Совершенствование средств и способов профилактики и лечения колибактериоза свиней

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Совершенствование средств и способов профилактики и лечения колибактериоза свиней

ТАТАРНИКОВ Кирилл Викторович

Курск - 2014

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Курская государственная

сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Евглевский Анатолий Алексеевич

Официальные оппоненты:Шахов Алексей Гаврилович доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий отделом микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии.

Лебедев Алексей Федорович кандидат ветеринарных наук, заместитель начальника Областного бюджетного учреждения «Курская областная станция по борьбе с болезнями животных».

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина»

Защита диссертации состоится « 25 » декабря 2014 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» (305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70. Тел. (4712) 53-13-30, факс (4712) 58-50-49.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» и на сайте www.kgsha.ru.

Автореферат разослан «_24__» октября 2014 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Рыжкова Галина Федоровна

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Кишечную палочку впервые выделил из кишечника и фекалий детей немецкий врач Теодор Эшерих в 1885 году.

Разнообразный род E. coli отличается по ферментативным, серологическим свойствам, подвижности, патогенности, иммуногенности, антигенности, чувствительности к антибиотикам, образованию и свойствам токсинов, строению, выделению колицина, вызывающие гибель без лизиса родственных бактерий (Шахов А.Г, 2007; Самуйленко А.Я.,2005; Виноходов В.О., 2001; Панин А.Н., 2007).

Для специфической профилактики колибактериоза изготавливают моно и ассоциированные инактивированные вакцины путем выращивания лабораторно-производственных отечественных и зарубежных штаммов E. coli на мясогидролизатном или казеиногидролизатном бульоне с последующей детоксикацией и полимеризацией комплекса токсинов 0,5 - 0,7% раствором формальдегида (Самуйленко А.Я., 2005; Панин А.Н., 2007; Гордон А., 2006).

Наличие в бульонах балластных веществ мяса, казеина и низкое накопление биомассы микроорганизмов снижает иммуногенную и протективную эффективность анатоксин - вакцин. Поэтому возникает необходимость создания синтетических питательных сред с доступными компонентами, обеспечивающих стабильно высокое накопление кишечной палочки и изыскание высокоэффективных детоксикаторов и полимеризаторов бактериальных экзо- и эндотоксинов вместо 0,5 - 1 % растворов формальдегида. (Покровский В. И, 1999; Воробьев А. А, 1999; Федоров Ю. Н, 2005).

Протективная активность колибактериозной вакцины во многом зависит от способа и места введения с учетом роли местного иммунитета (Н. Безредко, 1925; Виноходов В. О., 2000; Урбан В. П., 1985; Королева Е. А., 2011).

Многолетнее применение противомикробных препаратов, физико-химическое воздействие привело к образованию у E. coli устойчивости ко многим антибактериальным препаратам.

Соединение одних антибиотиков с другими, клавулановой и органическими кислотами, внесение в состав энрофлоксацина трилона - Б, аргинина, колимицина не обеспечило качественного прорыва в повышении биоцидного и лечебного действия лекарственных средств (Ковальчук Н. М., 2001; Девришев Д. А., 2010; Шахов А. Г., 2003).

Актуальность разработки минеральной питательной среды, принципиально новой технологии получения и применения колибактериозной анатоксин-вакцины, повышения биоцидной и лечебной эффективности антибиотиков, определили выбор темы, цель, задачи и направление исследований.

Цель и задачи исследований. Целью научных исследований явилось совершенствование жидкой и плотной минеральной питательной среды для выделения и выращивания E. coli, повышение иммуногенной и протективной активности колибактериозной анатоксин-вакцины и биоцидного и лечебного действия энрофлоксацина и амоксициллина.

Для достижения поставленной цели определены следующие задачи:

1. Разработать и апробировать экономически доступную и эффективную минеральную питательную среду для выращивания и выделения E. coli;

2. Изучить влияние геомагнитного воздействия на биологические свойства E. coli;

3. Разработать рациональную технологию получения и способов применения колибактериозной анатоксин-вакцины;

4. Повысить биоцидные и лечебные свойства энрофлоксацина и амоксициллина полимеризацией формальдегидом или глутаровым альдегидом, отдельно и с алкилдиметилбензиламмонием хлоридом в отношении E. coli и колибактериозе поросят.

