Аллергены и генетическая трансформация растений

Размещено на http://www.allbest.ru/

Аллергены и генетическая трансформация растений

Ю.В. Чесноков

Аннотация

Основное внимание уделено вопросам риска появления аллергенов в продуктах питания, полученных из генетически модифицированных растений. Рассматриваются потенциальные последствия создания генетически модифицированных растений. Обсуждается возможность использования методов генетической инженерии растений с целью уменьшения количества или полного удаления аллергенов или аллергенных эпитопов, присутствующих в пище.

ALLERGENS AND GENETIC TRANSFORMATION IN PLANTS

Yu.V. Chesnokov

S u m m a r y

Potential consequences are considered because of creation of modified plants - the appearance of new and the inhibition and/or the removing of existent food allergens. The author suggests alarm about appearance of allergenic properties in food products as result of introduction of new foreign genes to cultivated plant crops. The possibility of usage of plants genetic engineering techniques for reduction or absolute removing of allergens or allergenic epitops presented in food is discussed. The special attention was concentrated on the problems of the chances of allergens appearance in food products obtained from genetic modified plants.

Как известно, селекция растений основывается на выборке лучших растений (генотипов) в гетерогенной популяции, полученной посредством скрещивания двух отдаленных линий или представителей видов с различными признаками. Поэтому не секрет, что скрининг гермплазмы у культурных растений в генетических коллекциях и их диких сородичей становится важным элементом селекции. На сегодняшний день используют два подхода для увеличения генетической изменчивости растений. Один из них -- это мутагенез (химический и физический), который стали широко применять для этих целей с 60-х годов прошлого столетия. Несмотря на изначальный оптимизм, результаты в целом оказались разочаровывающими, так как большинство полученных мутаций были бесполезными или сопровождались вредоносным побочным эффектом. Кроме того, эти мутации, как правило, были рецессивными, что ограничивало их использование, и прежде всего для полиплоидных видов, таких, например, как пшеница. Более того, почти невозможно определить, сколько мутантных генов присутствует в растениях, подвергшихся мутагенному воздействию. Тем не менее некоторые сорта, полученные таким способом, были созданы и даже пущены в производство.

Другим подходом, призванным увеличить существующую изменчивость, конечно же, является генетическая трансформация растений. Так же, как и «мутационная» селекция, она явилась (и является) объектом интенсивных публичных дебатов, особенно в отношении возможного воздействия на окружающую среду и здоровье человека. В настоящей статье мы рассмотрим потенциальные последствия создания генетически модифицированных растений в отношении возможности появления новых и ингибирования и/или удаления существующих пищевых аллергенов.

Генетическая трансформация растений основывается на введении чужеродной последовательности ДНК в клетки в такой форме, которая позволяет ДНК встраиваться в геном хозяина, стабильно наследоваться и экспрессироваться специфичным образом. Вводимая последовательность обычно состоит из трех частей: кодирующая область (центральная часть), которая транскрибируется в белок; промоторная область (расположена перед кодирующим районом), которая контролирует механизм и уровень экспрессии гена, а также временн?ю ткане- и органоспецифичность; терминаторная область, контролирующая процессы остановки транскрипции. Преимущества этой системы генетической модификации растений перед классическими методами селекции очевидны. Во-первых, кодирующую область можно выделить практически из любого источника (генотипа), начиная от прокариотических микроорганизмов и заканчивая высшими растениями, животными и человеком. При этом не существует ограничительных барьеров по фертильности, затрудняющих проведение скрещиваний у растений. В кодирующей области можно индуцировать мутации с целью изменения биологической активности, питательной ценности, функциональных признаков или даже синтезировать гены, детерминирующие свойства, обозначенные как ab initio. Во-вторых, переносятся только единичные гены или ограниченное число генов, которые легко выявляются в трансгенном организме и их наследование можно проследить в последующих поколениях. При использовании методов традиционной и «мутационной» селекции практически невозможно идентифицировать или точно определить факт мутации или переноса гена(ов). В-третьих, методы генной инженерии позволяют точно контролировать уровень и характер трансгенной экспрессии, а также уменьшить или подавить экспрессию эндогенных генов. Последнее дает возможность контролировать степень аллергенности трансгенных растений.

