Вирус алеутской болезни норок и вирус синдрома снижения яйценоскости

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Кафедра радиобиологии и вирусологии

имени академиков А.Д. Белова и В.Н. Сюрина

Реферат

По дисциплине «Вирусология»

«Вирус алеутской болезни норок»

«Вирус синдрома снижения яйценоскости»

Москва, 2019

Содержание

Введение

1. Характеристика Вируса алеутской болезни норок

1.1 Таксономия вируса

2. Антигенная структура и антигенная вариабельность

2.1 Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства

2.2 Органный патогенез(этапы)

3. Диагностика болезни, вызываемой вирусом алеутской болезни норок

3.1 Постановка предварительного диагноза

3.2 Краткая характеристика клин. признаков

3.3 Краткая характеристика основных патанатомических изменений

3.4 Изоляция вируса

4. Вирус синдрома снижения яйценоскости

4.1 Особенности культивирования исследуемых вирусов

4.2 Органный патогенез

4.3 Диагностика болезни, вызываемой этим вирусом

4.4 Краткая характеристика клинических признаков

4.5 Специфическая профилактика

Заключение

Список использованной литературы

Введение

Алеутская болезнь (вирусный плазмоцитоз) -- контагиозная, медленно развивающаяся инфекционная болезнь, протекающая с явлениями геморрагического диатеза, анемией, кахексией на фоне плазмоклеточной пролиферации и гипергаммаглобулинемией.

Болезнь регистрируется в странах с развитым пушным звероводством и наносит большой экономический ущерб.

Данное заболевание представляют большую опасность для животных, не имеющих иммунитета к данным инфекциям. Обычно это невакцинированные молодые животные со слабым иммунным ответом на вакцины.

К алеутской болезни восприимчивы норки всех генотипов (пород), независимо от пола и возраста, и в некоторой степени хорьки. У экспериментально зараженных хорьков и тхорзофреток (гибридных хорьков) отмечают продолжительное (до 977 дней) вирусоносительство. Вирус долго сохраняется (персистируется) в организме лисиц, песцов, соболей, кроликов, диких зверей, собак, кошек и других животных, не теряя во многих случаях патогенности для норок. Он может персистировать и в организме человека, на вызывая заболевания.

Заболевание регистрируют среди пушных зверей в Европе, Азии, Австралии, Африке, Америке, а также в нашей стране.

Источник возбудителя инфекции -- в первую очередь зараженные норки. Вирус находится во всех органах и тканях больного животного, экскретах, перитонеальной и околоплодной жидкости, в плаценте и тканях эмбрионов. Он связан с клеточными ядрами и различными органеллами цитоплазмы.

Заражение происходит вертикально (от матери в утробе или во время родов и первых часов жизни) и горизонтально (при контакте) --орально, аэрогенно и через кожу (при покусах). Предполагается возможность трансмиссивной передачи возбудителя (через блох). В распространении болезни определенное значение имеют контаминированные вирусом клетки, сачки, рукавицы, корма. После скармливания в неблагополучных хозяйствах сырых или плохо проваренных тушек убойных норок заболеваемость резко увеличивается. Основная причина распространения болезни в благополучных хозяйствах -- завоз зараженных норок, не выявленных при диагностике (недиагностируемая стадия болезни).

Для алеутской болезни характерны стационарность эпизоотических очагов, наличие прямой зависимости между уровнем реагирующих на тот или иной диагностический тест и частотой резорбции эмбрионов у самок (пропустование), абортов, мертворождаемости, ранней гибели молодняка и т. п. На течение и исход болезни влияет генотип животного, а также сезон года и условия кормления. В осенне-зимний период гибель зверей ускоряется, так как больные норки вследствие замерзания воды в поилках не могут утолить жажду, обычно возникающую при данной болезни. Ухудшение кормления тоже увеличивает падеж и без того истощенных больных норок.

В зависимости от давности эпизоотического очага формы проявления болезни могут быть разными, В свежем очаге преобладает прогрессирующая форма, в стационарном -- непрогрессирующая, или инаппарантная (бессимптомная). В течение нескольких лет заболевание может охватить почти все поголовье. Максимальная по-раженность (превалентность), обнаруженная в отдельных средах при помощи серологических исследований, достигает 97%.

1. Характеристика Вируса алеутской болезни норок

1.1 Таксономия вируса

Семейство Parvoviridae

Род Parvovirus

Вид Вирус алеутской болезни норок

Морфология вириона:

Возбудитель относится к группе автономных дефектных парвовирусов и содержит однонитевую линейную молекулу ДНК. Как и все парвовирусы, вирус алеутской болезни норок является чрезвычайно устойчивым во внешней среде как вне клеток патматериала, так и в нем. Вирионы имеют изометрическую форму, диаметром 18--22 нм и не имеют суперкапсидной оболочки. Они состоят из капсида кубического типа симметрии и генома. (т.е. вирус простой)

Этапы репродукции вируса



Цикл репродукции парвовирусов предусматривает:

проникновение вируса в клетку и связывание с рецепторами клеток хозяина;

превращение вирусного генома в двухцепочечную ДНК под действием клеточных ферментов;

транскрипцию неструктурных регуляторных протеинов и повторяющиеся циклы репликации одноцепочечной вирусной ДНК;

транскрипцию структурных протеинов под контролем неструктурных протеинов вируса;

обособление вирусной геномной одноцепочечной ДНК;

сборку и упаковку вирионов;

лизис клетки и высвобождение вирионов.

Парвовирусы тропны к быстро делящимся клеткам (костного мозга, селезенки, кишечника, тканей плодов), находящимся в S-фазе клеточного цикла, т.е. в фазе синтеза ДНК, когда в клетках имеются ДНК-полимеразы , необходимые для репликации вируса. Эритровирус ВВ19 тропен прежде всего к клеткам-предшественникам эритроцитов в костном мозге и селезенке. К числу клеток-мишеней ВВ19 относятся также другие молодые клетки, не являющиеся пермиссивными для их репликации, в частности эндотелиальные клетки, клетки плаценты, миокарда, печени, легких, почек, синовиальных оболочек и др. ВВ19 не инфицирует мегакариоциты in vivo, но в опытах in vitro было показано цитотоксическое действие вирусных протеинов на мегакариоциты. ВВ19 проникает внутрь клеток через трансферриновые рецепторы клеток и, возможно, другие, пока неидентифицированные рецепторы плазмалеммы . Клеточным рецептором для ВВ19 является P-антиген (P-антиген эритроцитов, ВB19-рецептор) , который представляет собой глобозид - нейтральный гликосфинголипид, экспрессирующийся клетками-предшественниками эритроцитов, а также другими непермиссивными клетками. Клеточным корецептором, определяющим проникновение парвовирусов в клетку, являются интегрины (в частности для ВВ19 - aльфа5бета1-интегрин ).

