Влияние препаратов метапрот и трекрезан на показатели иммунитета при бурсите коров

Размещено на http://www.allbest.ru/

Институт экспериментальной медицины (Санкт-Петербург)

Влияние препаратов метапрот и трекрезан на показатели иммунитета при бурсите коров

Надеин К.А.

Аннотация

Цель исследования - лечение коров, больных бурситом тарсального сустава иммуномодуляторами метапрот и трекрезан, относящимися к препаратам метаболического типа действия. У больных бурситом коров под действием препаратов метапрот и трекрезан выявлено математически достоверное снижение количества и функциональной активности Т-, В-лимфоцитов, связанной с продукцией интерлейкинов, иммуноглобулинов, снижение концентрации ЦИК, активности лизоцима и комплемента, ЛКТ, КАСК, ЛАСК, усиление супрессорной активности Т-лимфоцитов, существенно сниженной при развитии бурсита.

Ключевые слова: БУРСИТ, ИММУНИТЕТ, ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ, ИММУНОКОРРЕКЦИЯ, МЕТАПРОТ, СОЕДИНИТЕЛЬНАЯ ТКАНЬ, ТРЕКРЕЗАН

Введение

Соединительная ткань составляет около 50% всей массы тела животных и находится в составе всех органных структур тела животных и человека. Ее роль в жизни организма чрезвычайно велика, а функции разнообразны: обмен веществ, образование клеток крови, реакция на инфекцию, всасывание высокомолекулярных веществ происходят при активном участии данного вида ткани организма [8]. Образуя вместе с кровью и лимфой внутреннюю среду организма, соединительная ткань обеспечивает жизненно важные функции: обмен веществ и поддержание гомеостаза, пластические и защитные реакции организма [11]. Именно поэтому изучение соединительной ткани в нормальном организме является фундаментом, на котором строятся научные подходы к познанию механизмов многих патологических процессов, в основе которых лежат нарушения структуры и функции клеток и межклеточного вещества соединительной ткани: воспаления, коллагенозы, иммунологические нарушения [11].

Уникальность строения и функции соединительной ткани создает условия для возникновения огромного числа ее аномалий и заболеваний. Структурные и функциональные изменения соединительной ткани способны привести к стойким нарушениям в жизненно важных органах, что в клинической практике воплощается полиорганными заболеваниями у животных и человека [17]. Они выражаются в нарушениях системы кровообращения, в том числе микроциркуляции тканей и органов [9].

Одновременно патология соединительной ткани может проявляться в виде поражения суставов животных и человека. Наиболее ярко выражена данная патология в области дистального отдела конечностей крупного рогатого скота [2]. В связи с тем, что развитие диффузной болезни соединительной ткани (ДБСТ) связано с различными иммунодефицитами, а применение традиционных схем профилактики таких болезней не всегда успешно, иммунокоррекция приобретает все большее значение в комплексной профилактике и терапии большинства патологических процессов. В формировании, течении и исходах ДБСТ важную роль играют совокупность факторов неспецифической резистентности организма, а также состояние метаболического и иммунного статуса [5].

Исходя из того, что в патогенезе бурсита важную роль играют нарушения в иммунной системе, не вызывает сомнения, что коррекция этих нарушений с помощью иммунотропных препаратов может оказаться новым, эффективным методом лечения аутоиммунных заболеваний у крупного рогатого скота.

В настоящее время в клинической практике накоплен достаточно большой арсенал иммуномодулирующих средств, применяемых при различных видах патологии. Однако применение их достаточно проблематично, так как провести четкую границу между иммуномодуляторами и иммуностимуляторами часто бывает затруднительно [14]. Так, некоторые препараты оптимально назначать на остроте инфекционного заболевания (препараты иммуноглобулинов, интерферонов), некоторые могут быть назначены только в стадии ремиссии заболевания [16].