Трансгенные растения и пищевые аллергены. Появление новых аллергенов. Многие трансгенные продукты, несомненно, будут потребляться людьми в их повседневной жизни независимо от того, были ли они созданы с целью повысить или изменить пищевые качества (вкус, запах, длительность хранения и др.) или улучшить агрономические признаки возделываемых растений (например, устойчивость к поеданию вредными насекомыми, повреждению патогенными грибами или вирусами). Вероятность того, что некоторые из трансгенных белков окажутся аллергенными, служит основой для беспокойства как потребителей, так и производителей сельскохозяйственной продукции. И это беспокойство небезосновательно. Многие белки, которые могут быть перенесены в другие растения методом трансгеноза, известны как аллергены, в том числе и обладающие антимикробиальным и фунгицидным действием, а потому представляющие интерес для решения биотехнологических задач. Поэтому биотехнологическая индустрия должна быть осторожна в выборе белков для широкого применения в пищевой промышленности. Рассмотрим некоторые примеры таких потенциально аллергенных белков.

Важнейшими запасными белками семян многих двудольных растений (включая бобовые, сложноцветные, крестоцветные и большинство орехов) являются 2S-альбумины, которые характеризуются высоким содержанием цистеина и метионина (1). Так, альбумины бразильского ореха, подсолнечника, хлопка и амаранта обогащены метионином, гороха и лебеды -- цистеином (2-6). Альбумины, имеющие высокое содержание метионина, могут служить источниками этой незаменимой аминокислоты при исправлении аминокислотного состава (сбалансированности) у растений бобовых культур. Однако известно, что, например, альбумин бразильского ореха является аллергеном (7). Показано, что у растений некоторых видов 2S-альбумины могут вызывать ингибирование трипсина (Brassica napus var. rapifera, B. nigra) или -химотрипсина (Sinapis arvensis) (8-10). Аллергенными свойствами обладают растения желтой и восточной горчицы, хлопка, лесного ореха, нута (2, 11-13).

В семенах и других органах растений присутствуют белки, переносящие липиды (БПЛ), размер которых исчисляется 90-93 аминокислотами (1). Противогрибковые БПЛ были выделены из тканей растений различных видов, включая семена редиса и лука (14-16). БПЛ так же, как и 2S-альбумины, представляют народнохозяйственный интерес, но при этом являются аллергенами.

Патогенные белки (ПБ) синтезируются в растениях в ответ на воздействие микробиальных патогенов или химических агентов (наиболее интенсивно в случае использования салициловой кислоты). ПБ изначально были идентифицированы в листьях табака, инокулированных вирусом табачной мозаики, а затем обнаружены в растениях многих других видов (17). ПБ -- это комплекс белков, обладающих различной биологической активностью, которые могут комбинироваться, благодаря чему обеспечивается широкий спектр устойчивости растений к патогенам. Некоторые растительные аллергены входят в состав белкового комплекса ПБ, например эндохитиназа каштана и авокадо, Bet v 1 (аллерген пыльцы березы) и схожие с ним аллергены яблони, черешни, сельдерея и моркови (18-21).

Основным профессиональным заболеванием у рабочих на мукомольных и хлебопекарных предприятиях является хлебопекарская астма, которая возникает при вдыхании частиц распыленной в воздухе пшеничной муки. При этом основными аллергенными компонентами служат низкомолекулярные ингибиторы -амилаз и/или трипсина, которые присутствуют в зернах пшеницы, ржи и ячменя (22-24). Ингибиторы этой группы действуют на -амилазы и протеиназы различного происхождения, включая пищеварительные -амилазы некоторых насекомых -- паразитов сельскохозяйственных растений (1). Генетически модифицированные растения табака, экспрессирующие ингибитор трипсина ячменя (BTI-CMC) или ингибитор -амилазы пшеницы (WMAI-1, Syn 0.28), вызывают смерть личинок и гусениц двух видов Lepidoptera, паразитирующих на листьях растений (1). Однако необходимо отметить, что WMAI-1 является аллергеном, вступающим в реакцию с иммуноглобулином Е (IgE) плазмы крови пациентов, больных хлебопекарской астмой (22). Было показано, что ингибитор -амилазы зерен пшеницы реагирует с IgE у детей, потребляющих диетическую пищу, в большей степени, чем при «респираторной» аллергии у тех же детей на пшеничную муку. Поэтому эти ингибиторы нельзя использовать в качестве трансгенов для сельскохозяйственных растений и тем более в качестве пищевых добавок.