В результате рецептор-опосредованной адсорбции на поверхности клеток-мишеней вирионы ВВ19, прикрепившиеся к плазмалемме, проникают внутрь клеток посредством эндоцитоза . После слияния вирусной мембраны с мембраной эндосом , вирусные частицы проникают внутрь эндосомы, в кислой среде которых они претерпевают конформационные изменения, обеспечивающие выход вирионов в цитоплазму клетки. Процесс высвобождения вирионов из эндосом наиболее интенсивно протекает при температуре 37*С, а при 18*С он прекращается. Оказавшись в цитоплазме, вирионы мигрируют в ядро, в которое они проникают через 2-6 ч после заражения. При преодолении мембраны ядра вирусные частицы не испытывают особых затруднений, т.к. их размер соответствует величине пор мембраны последнего. В ядре вирусная ДНК освобождается от капсида, а структурные белки и их фрагменты инициируют экспрессию вирусных генов.

Механизм репликации генома един для всех парвовирусов. Для репликации парвовирусы используют ДНК-синтезирующий аппарат клетки-хозяина. Репликация происходит в ядре клетки и по своему механизму напоминает репликацию аденовирусов . Репликация начинается с преобразования левой (3'-) и правой (5'-) концевых последовательностей вирионной ДНК в шпилечные структуры. Затем к специфическому сайту левой шпильки присоединяется неструктурный белок NS1 , клеточный белок нуклеолин и клеточная ДНК-полимераза , образуя стартовый комплекс, под контролем которого синтезируется комплементарная цепочка вирусной ДНК. Синтезированная цепь ДНК ковалентно связывается с 5'-концевым нуклеотидом правой шпильки родительской цепочки ДНК с помощью клеточной лигазы. В результате формируется двухцепочечная мономерная репликативная форма. Необходимым условием продолжения репликации является экспрессия гена неструктурного белка NS1. Вновь синтезированный NS1 присоединяется к специфическому сайту в области правой шпильки комплементарной цепочки ДНК и вносит одноцепочечный разрыв. Образовавшийся свободный З'-гидроксильный конец используется для синтеза комплементарного участка правой шпильки.

На следующем этапе репликации происходит восстановление шпилечных структур в правой части генома, формирование структуры "кроличьих ушей", которые образованы последовательностями родительской правой шпильки и синтезированной на предыдущем этапе ее комплементарной цепи со свободным З'-гидроксилом, используемым для продолжения репликативного синтеза в сторону левой шпильки. Результатом этого синтеза является образование промежуточных репликативных форм, двусторонних димеров, содержащих два полных генома парвовируса и две их комплементарные цепи, З'-концы которых могут образовывать шпильки для инициации синтеза ДНК. Затем осуществляется синтез димерных репликативных форм, полимеризация двусторонних димеров с образованием тетрамерных структур, из которых вырезается вирионная ДНК парвовируса.

Транскрипция парвовирусов происходит в ядре клетки с участием клеточной РНК-полимеразы . В отличие от многих других вирусов парвовирусы не ингибируют клеточные синтезы. Для синтеза вирусных полиаденилированных мРНК используется двухцепочечная ДНК, при этом в качестве матрицы выступает цепочка ДНК негативной полярности. Все транскрипты полиаденилированы и имеют кэпы . Вирусные мРНК подвергаются сплайсингу . Транскрипция мРНК у парвовирусов регулируется 1 ( Erythrovirus ), 2( Parvovirus ( CPRV ), Densovirus , Brevidensovirus ) или 3 ( AAV ) видами промоторов. Инициацию транскрипции осуществляет неструктурный белок NS1 .

Образование зрелых вирусных частиц включает в себя сборку нуклеокапсида . Сборка вирионов происходит под контролем неструктурного протеина NS1 в ядре клетки-хозяина, из которого они мигрируют в цитоплазму и выходят во внеклеточное пространство в результате лизиса инфицированной клетки.

2. Антигенная структура и антигенная вариабельность

Антигенная структура. Вирионы алеутской болезни содержат капсидные антигены. В организме инфицированных норок обнаружены неструктурные (невирионные) антигены. Капсидные и неструктурные антигены образуют так называемые инфекционные комплексы с иммуноглобулинами сыворотки крови. В состав таких комплексов входит и комплемент. Инфекционная активность вируса, входящего в такие комплексы, не нейтрализуется, поэтому он длительно циркулирует в организме больных животных.

Антигенная вариабельность. Штаммы вируса алеутской болезни морок и хорьков в иммунобиологическом отношении неродственны.

2.1 Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства

Гемагглютинирующая активность неизвестна

Особенности культивирования в различных живых системах

Основная живая система на которых поддерживается вирус - лабораторные животные, в частности норки. Из культур клеток для выращивания вируса использовали клетки куриной почки, семенники норок, почки кошки. Однако культуральный вирус уже с первых пассажей утрачивал инфекционную активность для норок, хотя вызывал ЦПД в культурах клеток.

2.2 Органный патогенез(этапы)

Первичный, инфекционный, цикл начинается после внедрения вируса и соответствует общепринятой картине. Вирус стимулирует пролиферацию плазматических клеток, которые, в свою очередь, вырабатывают антитела, вступающие с ним в реакцию. Однако начавшийся первичный цикл продолжается до конца жизни норки из-за неспособности сформировавшихся антител нейтрализовать внедрившийся вирус. Это обеспечивает пер-систентную циркуляцию вируса в организме и непрекращающееся формирование иммунных комплексов.

Вторичный, аутоиммунный, цикл начинается с момента повреждения лизосом вследствие захватывания клетками гистиоцитарной системы большого количества иммунных комплексов. Лизосомные энзимы, высвобождаясь, денатурируют белки цитоплазмы клеток гистиоцитарной системы и делают их аутоантигенными, которые стимулируют дальнейшую пролиферацию плазматических клеток.

