации результатов исследования. Полученные результаты исследований могут быть использованы для совершенствования диагностических и противоэпизоотических мероприятий при хламидиозе крупного рогатого скота, а также при организации учебно-педагогического процесса в ВУЗах при подготовке и повышении квалификации ветеринарных специалистов.
Личный вклад соискателя. Экспериментальные данные получены автором самостоятельно. Теоретическое обоснование, проведение экспериментов, анализ и обработка полученных данных проведены при личном участии автора. Результаты работы опубликованы и апробированы в производственных условиях.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:
- Ежегодных итоговых заседаниях проблемных советов ФГБОУ ВПО “Казанская академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана” (2009 и 2010 гг.);
- Научно-практической конференции “Ветеринарная медицина домашних животных” (Казань, 2009 г.);
- Научно-практической конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2011 г.).
- Всероссийских научно-практических конференциях “Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития” (Саратов, 2009 и 2011 гг.);
- XVII-XIX Московских международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2009-2011 гг.).
Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 в изданиях рекомендованных ВАК для кандидатских диссертаций.
Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты:
- хламидиоз крупного рогатого скота имеет существенное распространение на территории Республики Татарстан;
- общепринятые методы диагностики хламидиоза не позволяют в полной мере контролировать эпизоотическую ситуацию по хламидийным инфекциям;
- разработанная иммуноферментная тест-система более эффективна по сравнению с РСК при выявлении хламидийных антител у крупного рогатого скота.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах компьютерного текста (текстовый редактор “Microsoft Word 2003”, стиль “Times New Roman”, размер шрифта 14 пт, интервал полуторный) и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (4 главы), обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения и указатель литературы (всего 242 источника, в том числе 140 иностранных и 4 ссылки на сайты Internet). Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 3 рисунками. Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований.
Содержание работы
Исследования по изучению хламидиоза крупного рогатого скота проводились в 2008-2011 годы на кафедре эпизоотологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», в ГУ «Республиканская ветеринарная лаборатория» и Республиканском центре по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционных заболеваний Министерства здравоохранения Республики Татарстан. На отдельных этапах исследования проводились совместно с к.б.н. Герасимовым В.В.
Эпизоотологическое обследование проводилось среди поголовья крупного рогатого скота в некоторых хозяйствах республик Татарстан, Марий Эл и Башкортостан. Для оценки эпизоотической ситуации учитывали: благополучие по инфекционным болезням; условия комплектования поголовья, кормления и содержания животных; возможные источники хламидийной инфекции и пути ее передачи; результаты лабораторных исследований патологического материала и сывороток крови животных. При этом использовали ветеринарную учетную документацию районных ветеринарных лабораторий. Для уточнения предварительного диагноза на хламидиоз, проводили лабораторные исследования.
Для анализа встречаемости хламидиоза у крупного рогатого скота нами были использованы данные о результатах исследования клинических и патологических материалов в лаборатории вирусологии ГУ «Республиканская ветеринарная лаборатория», а также в районных ветеринарных лабораториях муниципальных образований Республики Татарстан (серологическими и вирусологическими методами) в период 2001-10 гг.
Во время нашей работы было исследовано параллельно в РСК и ИФА 1153 пробы сывороток крови крупного рогатого скота, подозрительного по заболеванию хламидиозом. Пробы были получены из разных районов и хозяйств республик Татарстан, Марий Эл и Башкортостан. Из сельхозпредприятий, где проводилось эпизоотологическое обследование, были получены 55 мазков-отпечатков (25 со слизистой оболочки влагалища коров и 30 с конъюнктивы телят).
При получении контрольных положительных и отрицательных сывороток для иммуноферментной тест-системы в серологических тестах было тестировано 586 проб сывороток. В серологических тестах испытывали сыворотки подозрительных по заболеванию крупного рогатого скота, а также различные варианты антигенов, которые были получены при конструировании иммуноферментной тест системы для диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота, положительные и отрицательные контрольные сыворотки.
РСК проводили общепринятыми методами, согласно “Методическим указаниям по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных“, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 30.06.99 г. (№ 13-7-2/643). ИФА выполняли по непрямому методу. В качестве коньюгата при выполнении анализа использовали белок А, меченые пероксидазой хрена (НПО “Пептоскрин-2“, г.Электросталь). Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра Multiskan, измеряя оптическую плотность (ОП) смеси реагентов в лунках при длине волны 450 нм. «0» (бланк) устанавливали по воздуху.
В качестве биологического материала для получения антигена использовали желточные оболочки павших куриных эмбрионов, которые были инфицированы штаммом “Ростиново-70”. Очищенную суспензию обрабатывали ультразвуком и детергентами в различных сочетаниях. Всего было испытано 5 вариантов обработки антигена хламидий: обработка ультразвуковым дезинтегратором (УЗДИ); обработка УЗДИ и 0,1%-ным раствором додецилсульфата натрия; обработка УЗДИ и 1%-ным раствором дезоксихолата натрия; обработка УЗДИ и 1%-ным раствором твина-80; обработка УЗДИ и 1%-ным раствором тритона-Х100. Готовый антиген стандартизировали по содержанию белка на спектрофотометре СФ-46.
Специфическую хламидийную сыворотку получали на клинически здоровых серонегативных быках-донорах. Контрольные (отрицательные) сыворотки получали от серонегативных быков-доноров.
Результаты исследований подвергали математической обработке на персональном компьютере с использованием программного комплекса Microsoft Excel 2003. Цифровые данные подвергали статистическому анализу с определением средних величин и их ошибок непосредственным и разностным методом по Стьюденту.