Хотя вышеизложенные данные далеко не столь исчерпывающие как хотелось бы, следует подчеркнуть важность использования аллергенного потенциала для тех случаев, когда трансгенные белки (или гены) повышают устойчивость или качество возделываемых растений. Это особенно наглядно было продемонстрировано при обсуждении проблем, возникших вокруг 2S-альбумина бразильского ореха. При исследовании фракций 2S-альбумина из растений 12 видов 11 семейств оказалось, что белковая фракция бразильского ореха содержит более 17 молярных процентов метионина (11). В последующих работах было показано, что в этой фракции содержится как минимум шесть сходных белков, состоящих из большой и малой цепи -- соответственно около 9000 и 3000 субъединиц (2, 25, 26). При экспрессии этого белка в генетически модифицированных растениях арабидопсиса, табака, рапса и вики содержание метионина в семенах увеличилось соответственно на 20, 30, 33 и 300 % (2, 27-29). Однако от идеи коммерческого использования этого гена отказались после того, как было обнаружено, что альбумин бразильского ореха является сильным аллергеном для человека (14). Более того, оказалось, что фракции IgE у пациентов с аллергенной реакцией на бразильский орех взаимодействуют с белками, экстрагированными из генетически модифицированных образцов сои (30).

Несмотря на то, что опыты с белком бразильского ореха высветили возможные проблемы введения аллергенов в трансгенные растения, эти же эксперименты показали, что биотехнологическая индустрия растений хорошо вооружена против такой потенциальной угрозы и негативные последствия могут быть незамедлительно выявлены посредством проведения соответствующих тестов. Не удивительно, что в промышленности уже сейчас используют специальные системы контроля и выявления потенциальных аллергенов. Работы с аллергенным материалом останавливаются задолго до того, как он попадет в пищу, и даже до того, как трансгенные растения будут убраны с полей. Критерии по оценке аллергенного потенциала достаточно подробно обсуждаются в статье Gilissen с соавт. (31). Рутинное использование подобного рода критериев и систем должно обеспечить надежность оценки генетически модифицированных пищевых продуктов на наличие аллергенных свойств. Это касается как всех новых генетически модифицированных разновидностей возделываемых растений, так и тех растений, которые получены традиционными методами селекции.

Освобождение от аллергенов посредством блокировки экспрессии эндогенных генов. В дебатах о риске увеличения аллергенности в результате потребления генетически модифицированной пищи часто забывают, что генно-инженерные технологии могут быть использованы и для уменьшения количества или полного удаления аллергенных белков, содержащихся в растениях. На сегодня существует несколько основных методов «глушения» (от английского слова silencing) эндогенных генов. Мы остановимся лишь на двух, получивших наибольшее распространение. Оба эти метода требуют идентификации и клонирования гена, который сначала необходимо «заглушить», а затем интегрировать либо целиком, либо по частям в требуемом объекте. При первом методическом подходе создается химерный ген, интересующий участок которого встраивается после промотора в обратной ориентации. Промотором может служить промотор этого же гена, но обычно используют более сильные промоторы. После того как такой химерный ген встраивают в геном растения, он начинает экспрессировать РНК с последовательностью, обратной и комплементарной таковой эндогенного гена растения-реципиента. Эта так называемая антисмысловая РНК взаимодействует со смысловой, то есть нормальной, РНК интересующего нас гена, не позволяя последней включаться в процесс трансляции белка (32). При использовании сильного промотора появляется уверенность в том, что антисмысловая РНК будет присутствовать в клетках растения-реципиента в значительно больших количествах, нежели смысловая РНК, и тем самым будет обеспечено полное подавление синтеза белка на смысловой РНК.

Второй метод был назван «ко-супрессия» и заключается в том, что одну или несколько дополнительных копий полного (или его части) смыслового гена дополнительно вводят в растение-реципиент, что в большинстве случаев приводит к интенсификации синтеза белка (33). В некоторых вариантах по неизвестным причинам происходит «глушение» процесса трансляции, и ни «хозяйский», ни вновь введенные гены не экспрессируются. Это может происходить либо за счет блокировки транскрипции мРНК с геномной ДНК, либо на посттранскрипционном уровне, если мРНК подверглась деградации до того момента, как начал транслироваться кодируемый белок. Однако как первый (антисмысловая РНК), так и второй («ко-супрессия») метод требуют получения генетически модифицированных растений, у которых интегрированные гены будут стабильно наследоваться.