С учетом изложенного, актуальным остается поиск эффективных и безопасных средств, усиливающих иммунную защиту, устойчивость к стрессам и стимулирующих обменные процессы в организме. С этой точки зрения, в качестве перспективных иммуномодуляторов может рассматриваться группа веществ, неспецифически улучшающих энергетические и пластические процессы в разных тканях организма, включая и органы иммунной системы. По действию они отличаются от пептидных факторов тимуса (т-активин, тимоген, тималин) и природных иммуностимуляторов (липополисахарид, рибомунил, вакцина БЦЖ) широким спектром фармакологической активности [13], одним из направлений действия которых является оптимизация нервных (нейромедиаторных), гормональных и иммунных взаимодействий. К ярким представителям данного направления можно отнести новые иммуномодуляторы метапрот и трекрезан [1, 4].

Трекрезан - оригинальный препарат, разработка Иркутского института органической химии РАН (акад. Воронков М.Г.), его испытания проходили в Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова МО РФ и Институте гриппа РАМН. Препарат малотоксичен (ЛД50 для крыс > 3700 мг/кг при внутрибрюшинном и > 6500 мг/кг при пероральном введении препарата), оказывает стресспротекторное действие на моделях иммобилизационного и болевого гиподинамического стресса, обладает способностью ускорять репарацию поврежденных тканей (печень, миокард, мышцы), защищает внутренние органы от повреждающего действия токсинов, СВЧ-облучения, инфекционного фактора [3]. Препарат обладает выраженной антиоксидантной активностью, иммуностимулирующими и адаптогенными свойствами. Указанные свойства трекрезана с преимущественным действием на клетки фагоцитарной системы в известной степени определили тактику их применения для лечения воспалительных процессов соединительной ткани [6, 10].

Метапрот (2-тиобензимидазола гидробромид, син.: бемитил, бемактор) обладает иммуностимулирующими свойствами, усиливая образование антител, Т-зависимые иммунные ответы, неспецифическую резистентность организма, преимущественно, функции макрофагов [7]. Препарат активирует пластический и энергетический обмен в организме, включая иммунную систему. Механизм действия метапрота связывают с активацией синтеза РНК, ферментных и структурных белков в клетке [12]. Кроме того, метапрот обладает мягким психостимулирующим действием, повышает работоспособность, восстанавливает после истощающих нагрузок, инфекций, интоксикаций, гипоксических состояний. Метапрот в качестве актопротектора назначают при астенических состояниях, неврозах, после перенесенных травм и в других состояниях, при которых показана стимуляция психических и физических функций, а в качестве иммуностимулирующего средства - в комплексной терапии некоторых инфекционных заболеваний (рецедидивирующая рожа, пиодермия и другие).

Таким образом, трекрезан и метапрот имеют свою клиническую нишу применения в практической медицине, однако в практике ветеринарии они не использовались. Приведенные экспериментальные и клинические данные показывают, что трекрезан и метапрот обладает выраженной иммунотропной активностью. Они стимулируют все звенья иммунитета (Т-, В-лимфоциты, макрофаги). Важной особенностью трекрезана является наличие интерфероногенной активности, связанной с увеличением продукции г-интерферона [3]. Кроме того, стресспротективные и антиастенические свойства трекрезана, наряду с его способностью уменьшать токсическое действие многих ксенобиотиков (включая лекарственные средства), позволяют позиционировать трекрезан как современный эффективный иммуномодулятор с широкими адаптогенными свойствами [15]. Метапрот также чрезвычайно важен в качестве актопротектора для восстановления физических функций организма [12].

Цель исследования - лечение коров, больных бурситом тарсального сустава иммуномодуляторами метапрот и трекрезан, относящимися к препаратам метаболического типа действия.

Методика исследований

Материалом для исследований служила кровь и сыворотка крови коров. Кровь в объеме 10 мл для гематологического исследования брали из яремной вены и помещали в пробирки с гепарином

Плазму крови получали путем центрифугирования крови, помещенной в пробирки с гепарином.

Сыворотку крови получали путем центрифугирования крови в негепаринизированных пробирках.

Всего были обследованы 134 коровы чёрно-пёстрой породы в возрасте 4-6 лет с периодом после отёла 3-4 месяца. Они находились в равноценных условиях кормления и содержания, согласно установленным нормам (ВИЖ, 2000). Контрольная группа - коровы, больные бурситом тарсального сустава, лечение которых не проводилось (n = 33).

Лечение больных коров с патологией соединительной ткани проводили салицилатом натрия (n = 33), метапротом (n = 29), трекрезаном (n = 31).