Степень распространения хламидийных инфекций среди поголовья крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Татарстан и некоторых сельхозпредприятиях Республик Башкортостан и Марий Эл
Анализ эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан. Для анализа эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан нами были использованы данные о результаты исследований клинических и патологических материалов в лаборатории вирусологии ГУ «Республиканская ветеринарная лаборатория», а также в районных ветеринарных лабораториях муниципальных образований Республики Татарстан (серологическими и вирусологическими методами) с 2001 по 2010 гг.
За последние 10 лет в ветеринарных лабораториях Республики Татарстан за последние 10 лет серологическим исследованиям на хламидиоз в районных ветеринарных лабораториях в среднем за год было подвергнуто более 30 тыс. голов крупного рогатого скота, из них реагировало с хламидийным антигеном в РСК в среднем 0,98% исследуемых животных, что в цифровом обозначении составляет 294,5 проб в год.
При анализе динамики количества исследованных проб и позитивных результатов серологических исследований сывороток крови крупного рогатого скота с хламидийным антигеном установлено, что наибольшее число исследований в ГУ «Республиканская ветеринарная лаборатория» проводится во втором и четвертом кварталах года.
В разрезе районов данные о результатах серологических исследований крупного рогатого скота в период 2007-10 гг. свидетельствуют о том, что наибольшее число исследований проведено в лаборатории города Набережные Челны и Балтасинской ветеринарной лаборатории, соответственно 14493 и 11671 проба, меньше всего исследований проведено в Аксубаевской, Актанышской и Буинской ветеринарных лабораториях, соответственно 6, 13 и 20 проб за 4 года, наибольшее количество положительных результатов РСК также получено в лаборатории города Набережные Челны и Балтасинской ветеринарной лаборатории, соответственно 240 (1,66%) и 439 (3,76%) проб. Кроме того, при исследовании 624 проб в Арской районной ветеринарной лаборатории было получено 120 положительных результатов, что составило 18,75%. В 23 районах республики за последние 4 года не было выявлено ни одного реагирующего животного, несмотря на то, что в хозяйствах этих районов ветеринарные специалисты регулярно регистрируют у крупного рогатого скота (коров и телят) клинические признаки, характерные для хламидийных инфекций (аборты, мертворождения, бесплодие, эндометриты, конъюнктивиты, артриты и другие).
За последние 10 лет в ветеринарных лабораториях Республики Татарстан не получено не одного позитивного результата световой и люминесцентной микроскопии, а также ни разу не удалось выделить хламидии на лабораторных моделях.
Эпизоотологическое обследование некоторых сельхозпредприятий республик Татарстан, Башкирия и Марий Эл в отношении хламидийных инфекций крупного рогатого скота
Акт эпизоотологического обследования животноводческой фермы АФ «Камскоустьинская» (подразделение «Сюкеевское»)
В хозяйстве в результате лабораторного обследования всего поголовья быков было выявлены животные инфицированные возбудителем хламидиоза (Chlamidia psittaci). Дальнейшему распространению инфекции способствовали абортировавшие коровы и телята, рожденные от больных коров, которые выделяли возбудитель во внешнюю среду с различными истечениями из половых органов, абортированными плодами, последом, а также с мочой, молоком и фекалиями. Передача возбудителя от одного животного к другому происходило при искусственном осеменении коров и телок, аэрогенным и контактным путями. Факторами передачи возбудителя инфекции явились инфицированные и загрязненные выделениями больных животных корма, вода, предметы ухода.
Проведенные в 2007 году противоэпизоотические мероприятия оказались малоэффективными, болезнь в хозяйстве не ликвидирована, и на сегодняшний день имеются больные животные. Хозяйству нанесен большой экономический ущерб, который складывается из снижения продуктивности, недополучения телят, снижения прироста, из затрат на лечение и мероприятии направленных на ликвидацию болезни.
Многие ветеринарно-санитарные мероприятия не соблюдаются, мероприятия направленные на обезвреживание молока не отвечает требованиям законодательства. Молоко от абортировавших коров с клинической формой мастита из непораженных четвертей подлежит обязательному кипячению в течение 30 минут и может быть использовано в хозяйстве только для кормления животных. Молоко из пораженных четвертей подлежит уничтожению.
В хозяйстве необходимо огородить территорию комплекса, построить санпропускник, площадку для вскрытия, специальные карантинные помещения и изоляторы.
Для ликвидации заболевания рекомендуется использовать специфическую иммунопрофилактику в сочетании с антибиотикопрофилактикой.
Всех животных подозрительных по заболеванию хламидиозом подвергать обязательному лабораторному исследованию бактериологическими и серологическими методами.
Противоэпизоотические мероприятия проводить согласно соответствующей инструкции.
Акт эпизоотологического обследования животноводческой фермы ЗАО “Марийское”
В результате проведенного эпизоотологического обследования получены следующие данные: у коров нередко регистрируют эндометриты, перегулы и бесплодие; состояние телят 20-дневного возраста удовлетворительное, клинически у некоторых телят регистрируются конъюнктивиты. Однако установлено, что телята имеют упитанность и массу ниже нормы для галштинской породы в этом возрасте. Кроме того, телят первых дней жизни содержат в одном помещении и в непосредственной близости от глубокостельных и отелившихся коров родильного отделения. Состояние и упитанность 3-х месячных телят имеет те же параметры, что и телят первых недель жизни. У них регистрируют конъюнктивиты и заболевания органов дыхания. Условия содержания этой группы телят можно оценить как удовлетворительное или даже хорошее. Среди телят старше 3 месяцев регистрируются симптомы респираторной инфекции. В содержании телят установлено нарушение принципа “все пусто - все занято”.