К аутоантигенам вырабатываются гомологичные им аутоантитела. Вторичный цикл патогенеза характеризуется выработкой антигенов из денатурированных белков тканей хозяина, дополнительной стимуляцией плазмоцитов, образованием аутоантител, формированием комплексов аутоантиген--аутоантитело. Этот источник блокады клеток РЭС обеспечивает непрерывное течение вторичного цикла. Первичный и вторичный циклы обусловливают прогрессирующее течение болезни и неизбежный летальный исход.

Наиболее характерным гистологическим изменением является пролиферация плазматических клеток, происходящая в лимфатических узлах, костном мозге, печени, почках. У тяжело больных норок периваскулярные плазмоклеточные инфильтраты можно обнаружить в любом органе и ткани.

В течении и исходе алеутской болезни важное значение имеют поражения почек, проявляющиеся прогрессирующим склерозирующим гломерулонефритом. Наряду с отчетливой плазмоклеточной инфильтрацией тканей и тяжелым гломерулонефритом был выявлен тяжелый артериит -- поражения сосудов почти во всех органах.

3. Диагностика болезни, вызываемой вирусом алеутской болезни норок

3.1 Постановка предварительного диагноза

Анализ эпизоотологических данных

В естественных условиях к вирусу алеутской болезни восприимчивы норки всех окрасок, однако особи с гомозиготным рецессивным геном АА (алеутские, сапфировые, голубые) заболевают чаще, быстрее и тяжелее переносят болезнь, чем стандартные. Генетические факторы влияют на тяжесть заболевания, но не на восприимчивость.

Описана спонтанная гипергаммаглобулинемия у хорьков с атипичными для алеутской болезни признаками. Вирус бессимптомно персистирует в организме лисиц, песцов, соболей, кроликов, диких зверей, собак, кошек, не теряя патогенности для норок.

Источником возбудителя инфекции служат больные норки и вирусо-носители, которые выделяют вирус со слюной, мочой, калом, молоком, околоплодной жидкостью. Заражение происходит алиментарно, аэроген-но, внутриутробно, через поврежденную кожу. Определенное значение имеет распространение вируса через предметы ухода, корма и блохами.

3.2 Краткая характеристика клин. признаков

Клинические признаки болезни обнаруживают незадолго до гибели животного через 1...24 мес после заражения. Самые характерные из них -- это прогрессирующее исхудание, периодическое кровотечение из носа и рта (на слизистой оболочке ротовой полости мелкие кровоточащие язвочки), усиливающаяся жажда, анемия, лихорадка. Зверьки малоподвижны, у них сонливый вид, волосы взъерошены, тусклые, линька задерживается. Кончик носа и подушечки пальцев приобретают желтый цвет. Начинается диарея, фекалии дегтеобразные. У отдельных особей наблюдают признаки поражения нервной системы -- звери не могут сохранить равновесие, у них нарушается координация движений, развиваются парезы и параличи (чаще тазовых конечностей). Возможно осложнение вторичными инфекциями.

У самок, заразившихся до периода гона, типичными считают аборты, пропустование, рассасывание плодов, потерю материнского инстинкта.

Бессимптомная форма болезни обусловливается наличием колостраль-ных специфических антител и проявляется невысокой летальностью в течение первого года после заражения; патологические изменения обнаруживают не у всех павших животных. При этой форме серологические реакции часто отсутствуют.

Прогрессирующая форма болезни наблюдается при горизонтальном заражении и характеризуется быстрым подъемом уровня антител, обнаруживаемых при серологической диагностике. У норок с геном алеутской окраски высокая летальность в течение первого года после заражения.

Прогноз болезни неблагоприятный. При бессимптомной форме погибает до 20 % норок. При прогрессирующей -- в течение первого года после заражения -- более 50 %, а на второй год -- до 80 %. Гибель зверей наступает через 2...7 мес, иногда на 675-й день после заражения.

3.3 Краткая характеристика основных патанатомических изменений

При алеутской болезни в органах развиваются довольно характерные изменения, в первую очередь в органах, богатых ретикулогистиоцитарной тканью: костном мозге, селезенке, лимфатических узлах, почках, печени. Трупы зверей истощены. На деснах, твердом и мягком нёбе у некоторых норок видны множественные мелкие кровоизлияния и язвы.

Наиболее характерны патологоанатомические изменения в почках. На поверхности коркового слоя хорошо выделяются точечные кровоизлияния и мелкие серо-белого цвета очажки. Создается впечатление, что почки обсыпаны песком. Граница между слоями сглажена. В почках явления нефрозонефрита. При хроническом течении болезни почки уменьшены в объеме, сморщенные, серо-желого цвета, капсула легко снимается.

Печень увеличена в 2 раза, цвета красного дерева или мускатного ореха. Селезенка резко увеличена -- в 2...5 раз, пятнистая. Лимфатические узлы набухшие, сочные.

Гистологические изменения весьма характерны. В почках, печени, селезенке, костном мозге, лимфатических узлах находят явления плазмоци-тоза. Плазматические клетки располагаются диффузно или очагами. Плазмоклеточную очаговую и диффузную пролиферацию можно обнаружить в любой ткани, но чаще поражаются органы кроветворения.

Виды патологического материала, направляемого от больных и павших животных:

От свежих трупов берут кусочки селезенки, печени, почек, лимфоузлов, головного мозга, которые транспортируют в лабораторию в термосе со льдом.

От больных норок отправляют сыворотку крови.

Этапы лабораторной диагностики:

Индикация и идентификация вируса

Присутствие вируса в зараженном организме в комплексе с антителами не дает возможности культивировать, индицировать и идентифицировать вирус, поэтому лабораторная диагностика основана на обнаружении специфических антител в сыворотке крови больных животных, либо на выявлении повышенного количества гамма-глобулинов (косвенный неспецифический метод диагностики).

Серологическая диагностика включает специфические реакции для обнаружения специфических антител в сыворотке крови, а также неспецифические методы для выявления повышенного содержания гамма-глобулинов в сыворотке крови.

Наиболее широко распространенным из неспецифических методов является йодагглютинационный тест (ЙАТ), основанный на свойстве йода осаждать гамма-глобулины при повышенном их количестве в сыворотке крови. Недостатком метода является невысокая чувствительность (40-60% инфицированных животных), а также отсутствие возможности выявлять зараженных норок в бессимптомный период.