Научная новизна исследований. На основе сущности и механизмов физиологических процессов у микроорганизмов, способности глутарового альдегида с алкилдиметилбензиламмония хлоридом обеспечивать полимеризацию с образованием крупных полимерных соединений и их детоксикацию. Впервые изучены и определены:

· Установлены параметры повышения устойчивости E. coli к энрофлоксацину и амоксициллину и температуре в железорудных регионах Курской и Белгородской областей;

· Определен состав минеральной жидкой питательной среды для максимального накопления E. coli и концентрации комплекса токсинов вместо балластных веществ мясо- и казеиногидролизатного бульона при изъятии дорогостоящих аспарагина и глицина;

· Научно обоснована технология изготовления колибактериозной анатоксин-вакцины;

· На основе повышения протективной эффективности при оральном введении поросятам колибактериозной анатоксин-вакцины по сравнению с подкожной вакцинацией, подтверждена роль местного иммунитета, обоснованная Безредко Н.;

· Повышение биоцидного действия энрофлоксацина и амоксициллина в отношении E. coli и терапевтической эффективности при колибактериозе поросят достигнуто полимеризацией 0,1% глутаровым альдегидом и 0,1% раствором алкилдиметилбензиламмония хлорида при 40⁰С в течение 2-3 суток по принципу инактивации, полимеризации и детоксикации бактериальных анатоксин-вакцин.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработанная жидкая минеральная питательная среда обеспечивает накопление до 75 - 90 млрд/мл E. coli в течение 2 - 3 суток выращивания для получения колибактериозной анатоксин-вакцины, а плотная среда с 2,5% агаром для оперативного выделения микроорганизмов. Эффективность полимеризации и детоксикации комплекса колибактериозных токсинов 0,2 - 0,3% глутарового альдегида с 0,2 - 0,3% алкилдиметилбензиламмония хлоридом позволяет исключить использования канцерогенного формальдегида и ртутьсодержащего консерванта - мертиолята.

Установленное повышение устойчивости E. coli, выделенных в железорудных регионах Курской и Белгородской областей к энрофлоксацину и амоксициллину и температуре необходимо учитывать при терапии поросят, больных колибактериозом и проведении ветеринарно-санитарных мероприятий.

Оральное введение поросятам колибактериозной анатоксин-вакцины по сравнению с подкожной вакцинацией увеличивает протективные свойства биопрепарата и подтверждает теорию и практическую ценность местного иммунитета, предложенные Безредко Н.

Повышение биоцидных свойств энрофлоксацина и амоксициллина полимеризацией по принципу технологии изготовления анатоксин-вакцины позволяет снизить дозу препарата и сроки лечения желудочно-кишечных болезней поросят, вызванные полирезистентными E. coli отдельно и в ассоциации с другими микроорганизмами.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты разработки и апробации жидкой и плотной минеральной питательной среды для выделения и выращивания E. coli;

2. Влияние геомагнитного воздействия на биологические свойства E. coli;

3. Материалы изыскания рациональной технологии получения колибактериозной анатоксин-вакцины;

4. Иммуногенные и протективные свойства колибактериозной анатоксин-вакцины при подкожном и оральном введении поросятам;

5. Биоцидные и лечебные свойства модифицированного полимеризацией энрофлоксацина и амоксициллина в отношении E. coli и при колибактериозе поросят.

Апробация работы. Результаты исследований рассмотрены на расширенном заседании кафедры эпизоотологии, радиобиологии и фармакологии и представлены в трех докладах международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы агропромышленного производства», Курск, 2013г.

Публикация результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 13 научных статей, в том числе 9 в изданиях, рецензируемых ВАК РФ, получен 1 патент на изобретение №2476210 от 27.02.2013г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 113 страницах компьютерного текста, содержит 14 таблиц, 7 рисунков и включает общую характеристику работы, обзор литературы, материалы и результаты исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы, приложения.

Список литературы включает 213 источников, в том числе 84 зарубежных авторов.

2. Материалы и методы исследований

колибактериозный анатоксин вакцина амоксициллин

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии, радиобиологии и фармакологии «Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова», Курской областной ветеринарной лаборатории, Железногорской зональной ветеринарной лаборатории и на базе свиноводческих комплексов ЗАО АПЦ «Фатежский» Курской области и ЗАО «Мираторг» Белгородской области.

Объектом исследований служили лабораторные и свежевыделенные E. сoli от павших поросят, фекалий, кормов, поверхностей помещений цехов комплексов и водных источников из регионов с различным геомагнитным полем и поросята трех пород: дюрок, ландрас, крупная белая в возрастной динамике в цехах ожидания, осеменения, опороса, выращивания и откорма.

