Стимуляция овуляции икры у самок вьюна синтетическими аналогами люлиберина

Размещено на http://www.allbest.ru/

Стимуляция овуляции икры у самок вьюна синтетическими аналогами люлиберина

В 1971 г. из экстрактов гипоталамусов свиньи был выделен люлиберин и определена структура его молекулы [10], после этого во многих странах начались интенсивные работы по синтезу и изучению биологических свойств аналогов этого соединения. В рыбоводстве люлиберин и его синтетические препараты представляют интерес прежде всего как заменители гипофизарных экстрактов, традиционно используемых для стимуляции овуляции и спермиации у различных видов рыб. Список испытанных в этом плане аналогов люлиберина и видов рыб постоянно увеличивается, однако получаемые результаты не всегда однозначны.

В настоящей работе проверяли способность двух синтетических аналогов люлиберина отечественного производства стимулировать созревание и овуляцию икры у самок вьюна Misgurnus fossilis. Первый аналог - сурфагон - синтезирован в лаборатории синтеза пептидов Института экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР. Аналог был испытан на ряде видов рыб и оказался эффективным для стимуляции овуляции и спермиации у осетровых [2, 3]. Второй препарат, использованный нами, - новый синтетический аналог люлиберина, полученный на кафедре химии природных соединений Ленинградского университета. В настоящей работе этот аналог обозначается как а-ЛГРГ.

Материал и методика

Вьюны для опытов были получены в январе 1986, 1987 и 1988 гг. из подледных уловов в водоемах Новгородской области. До начала опытов рыбу содержали в холодильнике при температуре 2-6 °С. Были испытаны однократные инъекции аналогов люлиберина одновременно с введением пимозида и резерпина и без них. Источником пимозида служил препарат орап (Гедеон Рихтер А.О., Венгрия), резерпин - отечественного производства.. Таблетки орапа и резерпина толкли в фарфоровой ступке, затем добавляли воду я полученную суспензию использовали для инъекций. Аналоги люлиберина вводили в виде водного раствора. Все инъекции делали внутрибрюшинно. Масса вьюнов варьировала от 30 до 120 г. Каждую дозу испытывали, как правило, на группе из трех - пяти рыб, в которую включали мелких, средних и крупных самок. На наличие текучей икры вьюнов проверяли ежедневно в течение семи суток после инъекции.

Результаты опытов и их обсуждение

Тестирование сурфагона было проведено в марте - апреле 1986 г. В опыте 29 марта были использованы самки вьюна, высаженные из холодильника за две недели до инъецирования в аквариумы с водой, имеющей температуру 18 °С. При такой же температуре рыбы находились и после инъекций. Дозы сурфагона 40 и 10 мкг (c пимозидом и без него) вызвали овуляцию у всех самок через двое суток. В опыте 4 апреля были использованы вьюны, переведенные в условия высокой температуры за сутки до инъекции. После введения рыбам 1 мкг сурфагона овуляция не произошла, а после введения 10 мкг созрела одна самка из трех, причем через трое суток.

Препарат а-ЛГРГ тестировали в 1986 к 1987 гг. В большинстве случаев использованы вьюны, переведенные из холодной воды в теплую за сутки-двое до инъекций. Овуляция икры произошла лишь в двух случаях: у одной из трех рыб в группе вьюнов, инъецированных наибольшей из испытанных доз, и у одной из двух самок, высаженных из холодильника заранее. В обоих случаях созревание произошло через трое суток. Совместное с а-ЛГРГ введение пимозида или резерпина существенно повышало количество созревающих самок. При этом отмечено, что в группах рыб, которым был введен пимозид в дозе 200 мкг или резерпин в дозе 150 мг, овуляция икры произошла через двое суток, а при более низких дозировках -- через трое.

Результаты опытов 1986-1987 гг. показали, что эффективность действия аналогов люлиберина может зависеть от условий содержания рыб до инъекций. Поэтому в 1988 г. была проведена серия опытов с целью более детального изучения этого феномена. Вьюны были разделены на четыре партии, которые начиная с 1 февраля содержали в 100-литровых аквариумах при различных режимах температуры и освещения:

1) низкая температура (6-7 °С) и постоянное освещение;

2) низкая температура (6-7 °С) и постоянная темнота;

3) высокая температура (20-21 °С) и постоянное освещение;

4) высокая температура (20-21 °С) и постоянная темнота.

Освещение аквариумов производили лампами дневного света мощностью 20 Вт, помещенными на расстоянии 40 см от поверхности воды.

15 февраля, после двух недель выдерживания при различных режимах, вьюнам были сделаны инъекции аналогов люлиберина. После инъекций рыбы из всех партий содержались при температуре воды 15-16°.