Для постановки теста на обезжиренное стекло наносят одну каплю сыворотки крови и добавляют равное количество йодного реактива. Реакцию учитывают через 2 минуты. Положительный результат характеризуется образованием темно-коричневых хлопьев различной интенсивности. Йодный реактив готовят за сутки до исследования по следующей прописи: йода кристаллического 2 г, калия йодистого 4 г, дистиллированной воды 30 мл.

Тимоловая проба также является неспецифическим тестом, основанным на выявлении нарушения физико-химического состояния коллоидных растворов вследствие поражения печени. В тимоловом буфере белки выпадают в осадок и вызывают помутнение раствора. Результаты теста выражают в единицах экстинкции, умноженных на сто. У здоровых норок пробы колеблются от 0 до 4 ед., показатели 4,1-7 ед. считаются сомнительными, величина выше 7 ед. свидетельствует о болезни у исследуемого животного.

Изменение белкового состава крови при болезни можно также обнаружить методом электрофореза сывороточных белков. Установлено, что при алеутской болезни норок уровень гамма-глобулина превышает 14,9%. Недостатками неспецифических тестов диагностики алеутской болезни норок является невозможность диагностирования бессимптомной стадии болезни, а также получение положительных результатов в случае других неинфекционных поражений печени, желчного пузыря и почек.

РИФ позволяет обнаружить вирусные антигены в патологическом материале. Применяют прямой вариант РИФ, который выявляет светящиеся гранулы в цитоплазме клеток.

ПЦР и метод гибридизационного зонда -- экспресс-методы, позволяющие обнаруживать ДНК вируса в патологическом материале уже на ранних стадиях болезни.

Биопробу проводят на норках. На 6--9-й день после заражения вирус обнаруживают в селезенке в титрах 105--106 ИД50. Первые клинические признаки наблюдаются через 40 дней после заражения.

3.4 Изоляция вируса

Вирус устойчив во внешней среде. В необработанных тканях больных норок длительно сохраняет свою инфекционность, поэтому именно так и выделяют вирус. Низкие температуры консервируют вирус.

Вирус плохо размножается in vitro. Из 39 исследованных культур только в 5 штаммах клеток норки, в культуре почки зеленой африканской мартышки и в человеческих клетках WI-38 удавалось индуцировать появление вирусоспецифического антигена, который через 2 дня появлялся в ядре 0,01% инфицированных клеток, а через 3--4 дня -- в цитоплазме (Porter, Larsen).

Хроматографическим методом была показана репродукция вируса в культуре клеток (Yoon Ti-Won е. а.). Попытки усилить синтез антигена с помощью мутагенов, ингибиторов или суперинфекции другим вирусом успеха не имели. В культурах, приготовленных из органов экспериментально зараженных норок, вирус определяется па протяжении минимум 30 дней (Porter, Larsen).

Ретроспективная серодиагностика

Для РИЭОФ применяют мединал-вероналовый или другие буферные

растворы с рН 8,6 - 8,9, пригодные для электрофореза белков. Мединал-вероналовый буфер готовят путем растворения 10,32 г мединала в 300 куб.см дистиллированной воды и последующего добавления 1,84 г веронала.

Раствор помешивают и держат в водяной бане при 40гр.С до полного растворения веронала. Затем раствор доводят дистиллированной водой до объема 1 литр и измеряют рН. В том случае, если реакция приготовленного мединал-вероналового раствора получилась ниже 8,6 - следует добавить мединал, а если выше - веронал. После добавления мединала или веронала каждый раз определяют рН раствора, доводя его до нужной концентрации. Буферный раствор при массовых исследованиях используют в течение трех-четырех дней. При ухудшении линий преципитации в контроле следует заменить раствор и проверить активность диагностикума.

На чистую обезжиренную стеклянную пластинку размером

8 х 15 см наливают 30 куб.см 1%-ного горячего раствора агара, разведенном пополам дистиллированной водой. После застывания в агаровом геле делают лунки при помощи пробойника, соединенного трубкой с вакуумным насосом. Всего на агаровой пластинке делают 206 лунок с таким расчетом, чтобы получилось десять полных горизонтальных рядов по 20 лунок в каждом и одиннадцатый нижний неполный /для контроля/ с шестью лунками, размещенными парами слева, справа и в середине ряда.

Диаметр лунок должен быть 2,5 мм, глубина - 2,5 мм, фактический объем около 0,01 куб.см, расстояние между центрами соседних лунок каждого горизонтального ряда - 6 мм. Края агаровой пластинки на расстоянии не менее 1 см не должны иметь лунок.

Для более точного расположения лунок используют заранее размеченную миллиметровую бумагу, которую кладут под стеклянную пластинку, или накладывают направляющую пластинку из оргстекла с просверленными для пробойника отверстиями.

При единичных исследованиях можно использовать предметные стекла или стеклянные пластинки меньшего размера.

После разлива агара пластинки должны быть использованы не позднее двух часов при хранении во влажной камере /камера для электрофореза, эксикатор и т.д.

Кровь для исследования у норок берут в стеклянные капилляры, которые с одного конца закрывают пластилином и центрифугируют при 1500-3000 об/мин в течение 5 минут. Затем отламывают часть капилляра с сывороткой и, не допуская ее разбрызгивания, осторожно выдувают при помощи специальной груши или резиновой трубки в очередную лунку четного вертикального ряда. При необходимости можно использовать цельную кровь,осадок эритроцитов, гемолизированную или хилезную сыворотку. Для контроля реакции в четные лунки 11 горизонтального неполного ряда вносят положительную контрольную сыворотку. Антиген закапывают пастеровской пипеткой во все лунки нечетных вертикальных рядов /включая и контрольные/и помещают пластинку в камеру электрофореза с тем расчетом, чтобы ток проходил параллельно горизонтальным рядам. К краям пластинки прикрепляют по 4-5 полосок фильтровальной бумаги и опускают их свободные концыв ванны с буферным раствором, наполненные примерно на 2/3 объема.

Камеру закрывают крышкой и подключают к выпрямителю тока так, чтобы положительный полюс был справа (со стороны крайнего вертикального ряда с сыворотками). Сила тока должна быть 10-15 миллиампер на каждую стеклянную пластинку /0,08-0,12 ма/кв.см/, напряжение на выходе - 120-220 в.