Акт эпизоотологического обследования животноводческой фермы ООО СХП «Агрогалс» (Республика Башкортостан)
В хозяйстве в результате лабораторного обследования всего поголовья быков было выявлено инфицирование животных возбудителем хламидиоза. Дальнейшему распространению инфекции способствовали выделение возбудителя во внешнюю среду с различными истечениями из половых органов, абортированными плодами, последом, а также с мочой, молоком и фекалиями. Передача возбудителя от одного животного к другому происходила алиментарным, аэрогенным и контактным путями. Факторами передачи возбудителя инфекции явились инфицированные и загрязненные выделениями больных животных корма, вода, предметы ухода. Противоэпизоотические мероприятия в хозяйстве не проводились.
Выявление комплементсвязывающих антител и антигена хламидий в клинических материалах. На предварительных этапах исследований нами были проведены лабораторные исследования 1153 проб сывороток крови подозрительного по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота. Наибольшее число проб сыворотки крови для проведения исследований были получено в Республике Татарстана из OOO Агрофирма «Сарсазы» Чистопольского района (270 проб); из OOO им. Тимерязева Балтасинского района (197 проб); из ПК «Камский» Тукаевского района (112 проб) и из ОАО ”КВ-Агро” ж/к Юхмачи Алькеевского района (103 проб). Из ближайших Республик (Марий Эл и Башкортостан) было получено соответственно 40 и 72 пробы сыворотки крови крупного рогатого скота от животных подозрительных по заболеванию хламидиозом. При этом в РСК реагировали только 1,4% подозрительных по заболеванию хламидиозом животных.
В хозяйствах, где удалось выявить серопозитивных животных (OOO Агрофирма «Сарсазы» Чистопольского района РТ, OOO им. Тимерязево Балтасинского района РТ и OOO «Нур-Агро» Ютазинского района РТ), как правило, регистрировали острое течение хламидийной инфекции в виде абортов и мертворождений у коров. Процент реагирующих в РСК животных в этих хозяйствах варьировал в пределах 1,1-5,1. В остальных сельхозпредприятиях, где регистрировали преимущественно хронические формы патологии (эндометриты у коров, артриты и конъюнктивиты у телят) реагирующих в РСК животных выявить не удалось.
Анализ результатов исследований сывороток крови подозрительного по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота в РСК дает нам основание утверждать, что хламидийная инфекция имеет определенное распространение среди поголовья этого вида животных в Республике Татарстан, однако указанный метод исследования не всегда дает полную картину распространения инфекции на восприимчивом поголовье.
Все 1153 сыворотки в дальнейшем были испытаны в ИФА при помощи разработанной нами тест-системы, результаты этих исследований представлены в следующих главах диссертации.
Кроме сывороток крови, из трех хозяйств: OOO АФ «Камско-Устьинская» Камско-Устьинского района РТ, ЗАО «Марийское» Медведевского района РМЭ и ООО СХП «Агрогалс» Аургазинского района РБ, где мы проводили эпизоотологическое обследование, были получены мазки-отпечатки (со слизистой влагалища коров и конъюнктивы телят). Во всех обследуемых хозяйствах имеются инфицированные хламидиями животные. Их доля среди исследованных колеблется в пределах от 30 до 60%, среди телят эти цифры составляю 30-40%, среди коров 40-60%. Всего исследованию в РИФ было подвергнуто 55 мазков-отпечатков и получено 23 или 41,8% положительных результатов.
Все это позволяет констатировать наличие хламидийной инфекции среди крупного рогатого скота в указанных хозяйствах. Необходимо указать, что сыворотки крови, полученные из этих сельхозпредприятий в РСК со специфическим хламидийным антигеном не реагировали.
Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител
Подбор метода получения хламидийного антигена. При выполнении твердофазного варианта ИФА по выявлению антител важным моментом, предшествующим самой реакции, является подготовка антигена. Для сравнения в ИФА нами были получены и испытаны лизатные антигены хламидий.
Очищенную суспензию хламидий обрабатывали детергентами: 0,1%-ным раствором додецилсульфата натрия, 1%-ным раствором дезоксихолата натрия, 1%-ным раствором твина-80 и 1%-ным раствором тритона-Х100, а также ультразвуком в различных сочетаниях. Всего было испытано 5 вариантов обработки антигена хламидий. От детергентов и обломков клеток освобождались 3-х кратным переосаждением суспензии насыщенным раствором сульфата аммония. Надосадок, содержащий антиген Ch. psittaci, служил исходным материалом для дальнейших процедур очистки, которую проводили путем ультрацентрифугирования при 100000g в течение 6,5 часов в градиенте плотности сахарозы 5-55% (w/v) с шагом 5%. Было получено по 11 фракций каждого варианта обработки хламидийной биомассы, из которых были изготовлены антигены для испытания в ИФА с положительными и отрицательными сыворотками крупного рогатого скота.
Максимальный коэффициент специфичности показал антиген, который подвергался обработке ультразвуком и 0,1%-ным раствором дезоксихолата натрия из фракции собранной в 35%-ной сахарозе ступенчатого градиента. Коэффициент специфичности реакции иммуноферментного анализа при использовании этого антигена в модельных опытах составил 10,2.