При лечении больных бурситом тарсального сустава коров исследуемые препараты назначали внутрь с кормом 6 дней в месяц (1-3-7-10-14-21 дни лечения) в дозе 10 мг/кг. Позитивную группу контроля составляли коровы, больные бурситом тарсального сустава, которых лечили наложением ихтиолового компресса на поражённый сустав (меняли 1 раз в два дня) и применением внутрь салицилата натрия 40 г на один приём 2 раза в сутки 10 дней подряд (стандарт лекарственного лечения данного заболевания), n=41.

Лизоцимную активность сыворотки крови (ЛАСК) определяли по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), комплементарную (КАСК) - по Г.Ф. Вагнеру (1963), фагоцитарный показатель - прямым морфологическим методом, комплементарную активность сыворотки крови (КАСК) - по Г.Ф. Вагнеру (1963).

Исследование внутриклеточного кислородозависимого метаболизма фагоцитов проводили, используя НСТ-тест. Метод основан на учете интенсивности восстановления клетками нитросинего тетразолия (НСТ) в его нерастворимую форму - диформазан (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Параллельно с помощью НСТ-теста оценивали способность нейтрофилов крови отвечать повышением метаболической активности на стимуляцию частицами латекса - индуцированный НСТ-тест (Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993).

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) определяли методом нефелометрии ПЭГ-осадка (Йегер Л., 1990).

Концентрацию лизоцима в сыворотке крови исследовали с использованием ацетонового порошка Micrococcus Lysodeicticus относительно стандартного кристаллического лизоцима в концентрации от 0,5 до 100 мкг/мл.

Для определения функциональной активности Т-системы лимфоцитов применяли: подсчет циркулирующих Т-лимфоцитов, реакцию бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) - спонтанной и стимулированной, реакцию торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии митогена конканавалина А (Кон А).

Обработку полученных данных проводили с помощью пакета программ SPSS Sigma Stat 3.0 и Minitab 14. В качестве статистических критериев использовали традиционные показатели описательной статистики. Для сравнения контрольной и экспериментальных групп использовали однофакторный дисперсионный анализ ANOVA, а также критерии попарных сравнений групп Стьюдента-Ньюмена-Кейлса и Данна. Из непараметрических критериев использовали критерий Краскела-Уоллиса для сравнения групп. Для оценки соответствия распределений случайных величин гауссовым применяли критерий нормальности Колмогорова-Смирнова (Боровиков В., 2001; Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2000).

Результаты и их обсуждение

метапрот иммунитет бурсит корова

Исследования крови проводили через 30 дней после начала лечения. Результаты показателей врождённого и приобретённого иммунитета приведены в таблице 1.

Таблица 1. Показатели иммунитета в крови при лечении коров, больных бурситом

Примечание. * р<0,001 по отношению к контрольным животным

Как видно из таблицы 1, изменения показателей врождённого и приобретённого иммунитета наиболее выражены при применении препарата трекрезан. У больных животных наблюдается запуск классического механизма усиления функциональной активности фагоцитирующих клеток, КАСК и ЛАСК, увеличения количества ЦИК на фоне снижения реакций торможения миграции лейкоцитов, подтверждающий неадекватность иммунного ответа при аутоиммунном заболевании [11].

Под влиянием метапрота и трекрезана происходило увеличение фагоцитарного показателя с 57,4±1,13 % до 83,9±2,05 % и 86,0±1,92 %, что соответствовало их значениям в норме. Отмечается снижение НСТ-теста (спонтанного) с 0,56±0,01у.е. до 0,36±0,01у.е. и 0,28±0,02 у.е.; НСТ-теста (стимулированного) - с 0,91±0,005 у.е. до 0,80±0,009 у.е. и 0,75±0,007 у.е., РБТЛ, соответственно, - с 19,1±3,1 % до 11,4±2,9 % и 9,8±1,6 % (спонтанный); с 46,2±3,06% до 25,7±2,1% и 23,5±1,89% (стимулированный), подтверждая, таким образом, снижение количества, возможно, патогенных Т-, В-клеток, потенцирующих развитие воспаления, снижение неспецифических факторов иммунного ответа активности лизоцима с 43,6±1,3 до 25,3±1,1 и 22,5±0,9 мкг/мл.