Требуемые параметры тока /по показаниям приборов выпрямителя/ достигаются путем изменения количества полосок фильтровальной бумаги, если регулировка тумблерам не приводит к желаемому результату.

Предварительную читку реакции проводят через 15-45 минут после размещения пластинки в силовом поле. Для этого отключают от сети выпрямитель, открывают крышку камеры, вынимают пластинку и просматривают ее в косопроходящем свете /осветитель ОИ-19 или другие источники света/на темном фоне в затемненном помещении.

Положительная РИЭОФ характеризуется наличием тонкой четкой прямой линии преципитации в горизонтальных рядах геля примерно на середине расстояния между лунками с сывороткой и антигеном. Расплывчатые полосы в геле, диффузные или ограниченные изменения его прозрачности, а также отсутствие изменений расценивается как отрицательный результат.

Окончательную читку реакции проводят после экспозиции стекла с агаровой пластинкой в гипертоническом растворе /12,5%/ хлористого натрия в течение 7-10 мин и последующего отмывания в дистиллированной воде /6-18 ч/ для удаления неспецифических полос сывороточного белка.

При обнаружении едва различимой линии преципитации результат РИЭОФ считается сомнительным. В этом случае реакцию ставят повторно с новой пробой сыворотки. Подтвержденный сомнительный результат РИЭОФ засчитывают как положительный.

Показания РИЭОФ признают действительными, если на данной пластинке в 11 горизонтальном ряду во всех трех контролях будет ясно выражена линия преципитации.

Специфическая профилактика:

Все заболевшие норки гибнут, поэтому вопрос о естественном иммунитете отпадает. В США испытывали инактивированную вакцину (10 %-ный гомогенат селезенки и печени экспериментально зараженных норок, подвергнутый термоинактивации и смешанной с адъювантом Фрейнда в равных объемах). Вакцина оказалась не иммуногенной, повышала восприимчивость норок к последующему заражению и усиливала степень поражения органов. В 1964 г. Рассел и Максфельд запатентовали инактивированную формолвакцину. Ее вводят подкожно, внутрибрюшинно, внутримышечно или внутрикожно по 1--2 мл. Вакцина создает непрочный иммунитет, но позволяет повысить резистентность животных и прервать распространение инфекции. Китайские ученые впервые установили существование долговременной отрицательной реакции на антиген АБ у большого числа норок, что, вероятно, может быть основой иммунизации и предотвращения болезни.

Специфических средств лечения больных животных не существует. Показана симптоматическая терапия с применением антибиотиков, витаминов, белковых гидролизатов, иммунодепрессоров, гормонов. Основное внимание следует сосредоточить на лечении животных до созревания меха. Больных норок необходимо изолировать, обеспечить уход отдельным обслуживающим персоналом, снабдив последний специальным инвентарем.

С лечебной целью используют витамин В12 в сочетании с фолиевой кислотой и гидролизатом амидопептида. Для предотвращения дистрофии печени применяют липокаин, холин; для нормализации водно-солевого обмена -- физиологический раствор с глюкозой. Назначают иммуномоду-ляторы -- левамизол, иммунодепрессанты -- метотрексат, меркаптопурин. Лечение должно быть длительным и регулярным. В этот период в рацион животным вводят печень, творог, хорошего качества рыбу, мясо, свежедробленые кости.

Вакцинные антиидиотипические препараты VF80 и VS80 эффективно предотвращают развитие приобретенного вирусного иммунодефицита - алеутской болезни норок не менее чем у 80-90% вакцинированных животных, причем наиболее эффективно оказывается использование препарата VF80, представленного Fab-фрагментами антиидиотипических аналогов вирусного белка с молекулярной массой 80 кД.

Применение профилактической антиидиотипической вакцины против алеутской болезни норок не менее чем в 3-4 раза снижает заболеваемость и падеж животных и может эффективно использоваться в условиях специализированного звероводческого хозяйства, пораженного алеутской болезнью.

Данное заболевание распространено повсеместно и является контагиозной, медленно развивающейся инфекционной болезнью. Не смотря на то, что возбудитель был обнаружен в 1965 году и достаточно длительное время находился под наблюдением, болезнь изучена довольно слабо и является достаточно серьезной проблемой для хозяйств, действенных методов вакцинации незначительное кол-во, и лечение является в большинстве своем симптоматических. Ущерб, который наносит данное заболевание, колоссальный, и поэтому следует серьезно отнестись к профилактике и мерам борьбы с вирусом, а также не забывать о дезинфекции клеток и инвентаря.

4. Вирус синдрома снижения яйценоскости

Синдром снижения яйценоскости- вирусная болезнь, поражающая товарных и племенных кур-несушек, характеризуется снижением яйценоскости, размягчением или исчезновением скорлупы яйца, потерей окраски скорлупы у пород кур, несущих коричневые яйца.

Распространенность. Болезнь впервые описана Van Eck в 1976 г. В настоящее время ее регистрируют в Голландии, Англии, Северной Ирландии, Франции, Италии, ФРГ, Испании, Бельгии, Югославии, Дании, Венгрии, Швеции, Аргентине и США.

Экономический ущерб, причиняемый болезнью, обусловлен потерями, связанными со снижением яйценоскости. По данным J. Macpherson, в Англии ущерб составил 2,4 млн. фунтов стерлингов в год. Французские ученые отмечают, что у птиц, находящихся в клетках, продуктивность восстанавливается в течение 4--6 недель, а при содержании на полу она ниже на 8--10%. Потери яиц на птицу в неблагополучных стадах составляют 17,7%, что оценено в 116,9 пенса. Больная птица несет до 15% деформированных, со слабой скорлупой или без нее или депигментированных яиц. По данным Darbyshire (1980), количество яиц с пораженной скорлупой может достигать 38--40%. J. McFerran et al. (1978) отмечают, что потери продуктивности при этой болезни составляют в среднем 12 яиц на курицу.

Экономический ущерб связан также со снижением качества инкубационных яиц. Более 50 яиц от курицы-несушки непригодно для инкубации из-за хрупкости скорлупы. Помимо высокой выбраковки, отмечено также снижение уровня выводимости и жизнеспособности цыплят в первые дни жизни.