Оба эти подхода были использованы для увеличения времени лежкости фруктов. В 1994 году впервые на рынок поступили трансгенные томаты, полученные Grierson с соавт. в сотрудничестве с фирмой «Zeneca» (34), и томат сорта Flavr Savr, полученный фирмой «Calgene», которые содержали антисмысловой ген полигалактуроназы, что предотвращало на поздних стадиях созревания усыхание и порчу плодов, позволяя последним длительное время оставаться на кисти; при этом возрастала интенсивность окраски и улучшались вкусовые качества. К сожалению, в качестве растения-реципиента использовали разновидность томата с изначально низкими вкусовыми качествами, а это означает, что сорт Flavr Savr никогда не станет популярным и не будет пользоваться спросом.

Фирма «Zeneca» использовала «ко-супрессию» для того, чтобы «заглушить» у растений томата тот же ген полигалактуроназы, что оказалось весьма успешным. В томатах, созданных фирмой «Zeneca», содержалось гораздо больше сухого вещества, чем в плодах, полученных обычной селекцией, что значительно снижало затраты при производстве томатной пасты. Кроме того, паста, полученная из трансгенных томатов, была более высокого качества, а производство стало практически безотходным. Этот продукт поступил на рынок во многих странах мира и получил особую популярность в Великобритании в период с 1996 по 1999 год, то есть до того времени, когда в ответ на враждебные действия, направленные на производителей продуктов питания из генетически модифицированных растений, прекратилось производство этой томатной пасты.

Возможность «заглушать» экспрессию отдельных генов, используя для этого антисмысловую РНК или технику «ко-супрессии», привела к мысли о том, что методы генетической инженерии можно использовать для освобождения растений («заглушения») от аллергенов и различного рода токсинов, причем оба подхода позволяют добиться практически полной инактивации этих соединений. Однако, насколько нам известно, в этом направлении была предпринята лишь одна попытка в отношении одного аллергена, содержащегося в зернах риса.

Пищевой аллерген из зерен риса с молекулярной массой 14-16 кД ингибирует -амилазу человеческой слюны (35). При сравнении первичных последовательностей было выявлено явное сходство пищевого аллергена из зерен риса с -амилазными/трипсиновыми ингибиторами злаков (36). Было обнаружено более 10 различных, но гомологичных кДНК-клонов, что свидетельствует о существовании мультигенного семейства ингибиторов подобного рода (36-38). Тем не менее Tada с соавт. показали, что использование всего лишь одной антисмысловой РНК приводит к существенному снижению общего содержания аллергена в зернах трансгенного риса с 300 до 60-70 мг (39). Этот эффект обусловлен уменьшением размера смысловых транскриптов до 20 % от исходного уровня у образцов дикого типа, что сохранялось, как минимум, в трех последующих поколениях. Аналогичный подход был использован для «заглушения» экспрессии аллергена пыльцы райграса (Lolium perenne) -- белка Lol p 5 (40).

Опыт использования этих методов в ряде других работ свидетельствует о возможности уменьшения содержания или полного удаления аллергенов из растительных продуктов питания. Однако реализация этих методов лимитирована рядом факторов. Во-первых, неполное подавление экспрессии аллергенного гена может происходить чаще (например у растений риса), чем полное, так как в геноме, как правило, присутствует целое мультигенное семейство последовательностей генов с различной степенью идентичности к последовательности, которая используется в качестве «глушителя». Во-вторых, до сих пор не достигнута длительная стабильность подавления генной экспрессии, а любой возврат к исходной форме может привести к серьезным клиническим заболеваниям. Риск неполного подавления генной экспрессии или осознание того, что экспрессия аллергенного гена может возобновиться и любой человек с выраженной реакцией на пищевые аллергены подвергнется воздействию аллергенных белков из генетически модифицированных пищевых продуктов, дает повод задуматься о гарантии полной и длительной стабильности трансгенов в растениях-реципиентах. В то же время, справедливости ради, необходимо отметить, что вероятность возврата к исходной форме у трансгенных растительных форм невелика, что, безусловно, существенно снижает риск возвратной аллергенности генетически модифицированных продуктов питания. В-третьих, многие пищевые аллергены не имеют уникальных, присущих только им генных последовательностей и, как правило, принадлежат к мультигенным семействам. Так, иммунологический анализ антител IgE у пациентов, страдающих атипичной аллергией на белок сои, выявил как минимум 16 аллергенных белков, молекулярная масса которых варьировала от 14 до 17 кД (41). В последующем было показано, что в эту группу могут быть включены тиоловая протеиназа (30 кД), ингибитор трипсина Куница, а также -субъединица -конглицинина (42-44). Эти аллергеные белки не гомологичны друг другу, хотя и находятся в растениях одного вида, поэтому для их подавления необходимо создавать мультигенные трансгенные формы. Четвертое ограничение возникает тогда, когда аллергены или близкородственные им белки ответственны за функциональные и/или хозяйственно ценные свойства растений, например глютелины пшеницы -- за проявление респираторной и пищевой аллергии (27, 45, 46). Более того, IgE-связующий эпитоп, идентифицированный Tanabe с соавт. как основной аллергенный фактор, образует часть повторяющейся глутамин- и пролин-богатой последовательности (Gln-Gln-Gln-Pro-Pro), характерной и для других белков, которые определяют основные потребительские и производственные качества макаронных и хлебобулочных изделий (47). Полное или частичное удаление этих свойств за счет подавления экспрессии соответствующих генов приведет к резкому снижению качества выпускаемых мучных изделий. Схожая ситуация может возникнуть и с растениями сои, если содержание 7S-глобулинов (-конглицинин) в семенах снизится в 2 раза от общего количества запасных белков (останутся лишь 11S-легумины), что, несомненно, приведет к изменению функциональных свойств генов и ухудшению потребительских качеств производимых из сои продуктов (1, 48).