Приготовление колибактериозной анатоксин-вакцины проводили выращиванием E. сoli в 2-х литровых биобутылях с объемом среды, равной 1 литру, в течение 2 - 3 суток, до 70 - 90 млрд/мл микробных клеток с последующим автоклавированием при 1,0 атм в течение 20 - 30 минут. Полученную взвесь автоклавированных кишечных палочек с комплексом токсинов, подвергали детоксикации и полимеризации 0, 2 - 0, 3 % глутаровым альдегидом с 0,2 - 0,3 % раствором алкилдиметилбензиламмония хлоридом при 40 ⁰С в течение 2 - 3 суток.

Вакцинацию анатоксин-вакциной проводили поросятам подкожно двукратно с интервалом 12 - 13 суток по 5 - 7 мл и путем выпаивания с водой или в смеси с кормом по 20 - 30 мл 2 раза в день, в течение 3-7 суток.

Повышение биоцидных свойств амоксициллина и энроксила проводили по принципу полимеризации и детоксикации бактериальных токсинов в первом варианте 0, 2 % формальдегидом при 40 ⁰С в течение 5 суток, а во втором 0,1 % глутаровым альдегидом в смеси с 0,1 % алкилдиметилбензиламмония хлоридом.



Рисунок 1 - Общая схема исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты разработки и апробации минеральной питательной среды для выращивания и выделения E. сoli

Изыскание рационального состава минеральной питательной среды проводили с использованием концентраций лимонной и янтарной кислот от 1 до 7 г/л, аспарагина и глицина от 0, 5 - 5 г/л, солевых компонентов глицерина, глюкозы.

Для выращивания E. сoli использовали три штамма лабораторных культур и 2 штамма свежевыделенных E. сoli.

Сравнительную оценку минеральной питательной среды проводили по максимальной концентрации E. сoli при выращивании в 2-х литровых биобутылях с объемом среды равной 1 литру в течение 3 - 5 суток инкубирования микроорганизмов. Концентрацию E. сoli определяли по стандарту мутности, изготовленной контрольным институтом им. Тарасевича.

По максимальному накоплению E. сoli был определен следующий состав (рецептура) минеральной жидкой питательной среды.

Питательные свойства жидкой минеральной среды для E. сoli не изменяются как при последовательном растворении солевых ингредиентов, так и после предварительного смешивания в сухом виде. Состав жидкой питательной среды представлен в таблице 1.

Таблица 1 - Состав минеральной жидкой питательной среды для выращивания кишечной палочки, сальмонелл и бифидобактерий.

№ п/п	Наименование ингредиентов	Количество в граммах
1	Лимонная кислота	3,0
2	Янтарная кислота	2,0
3	Фосфорнокислый калий 2-х замещенный	4,0
4	Фосфорнокислый натрий 2-х замещенный	2,0
5	Хлористый натрий	2,0
6	Сернокислый магний	0,6
7	Сернокислый цинк	0,4
8	Сернокислое железо	0,3
9	Глицерин	20 мл
10	Дистиллированная вода	До 1 литра
	рН 7,2 - 7,3 до автоклавирования

Перед автоклавированием реакция раствора питательной среды устанавливается 5 - 10% раствором аммиака до рН 7, 2 - 7, 3.

Результаты накопления микроорганизмов на жидкой минеральной питательной среде в 2-х литровых биобутылях с объемом 1 литр представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Накопление микроорганизмов на жидкой минеральной питательной среде.

№ п/п	Наименование микроорганизмов	Сроки выращивания	Накопление (концентрация) микроорганизмов
1	Кишечная палочка (лабораторный штамм)	2 - 3 суток	75 ± 10 млрд/ мл (густая масса)
2	Кишечная палочка (свежевыделенный штамм)	2 - 3 суток	75 ± 10 млрд/ мл (густая масса)
3	Бифидобактерии	3 суток	Крошковидная масса до 1-2 см осадка
4	Лактобактерии	3 суток	Крошковидная масса до 1 - 2 см осадка

Полученные результаты оптимального роста и накопления кишечной палочки до 75 ±10,0 млрд/ мл, положены в основу изготовления и апробации плотной с 2,5 % агара питательной среды.

При выращивании кишечной палочки и бифидобактерий происходило полное покрытие поверхности агара в пробирках и чашках Петри в течение 2 - 3 суток выращивания. Полученные результаты роста кишечной палочки на плотной минеральной среде с 2,5 % агара использованы в исследованиях при определении чувствительности к антибиотикам, а жидкая минеральная среда для выращивания E. сoli и получения колибактериозной анатоксин-вакцины.