Морфология вируса синдрома снижения яйценоскости

Вирус синдрома снижения яйценоскости. Различными исследователями выделено несколько штаммов, идентичность которых подтверждена серологическими исследованиями. Штамм 127 изолирован в Северной Ирландии со слизистой оболочки носовой полости и глотки птиц. Вирус (ВС 14) выделен из лейкоцитов крови, серологически подтверждена его идентичность вирусу 127, выделенному из яйцеводов, фецес, носоглотки кур в пораженных стадах, обнаружены также антитела к этому агенту. В экспериментальных условиях болезнь воспроизведена заражением кур-несушек и бройлеров-свибов и установлено, что изолированный вирус является этиологическим агентом.

Штамм Д61 выделен из клоаки несушки в Англии. В Венгрии получен штамм В 8/78, идентичный штамму 127, во Франции выделены 3 штамма. Вирус идентифицирован как аденовирус, но не установлены группоспецифичные антигены с основными аденовирусами птиц методом гельдиффузии (W. Ba-xendale, 1977; J. McFerran et al., 1978). Однако некоторую степень перекрестных реакций с аденовирусами птиц наблюдали при использовании метода непрямой [3, c. 107].

Таким образом. возбудитель ССЯ-76 - ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Adenoviridae, роду Aviadenovirus, является аденовирусом уток, патогенным для кур. Как и у всех аденовирусов, вирионы ССЯ-76 представляют собой лишенные суперкапсидной оболочки изометрические частицы диаметром 70-90 нм. Белок вириона представлен 252 капсомерами, уложенными по кубическому типу симметрии и формирующими длинные отростки. Вирус снижения яйценоскости не связан ни с одним из 11 серотипов аденовирусов птиц и отличается от других аденовирусов птиц способностью агглютинировать эритроциты кур, уток и гусей.

Вирус имеет икосаэдральную форму. Симметрия капсида кубическая. Вирус не принадлежит ни к одному из известных серотипов аденовирусов птиц и в отличие от них агглютинирует эритроциты кур, уток и гусей. Гемагглютинин стабилен 30 минут при 70 °С. Некоторыми исследователями идентифицирован как аденовирус уток. На вершинах икосаэдра могут выявляться булавовидные утолщения. Считается, что они являются носителями поверхностного антигена вируса - гемагглютинина. Геном вируса сформирован ДНК. Молекулярная масса вируса равна 170-175 мегадальтон, константа седиментации 560, плавучая плотность в градиенте хлорида цезия составляет 1,32-1,35 г/см3. Вирулентность теряет через 30 минут при 60°С, а также под воздействием трипсина, мочевины и пиридина. Штаммы вируса, выделенные в различных странах, в антигеном отношении родственны. Вирус размножается в эмбрионах и культурах клеток утиного происхождения активнее, чем в эмбрионах и культурах клеток других птиц. ЦПЭ выражен образованием внутриядерных включений, округлением клеток, деформацией клеточного монослоя. У переболевшей (и экспериментально зараженной) птицы образуются специфические антитела, которые передаются трансовариально.

Антигенная структура и антигенная вариабельность

Вирус синдрома снижения яйценоскости. Антигенная структура. Вирус имеет группоспецифический антиген, общий для всех аденовирусов птиц, который обнаруживается в РДП, РСК. Имеется также типоспецифический антиген, присущий вирусам определенного серотипа и определяемый в РИФ. В то же время вирус ССЯ-76 не имеет антигенного родства ни с одним из вирусов 12 серотипов аденовируса кур.

Антигенная активность. Проявляется синтезом антигемагглютинирующих антител у кур через 2-3 нед после инфицирования, а также у цыплят, вылупившихся из яиц, снесенных больными курами.

Гемагглютинирующая активность. Вирус ССЯ-76 проявляет гемагглютинирующую активность с эритроцитами кур, уток и гусей.

Для идентификации выделенного вируса первоначально определяют титр его гемагглютинирующей активности в РГА, подбирают рабочее разведение вируса, равное 4 ГАЕ (методика приводится ниже), после чего к 4 ГАЕ вируса в 0,2 мл физиологического раствора добавляют 0,2 мл положительной к вирусу ССЯ-76 сыворотки в разведении, заведомо нейтрализующем взятое количество вируса [11, c. 250]. После контакта вируса с сывороткой в течение 30 мин. при комнатной температуре добавляют 0,4 мл 1% взвеси эритроцитов и через 30 минут учитывают результат. Задержка гемагглютинации указывает на гомологичность вида вируса и сыворотки, т.е. будет являться подтверждением того, что выделен вирус ССЯ-76. Отсутствие задержки гемагглютинации свидетельствует о том, что выделен гемагглютинирующий возбудитель, не являющийся вирусом ССЯ-76.

Реакция задержки гемагглютинации для серологический диагностики ССЯ-76 ставится в два этапа. На первом этапе проводится титрование стандартного инактивированного антигена вируса ССЯ-76 по гемагглютинирующей активности в РГА, готовится и контролируется его рабочее разведение. На втором этапе ставится собственно РЗГА.

Антигенных вариантов и типов у вируса ССЯ-76 не установлено. У больных кур на 6-8 день после заражения продуцируются сывороточные антитела, обладающие вируснейтрализующими, антигемагглютинирующими и прецишгтирующими свойствами. В динамике выработки антител имеется два пика. Первый (JgM-пик) выявляется на 10-11 день, второй (JgG-пик) - на 16-18 день после заражения. Нейтрализующие антитела начинают образовываться на шестые сутки после заражения, с возрастанием титра до 28 дня. Возбудитель устойчив к эфиру и рН в широком диапазоне. Инфекционные свойства его теряются в течение 30 мин при 60 °С, инактивируется он также трипсином, мочевиной и пиридином.

Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, действию температурных факторов. При нагревании вируссодержащего материала до 56 °С в течение 30 минут инфекционная активность снижается не более чем на 50%. Нагревание до 70 °С вызывает потерю инфекционной и гемагглютинирующей активности через 10 минут. В замороженном состоянии при -25 °С вирус сохраняет жизнеспособность более 3 лет. Вирус относительно стабилен при рН среды 6,0-9,0. В 50 % глицерине при температуре -30-50 °С вирус, содержащийся в патологическом материале, сохраняется в активном состоянии в течение нескольких лет [5, c. 53].

