Розробка методики визначення залишкових кількостей кетопрофену у сироватці крові тварин

Размещено на http://www.allbest.ru/

Державний науково-дослідний контрольний інститут ветеринарних препаратів та кормових добавок

Розробка методики визначення залишкових кількостей кетопрофену у сироватці крові тварин

О.І. Федякова

Рис. 1. Хроматограма зразка стандартного розчину кетопрофену, концентрацією 0,5 мкг/мл

Для підтвердження відповідності отриманих результатів у певному діапазоні ми співставили площі піків досліджуваної речовини з концентрацією. Отримані дані (табл.1.) вказують на лінійність методики визначення кетопрофену у діапазоні концентрацій 0,5 - 8 мкг/мл. Коефіцієнт кореляції в даному діапазоні становить 1,0.

Таблиця 1 Залежність площі піків кетопрофену від концентрації аналізу в розчині

Наступним етапом розробки методики була підготовка зразків сироватки крові для визначення аналіту. Одержання сироватки крові проводили за стандартною процедурою [1].

Таблиця 2 Схема приготування зразків сироватки крові навантажених кетопрофеном для побудови калібрувальної кривої

На основі літературних даних і проведених експериментів встановили таку послідовність підготовки зразків:

• відбирали 1,0 мл сироватки крові, додавали 2,0 мл натрій фосфатного буферу рН 3,0;

• екстрагували етилацетатом впродовж 15 хв;

• верхню фракцію після центрифугування висушували;

• перерозчинені зразки переносили у віалу автоматичного дозатора хроматографічної системи для проведення визначання.

Для програмного обрахунку даних побудували калібрувальну криву на матриці, з цією метою у шість поліпропіленових пробірок відбирали по 1,0 мл сироватки крові, яка не містить кетопрофену. Навантаження проводили розчином стандартного зразку кетопрофену у концентрації: 10 та 1 мкг/мл, згідно з таблицею 2. кетопрофен кров тварина хроматографія

Рис. 2. Графічне зображення калібрувальної кривої кетопрофену у сироватці крові.

Одержані дані свідчать про придатність методики для визначення кетопрофену у сироватці крові тварин. Про лінійність методики свідчить коефіцієнт кореляції, що становить 0,9998. Проте, навіть при такому високому коефіцієнті кореляції можуть спостерігатися помітні відхилення від лінійності в області високих і низьких концентрацій, тому лінійність зобразили графічно (рис. 2).

Отже, результати, отримані на цьому етапі досліджень, свідчать, що розроблену методику можна застосовувати для визначення залишкових кількостей кетопрофену у сироватці крові.

Висновки

Розроблено чутливу селективну методику визначення залишкових кількостей кетопрофену у сироватці крові. Встановлено, що методика лінійна в діапазоні концентрацій 0,1-8 мкг/мл.

Перспективи досліджень. У подальшому необхідно провести валідацію розробленої методики визначення кетопрофену.

Література

1. Левченко В. І. Ветеринарна клінічна біохімія / В. І. Левченко, В. В. Влізло, П. Кондрахін // За ред. В. І. Левченка, В. Л. Г аляса. - Біла Церква. - 2002. - 400 с.

2. Topical ketoprofen patch in the treatment of tendinitis: a randomized, double blind, placebo controlled study / B. Mazieres, S. Rouanet, Y. Guillon et al. // The Journal of Rheumatology - 2005. - 32 (8) - P. 1563-1570.

3. MazieresB. Topical ketoprofen patch / B. Mazieres // Drugs in R&D. - 2005. - № 6 (6). - P. 337-344.

4. Ketoprofen Absorption by Muscle and Tendon after Topical or Oral Administration in Patients Undergoing Anterior Cruciate Ligament Reconstruction / Sekiya I.; Morito T.; Hara K. et al. // AAPS PharmSciTech. - 2010. - № 11(1). - P. 154-158.