Полученный специфический антиген не реагировал с геторологичными сыворотками, содержащими антитела против бруцелл, микоплазм и вируса чумы плотоядных. При проверке полученного в идентичных условиях контрольного антигена из интактных желточных мешков куриных эмбрионов было установлено, что положительные и отрицательные контрольные сыворотки с ним не реагируют.
Конструирование иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител. При разработке тест-системы за основу был взят непрямой метод постановки ИФА - наиболее перспективный при разработке тест-систем для выявления антител. Конструирование иммуноферментной тест-системы включало несколько этапов: подбор режима “посадки” антигена на полистироловую основу; отбор контрольных положительных и отрицательных сывороток; титрование конъюгата; подбор регламента проведения реакции; определение критериев оценки результатов тестирования, определение срока годности тест-системы.
Подбор режима “посадки” антигена
В процессе подбор режима посадки антиген, в модельных опытах нами были испытаны концентрации антигена от 1 до 12 мкг/мл для определении оптимальной концентрации белка в антигене. Наименьшая концентрация белка в антигене, при которой удается достичь наивысшей специфичности тест-системы, составляет 6 мкг/мл.
При подборе режима посадки антигене на полистироловую основу мы испытывали 3-, 6-, 12-, 24-, 48- и 72-часовые режимы экспозиции. Испытывали также температурный режим при каждом режиме посадки антигена. Оптимальный режим посадки антигена, при которой удается достичь наивысшего коэффициента специфичности тест-системы, является 24 часа при температуре 4оС.
Получение контрольных положительных и отрицательных сывороток
Контрольные сыворотки получали от животных доноров. Обработку сывороток проводили следующим образом: кровь получали в закрытой системе от зафиксированных животных. Отстоявшуюся сыворотку сливали в центрифужные стаканы и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 минут. «Осветленную» сыворотку отсасывали в бутыль, консервировали азидом натрия в конечной концентрации 0,1%.
Через сутки консервированную сыворотку исследовали в РСК и проверяли на стерильность. При исследовании в РСК положительные контрольные сыворотки должны были реагировать со специфическим хламидийным антигеном, а отрицательные контрольные сыворотки не должны.
Титрование конъюгата
Титр конъюгата был определен путем шахматного титрования специфического антигена и положительных хламидийных сывороток.
В результате нами установлено, что для исследования сывороток крупного рогатого скота к 10 мкл базового раствора конъюгата (содержимое ампулы с леофильновысушенным препаратом растворяли в 100 мкл дистиллированной воды) необходимо добавлять 1 мл раствора ФСБР-Т.
В модельных опытах сначала подбирали регламент экспозиции сывороток (при одинаковой экспозиции конъюгата), а затем наоборот.
При анализе результатов этих опытов учитывали необходимость максимального сокращения времени исследования проб, а также то, что чрезмерное увеличение времени инкубации планшете с реагентами в термостате часто приводит к снижению коэффициента специфичности тест-системы. Оптимальным временем экспозиции сывороток оказалась инкубация планшета в термостате в течение 60 минут, конъюгата - 40 минут.
Подбор регламента проведения реакции
Для постановки ИФА мы подбирали регламент проведения исследования, при этом мы ориентировались на регламенты выполнения ИФА, которые используют в медицинских тест-системах для диагностики хламидиоза.
Сенсибилизированный антигеном планшет один раз предварительно промывали раствором (ФСБР-Т), заливали в каждую лунку по 400 мкл. По истечении 5 мин раствор аккуратно удаляли в сосуд с дезинфицирующим раствором. По окончании промывки тщательно удаляли влагу из лунок, постукивая перевернутыми стрипами по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. При этом старались допускать высыхания лунок между отдельными операциями при постановке реакции.
Контрольные образцы разводили в растворе ФСБР-Т 1:100 и вносили по 100 мкл в лунку. Контрольный образец в рабочем разведении вносили в 2 лунки: контрольную положительную сыворотку крупного рогатого скота (К+) и контрольную отрицательную сыворотку крупного рогатого скота (К-), Одну лунку оставляли без добавления сыворотки для контроля конъюгата. Планшет помещали в термостате, инкубировали 60 минут при 37єС. Лунки 5 раза промывали раствором ФСБР-Т, заливая в каждую лунку по 400 мкл.
В каждую лунку планшета вносили по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, после чего планшет или стрипы помещали в термостат и инкубировали 60 минут при температуре 37єС. Лунки 5 раз промывали раствором ФСБР-Т, заливая в каждую лунку по 400 мкл. Остатки содержимого лунок удаляли легким постукиванием по 4-5 слоям фильтровальной бумаги.
В каждую лунку планшета вносили по 100 мкл хромогена и инкубировали при комнатной температуре в темном месте в течение 30 минут. Затем реакцию останавливали добавлением в лунки по 50 мкл стоп-реагента и проводили учет результатов ИФА.
Определение критериев оценки результатов тестирования
Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) при длине волны 450 нм.
В большинстве медицинских иммуноферментных тест-систем для оценки результатов реакции используют понятие «критическая оптическая плотность» или ОП крит., которую вычисляют по формуле: ОПкрит.= ОПср.К- + 0,2, где ОПср.К- среднее значение оптической плотности цветной реакции иммуноферментного анализа в лунках с отрицательными контрольными сыворотками.
Чтобы проверить насколько данная формула подходит для нашей тест-системы все имеющиеся в нашем распоряжении 1153 сыворотки, были испытаны в ИФА и результаты оптической плотности цветных реакций в лунках с этими сыворотками были разделены на группы: ОП 0,2 о.е., ОП=0,2-0,4, ОП=0,4-0,6, ОП=0,6-0,8 и ОП0,8. ОП крит., вычисленное по вышепредставленной формуле, составило в опыте 0,386 о.е.