Преципитирующие антитела также образуются с 6 дня после заражения, но с 17 дня их титр начинает снижаться. Цыплята, полученные от серопозитивных родителей, до 4-недельного возраста содержат материнские антитела, с периодом полураспада 3 дня. Но они не могут постоянно предохранять птицу от аденовирусов, передаваемых потомству вертикально и начинающих себя проявлять в стрессовых ситуациях, в том числе в период выхода на пик яйцекладки. Вирус ССЯ-76 не принадлежит ни к одному из 12 известных в настоящее время серотипов аденовирусов птиц и в отличие от них способен агглютинировать эритроциты кур, уток, индеек, гусей.

4.1 Особенности культивирования исследуемых вирусов

Вирус синдрома снижения яйценоскости. Оптимальной системой для культивирования вируса ССЯ-76 являются утиные эмбрионы и культуры клеток утиного происхождения. После адаптации возможно культивирование на эмбрионах кур и культуре клеток печени эмбрионов кур. Оптимальная температура культивирования этого вируса - 40 °С. В культуре клеток вирус вызывает образование внутриядерных включений и проявляет себя гемагглютинирующей активностью.

Вирус также культивируют на различных культурах клеток и суспензий эксплантатов органов и тканей птиц. Чаще применяются культуры фибробластов утиных эмбрионов и культуры клеток печени и почек эмбрионов кур. Используют 24-48-часовую культуру первично трипсинизированных утиных фибробластов, приготовленную общепринятым методом и выращенную в стеклянных флаконах (матрасах) или пробирках. Исследуемый материал дополнительно разводят на физиологическом растворе до 10-1 и 10-3 и затем каждым разведением материала в объеме 3 мл заражают по 3 флакона с монослоем. Зараженные и контрольные флаконы инкубируют при 37-38 °С. Для учета цитопатического действия флаконы просматривают под малым увеличением микроскопа через каждые 24 часа в течение 7 дней [7, c. 80].

Вирус ССЯ-76 размножается в высоких титрах в почках уток, печени эмбриона уток и фибробластах утиного эмбриона, хуже - в клетках печени цыплят и крайне низко в фибробластах куриного эмбриона. В клетках млекопитающих вирус не культивируется. Он реплицируется в ядрах клеток по способу, описанному для первой подгруппы аденовирусов. Электронно-микроскопическим изучением тонких срезов инфицированных клеток обнаружены вирусные частицы и связанные с ними тельца-включения как у аденовирусов человеческого типа, так и аденовирусов птиц.

Хорошо вирус хранится в лиофилизированном состоянии. Ведущим местом локализации вируса в организме птиц являются органы половой системы, но в период латентной инфекции он может персистировать в кишечнике и других органах. Вирус можно выделить из яйцевода, лейкоцитов крови, верхних дыхательных путей, носовой и фаренгиальной слизи, печени, содержимого клоаки больных кур в течение 3-5 дней с момента появления первых клинических признаков заболевания. Во внутренних органах и тканях экспериментально зараженных птиц вирус сохраняется до 5 недель. В фекалиях его можно обнаружить в течение 2 недель после заражения.

4.2 Органный патогенез

Патогенез изучен недостаточно. Известно только, что происходит нарушение механизма формирования яичной скорлупы. Наблюдают также атрофию яичников и кровоизлияния в них. В матке увеличивается кислотность, что может привести к растворению кальция и нарушению образования скорлупы. При экспериментальном заражении кур-несушек дефектные яйца появляются на 4--7-е сутки, содержание белка и кальция в крови не изменяется.

4.3 Диагностика болезни, вызываемой этим вирусом

Анализ эпизоотологических данных

Болеют куры всех пород, преимущественно при достижении ими наивысшей продуктивности (25-35 недель), но возможно возникновение болезни в любой период продуктивного цикла. При этом к заболеванию наиболее восприимчива племенная птица и несушки мясных линий. Вирус ССЯ-76 широко распространен среди домашних и диких уток, а также гусей, является для них апатогенным и не вызывает клинического проявления болезни. Вирус способен персистироваться в организме кур, не достигших половой зрелости. Он активизируется и провоцирует спад яйценоскости в результате стресса, вызванного началом яйцекладки. Основной путь передачи вируса, а следовательно, и распространения заболевания - трансовариальный, не исключается и горизонтальный. Вирус передается контактно через одежду и обувь обслуживающего персонала, транспорт, кормушки, поилки, предметы ухода за птицей, отмечают случаи передачи возбудителя болезни со спермой петухов, пометом.

4.4 Краткая характеристика клинических признаков

Признаки болезни обычно проявляются на 30-й неделе, при наступлении пика яйценоскости. Очевидно, латентное течение болезни переходит в острое на фоне физиологического стресса -- возрастания яйценоскости и увеличения содержания гормонов.

У кур клинические признаки, как правило, не проявляются. У 10--70 % больных птиц наблюдалась синюшность сережек и гребня, анорексия, анемия и диарея. Основной же характерный признак-снижение яйценоскости, которая восстанавливается через 4--6 нед, но первоначального уровня уже не достигает. Изменяется не только скорлупа снесенных яиц (деформирована, с кольцами на экваторе, депигментирована), но и внутреннее качество: белок становится водянистым, мутным, с беловатыми хлопьями.

Краткая характеристика основных патанатомических изменений

Болезнь сопровождается отеками и инфильтрацией тканей матки и яйцеводов, незначительным катаральным энтеритом. При гистологическом исследовании установлена дегенерация кальцифицирующих желез, их мононуклеарная инфильтрация, лимфоидная гиперплазия в печени, селезенке и других органах. Маточные железы в состоянии атрофии, отечны, инфильтрированы. Атрофии подвержена и фабрициева сумка.

Механизмы повреждения яичной скорлупы, которые непостоянны, связывают не с гистологическими изменениями яйцеводов, а с ферментативными нарушениями в организме.

Виды патологического материала, направляемого от больных и павших животных

Материалом для исследований служат взятые от больной птицы в первые дни болезни носоглоточные смывы, кровь, фекалии. От трупа исследуют клоаку, яйцеводы, печень, селезенку.

Этапы лабораторной диагностики

Обнаружение(индикация) вируса в патологическом материале возможно в РИФ, биопробе на однодневных цыплятах (редко) или в культуре клеток. Причем вирус может быть обнаружен и выделен в культуре клеток после 2--3 «слепых» пассажей. ЦПД проявляется через 48--96 ч.

