Микробиоценоз кишечника взрослых пчелиных особей

Размещено на http://www.allbest.ru/

РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, г. Москва, Россия

Микробиоценоз кишечника взрослых пчелиных особей

Н.Д. Московская

Аннотация

Результаты исследований позволяют отметить, что к концу зимовки в кишечнике взрослых рабочих особей в ответ на повышение содержания условно-патогенной микрофлоры, активно увеличиваются представители нормофлоры, которые, вырабатывая молочную кислоту, угнетают размножение гнилостной микрофлоры.

Ключевые слова: рабочие пчелы, кишечник, микроорганизмы, микробиоценоз, нормофлора, стафилококки, энтерококки, лактобактерии, энтеробактерии.

Annotation

Results of researches allow to note that by the end of wintering in intestines of adult working individuals in response to increase of maintenance of opportunistic microflora, representatives normoflor which, producing lactic acid, oppress reproduction of putrefactive microflora actively increase.

Key words: working bees, intestines, microorganisms, microbiocenosis, normoflor, staphylococcus, enterokokk, lactobacilli, enterobakteriya.

Среди факторов, влияющих на силу и продуктивность пчелосемьи, основную роль играет состояние здоровья ее членов. Медоносные пчелы, также как и другие насекомые, подвержены различным заразным и незаразным болезням, вследствие чего они постоянно находятся под угрозой развития болезней [1,2,3]. Причем под угрозой не только заболевания, но и под угрозой полного исчезновения как вида, в связи с распространением в странах Европы и США явления массовой гибели пчел, получившего название коллапса пчелиных семей [2,4,7]. Следовательно, причинами массовой гибели пчел могут быть различные как биогенные, так и абиогенные факторы, в частности и микроорганизмы, составляющие микробный пейзаж организма пчел и их жилища [3,4,5,].

Исследователями отмечается, что микробиоценоз пчел во многом определяется средой обитания насекомых, а поэтому его членами бывают не только сапрофитные, но и потенциально патогенные микроорганизмы, которые обуславливают появлению болезней, таких как эшерихиоз, гафниоз, цитробактериоз, сальмонеллез и гнильцов [2].

С другой стороны отсутствие у пчелиных особей опорожнения толстой кишки в зимний период подвергает риску развития у них инфекционной болезни. Следовательно, от того, какой состав микрофлоры будет сформирован у взрослых и молодых пчел к зимовке, будет зависеть не только состояние здоровья семьи, но хозяйственно полезные признаки, связанные с продуктивностью пчелиных семей [2]. Для нивелирования пагубного воздействия патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике пчел исследователи применяют микробиологические препараты сдерживающие развитие гнилостной микрофлоры [2,3,4], а также ульи сделанные из пенополиуретана [5].

Целью исследований явилось изучить состав кишечного микробиоценоза взрослых пчелиных особей для возможностей последующей их коррекции.

Материал и методы исследования. Объектом исследования были пчелы карпатской породы - Apis mellifera carpatica. Материал для бактериологических исследований был собран от 320 пчелосемей и 800 пчел. Для проведения микробиологических работ проведено 2015 бактериологических исследований, в ходе которых устанавливали качественный и количественный состав кишечной микрофлоры пчелиных особей. кишечный микробиоценоз пчелиный особь

С этой целью живых пчел усыпляли эфиром и от 10 особей исследуемых семей отпрепаровывали кишечник, который помещали в стерильный бюкс, взвешивали и гомогенизировали в стерильной фарфоровой ступке в 1% пептонной воде, в соотношении 1:10, и готовили ряд последовательных 10-кратных разведений на 1% пептонной воде с 0,1% агар-агаром. Из полученных разведений, с помощью градуированной пипетки на поверхность хорошо подсушенных селективных питательных сред, делали посевы в объеме 0,025 мл в виде 3-х изолированных капель. Через 24-72ч инкубации при 37°С осуществляли учет выросших колоний и рассчитывали число микроорганизмов в 1 г кишечного содержимого пчел по формуле (Бочков, 1989):

А = ((а1 + а2 + а3)/ 3) х р х 4 х 10ⁿ

где А - число живых микробных клеток;

а1 - а3 - число колоний, выросших в 3-х просчитанных каплях;

n - номер разведения;

4 - коэффициент пересчета;

р - навеска кишечника (г).

В качестве селективных питательных сред использовали: агар Эндо - для выделения энтеробактерий, агар Квасникова с 6% этанола - для выделения лактобактерий, желточно-солевой агар - для выделения стафилококков, питательный агар с теллуритом калия - для выделения энтерококков, ЦПХ-агар - для выделения псевдомонад и других неферментирующих бактерий, Сабуро и Чапека - для выделения микроскопических грибов, среду Вильсон-Блер - для выделения клостридий, среду Блаурокка с неомицином - для выделения бифидобактерий. Также, использовали кровяной агар для выделения стрептококков и мясопептонный агар для выделения бацилл. Идентификацию выделенных бактерий осуществляли по культуральным, мор- фологическим, тинкторильным и биохимическим свойствам. В работе использовали биохимические тест-системы фирмы Pliva-Lachema Diagnostika: ЭНТЕРОтест, НЕФЕРМтест, ЭН-КОККУСТтест, АНАЭРОтест, СТАФИтест. Видовую принадлежность бактерий и грибов устанавливали с использованием специальных каталогов, определителей и руководств [1].