Удаление аллергенных эпитопов. Альтернативой удаления целых аллергенных белков может служить удаление (или заглушение) коротких фрагментов (эпитопов) аллергенов, которые собственно и ответственны за аллергенность. Последовательности основных аллергенов арахиса (Ara h 1 и Ara h 2) были идентифицированы посредством взаимодействия с короткими синтетическими олигопептидами (49, 50). Этот метод позволяет выявлять эпитопы лишь в первичной аминокислотной последовательности. Для идентификации конформационных эпитопов вторичной, третичной и четвертичной структур требуется белковая инженерия и экспрессия мутантных белков в гетерологичной системе. Основываясь на полученной таким образом информации, можно создать гомолог -- неаллергенный белок, имеющий аналогичную пространственную структуру, стабильность, биологические и функциональные свойства. Этот подход был с успехом использован для удаления конформационных эпитопов основных аллергенов яблони и вишни (51, 52). Следующим шагом будет замена эндогенных генов, детерминирующих синтез аллергенных белков, на гены, кодирующие неаллергенные белки. К сожалению, до сих пор не разработан метод направленной замены генов посредством генетической трансформации у растений, хотя методология получения направленных генных мутаций, используя для этого гибридные молекулы (химеры) ДНК и РНК, уже существует (53, 54). Эту систему, названную химеропластия, можно будет использовать для выключения генной экспрессии посредством мутации регуляторных последовательностей или замены отдельных аминокислот в активных центрах ферментов или аллергенных эпитопах. Несмотря на то, что этот подход до сих пор до конца не разработан, в будущем он может сыграть важную роль в генетической инженерии растений.

аллерген генетический модифицированный растение

Заключение

В 1999 году по всему миру примерно на 70 млн га выращивали генетически модифицированные растения, что уже привело к существенному уменьшению использования химических инсектицидов и пестицидов, принятию более экологически адаптированных технологий (например, обработка земли без внесения химических удобрений), позволило повысить урожайность различных культур, питательную ценность продуктов, а также лежкость плодов при хранении (55, 56). Нет сомнений, что основное внимание в дальнейшем будет уделяться качеству продуктов, при этом особое значение приобретают компоненты, необходимые для нормальной жизнедеятельности и здоровья человека (например, полиненасыщенные длинноцепочечные жирные кислоты, витамины, сбалансированные по аминокислотному составу белки). Современная индустрия (сельскохозяйственная и пищевая промышленности) хорошо осведомлена о возможности появления новых аллергенов и имеет специально разработанные тестовые системы для их выявления, включая меры по предупреждению образования новых соединений, обладающих аллергенными свойствами. Кроме того, существует возможность использовать методы генетической инженерии для уменьшения количества аллергенов или аллергенных эпитопов, присутствующих в пище, и, возможно, в отдельных случаях полного очищения продуктов питания от аллергенов. Это, безусловно, снижает риск появления новых пищевых аллергенов и как следствие предупреждает появление новых аллергенных заболеваний.