Влияние электрогеомагнитного воздействия на биологические свойства E. сoli.

Изучено, что под воздействием электрического тока, солнечной активности, геомагнитного и магнитного влияния и линий высокого напряжения космического пространства происходит намагничивание воды, почвы, живых организмов, изменение проницаемости мембран, определяющих гомеостаз живых систем. Сильные изменения геомагнитного поля приводят к образованию магнитной бури, неустойчивости жизнедеятельности живых организмов. В целом магнетизм - глобальное свойство природы, которое получило свое название от города Магнетис в Малой Азии, где были обнаружены залежи магнитного железняка - «камня», притягивающего железо. Подобное явление проявляется в зоне железорудных залежей в естественных условиях и усилено под действием высоковольтных линий электропередач, а в обиходе в пространстве электробытовой техники. В современных условиях вызывает научный и практический интерес изучение влияния на биофизиологические свойства макро- и микроорганизмов экологических факторов.

Для изучения влияния электрогеомагнитных воздействий в зоне железорудных разработок использовали лабораторные и свежевыделенные бульонные культуры E. сoli во флаконах с МПГБ, при температуре 15-25°С в течение 60 суток с концентрацией 100000/мл микроорганизмов.

Из полученных результатов исследований следует, что суспензия 1млн/мл кишечной палочки после электрогеомагнитного воздействия в течение 60 суток проявляла повышенную устойчивость к линкоспектину, гентамицину и тетрациклину на 3-4%, к температуре 80°С и 100°С на 4-5% и дезинфицирующим веществам 1% хлорамину, 1% фенолу, 3% этонию и 1% глутаровому альдегиду на 5-6% по сравнению с контроле

Изыскание способа получения колибактериозной анатоксин-вакцины с повышенной иммуногенной и протективной активностью.

Получение колибактериозной анатоксин-вакцины проводили путем выращивания лабораторных и свежевыделенных E. сoli от павших поросят в 2-х литровых биобутылях с объемом синтетической среды равной 1 литру в течение 2-3 суток. При этом концентрация микроорганизмов составляла 75±10 млрд/мл. После автоклавирования суспензии E. сoli при 1,0 атм. в течение 30 минут проводили детоксикацию и полимеризацию комплекса растворимых экзо- и эндотоксинов с микроорганизмами 0 0,2-0,3% глутаровым альдегидом с 0,2 - 0,3% алкилдиметилбензиламмония хлоридом, который как этоний является бесчетвертичным аммонийным соединением.

Общая схема получения колибактериозной анатоксин-вакцины представлена на рисунке 2.

Рисунок 2 - Способ получения колибактериозной анатоксин-вакцины.

Полученную колибактериозную анатоксин-вакцину проверяли на безвредность, иммуногенность и протективную активность.

Анализ протективной активности энтеральной вакцинации с водой 172 поросят колибактериозной анатоксин-вакциной в дозе 75млрд/мл микробных клеток в течение 7 суток с последующим оральным заражением животных в дозе 150000 вирулентными E. сoli выявили 13, заболевших колибактериозом, поросят. В то же время все 9 контрольных, невакцинированных поросят заболели , и из них 3 пало, а остальные 6 голов подвергли лечению.

Сводные результаты протективной активности колибактериозной анатоксин-вакцины представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Результаты протективной активности колибактериозной анатоксин-вакцины.

№/пп	Способ вакцинации поросят	Кол-во голов	Способ заражения	Заболело	Пало
			Подкожный 150т. E. coli	Энтерально с водой 150т. E. сoli
1	Подкожно двукратно в объеме 10 мл	82	+	-	12	2
2	Контроль (невакцини-рованные)	11	+	-	11	4
3	Энтерально с водой в течение 7 суток в объеме 30-40мл	172	-	+	13	3
4	Контроль (невакцини-рованные)	9	-	+	9	3

Из данных, представленных в таблице, следует, что колибактериозная анатоксин-вакцина обеспечивала защиту поросят при энтеральной и подкожной вакцинации. Однако, при энтеральной вакцинации защитный эффект составил свыше 90%, а при подкожной в пределах 70%.

Изучение иммуногенного действия колибактериозной анатоксин-вакцины.

Изучение иммуногенной активности колибактериозной анатоксин-вакцины проводили у поросят после подкожной и энтеральной вакцинации путем определения эритроцитов, альбуминов, глобулинов и титра сывороточных антител постановкой пластинчатой и пробирочной реакции агглютинации.