Идентифицируют выделенный вирус с помощью РИФ, РТГА, PH. PH применяют в сомнительных случаях. Ставят ее на утиных эмбрионах, в культуре клеток печени и почек эмбрионов уток.

Серодиагностика. Проводят ее с целью установления инфекции в стаде, для чего исследуют парные сыворотки. Парные сыворотки берут у птицы в 5--6-месячном возрасте, считая этот период началом болезни. Сыворотки исследуют в РТГА, ИФА, РНГА, РДП. Если РТГА выявляет в сыворотках антигемагглютинины в титрах 1:8 -- 1 : 512, то это считается косвенным признаком циркуляции в хозяйстве эпизоотического штамма вируса ССЯ-76. Максимальные титры антител обнаруживают у птиц в 8-месячном возрасте.

Дифференциальная диагностика. ССЯ-76 необходимо отличать от болезни Ньюкасла, инфекционного бронхита кур, инфекционного ларинготрахеита птиц, инфекционной бурсальной болезни и микоплазмоза.

4.5 Специфическая профилактика

У естественно переболевшей птицы образуется напряженный иммунитет. Через 7 дней после инфицирования обнаруживаются вируснейтрализующие, антигемагглютинирующие и преципитирующие антитела, связанные с иммуноглобулином IgG. Цыплята, выведенные из яиц инфицированных кур, сохраняют материнские антитела, период полураспада которых составляет 3 дня. Пассивные антитела обеспечивают устойчивость цыплят к заражению в первые 4 недели жизни.

Для специфической профилактики используют масляную формолвакцину из штамма ВС 14, выращенного на культуре клеток эмбриона уток. Вводят вакцину однократно внутримышечно или подкожно в дозе 0,5 мл (1000 ГАЕ), начиная с 18-недельного возраста.

Вакцина от ССЯ-76 испытана во Франции, Нидерландах, Великобритании, Бельгии и Люксембурге, Аргентине. После прививки не наблюдается фаза виремии и связанная с ней экскреция вируса, улучшается яйценоскость и качество скорлупы. Иммунитет образуется через 15 дней, максимально антигемагглютинины накапливаются через 30 дней. Титр антител начинает снижаться через 12--16 недель после прививки. Через 40--50 недель антитела не выявляются.

Вакцинация рассматривается как временная мера в связи с опасностью распространения вируса и адаптации его к курам. В Югославии (М. Krecov et al., 1980) с положительным результатом испытана вакцина, инактивированная 13-пропиолактоном и адсорбированная гидроокисью алюминия, изготовленная из вируса штамма 127.

Профилактика и меры борьбы. Для инкубирования рекомендуется использовать яйца от кур старше 40-недельного возраста, дающих отрицательные результаты в серологических реакциях. В Англии, Северной Ирландии и ФРГ радикальной мерой борьбы и профилактики синдрома снижения яйценоскости считается убой птицы, положительно реагирующей в серологических реакциях, с тем, чтобы предотвратить вертикальный путь передачи возбудителя через яйцо. Допускается применять инактивированную вакцину. культивирование яйценоскость вирус

Заключение

Данное вирусное заболевание широко распространено по всему миру, следственно несет большой экономический ущерб, который обусловлен гибелью птицы, снижением прироста массы тела, выбраковкой птиц. Переболевшие цыплята отстают в росте, плохо откармливаются. Значительно увеличивается процент выбраковки тушек и снижается качество мяса. Необходимо своевременно проводить вакцинацию с/х птиц, и своевременное лечения при появлении первых признаков

Для предотвращения возникновения эпизоотии по синдрома снижения яйценоскости необходимо использовать все доступные методы профилактики, в том числе и организационно-хозяйственного и социально-экономического характера. Защита птицеводческих предприятий должна осуществляться посредством использования программных мер безопасности.

Список использованной литературы

1. Бессарабов Б.Ф., Воронин Е.С. и др. Инфекционные болезни животных. -- М.: КолосС, 2007. -- 671 с.

2. Белоусова Р.В., Преображенская Э.А. Ветеринарная вирусология / Под ред. Проф. Р.В. Белоусовой - М.: «КолосС», 2007. - 424 с.

3. Борисевич Б.В. Клинические признаки и патологоанатомические изменения у кур за синдрома снижения яйценоскости / Б. В. Борисевич, Е. С. Шацило // Научный вестник Национального университета биоресурсов и природопользования. Серия: Ветеринарная медицина, качество и безопасность продукции животноводства. - 2013. - Вып. 188. - Ч. 4. - С. 16-20.

4. Борисов В.В. Инактивированная вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 / В. В. Борисов, Д. А. Лозовой, О. А. Борисова [и др.] // Аграрная Россия. - 2001. - №3. - С. 52-55.

5. Патоморфологические изменения в строме яичников кур при синдроме снижения яйценоскости /[Борисевич б. В., Лесная В. В., Шацило Е. С., Юшкова И. О] // Ветеринарная медицина. - 2015. - Вып. 101. - Ч. 1. - С. 152-154.

6. Васильева Е.Г. Алеутская болезнь и продуктивность норок // Биология и патология пушных зверей. Петрозаводск, 1974. С. 202-204.

7. Вирусология и биотехнология. Белоусова Р.В., Ярыгина Е.И., Третьякова И.В., Калмыкова М.С., Рогожин В.Н. Год: 2016. С.220.

8. Дукур И. И., Чижов В. А., Акулова В. П., Алеутская болезнь, в кн.: Болезни пушных зверей, под ред. С. Я. Любашенко, 2 изд., М., 1973, с. 83-94.

9. Дукур И.И. Результаты пассирования вируса плазмоцитоза на различных культурах клеток норок // Биология и патология пушных зверей. Петрозаводск, 1974. С. 200-202.

10. Дымина Г.П. Патологоанатомическая диагностика вирусных болезней животных. -- М.: Колос, 1984. С. 168.

11. Слугин В.С. Алеутская болезнь норок // Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / Под ред. А.А. Конопаткина. М.: Колос, 1984. С. 506-510.

12. Слугин В.С., Родюков А.И. Алеутская болезнь норок // Науч. осн. звероводства / Под ред. В.А. Берестова. Л.: Наука, 1985. С. 381-386.

Размещено на Allbest.ru

...