Литература

1. S h e w r y P.R., C a s e y R. Seed Protein. Kluwer Academic Publichers. Netherlands, 1999.

2. A l t e n b a c h S.B., K u o C.C., S t a r a c i L.C. e.a. Accumulation of a Brazil nut albumin in seeds of transgenic canola results in enhanced levels of seed protein methionine. Plant Mol. Biol., 1992, 18(2): 235-245.

3. K o r t t A.A., C a l d w e l l J.B., L i l l e y G.G. e.a. Amino acid and cDNA sequences of a methionine-rich 2S protein from sunflower seed (Helianthus annuus L.). Eur. J. Biochem., 1991, 195(2): 329-334.

4. G a l a u G.A., W a n g H.Y., H u g h e s D.W. Cotton Lea5 and Lea14 encode atypical late embryogenesis-abundant proteins. Plant Physiol., 1993, 101(2): 695-696.

5. D a m o d a r a n S. Food proteins and lipids. N.Y., 1997.

6. H i g g i n s T.J., C h a n d l e r P.M., R a n d a l l P.J. e.a. Gene structure, protein structure, and regulation of the synthesis of a sulfur-rich protein in pea seeds. J. Biol. Chem., 1986, 261(24): 11124-11130.

7. A s e r o R., M i s t r e l l o G., R o n c a r o l o D. e.a. Allergy to minor allergens of Brazil nut. Allergy, 2002a, 57(11): 1080-1081.

8. F o c k e M., H e m m e r W., H a y e k B. e.a. Identification of allergens in oilseed rape (Brassica napus) pollen. Arch Allergy Immunol., 1998, 117(2): 105-112.

9. G o n z a l e z d e l a P e n a M.A., V i l l a l b a M., G a r c i a - L o p e z J.L. e.a. Cloning and expression of the major allergen from yellow mustard seeds. Sin a I. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1993, 190(2): 648-653.

10. A s e r o R., M i s t r e l l o G., R o n c a r o l o D. e.a. Allergenic similarities of 2S albumins. Allergy, 2002, 57(1): 62-63.

11. Y o u l e R.J., H u a n g A.H.C. Albumin storage protein and allergens in cottonseeds. J. Agric. Food Chem., 1979, 27(3): 500-503.

12. T e u b e r S.S., J a r v i s K.C., D a n d e k a r A.M. e.a. Identification and cloning of a complementary DNA encoding a vicilin-like proprotein, jug r 2, from english walnut kernel (Juglans regia), a major food allergen. J. Allergy Clin. Immunol., 1999, 104(6): 1311-1320.

13. V i o q u e J., S a n c h e z - V i o q u e R., C l e m e n t e A. e.a. Purification and partial characterization of chickpea 2S albumin. J. Agric. Food Chem., 1999, 47(4): 1405-1409.

14. P a s t o r e l l o E.A., O r t o l a n i C., F a r i o l i L. e.a. Allergenic cross-reactivity among peach, apricot, plum, and cherry in patients with oral allergy syndrome: an in vivo and in vitro study. J. Allergy Clin. Immunol., 1994, 94(4): 699-707.

15. P a s t o r e l l o E.A., F a r i o l i L., P r a v e t t o n i V. e.a. Sensitization to the major allergen of Brazil nut is correlated with the clinical expression of allergy. J. Allergy Clin. Immunol., 1998, 102(6 Pt1): 1021-1027.

16. S a n c h e z - M o n g e R., L o m b a r d e r o M., G a r c i a - S e l l e s F.J. e.a. Lipid-transfer proteins are relevant allergens in fruit allergy. J. Allergy Clin. Immunol., 1999, 103 (3 Pt1): 514-519.

17. V a n L o o n L.C. Disease induction by plant viruses. Adv. Virus Res., 1987, 33: 205-255.

18. D i a z - P e r a l e s A., C o l l a d a C., B l a n c o C. e.a. Class I chitinases with hevein-like domain, but not class II enzymes, are relevant chestnut and avocado allergens. J. Allergy Clin. Immunol., 1998, 102(1): 127-133.

19. S o w k a S., H s i e h L.S., K r e b i t z M. e.a. Identification and cloning of prs a 1, a 32-kDa endochitinase and major allergen of avocado, and its expression in the yeast Pichia pastoris. J. Biol. Chem., 1998, 273(43): 28091-28097.