Исследованиями установлено, что у подкожно вакцинированных поросят колибактериозной анатоксин-вакциной сыворотка вызывала агглютинацию E. сoli (биофабричный антиген) в разведении от 1:100 до 1:400), а у энтерально вакцинированных поросят практически отсутствовали антитела, способные вызывать агглютинацию, склеивание микробных клеток E. сoli.

С учетом роли местного иммунитета и полученных результатов следует, что энтеральная вакцинация поросят колибактериозной анатоксин-вакциной обеспечивает более эффективную защиту от заражения вирулентными E. сoli.

Результаты гематологических и иммунологических исследований крови у вакцинированных поросят представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Гематологические показатели и содержание белков крови контрольных и вакцинированных поросят.

Показатели	Контроль невакцинированные	Энтеральная вакцинация 30 - 40 мл двукратно	Подкожная вакцинация 7 - 10 (двукратно)
Общий белок, г/л	60,2±2,5	62,4±2,5	64,2±2,5
Гемоглобин, г/л	87,5±3,5	89,5±3,5	90,5±3,5
Альбумин, г/л	48,4±2,5	51,5 ±2,5	62,5±2,5
г-глобулины, г/л	22,5±2,5	28,5±2,5	32,5±2,5
Эритроциты, млн/мл (мл/мкл)	3,7±0,5	3,9±0,5	4,2±0,5
Лейкоциты, тыс/мл	7,5±0,5	8,2±0,5	8,9±0,5

Из данных, представленных в таблице следует, что гематологические показатели крови клинически здоровых и вакцинированных поросят находились в диапазоне физиологических значений. По содержанию гемоглобина, альбуминов, эритроцитов и лейкоцитов не выявлено различий, а по г- глобулину отмечено повышение у вакцинированных поросят. Полученные показатели у вакцинированных поросят подтверждают протективную безвредность и иммуногенную активность анатоксин-вакцины при подкожном и энтеральном введении.

Повышение биоцидного и лечебного действия амоксициллина и энрофлоксацина в отношении E. сoli при колибактериозе поросят с применением пробиотиков.

С учетом совместимости соединения глутарового альдегида и алкилдиметилбензиламмония хлорида проводили полимеризацию антибиотиков одномоментным воздействием.

Полученные результаты обобщены и представлены в формуле изобретения со следующей трактовкой: «Способ повышения эффективности антибиотиков к резистентным E. Сoli», включает детоксикацию и полимеризацию 200 мг/мл препарата 0,1% глутарового альдегида с 0,1%-ным алкилдиметилбензиламмония при 40 °С в течение 2 - 3 суток.

Установленное повышенное биоцидное действие ряда антибиотиков в отношении полирезистентных E. сoli явилось основанием изготовления амоксициллина и энрофлоксацина путем полимеризации для подкожного и энтерального способа лечения поросят, больных колибактериозом и нарушением пищеварения.

Для изучения биоцидного действия производственного и экспериментального амоксициллина и энрофлоксацина на E. сoli и лакто- и бифидобактерий, использовали метод бумажных дисков и серийные разведения с использованием МПГБ и жидкой синтетической питательной среды. Полученные данные представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Сводные данные биоцидного действия производственных и экспериментальных амоксициллина и энрофлоксацина на E. сoli, лактобактерий и бифидобактерий.

Антибиотики мкг/мл	Тест-микробы
	E. сoli	E. сoli	Лактобактерии	Бифидобактерии
	1000/ мл	10000/ мл	105 в 1 мл	105 в 1 мл
Производственный амоксициллин 3,2 мкг/ мл	+	-	+	+
Экспериментальный амоксициллин 3,2 мкг/ мл	+	+	+	+
Производственный энрофлоксацин 2,4 мкг/мл	+	-	+	+
Экспериментальный энрофлоксацин 2,4 мкг/мл	+	+	+	+
Производственный амоксициллин 3,2 мкг/ мл с 0,1% HCl	+	-	+	+
Производственный энрофлоксацин 2,4 мкг/мл с 0,1% HCl	+	-	+	+

Из данных, представленных в таблице следует, что производственный амоксициллин, в концентрации 3,2 мкг/мл, проявил биоцидное действие на 1000/ мл E. сoli и 10⁵ лактобактерии и бифидобактерии, но не действовал в отношении 10000/ мл E. сoli. В то же время экспериментальный амоксициллин и энрофлоксацин в смеси с 0,1% соляной кислотой, действовали в отношении 1000/ мл и 10000/ мл E. сoli, лакто- и бифидобактерии.

