Консервирование культур клеток
Исследование культуры клеток многоклеточного организма, живущих и размножающихся в искусственных условиях вне организма. Наиболее распространенные способы выращивания культур клеток, используемых в вирусологических исследованиях, их консервирование.
| Рубрика | Сельское, лесное хозяйство и землепользование |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 22.03.2019 |
| Размер файла | 13,9 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Консервирование культур клеток
Preserving cell cultures
Маменова А.Д., Николаева О.Н.
ФГБОУ ВО Башкирский ГАУ
Уфа, Россия
Культура клеток - это клетки многоклеточного организма, живущие и размножающиеся в искусственных условиях вне организма (in vitro) /1/.
Наиболее распространенные способы выращивания культур клеток: первичные культуры клеток, культуры перевиваемых клеток и культуры диплоидных клеток.
Первичные культуры получают путем посева клеточной взвеси, приготовленной в результате ферментативного расщепления тканей.
Перевиваемые клетки - это культура клеток, способная к размножению вне организма неопределенно длительное время. Наиболее часто применяют культуры клеток, выделяемые из нормальных и раковых тканей человека. Среди них широкую известность получила линия клеток Hela, полученная из опухоли шейки матки человека.
Штаммом диплоидных клеток называется морфологически однородная популяция клеток, стабилизированная в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни /2/.
Каждый из трех основных типов клеточных культур, используемых в вирусологических исследованиях, часто приходится консервировать, так как при продолжительном пассировании клеток in vitro есть опасность бактериального загрязнения и неконтролируемых (генетических) изменений самих клеток.
Наиболее простой метод консервирования культур клеток- хранение их при 4°С до 1-6нед. Успешно применяют хранение клеточных штаммов в условиях сухого льда (минус 78°С) и жидкого азота (минус 196°С). Для этого клетки снимают с матрасов, суспендируют в концентрации 10 в 1мл питательной среды, содержащей в качестве защитных веществ 10-40% сыворотки и 10% очищенного стерильного глицерина (вместо глицерина успешно применяют ДМСО-диметилсульфоксид). Затем клеточную суспензию разливают в ампулы, запаивают и выдерживают 1-3часа при 4°С, после чего замораживают клетки в смеси этилового спирта с сухим льдом. Скорость охлаждения не должна превышать 1°С в 1 минуту. При снижении температуры до минус 25°С ампулы помещают для хранения в сухой лед. Если для хранения используют жидкий азот, то ампулы с клетками охлаждают до минус 70°С и кладут в жидкий азот. Хранение клеток в жидком азоте в течение ряда лет не изменяет их пролиферативную активность и чувствительность к вирусам.
Штаммы вирусов хранят в холодильнике под замком с пломбой или печатью.
Использование стабилизирующих веществ необходимо не только при хранении вируса, но и для предотвращения потерь его в процессе самого замораживания, особенно вируссодержащих образцов экстраэмбриональной и культуральной жидкости. Если же в культуральной питательной среде содержится 2-19% сыворотки или гидролизата лактальбумина, то ее можно заморозить без добавления стабилизирующих веществ. Хорошее защитное действие при замораживании вирусов и хранении их в таком состоянии оказывает добавление к вируссодержащему материалу одного из таких компонентов, как 10-30% сыворотки крови, инактивированной при 56- 60°С; 0,5-1,5% желатина; 20-50% обезжиренного молока; 0,1-0,5% метилцеллюлозы; 1-5% пептона; 5-20% гидролизата животного белка и 10% ДМСО. Последний, хорошо защищает вирусы, имеющие оболочку, особенно вирусы герпеса, кори, везикулярного стоматита. Даже при четырехкратном оттаивании и замораживании установлено его эффективное защитное действие.
Восстанавливают замороженные клетки следующим образом: ампулу с замороженными клетками быстро погружают в водяную баню на 1-2 минуты при легком встряхивании, затем клетки выливают в матрас, добавляют соответствующее количество ростовой среды и культивируют в термостате при 37°С. Для удаления глицерина или ДМСО питательную среду заменяют на следующий день после посева.
При транспортировке клеток матрасы с выросшим монослоем заливают средой доверху и закрывают резиновой пробкой. В лаборатории питательную среду сливают и используют при культивировании этих клеток в виде добавок к питательной среде, применяемой в данной лаборатории.
Можно транспортировать и клеточную суспензию при 4°С. При благоприятных условиях транспортировки, исключающих перегревание и замораживание клеток, 80-90% из них сохраняют жизнеспособность до 7-8 дней.
Работа с культурой клеток требует абсолютной стерильности, тщательной подготовки посуды, соответствующих растворов, питательных сред и высокого качества воды /1/.
консервирование культура клетка вирусологический
Библиографический список
1. Белоусова, Р. В. Практикум по ветеринарной вирусологии [Текст]: учеб. пособие для студ. вузов по спец. 111201 "Ветеринария" / Р. В. Белоусова, Н. И. Троценко, Э. А. Преображенская. - 3-е изд., перераб. и доп. - Москва: КолосС, 2006. - 77 с.
2. Госманов, Р. Г. Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник для студ. Вузов, обуч. По спец. 111201 «Ветеринария» / Р. Г. Госманов, Н. М. Колычев. - 2-е изд., перераб. и доп. - Москва: КолосС, 2006 г. - 221с.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Краткая история развития метода культуры ткани. Терминология клеточных культур. Требования к факторам внешней среды. Питательные среды, солевые растворы. Материалы для приготовления культуры клеток из кожно-мышечной ткани развивающихся куриных эмбрионов.