Используя данную формулу, мы установили, что 89,4% (689 проб) из числа сывороток, которые считаются «отрицательными» (771 проба), имели ОП менее 0,2 о.е. При этом, 64,1% (245 проб) из числа сывороток, которые считаются «положительными» (382 пробы), имели ОП выше ОП крит. и имели ОП в диапазоне 0,4-0,6 о.е.; 29,3% (112 проб) - имели ОП в диапазоне 0,6-0,8 о.е.; 6,6% (25 проб) - имели ОП более 0,8 о.е.
Таким образом, мы установили, что в разработанной нами иммуноферментной тест-системе положительными считаются образцы исследуемых сывороток, ОП которых превышает критическое значение (ОПкрит.), которое рассчитывается по формуле: ОПкрит.= ОПср.К- + 0,2, где ОПср.К- - среднее арифметическое оптической плотности цветной реакции в лунках с отрицательными контролями.
Антиген адсорбированный на полистироловых планшетах должен реагировать с позитивными сыворотками крупного рогатого скота (в разведении 1:100) и не реагировать с отрицательными, т.е. результат подлежит учету, если среднее значение ОП контрольной отрицательной сыворотки (ОПср. К-) не превышает 0,2 оптические единицы (о.е.), а среднее значение ОП контрольной положительной сыворотки (ОПсрК+) не менее 0,8 о.е.
Используя эти критерии оценки реакции, мы установили, что результаты ИФА в разработанной нами тест-системе можно также регистрировать визуально по интенсивности окрашивания цветной реакции ферментзависимой метки с субстратом. Положительными считаются образцы, интенсивность окрашивания которых в лунках с исследуемой сывороткой отчетливо отличаются от таковой в отрицательном контроле. Интенсивность окрашивания положительного контроля при этом должна быть достаточно выраженной.
Определение срока годности тест-системы.
Для определения срока годности тест-системы несколько коробок опытной партии диагностикума было помещено на хранение. Через 3, 6, 9, 12, 18 и 24 месяцев упаковку вскрывали и проводили анализ с положительными и отрицательными контрольными сыворотками.
Исследованиями установлено, что тест-система сохраняет активность в течение 24 месяцев со дня изготовления. Таким образом, срок годности диагностикума определен в 12 месяцев при соблюдении требований к применению и хранению. Датой изготовления тест-системы считают наиболее раннюю дату изготовления одного из компонентов диагностикума.
Таким образом, в результате исследований представленных в этой главе нами разработан набор для диагностики хламидиоза крупного рогатого скота в ИФА путем выявления антител, включающий: иммуносорбент - планшет для иммунологических реакций, сорбированный специфическим хламидийным антигеном; положительные контрольные образцы - сывороток крови крупного рогатого скота, содержащие хламидийные антитела; отрицательные контрольные образцы - сывороток крови крупного рогатого скот, не содержащие хламидийные антитела; конъюгат - белок А, меченный пероксидазой хрена; фосфатно-солевой буферной раствор с твином; цитратный буферный раствор с перекисью водорода; хромоген - тетраметилбензидин (ТМБ); стоп-реагент - 4N раствор серной кислоты.
Тест-система имеет достаточно высокий коэффициент специфичности (6,5-7,5), что позволяет регистрировать результаты анализа не только инструментально, но и визуально. В этом случае учет проводится по интенсивности окрашивания цветной реакции ферментзависимой метки с субстратом. Положительными будут образцы, интенсивность окрашивания которых в лунках с исследуемой сывороткой будут отчетливо отличиться от таковой в отрицательном контроле. Интенсивность окрашивания положительного контроля при этом должна будет быть достаточно выраженной.
Сравнительное изучение эффективности РСК и ИФА для ретроспективной диагностики хламидиоза крупного рогатого скота. В наших опытах в РСК и ИФА параллельно были испытаны 1153 пробы сывороток крови крупного рогатого скота, подозрительного по заболеванию хламидиозом. Результаты этих исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1. Исследования сывороток крови крупного рогатого скота, подозрительного по заболеванию хламидиозом, в РСК и ИФА
|
РСК+/ИФА+ |
РСК+/ИФА- |
РСК-/ИФА+ |
РСК-/ИФА- |
Общее количество проб |
|||||
|
кол-во |
% |
кол-во |
% |
кол-во |
% |
кол-во |
% |
||
|
14 |
1,2 |
2 |
0,2 |
368 |
31,9 |
769 |
66,7 |
1153 |
Из 1153 сывороток крови крупного рогатого скота в РСК с хламидийным антигеном прореагировали положительно и сомнительно 16 проб (1,4%). При исследовании в ИФА было установлено, что из 16 реагирующих в РСК сывороток, 14 (1,2%) были также позитивными в ИФА, а 2 сыворотки (0,2%) дали отрицательный результат в иммуноферментном тесте.
368 проб (31,9%), ранее негативных в РСК, в ИФА реагировали положительно. Общее количество реагирующих в ИФА проб составило 382 (33,1%). 769 сыворотка крови (66,7%) крупного рогатого скота оказались отрицательными и в РСК, и в ИФА. Общее число отрицательных в ИФА проб составило 771 (66,9%). Количество сывороток, результаты которых совпали в обеих реакциях составило 785 (68,3%). Значение показателя РСК отрицательно / ИФА положительно, равное 31,9%, говорит о более высокой чувствительности иммуноферментного теста. Кроме того, следует отметить, что проведение РСК - весьма трудоемкий по сравнению с ИФА процесс, для которого требуется, как минимум, 4-5 часов, а для постановки последней - около 3 часов.