Изучение безвредности модифицированного амоксициллина и энрофлоксацина проводили путем энтерального введения 4 грамм препарата с водой (12 гол) и кормом (9гол) ежедневно в течение 3-х суток. При этом установлено, что, несмотря на повышенную вдвое лечебную дозу, поросята хорошо переносили без видимых клинических проявлений, повышения температуры и не влияли на общие гематологические показатели.

Результаты изучения лечебной эффективности модифицированного полимеризацией амоксициллина 0,1% глутаровым альдегидом с 0,1% алкилдиметилбензиламмония хлорида проводили путем выпойки с водой 10 тысяч вирулентных E. сoli. Через трое суток с появлением диареи у поросят проводили энтеральное введение энрофлоксацина и амоксициллина (2 грамма на голову) утром и вечером в течение 3-х суток.

Сводные данные лечебной эффективности коммерческого и экспериментального амоксициллина представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Результаты лечения поросят, зараженных E. сoli (10тыс/мл).

Количество и масса поросят	Сроки лечения	Амоксициллин модифицированный	Коммерческий амоксициллин
		заболело	пало	заболело	пало
27 гол. (20-30 кг)	2-3 дня	27	1	-	-
19 гол. 20-30 кг	4-5 дней	-	-	19	4

Из данных, представленных в таблице, следует, что модифицированный амоксициллин обеспечивает 100% лечебную эффективность поросят, экспериментально зараженных E. сoli и заболевших колибактериозом поросят в течение 2-3 дней лечения. В то же время из 19 поросят при лечении в течение 4-5 дней коммерческим амоксициллином пало 2 поросенка. Аналогичные результаты при изучении лечебной эффективности получены и в отношении экспериментального энрофлоксацина на фоне сокращения срока лечения до 2-3 суток.

Изучено, что причиной желудочно-кишечных болезней поросят является дисбактериоз на фоне развития патогенных микроорганизмов в т. ч. E. сoli и сальмонелл.

Постоянное применение антибиотиков еще более усугубляет патологический процесс. Использование молочнокислых продуктов болгарскими сыроварами, установление И. И. Мечниковым антагонизма молочнокислых бактерий патогенным микроорганизмам и основанная им технология, применение АБК (ацидо-бульонной культуры), ПАБК (пропионоацидофильной бульонной культуры) создали необходимость поиска микроорганизмов и разработки способов получения препаратов под названием эубиотики или пробиотики.

В настоящее время выращивание лакто- и бифидобактерий производится на плотной агаровой среде с добавлением молочной или подсырной сыворотки, а также гидролизата творога или кильки. Основными недостатками существующих питательных сред является их непостоянство состава и необходимость смыва выращенных лакто- и бифидобактерий с поверхности агара.

Для устранения указанных недостатков была разработана жидкая питательная среда, содержащая стабильные компоненты: лимонную, янтарную кислоту, пептоны, глюкозу, обеспечивающая высокое накопление бактериальной массы, до 90 млрд/мл. При выращивании в 2-х литровых биобутылях с объемом среды, равной 1 литру, лакто- и бифидобактерии образуют рыхлую массу и колонии в виде «зерен», «тяжей» с прозрачной надосадочной жидкостью. В качестве контроля использовали коммерческий «Бактенорм» и «Лактобифил».

Применение пробиотических микроорганизмов обусловлено их способностью адгезии к клеткам кишечника, антимикробным и токсиннейтрализующим действием, улучшением пищеварения, путем выработки ферментов, витаминов, молочной кислоты и т.д.

Исходя из того, что производственный и экспериментальный амоксициллин и энрофлоксацин отдельно и в смеси с 0,1% соляной кислотой при энтеральном введении, способствуют развитию дисбактериоза после антибиотикотерапии поросят, провели выпаивание утором и вечером в течение 1-3-х суток суспензии лакто- и бифидобактерий в концентрации 10⁹ / мл в объеме 10 - 15 мл. В исследованиях использовали 76 голов поросят после лечения желудочно-кишечных болезней производственным (38 голов) и экспериментальным амоксициллином (38 голов), один раз в сутки, в течение 1 - 3 уток по 2,0 г и 30 г.

Прекращение поносов у 38 поросят происходило через 1- 2суток при лечении экспериментальным амоксициллином по 1 грамму на животное в течении 1-2 суток. При лечении поросят производственным амоксициллином, по 2-4 грамма одному поросенку утром и вечером в течении 3-5 суток, прекращение поносов происходило у 38 поросят через 3 - 5 суток.