20. J a n k i e w i c z A., A u l e p p H., B a l t e s W. e.a. Allergic sensitization to native and heated celery root in pollen-sensitive patients investigated by skin test and IgE binding. Arch. Allergy Immunol., 1996, 111(3): 268-278.

21. B r e i t e n e d e r H., H o f f m a n n - S o m m e r g r u b e r K., O 'R i o r d a i n G. e.a. Molecular characterization of Api g 1, the major allergen of celery (Apium graveolens), and its immunological and structural relationships to a group of 17-kDa tree pollen allergens. Eur. J. Biochem., 1995, 233(2): 484-489.

22. G o m e z L., M a r t i n E., H e r n a n d e z D. e.a. Members of the alpha-amylase inhibitors family from wheat endosperm are major allergens associated with baker's asthma. FEBS Lett., 1990, 261(1): 85-88.

23. S a n c h e z - M o n g e R., G a r c i a - C a s a d o G., L o p e z - O t i n C. e.a. Wheat flour peroxidase is a prominent allergen associated with baker's asthma. Clin. Exp. Allergy, 1997, 27(10): 1130-1137.

24. G a r c i a - C a s a d o G., A r m e n t i a A., S a n c h e z - M o n g e R. e.a. A major baker's asthma allergen from rye flour is considerably more active than its barley counterpart. FEBS Lett., 1995, 364(1): 36-40.

25. S u n S.S., A l t e n b a c h S.B., L e u n g F.W. Properties, biosynthesis and processing of a sulfur-rich protein in Brazil nut (Bertholletia excelsa H.B.K.). Eur. J. Biochem., 1987, 162(3): 477-483.

26. A m p e C., V a n D a m m e J., de C a s t r o L.A. e.a. The amino-acid sequence of the 2S sulphur-rich proteins from seeds of Brazil nut (Bertholletia excelsa H.B.K.). Eur. J. Biochem., 1986, 159(3): 597-604.

27. S a n d i f o r d C.P., T a t h a m A.S., F i d o R. e.a. Identification of the major water/salt insoluble wheat proteins involved in cereal hypersensitivity. Clin. Exp. Allergy, 1997, 27(10): 1120-1129.

28. A l t e n b a c h S.B., P e a r s o n K.W., M e e k e r G. e.a. Enhancement of the methionine content of seed proteins by the expression of a chimeric gene encoding a methionine-rich protein in transgenic plants. Plant Mol. Biol., 1989, 13(5): 513-522.

29. S a a l b a c h I., P i c k a r d t T., M a c h e m e h l F. e.a. A chimeric gene encoding the methionine-rich 2S albumin of the Brazil nut (Bertholletia excelsa H.B.K.) is stably expressed and inherited in transgenic grain legumes. Mol. Gen. Genet., 1994, 242(2): 226-236.

30. N o r d l e e J.A., T a y l o r S.L., T o w n s e n d J.A. e.a. Identification of a Brazil-nut allergen in transgenic soybeans. N Engl. J. Med., 1996, 334(11): 688-692.

31. G i l i s s e n L.J.W., N a p J.P. Assessment of Allergenic Potential of Food from Genetically Modified Plants. CPRO-DLO, Netherlands, 1995.

32. Z h a n g Y., C u i J., L i u X. e.a. MR imaging in rat glioma model and gene therapy using EGFR antisence RNA. Chin. Med. J. (Engl.), 1998, 111(11): 993-997.

33. H a m i l t o n A.J., F r a y R.G., G r i e r s o n D. Sense and antisense inactivation of fruit ripening genes in tomato. Curr. Top. Microbiol. Immunol., 1995, 197: 77-89.

34. G r i e r s o n D., L y c e t t G.W., T u c k e r G.A. Mechanisms and application of gene silencing. Nottingham, 1996.

35. N a k a s e M., A l v a r e z A.M., A d a c h i T. e.a. Immunochemical and biochemical identification of the rice seed protein encoded by cDNA clone A3-12. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1996, 60(6): 1031-1032.

36. A l v a r e z A.M., A d a c h i T., N a k a s e M. e.a. Classification of rice allergenic protein cDNAs belonging to the alpha-amylase/trypsin inhibitor gene family. Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1251(2): 201-204.

37. I z u m i H., A d a c h i T., F u j i i N. e.a. Nucleotide sequence of a cDNA clone encoding a major allergenic protein in rice seeds. Homology of the deduced amino acid sequence with members of alpha-amylase/trypsin inhibitor family. FEBS Lett., 1992, 302(3): 213-216.