Материалы по разработке ИФА в качестве диагностического теста для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота и нормативно-техническая документация рассмотрены и одобрены на научно-техническом совете КГАВМ (протокол № 6 от 25.03.2011 г.). Временная инструкция и технические условия утверждены ректором КГАВМ, наставление по применению тест-системы - начальником ГУВ Кабмина РТ 18 мая 2011 г.
Серологический скрининг поголовья крупного рогатого скота в отношении хламидийных инфекций с использованием ИФА. Нами был проведен серологический скрининг поголовья крупного рогатого скота в отношении хламидийной инфекции. Всего было исследовано 1153 пробы сывороток крови крупного рогатого скота подозрительного по заболеванию хламидиозом. Результаты этих исследований представлены в таблице 2.
Таблица 2. Результаты исследования сывороток крови подозрительного по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота в РСК и ИФА
|
Республика, район |
Название организации |
Количество проб сывороток крови |
Результат РСК |
Результат ИФА |
|||
|
+ (%) |
_ (%) |
+ (%) |
_ (%) |
||||
|
Республика Татарстан |
|||||||
|
Чистопольский |
OOO Агрофирма «Сарсазы» |
270 |
3 (1,1) |
267 (98,9) |
49 (18,1) |
221 (81,9) |
|
|
Балтасинский |
OOO им. Тимерязева |
197 |
8 (4,1) |
189 (95,9) |
127 (64,5) |
70 (35,5) |
|
|
Тукаевский |
ПК «Камский» |
112 |
---- |
112 (100) |
18 (16,1) |
94 (83,9) |
|
|
Алькеевский |
ОАО «КВ Агро», ж/к Юхмачи |
103 |
---- |
103 (100) |
---- |
103 (100) |
|
|
Ютазинский |
OOO «Нур-Агро» |
98 |
5 (5,1) |
93 (94,9) |
52 (55,9) |
46 (44,1) |
|
|
Кайбицкий |
OOO АФ «Кубня» |
75 |
---- |
75 (100) |
47 (62,7) |
28 (37,3) |
|
|
Сабинский |
ООО «Утра Саба» |
73 |
---- |
73 (100) |
15 (20,5) |
58 (79,5) |
|
|
Нурлатский |
ООО «Агроразвитие» |
50 |
---- |
50 (100) |
19 (38,0) |
31 (62,0) |
|
|
Камско-Устьинский |
OOO АФ «Камско-Устьинская» |
48 |
---- |
48 (100) |
15 (31,3) |
33 (68,7) |
|
|
Пестречинский |
OOO ПХ «Герефорд» |
15 |
---- |
15 (100) |
---- |
15 (100) |
|
|
Республика Марий Эл |
|||||||
|
Медведевский |
ЗАО «Марийское» |
40 |
---- |
40 (100) |
17 (17,5) |
23 (72,5) |
|
|
Республика Башкортостан |
|||||||
|
Аургазинский |
ООО СХП «Агрогалс» |
72 |
---- |
72 (100) |
23 (31,9) |
49 (60,1) |
|
|
ВСЕГО |
1153 |
16 (1,4) |
1137 (98,6) |
382 (33,1) |
771 (66,9) |
Процент реагирующих в ИФА животных в хозяйствах варьировал в пределах 16,1-64,5, при этом в РСК данный показатель составил 1,1-5,1.
С использованием разработанной нами иммуноферментной тест-системы были выявлены серопозитивный крупный рогатый скот во всех 3-х хозяйствах, в которых ранее при помощи РСК регистрировались реагирующие животные (OOO Агрофирма «Сарсазы» Чистопольского района РТ, OOO им. Тимерязева Балтасинского района РТ и OOO «Нур-Агро» Ютазинского района РТ).
Кроме того, нам удалось обнаружить специфические антитела в пробах сывороток крови коров из 7 хозяйств, где ранее в РСК реагирующие животные не регистрировались (ПК «Камский» Тукаевского района РТ, OOO АФ «Кубня» Кайбицкого района РТ, ООО «Утра Саба» Сабинского района РТ, ООО «Агроразвитие» Нурлатского района РТ, OOO АФ «Камско-Устьинская» Камско-Устьинского района РТ, ЗАО «Марийское» Медведевского района РМЭ и ООО СХП «Агрогалс» Аургазинского района РБ), а клиническими исследованиями были установлены случаи хронического проявления различной патологии у самок и молодняка, характерной для хламидиоза.
В двух хозяйствах (ж/к Юхмачи ОАО «КВ Агро» Алькеевского района РТ и OOO ПХ «Герефорд» Пестречинского района РТ) антитела против хламидий у подозрительных по заболеванию животных ни в РСК, ни в ИФА так и не были обнаружены.
Таким образом, результаты исследований представленных в этой главе показали высокую эффективность разработанной тест-системы для серологического скрининга поголовья крупного рогатого скота в отношении хламидийных инфекций, особенно в хозяйствах, где РСК не позволяет адекватно оценить эпизоотическую ситуацию.
Выводы
1. Хламидийные инфекций крупного рогатого скота имеют существенное распространение в Республике Татарстан. За последние 10 лет в ветеринарных лабораториях республики подвергается исследованию на хламидиоз в среднем в год 30122,4 проб сывороток крови крупного рогатого скота, полученных от подозрительного по заболеванию хламидиозом и племенных животных. При этом в РСК с хламидийным антигеном в диагностических титрах реагируют в год в среднем 0,98% проб, что в цифровом обозначении составляет в среднем 294,5 проб в год.