Нормализация пищеварения и нормофлоры у поросят происходило через 2 - 3 суток после выпойки суспензией из свежевыращенных лакто- и бифидобактерий на жидкой синтетической среде. При этом из кишечника вынужденно убитых 3-х поросят были выделены лакто- и бифидобактерии. В то же время восстановление нормальной лакто- и бифидобактерий в таблетках, капсулах, пасте происходило через 6 - 7 суток.

Из полученных результатов следует, что для нормализации молочнокислых бактерий в кишечнике поросят после антибиотикотерапии необходимо выпаивать суспензию из свежевыращенных лакто- и бифидобактерий.

ВЫВОДЫ

1. Для выращивания E. coli разработана жидкая минеральная питательная среда, содержащая в 1 л дистиллированной воды следующие компоненты в граммах: янтарной кислоты -3,0; лимонной кислоты -4,0; фосфорнокислого калия 2-х зам -3,0;фосфорнокислого натрия-2х -зам-3,0; хлористого натрия -1,5;сернокислого цинка-0,1;сернокислого железа 0,1; сернокислого магния - 0,3 и глицерина -30,0 мл. Реакция среды устанавливается 5% раствором аммиака до 7,2 перед автоклавированием.

2. После 2-3 суточного выращивания в 2-х литровых биобутылях с объёмом среды, равной 1 литру накопление E. coli достигает 75-90 млрд/мл при концентрации токсинов 0,9- 1,0 мг/мл.

3. Синтетическая среда в разведении 1:1 с 2,5 % агара обеспечивает оперативное выделение E. coli из патологического материала.

4. Кишечная палочка, выделенная от поросят в зоне железорудных регионов Курской и Белгородской областей обладает повышенной устойчивостью к температуре на 5-7°С, гентамицину и амоксициллину, тетрациклину, энрофлоксацину на 3-5 % и дезинфицирующим средствам- 1% хлорамину, 1% фенолу, 3% этонию, и 1% глутаровому альдегиду на 5-6 %по сравнению с контролем .

5. Детоксикация и полимеризация комплекса токсинов вместе с автоклавированными 75-90 млрд/мл E. coli 0,2-0,3% глутаровым альдегидом с 0,25% алкилдиметилбензиламмония хлоридом при 40°С в течение 2-3 суток обеспечивает получение безвредной с повышенной иммуногенной и протективной активностью колибактериозной анатоксин-вакцины при оральном или подкожном введении.

6. Полимеризация 5-10% раствором амоксициллина и энрофлоксацина 0,1%; глутаровым альдегидом с 0,1% алкилдиметилбензиламмония хлоридом при 40°С в течение 2-3 суток повышает бактериальные свойства в 1,5 - 2 раза в отношении полирезистентных E. coli и сокращает сроки лечения поросят, больных колибактериозом или после заражения вирулентными микроорганизмами.

7. Подкожное введение поросятам экспериментально амоксициллина или энрофлоксацина в объёме 2,5 -3,0 мл в течение 2-3 суток обеспечивает защиту животных от заболевания при экспериментальном заражении E. coli.

8. Оральное введение 30-40 мл экспериментального амоксициллина или энрофлоксацина утром и вечером вызывает прекращение диареи у поросят на 2-й день лечения.

9. Методом серийных разведений экспериментального амоксициллина и энрофлоксацина установлено биоцидное действие препаратов в отношении 1000/мл и 10000/мл E. coli и 10⁵ лактобактерий и бифидобактерий.

10. Нормализация полезной микрофлоры кишечника поросят после антибиотикотерапии достигается выпойкой с водой или, в смеси с кормом в течение 1-2 суток суспензии 10⁹ лактобактерий и 10⁹ бифидобактерий, предварительно выращенных на жидкой синтетической питательной среде в течение 2-3 суток.

Практические предложения

1. Разработанный состав жидкой минеральной среды рекомендуем использовать для выращивания свежевыделенных и лабораторных штаммов микроорганизмов вместо мясопептонного бульона.

2. Плотная среда с 2,5% агаром на основе синтетической питательной среды в разведении 1:1 и 1:2 создаёт возможность оперативного выделения и определения резистентности E. coli к антибактериальным препаратам.

3. Рациональная технология изготовления колибактериозной анатоксин-вакцины предполагает изготовление биопрепарата из лабораторных и свежевыделенных E. coli региона.