курсовая работа [38,4 K], добавлен 16.03.2014Способы выращивания цветочных культур в открытом и защищенном грунте, закаливание рассады. Биологическая характеристика наиболее распространенных гибридов лилий и особенности выращивания. Назначение и подбор ассортимента для построения цветочных массивов.
контрольная работа [29,6 K], добавлен 07.10.2010Роль минеральных веществ в жизнедеятельности клеток и тканей организма животного. Значение макроэлементов для организма животного. Кислотно-щелочное соотношение элементов в кормах. Применение микроэлементов в кормлении, суточные нормы потребления.
реферат [21,6 K], добавлен 25.10.2009Иммунная система рыб представляет собой совокупность клеточных и гуморальных факторов иммунитета и состоит из клеток лимфоидно-макрофагального комплекса (лимфоцитов, гранулоцитов, клеток Купфера, Лангерганса и т.д.).
методичка [38,2 K], добавлен 03.07.2007Добавки, используемые для консервирования и обогащения кормов. Консервирование кормов. Способы химического консервирования кормов азотсодержащими веществами. Карбамид, бикарбонат, сульфат, бисульфат и бисульфит аммония, хлористый аммоний.
реферат [17,9 K], добавлен 19.11.2006Роль высококачественного семенного материала в росте урожайности сельскохозяйственных культур. Хозяйственная и биологическая характеристика интенсивных сортов озимой пшеницы. Фазы роста и развития зерновых культур, вегетативный период в жизни растения.
контрольная работа [25,3 K], добавлен 20.05.2011Ботанические характеристики и биологические особенности овощных культур, выращиваемых в России. Сорта лука, салата, петрушки, цикория и сельдерея. Агротехника выращивания выгоночных и посевных зеленых культур. Болезни и вредители, меры борьбы с ними.
курсовая работа [43,8 K], добавлен 09.04.2015Морфологические и биологические особенности полевых и зернобобовых культур. Полевая всхожесть семян, способы ее повышения. Народнохозяйственное значение, возделывание и содержание волокна у прядильных культур. Технология возделывания клевера красного.
контрольная работа [29,0 K], добавлен 15.06.2011Характеристика земельных угодий хозяйства. Сроки, способы выращивания семян однолетних и двулетних овощных культур и площади посева. Потребность хозяйства в семенах, маточниках и гербецидах. Технологическая карта выращивания семян свеклы столовой.
курсовая работа [72,3 K], добавлен 14.01.2015Общие сведения о хозяйстве. Сорта овощных культур, способы выращивания и сроки поступления продукции. Потребность в семенах, рассаде и другом посадочном материале. Система обработки почвы, орошения и удобрений овощных культур. Борьба с вредителями.
курсовая работа [80,2 K], добавлен 15.06.2010Характеристика зернового хозяйства Украины. Стратегия выращивания пшеницы в рыночных условиях Украины. Особенности выращивания пшеницы в годы с неблагоприятными и благоприятными климатическими условиями. Проблемы семеноводства пшеницы и зерновых культур.
реферат [22,2 K], добавлен 01.06.2010Коровье молоко как продукт молочного скотоводства, анализ его основных показателей качества. Содержание соматических клеток в молоке - важный микробиологический показатель его качества, методы и приборы для его определения, пути снижения их содержания.
курсовая работа [29,3 K], добавлен 07.05.2010Почвенно-климатические условия исследуемого хозяйства. Декоративное древоводство и питомники. Обоснование ассортимента выращиваемых культур. Биологическая характеристика культуры, требования к условиям, технология выращивания, особенности размножения.
отчет по практике [42,9 K], добавлен 17.10.2014Общая характеристика зернофуражных культур. Ботанические и биологические особенности ячменя. Характеристика и особенности технологии промышленного выращивания овса. Особенности сельскохозяйственного возделывания обеих культур по интенсивной технологии.
реферат [9,8 K], добавлен 07.03.2015Классификация, возделывание и значение промежуточных культур в специализированных севооборотах зернового направления. Характеристика озимых культур. Поукосные промежуточные культуры, особенности их обработки. Посев пожнивных промежуточных культур.
контрольная работа [11,3 K], добавлен 25.03.2009Понятие технологии возделывания сельскохозяйственной культуры. Физиологические основы зимостойкости, фазы закалки озимых культур. Технология возделывания кормовой свеклы, брюквы, репы и моркови на корм, льна долгунца на прядильные цели и семена.
контрольная работа [37,3 K], добавлен 19.09.2009Почвенно-климатические условия зоны выращивания плодоовощных культур. Технологии выращивания овощной и плодово-ягодной культуры открытого и закрытого грунта: севооборот, система обработки почвы, удобрение и уборка урожая. Проектирование садов и ягодников.
курсовая работа [1,3 M], добавлен 19.04.2012Требования культур к условиям выращивания. Подготовка почвы, посев, посадка и пересадка. Некоторые правила посадки и пересадки многолетников. Внекорневая подкормка и удобрение цветочных культур. Чередование при посадке, полив, окучивание и утепление.
реферат [27,7 K], добавлен 04.07.2010Способы посева полевых культур. Место в севообороте и агротехника картофеля и ранних яровых хлебов. Особенности выращивания льна по прогрессивной технологии. Значение и биология тимофеевки и овсяницы луговой. Системы улучшения природных кормовых угодий.
контрольная работа [36,8 K], добавлен 02.11.2014Классификация факторов, влияющих на урожайность сельскохозяйственных культур. Роль антропогенного воздействия на развитие растений. Специфика трудностей выращивания культур при избытке или недостатке влаги. Действие засоления почвы. Биотические факторы.
реферат [24,3 K], добавлен 24.05.2015