2. Эпизоотологическим обследованием и комплексными лабораторными исследованиями (РИФ и ИФА) установлен хламидиоз в некоторых сельхозпредприятиях Республик Татарстан, Марий Эл и Башкортостан.
3. Сконструированная иммуноферментная тест-система позволяет выявлять специфические противохламидийные антитела у спонтанно зараженного крупного рогатого скота. Полученный антиген имеет коэффициент специфичности 10,2 и не реагирует с геторологичными иммунными сыворотками.
4. Анализ результатов исследования сывороток крови подозрительного по заболеванию крупного рогатого скота в разработанной иммуноферментной тест-системе показал, что положительными считаются образцы, у которых оптическая плотность цветной реакции ИФА превышает критическое значение, которое рассчитывается по формуле: ОПкрит.= среднее арифметическое цветной реакции в лунках с отрицательными контролями + 0,2 оптические единицы.
5. При сравнительном исследовании сывороток крови, полученных от подозрительного по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота, в РСК и ИФА с хламидийным антигеном в диагностических титрах реагируют соответственно 1,4% и 33,1%, что свидетельствует о высокой специфичности разработанной иммуноферментной тест-системы. Значение показателя РСК отрицательно / ИФА положительно, равное 31,9%, говорит о более высокой чувствительности разработанной иммуноферментной тест-системы.
6. Серологическим скринингом сывороток крови, полученных от подозрительного по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота, с использованием разработанной иммуноферментной тест-системы позволяет выявлять серопозитивных животных в тех сельхозпредприятиях, где при использовании РСК таковые не регистрировались. В хозяйствах, где в РСК выявляются серопозитивные животные, при использовании ИФА их процент увеличивается с 1,1-5,1 до 18,1-69,5.
Практические предложения
На основании проведенных исследований внесены следующие практические предложения:
1. С целью оперативной диагностики хламидидийных инфекций у крупного рогатого скота ветеринарные специалисты обязаны регистрировать все случаи абортов и мертворождений у коров, уретритов и орхитов у быков, конъюнктивитов и артритов у телят, а также гибели приплода в первые дни жизни.
2. При диагностике заболевания у крупного рогатого скота необходимо использовать сочетание серологических тестов и методов индикации антигенов хламидий в тканях.
3. Иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота предложена для промышленного изготовления (Временное наставление по применению иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота, утверждено начальником ГУВ Кабмина РТ 18 мая 2011 г.) и может быть использована в ветеринарной практике для подтверждения ранее установленного другими методами диагноза на хламидиоз у спонтанно больных животных, серологическом скрининге поголовья крупного рогатого скота в отношении хламидиоза, а также оценке иммунитета у вакцинированных животных.
Список опубликованных работ
1. Банзузи, Б.А.С. Методика получения антигена для конструирования иммуноферментных тест-систем / Б.А. Банзузи [и др.] // Труды XVII Междунар. Моск. конгр. - М., 2009. - С. 190-191.
2. Банзузи, Б.А.С. Антиген для иммунологических реакций / Б.А. Банзузи [и др.] // Матер. IX Всерос. науч.-практ. конф. “Вет. медицина. Совр. пробл. и пресп. разв.” - Саратов, 2009. - С.113-115.
3. Банзузи, Б.А.С. Иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов, В.В. Герасимов // Сб. стат.: Вет. мед. дом. жив. - Казань, 2009. - С.141-144.
4. Банзузи, Б.А.С. Тест-система для иммуноферментной диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов, В.В. Герасимов // Труды XVIII Междунар. Моск. конгр. - М., 2010. - С. 305-306.
5. Банзузи, Б.А.С. Набор диагностикумов для иммуноферментной индикации антител против хламидий у крупного рогатого скота / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов, В.В. Герасимов // Ученые записки КГАВМ. - Казань, 2010. - Т. 201. - С.23-26.
6. Банзузи, Б.А.С. Сравнительная оценка ретроспективных методов диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов, В.В. Герасимов // Труды XIX Междунар. Моск. конгр. - М., 2011. - С. 285-286.
7. Банзузи, Б.А.С. Анализ результатов серологических и вирусологических исследований крупного рогатого скота на хламидиоз в ветеринарных лабораториях Республики Татарстан / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов // Ученые записки КГАВМ. - Казань, 2011. - Т. 206. - С.12-19.
8. Банзузи, Б.А.С. Оценка эффективности РСК и ИФА при выявлении хламидийных антител в сыворотке крови крупного рогатого скота / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов, В.В. Герасимов // Ученые записки КГАВМ. - Казань, 2011. - Т. 206. - С.19-22.
9. Банзузи, Б.А.С. Сопоставление РСК и ИФА при выявлении хламидийных антител у крупного рогатого скота / Б.А. Банзузи, Р.Х. Равилов, В.В. Герасимов // Ветеринарная медицина: материалы международного научно-практического симпозиума. - Саратов: ИЦ "Наука", 2011. - С. 33-35
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Эпизоотологические особенности хламидиоза крупного рогатого скота в Республике Беларусь. Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Мероприятия по его предупреждению и ликвидации. Эффективность вакцин, применяемых при профилактике хламидиоза.