4. Повышенная бактерицидная и терапевтическая эффективность амоксициллина и энрофлоксацина полимеризацией глутаровым альдегидом с алкилдиметилбензиламмония хлоридом обеспечивает эффективное лечение поросят, больных колибактериозом отдельно и в ассоциации с другими инфекционными болезнями с полирезистентными микроорганизмами. Установленную антибиотикоустойчивость и терморезистентность E. coli, выделенных из регионов с повышенными геомагнитным полем необходимо учитывать при проведении лечебных и ветеринарно- санитарных мероприятий.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Татарников К.В. Физиологические свойства стафилококков, сальмонелл и кишечной палочки, подвергнутых магнитному воздействию/ Д.А.Евглевский, С.И. Худяков, А.Г.Беляев, К.В. Татарников, Б.М. Тагирмирзоев, Е.А. Стебловский //Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2011г.-№6.-с.62.

2. Татарников К.В. Исследования эпизоотической ситуации по хламидийным инфекциям свиней в репродуктивных хозяйствах/ В.М. Сапегин, А.М. Коваленко, М.А. Паюхина, К.В. Татарников //Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2011г.-№6.-с.74.

3. Татарников К.В. Стратегия успеха применения пробиотических препаратов при антибиотикотерапии колибактериоза поросят и телят/ Д.А. Евглевский, К.В. Татарников, И.В. Ермилов, В.И. Чернов, С.А. Федосова, Е.А. Стебловский// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2012г.-№7.-с.70.

4. Татарников К.В. Биотехнологическая закономерность потенцирования иммуногенной и протективной эффективности анатоксин-вакцин/ Д.А. Евглевский, А.О. Павленко, К.В. Татарников, С.А. Федосова, Д.И, Шахов// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2012г.-№9.-с.60.

5. Татарников К.В. Потенцирование лечебного действия модифицированных энрофлоксацина и линкоспектина при колисальмонеллезе телят/ Д.А. Евглевский, Л.В. Коваленко, А.В. Бледнова, С.Н. Кретова, К.В. Татарников// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2013г.-№1.-с.70.

6. Татарников К.В. Биоцидное и лечебное действие модифицированных энрофлоксацина, линкоспектина и гентамицина при колибактериозе и сальмонеллезе поросят/ Д.А. Евглевский, С.Ю. Стебловская, К.В. Татарников, О.Г. Косикова, К.В. Петрухина// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2013г.-№1.-с.72.

7. Татарников К.В. Стратегия повышения эффективности средств диагностики и профилактики инфекционных болезней у свиней/ А.М. Коваленко, Д.А. Евглевский, А.О. Павленко, К.В. Татарников// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2013г.-№2.-с.61.

8. Татарников К.В. Специфическая профилактика и антибиотикотерапия колибактериоза свиней/ А.Я. Самуйленко, Д.А. Евглевский, К.В. Татарников // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2013г.-№7.-с.52.

9. Татарников К.В. Иммуногенные и протективные свойства колисальмонеллезной анатоксин-вакцины/ А.А. Евглевский, А.М. Коваленко, Р.А. Мерзленко, Е.Г. Яковлева, К.В. Татарников, Е.А. Стебловский// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии 2013г.-№7-с.105.

10. Татарников К.В. Биотехнологическое и научное обоснование повышения эффективности антибиотиков и эубиотиков при желудочно-кишечных болезнях поросят и телят/ Д.А. Евглевский, А.О. Павленко, С.А. Федосова, К.В. Татарников // Актуальные проблемы агропромышленного производства (Материалы Международной научно-практической конференции, 23-25 января 2013г. , г. Курск).

11. Татарников К.В. Повышение эффективности эубиотических препаратов при желудочно-кишечных болезнях поросят/ Д.А. Евглевский, Е.А. Стебловский, К.В. Татарников //Актуальные проблемы агропромышленного производства (Материалы Международной научно-практической конференции, 23-25 января 2013г. , г. Курск).

12. Татарников К.В. Стратегия успеха профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней поросят/ Д.А. Евглевский, А.О. Павленко, О.А. Гладких, К.В. Татарников// Актуальные проблемы агропромышленного производства (Материалы Международной научно-практической конференции, 23-25 января 2013г., г. Курск).

13. Татарников К.В. Способ повышения эффективности антибиотиков к резистентным E.coli/ Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский, С.И. Худяков, Е.А. Тимкова, К.В. Татарников// Патент № 2476210, 27.02.2013г.

Размещено на Allbest.ru

...