Наиболее показателен опыт с инъекцией а-ЛГРГ: овуляция произошла лишь в тех группах, где рыба предварительно выдерживалась при высокой температуре, причем созревание имело место через двое суток. Овуляция икры под действием инъекций сурфагона происходила во всех партиях, хотя и в этом случае вьюны, предварительно выдержанные при высокой температуре, созревали более эффективно, чем выдержанные при низкой (70% против 30). Длительность созревания составляла двое-трое суток. Различия между группами с разным режимом освещения, по-видимому, носили случайный характер, поскольку при повторении опыта 1 марта (четыре недели выдерживания при различных режимах) с использованием более низкой дозы сурфагона не подтвердились. Длительность созревания в этом случае составляла трое-четверо суток. При введении самкам одновременно с сурфагоном 300 мкг резерпина овуляция икры произошла через двое суток в 100% случаев вне зависимости от условий предварительного выдерживания.

Вьюн Misgurnus fossilis является чрезвычайно неприхотливым и удобным для различного рода опытов лабораторным животным. В течение всей зимы, задолго до сезона размножения самки вьюнов стабильно созревают после инъекций гипофизарных препаратов [4]. Было интересно выяснить, возможно ли использование этих рыб для оценки активности синтетических аналогов люлиберина. Б.Ф. Гончарову [3] не удалось получить овуляцию икры у самок вьюна под действием сурфагона, что вполне объяснимо, поскольку этот автор вводил рыбам лишь один аналог без пимозида, резерпина или каких-либо других препаратов. В экспериментах на близкородственном виде - китайском вьюне Paramisgurnus dabrianus - были получены результаты, сходные с нашими [7, 8, 9] . Овуляция икры у самок этого вида после инъекций аналога люлиберина происходила чаще, если рыбам кроме аналогов вводили пимозид или резерпин. Аналогичные результаты были получены и на ряде других видов рыб [б, 11] и др.

Повышение эффективности действия аналогов люлиберина при совместном введении пимозида или резерпина объясняется механизмом нейроэндокринной регуляции репродуктивной функции рыб. Одним из звеньев этого механизма является гонадотропин-релизинг ингибирующий фактор, роль которого, по-видимому, выполняет допамин [9]. Пимозид, резерпин и некоторые другие препараты, являясь антагонистами допамина, усиливают действие люлиберина и его аналогов. Как показали исследования, относительное значение допамина может быть различным у разных видов рыб: одни виды хорошо созревают под действием только одних аналогов люлиберина, у других антагонисты допамина усиливают действие аналогов, у третьих овуляция возможна только при совместном введении аналогов люлиберина и антагонистов допамина [3, 5, 6, 11 и др.]. На основании результатов наших опытов следует полагать, что у вьюна роль допамина в нейроэндокринной регуляции репродуктивной функции относительно велика.

Большой интерес представляет отмеченное в опытах разнообразие длительности созревания самок вьюна после инъекций - от двух до четырех суток - в зависимости от дозировок аналога люлиберина, пимозида или резерпина. При использовании гипофизарных препаратов вариабельность длительности созревания у этого вида значительно ?же [1].

Весьма любопытна также зависимость действия аналогов люлиберина от условий предынъекционного содержания вьюнов. В литературе есть указания на сезонные изменения гонадотропин-релизинг ингибирующей активности допамина у золотой рыбки [12]. Результаты наших опытов позволяют предполагать, что эти изменения, по крайней мере на определенных этапах годового цикла, могут контролироваться внешними факторами, в частности температурой воды.

стимуляция икра овуляция

Выводы

стимуляция икра овуляция

1. Синтетические аналоги люлиберина способны стимулировать овуляцию икры у самок вьюна.

2. Введение самкам вьюна пимозида или резерпина усиливает действие аналогов люлиберина.

3. Чувствительность самок вьюна к аналогам люлиберина зависит от температурных условий предынъекционного выдерживания рыб.

4. Длительность созревания вьюнов после инъекций аналогов люлиберина зависит от доз этих препаратов, а также от одновременно вводимых доз пимозида или резерпина.

Литература

стимуляция икра овуляция

1. Бурлаков А.Б. Гонадотропные гормоны гипофиза рыб и их таксономическая специфичность // Тр. ВНИРО. 1978. Т. 130. С. 17-25.

2. Гончаров Б.Ф. Опыт применения синтетических аналогов люлиберина для индукции созревания половых продуктов у осетровых // Осетровое хозяйство водоемов СССР: Всесоюзное совещание: Тез. докл. Астрахань, 1984. С. 94-95.

3. Гончаров Б.ф. Синтетический аналог люлиберина - новый перспективный стимулятор созревания половых продуктов осетровых рыб // Докл. АН СССР. 1984. Т. 276, № 4. С. 1002-1006.

4. Казанский Б.Н. , Нусенбаум Л.М. Вьюн как объект для определения гонадотропной активности препаратов гипофиза рыб // Тр. лаборатории основ рыбоводства. 1947. Т. I. С.111-120.

5. De Leeuw R. etc. Pimozide-LHRH-induced breeding of the african catfish, Clarias gariepinus (Burchell) // Aquaculture. 1985. V. 44, N 4. P. 295-302.

6. Kйri G. etc. Characterization of novel species specific GnRH analoge with can be used for the artificial propagation of fishes // Peptides. 1986. Berlin; New York. 1987. P. 513-516.

Размещено на Allbest.ru