автореферат [35,8 K], добавлен 20.04.2012Методы диагностики, дифференциальная диагностика и лечение при эмфизематозном карбункуле крупного рогатого скота. Лейкоз крупного рогатого скота. Определение, распространение, экономический ущерб и этиология, течение и симптомы цирковирусной болезни.
контрольная работа [25,7 K], добавлен 20.04.2012Определение хламидиоза крупного рогатого скота. Историческая справка, степень опасности. Возбудители болезни, эпизоотология, патогенез, течение и клиническое проявление. Патологоанатомические признаки, диагностика, профилактика и лечение, меры борьбы.
реферат [15,8 K], добавлен 24.09.2009Понятие о конституции, экстерьере и интерьере крупного рогатого скота. Способы оценки крупного рогатого скота по экстерьеру и конституции. Линейный метод оценки телосложения молочного крупного рогатого скота. Метод глазомерной оценки, фотографирование.
курсовая работа [701,9 K], добавлен 11.02.2011Проведение эпизоотологического анализа при лейкозе крупного рогатого скота. Разработка мероприятий по профилактике и ликвидации болезни среди молочного скота фермерского хозяйства. Обнаружение у крупного рогатого скота клинических признаков болезни.
презентация [2,9 M], добавлен 20.03.2019Анатомо-морфологические особенности фасциол. Их биологический цикл развития. Фасциолез как трематодозное заболевание крупного рогатого скота. Эпизоотология фасциолеза, его течение и симптомы. Патогенное воздействие возбудителя на крупного рогатого скота.
курсовая работа [27,5 K], добавлен 16.04.2010Технология кормления и содержание крупного рогатого скота. Анализ разведения в хозяйстве породы. Технология кормления крупного рогатого скота в хозяйстве. Особенности организации труда и ухода. Охрана окружающей среды от загрязнения отраслью скотоводства.
курсовая работа [28,9 K], добавлен 12.09.2012Характеристика возбудителя лейкоза, эпизоотологические данные возникновения заболевания. Влияние лейкоза крупного рогатого скота на развитие онкологических заболеваний у человека. Симптомы лейкоза, методы его диагностики. Профилактика и меры борьбы.
презентация [3,1 M], добавлен 02.04.2015Определение сущности и особенности распространения респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота. Этиология и патогенез заболевания, источники и пути передачи вируса. Течение и симптомы болезни, методы ее диагностики, лечения и профилактики.
реферат [19,5 K], добавлен 15.02.2012Краткая характеристика породы крупного рогатого скота, его экстерьерные особенности и продуктивные показатели в условиях Западной Сибири. Технологические карты содержания поголовья крупного рогатого скота на ферме. Кормление разных половозрастных групп.
курсовая работа [52,3 K], добавлен 05.05.2009Техническая характеристика, описание рабочих процессов и виды кормораздатчиков для крупного рогатого скота и свиней: односторонние и двухсторонние, одноосные и двухосные. Кормовые рационы и цеха для приготовления общесмешанных кормовых смесей для скота.
реферат [23,6 K], добавлен 15.04.2014Основные причины, способствующие возникновению вирусных желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота. Эпизоотологические особенности вирусных желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота, их клинические признаки.
курсовая работа [43,7 K], добавлен 15.04.2012Описание демодекоза крупного рогатого скота как инвазионной болезни, вызываемой паразитированием условно патогенного клеща. Жизненный цикл возбудителя и эпизоотология заболевания. Диагностика, профилактика, терапия и методы борьбы с демодекозом скота.
контрольная работа [19,2 K], добавлен 19.02.2011Характеристика породы крупного рогатого скота. Мясная продуктивность и факторы, влияющие на нее. Технология откорма крупного рогатого скота и производства говядины. Мероприятия, направленные на повышение мясной продуктивности и улучшение качества мяса.
курсовая работа [49,2 K], добавлен 25.12.2012Общая характеристика современного животноводства России. Понятие мясной продуктивности и факторы, влияющие на неё. Особенности молодого и старого скота как производителей мяса. Откорм взрослого крупного рогатого скота в летний, зимний период и на силосе.
реферат [29,7 K], добавлен 03.11.2010Рассмотрение системы органов пищеварения крупного рогатого скота. Описание строения ротовой полости, слюнных желез, миндалин, гортани, пищевода, печени. Видовые особенности кишок животного. Характеристика процесса всасывания питательных веществ.
презентация [4,7 M], добавлен 24.12.2015Общая характеристика крупного рогатого скота, распространенного в исследуемом хозяйстве. Описание характеристики по одной основной породе крупного рогатого скота и овец, разводимых в зоне расположения хозяйства. Влияние кормления животных на их развитие.
контрольная работа [30,4 K], добавлен 19.06.2014Классификация ферм в зависимости от биологического вида животных. Основные и вспомогательные здания и сооружения в составе фермы крупного рогатого скота. Число персонала, распорядок дня. Оборудование стойловых мест, системы поения и подогрева воды.
курсовая работа [576,2 K], добавлен 06.06.2010Цистицеркоз крупного рогатого скота: морфология возбудителя, промежуточный хозяин, схема развития, эпизоотологические данные, патогенез, иммунитет, диагноз и лечение. Характеристика Белгородской станции по борьбе с болезнями животных. Анализ результатов.
курсовая работа [1,2 M], добавлен 28.06.2012Исследование рубца, сетки, книжки и сычуги как элементов пищеварительной системы крупного рогатого скота. Этиология, патогенез, клиническая картина, диагностирование и курс лечения гипотонии преджелудков у животных. Методы профилактики заболевания.
курсовая работа [3,2 M], добавлен 04.12.2010