5. Efficacy of ketoprofen vs. ibuprofen and diclofenac: a systematic review of the literature and meta-analysis / P. Sarzi-Puttini, F. Atzeni, L. Lanata, M. Bagnasco // Clinical and experimental rheumatology. - 2013. - № 31(5). - P. 731-738.

6. Single dose oral ketoprofen or dexketoprofen for acute postoperative pain in adults / Н. Gaskell, Sh. Derry, Ph. Wiffen et al. // The Cochrane Database of Systematic. - 2017. - № 5. - P. 1469-1493.

7. Topical NSAIDs for chronic musculoskeletal pain in adults / S. Derry, Р. Conaghan, J.A. Da Silva et al. // The Cochrane Database of Systematic. - 2016. - № 4. - P. 80-84.

8. Nondumiso Mkontwana. Oral analgesia for relieving postcaesarean pain / Nondumiso Mkontwana, Natalia Novikova // Cochrane Systematic Review. - 2015. - № 2. - P. 50-51.

Анотація

Ключові слова: КЕТОПРОФЕН, РОЗРОБКА МЕТОДИКИ, ВЕРХ-УФ, СИРОВАТКА КРОВІ.

В статье представлены основные этапы разработки и применения методики количественного определения кетопрофена в сыворотке крови животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Разработанная методика позволяет хроматографически определять концентрацию кетопрофена в условиях применения ультрафиолетового детектора, длины волны 260 нм, использование мобильной фазы в составе натрий-фосфатного буфера и ацетонитрила в соотношении 55:45, температуры колонки 30°С. Рассмотрены основные этапы подготовки образцов для исследования, а именно экстрагирования этилацетатом, очистки путем твердофазной экстракции, пере растворения и, собственно, хроматографии. При потоке 2 мл / мин. время содержания кетопрофена составляет 3,6хв, а время анализа - 10 мин. Методика линейная в диапазоне концентраций 0,1-8 мкг / кг.

Ключевые слова: КЕТОПРОФЕН, РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ, ВЭЖХ-УФ,

Ketoprofen (2-(3-benzoylphenyl)-propionic acid) is a potent non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) used for the treatment of a wide range of painful and inflammatory illness. Like the most NSAIDs, ketoprofen is advantageous because it lacks addictive potential and does not result in sedation or respiratory depression. Ketoprofen is a white or almost white crystalline powder having empirical formula C16H14O3 with molecular weight of 254.3 and melting point 94° to 97°C. It has pKa of 5.94. It is practically insoluble in water, freely soluble in alcohol, acetone, and dichlormethane.

Several types of analytical procedures have been proposed for the analysis of ketoprofen in pharmaceutical formulations. The procedures include capillary zone electrophoresis, UV- spectrophotometry, high-performance liquid chromatography, flow injection technique with hemiluminiscence, flow injection with UV-detection, polarography, micellar elecrokinetic chromatography, electrochemical methods.

European Pharmacopoeia recommended acid-base titration for analysis of ketoprofen in substance, UV-spectrophotometry for its determination in capsules as well as liquid chromatography for assay in gel. The aim of this paper is to develop a specific, precise and accurate chromatographic method that could be applied in quality and quantity control for the determination of ketoprofen.

The article describes the main stages of development and application of quantitative determination of ketoprofen in blood serum of animals by the method of high-performance liquid chromatography. The developed method allows to determine the concentration of ketoprofen by using a ultraviolet detector, a wavelength of 260 nm. The mobile phases contains sodium phosphate buffer and acetonitrile in the ratio 55:45, and a column temperature of 30 °С.

The main stages of samples preparation for research was observed: extraction with ethyl acetate, purification by solid phase extraction, re-dissolution and, in fact, chromatography. At a flow of 2 ml/min. the retention time for ketoprofen is 3,6 minutes, and the analysis time is 10 minutes. The method is linear in the range of 0.1-8 gg / kg.

Keywords: KETOPROFEN, METHODOLOGY DEVELOPMENT, HPLC-UV, BLOOD SERUM.

Размещено на Allbest.ru