38. N a k a m u r a R., M a t s u d a T. Rice allergenic protein and molecular-genetic approach for hypoallergenic rice. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1996, 60(8): 1215-1221.

39. T a d a Y., N a k a s e M., A d a c h i T. e.a. Reduction of 14-16 kDa allergenic proteins in transgenic rice plants by antisense gene. FEBS Lett., 1996, 391(3): 341-345.

40. B h a l l a P.L., S w o b o d a I., S i n g h M.B. Reduction in allergenicity of grass pollen by genetic engineering. Arch. Allergy Immunol., 2001, 124(1-3): 51-54.

· g a w a T., B a n d o N., T s u j i H. e.a. Investigation of the IgE-binding proteins in soybeans by immunoblotting with the sera of the soybean-sensitive patients with atopic dermatitis. J. Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo), 1991, 37(6): 555-565.

· g a w a T., T s u j i H., B a n d o N. e.a. Identification of the soybean allergenic protein, Gly m Bd 30K, with the soybean seed 34-kDa oil-body-associated protein. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1993, 57(6): 1030-1033.

41. B a n d o N., T s u j i H., Y a m a n i s h i R. e.a. Identification of the glycosylation site of a major soybean allergen, Gly m Bd 30K. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1996, 60(2): 347-348.

· g a w a T., B a n d o N., T s u j i H. e.a. Alpha-subunit of beta-conglycinin, an allergenic protein recognized by IgE antibodies of soybean-sensitive patients with atopic dermatitis. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1995, 59(5): 831-833.

42. M a r u y a m a N., I c h i s e K., K a t s u b e T. e.a. Identification of major wheat allergens by means of the Escherichia coli expression system. Eur. J. Biochem., 1998, 255(3): 739-745.

43. V a r j o n e n E., V a i n i o E., K a l i m o K. Life-threatening, recurrent anaphylaxis caused by allergy to gliadin and exercise. Clin. Exp. Allergy, 1997, 27(2): 162-166.

44. T a n a b e S., A r a i S., Y a n a g i h a r a Y. e.a. A major wheat allergen has a Gln-Gln-Gln-Pro-Pro motif identified as an IgE-binding epitope. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996, 219(2): 290-293.

45. K i n s e l l a J.E. Leaf proteins for foods. J. Am. Oil. Chem. Soc., 1979, 56(3): 471.

46. S t a n l e y J.S., K i n g N., B u r k s A.W. e.a. Identification and mutational analysis of the immunodominant IgE binding epitopes of the major peanut allergen Ara h 2. Arch. Biochem. Biophys., 1997, 342(2): 244-253.

47. S h i n D.S., C o m p a d r e C.M., M a l e k i S.J. e.a. Biochemical and structural analysis of the IgE binding sites on ara h 1, an abundant and highly allergenic peanut protein. J. Biol. Chem., 1998, 273(22): 13753-13759.

48. S o n D.Y., S c h e u r e r S., H o f f m a n n A. e.a. Pollen-related food allergy: cloning and immunological analysis of isoforms and mutants of Mal d 1, the major apple allergen, and Bet v 1, the major birch pollen allergen. Eur. J. Nutr., 1999, 38(4): 201-215.

49. S c h e u r e r S., S o n D.Y., B o e h m M. e.a. Cross-reactivity and epitope analysis of Pru a 1, the major cherry allergen. Mol. Immunol., 1999, 36(3): 155-167.

50. Z h u T., M e t t e n b u r g K., P e t e r s o n D.J. e.a. Engineering herbicide-resistant maize using chimeric RNA/DNA oligonucleotides. Nat. Biotechnol., 2000, 18(5): 555-558.

51. B e e t h a m P.R., K i p p P.B., S a w y c k y X.L. e.a. A tool for functional plant genomics: chimeric RNA/DNA oligonucleotides cause in vivo gene-specific mutations. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, 96(15): 8774-8778.

52. H a l f o r d N.G., S h e w r y P.R. Genetically modified crops: methodology, benefits, regulation and public concerns. Br. Med. Bull., 2000, 56(1): 62-73.

53. C o c k b u r n A. Assuring the safety of genetically modified (GM) foods: the importance of an holistic, integrative approach. J. Biotechnol., 2002, 98(1): 79-106.

Размещено на Allbest.ru