Результаты исследования и их обсуждение. Кишечный пейзаж взрослых рабочих особей состоит из плесневых грибов, лактобактерий, энтерококков, псевдомонад, дрожжей, энтеробактерий и стафилококков. Наименьшее количество в кишечнике пчелиных особей содержится плесневых грибов - 2,35 lgKOE/г. При этом с августа по январь их не обнаруживается в кишечнике исследованных пчел (рис.).

Примерно одинаковое количество содержится в кишечнике взрослых рабочих пчел лактобактерий и энтерококков - 3,26-3,3 lgKOE/г. В сентябре и октябре энтерококки не выделяются при посевах содержимого кишечника рабочих особей. Наиболее высокий уровень содержания в кишечнике наблюдается дрожжей. Так у взрослых пчелиных особей его содержание составило 5,26 lgKOE/г.

У взрослых рабочих особей при высеве содержимого кишечника на специальные питательные среды всегда регистрировали рост энтеробактерий и стафилококков. При этом их содержание было примерно на одинаковом уровне -5,54- 5,62 lgKOE/г. Следует отметить, что при посевах даже на специальные питательные среды содержимого кишечника мы не обнаружили рост таких микроорганизмов как бифидобактерии, стрептококки, бациллы и клостридии.

Рис. Содержания микроорганизмов в кишечнике пчел

В состоянии кишечного микробиоценоза рабочих особей выявляются характерные сдвиги по сезонам года. Так в кишечнике пчел плесневых грибов осенью и до середины зимы не регистрируется. Однако к моменту выставки пчелиных семей из зимовника их содержание резко увеличивается (рис.). Лактобактерии активно начинают уменьшаться с августа и достигают минимальных значений в ноябре - 1,3 lgKOE/г. С началом выкармливания расплода содержание описываемой группы микроорганизмов резко возрастает. Так в марте содержание лактобактерий достигает 5,5 lgKOE/г. По сравнению с минимальным значением их содержание увеличивается в 4,23 раза.

Энтерококки активно понижаются с июля по август, а затем с сентября по октябрь вообще не регистрируются. Однако их присутствие активно проявляется с ноября по март. За указанный период их содержание колеблется в пределах от 5,7 до 6,7 lgKOE/г, то есть с октября возрастает в 5,7-6,7 раза.

Для псевдомонад характерны перепады в их содержании. При этом на гистограмме отмечается три пика падения и три подъема в содержании описываемого микроорганизма. Так с мая по июль его содержание уменьшается с 5,3 до 2,7 lgKOE/г, к августу увеличивается до 4,0 lgKOE/г, к сентябрю понижается до 3,7 lgKOE/г, а затем активно возрастает до февраля, достигая значения 6,3 lgKOE/г, к концу марта резко понижается до 2,7 lgKOE/г. Дрожжи из рода candida понижались в кишечнике рабочих пчел начиная с июля по сентябрь, затем увеличивались и удерживались на уровне 5,7-6,3 lgKOE/г.

В динамике содержания энтеробактерий регистрировали незначительное колебание, укладывающееся в три пика подъема и три пика падения численных значений. Уменьшение численных значений было в пределах от 1,0 до 1,5 lgKOE/г, такая же была динамика регистрировалась и в отношении повышения уровня описываемого микроорганизма.

В отношении стафилококков можно отметить, что их минимальные уровни выявлялись в кишечнике взрослых рабочих особей в августе и сентябре - 4,0 lgKOE/г. С переходом пчел к безоблетному периоду количество данного микроорганизма постоянно увеличивается. К концу зимовки содержание стафилококков достигает высокого уровня - 7,5 lgKOE/г.

Таким образом, результаты исследований позволяют отметить, что к концу зимовки в кишечнике взрослых рабочих особей в ответ на повышение содержания условно-патогенной микрофлоры, активно увеличиваются представители нормофлоры, которые, вырабатывая молочную кислоту, угнетают размножение гнилостной микрофлоры.

Литература

1. Маннапова Р.Т. Микробиология и иммунология. М., 2013. Издательство ГЕОТАР-Медиа. -540с.

2. Ларионова О.С., Маннапов А.Г. Физиологическое состояние, микробиоценоз кишечника, функциональные и продуктивные свойства семей пчел при содержании их в ульях разного типа. / ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова». - Саратов, 2012. - 262 с.

3. Маннапов А.Г., Ларионова О.С. Влияние препарата апиник на биологические показатели, микробиоценоз и зимовку пчел // Пчеловодство. 2011. № 8. С. 22-24.

4. Маннапов, А.Г. Технология производства продукции пчеловодства по законам природного стандарта / А.Г. Маннапов, Л.И. Хоружий, Н.А. Симоганов, Л.А. Редькова / -М.: Издательство: Проспект, 2016. -184 с.

5. Маннапов А.Г., Ларионова О.С., Залилова З.А. Биологические и технологические возможности пенополиуретановых ульев // Пчеловодство. 2011. № 1. С. 12-14.

6. Маннапов А.Г., Ларионова О.С. Биологические и технологические возможности современных ульев / М-во сельского хоз-ва Российской Федерации, Федеральное гос. бюджетное образовательное учреждение высш. проф. образования "Саратовский гос. аграрный ун-т им. Н. И. Вавилова". Саратов, 2011.

7. Маннапов А.Г. Рост, развитие и качество зимовки пчел различных пород /Монография: А.Г. Маннапов, О.С. Ларионова, Е.А. Смольникова; М-во сельского хоз-ва Российской Федерации, Федеральное гос. образовательное учреждение высш. проф. образования "Саратовский гос. аграрный ун-т им. Н. И. Вавилова". Саратов, 2011.

Размещено на Allbest.ru