Иммунный статус относится к важным факторам, определяющим исход воспалительного процесса в соединительной ткани, наряду с длительностью персистенции бактериальной, вирусной или микоплазменной инфекции. Выявление функционального состояния Т- и В-лимфоцитов и фагоцитирующих клеток при воспалении дает возможность прогнозировать течение заболевания, оценивать активность и направленность воспалительного процесса, полноту выздоровления [9].

Известно, что в развитии воспаления соединительной ткани особая роль принадлежит системе фагоцитирующих клеток, дисфункция которых выражается в угнетении поглотительной и бактерицидной способностей нейтрофилов крови [4]. Степень снижения показателей фагоцитоза находится в прямой корреляции со степенью тяжести иммунного воспаления. Чем тяжелее протекает процесс, тем выраженнее угнетение фагоцитоза.

Возникающие в ходе иммунных нарушений комплексы антиген-антител (ЦИК), концентрация которых существенно повышена при бурсите, образуются при взаимодействии растворимых антигенов и антител в крови, повышенное содержание которых указывает на вероятность их накопления в тканях и развития воспалительного процесса в местах их отложения [18].

При лечении коров, больных бурситом, отмечается достоверное снижение ЦИК, особенно выраженное при применении трекрезана, что свидетельствует о снижении воспалительной реакции.

При применении метапрота и трекрезана повышалась лимфокинпродуцирующая функция лимфоцитов, определяемая в тесте реакции торможения миграции лейкоцитов с конканавалином А и фитогемагглютинином.

Заключение

На основании проведенных исследований можно заключить, что бурсит тарсального сустава коров относится к диффузным болезням соединительной ткани и сопровождается нарушениями клеточного и гуморального звена иммунитета, которые выражаются в увеличении уровня Т- и В-лимфоцитов в крови больных животных. Для коррекции выявленных нарушений целесообразно курсовое применение иммунномодуляторов.

У больных бурситом коров под действием препаратов метапрот и трекрезан выявлено достоверное увеличение фагоцитарного показателя РТМЛ с одновременным снижением ЦИК, НСТ, РБТЛ. Одновременно увеличивается процент фагоцитов, способных к активному захвату частиц при одновременном снижении количества частиц, поглощенных одним фагоцитом, то есть наблюдали ослабление их поглотительной функции и метаболического резерва, усиление выработки лимфокинов. Всё это свидетельствует о снижении активности иммунного воспаления, нормализации большинства показателей врождённого и приобретённого иммунитета при курсовом назначении метаболических активаторов метапрот и трекрезан, а также низкой токсичности применяемых препаратов.

Таким образом, применение метапрота и трекрезана приводит к достоверному снижению количества и функциональной активности Т-, В-лимфоцитов, связанному с продукцией интерлейкинов, иммуноглобулинов, снижению концентрации ЦИК, активности лизоцима и комплемента, ЛКТ, КАСК, ЛАСК, усилению супрессорной активности Т-лимфоцитов, существенно сниженной при развитии бурсита.

Список использованных источников

1. Бобкова С.Н., Расулов М.М., Беликова О.А. и др. Трекрезан - ингибитор холестеролэстеразы тромбоцитов // Вопр. Биол., мед. и фарм. химии. - 2011, № 8. - С. 61-64.

2. Борисов М.С., Мамашева Р.Р., Жариков Д.Н. Эффективность лечения животных при болезнях суставов и сухожилий // Ветеринария. - 2008, №1. - С. 44-47.

3. Воронков М.Г., Колесникова О.П., Расулов М.М. и др. Фармакологические свойства и клинические эффекты трекрезана // Хим.-фарм. журнал. - 2007, т. 41, № 5. - С. 13-17.

4. Дурнецова О.С., Вартанова О.А., Максимов М.Л., Андрущишина Т.Б. Адаптогены в клинической практике. Возможности препарата метапрот // Российский медицинский журнал. - 2014, т. 22, № 24. - С. 1756-1759.

5. Долгих В.Т. Основы иммунопатологии. - Омск. - 2007. - 319 с.

6. Зарубина И.В., Мокренко Е.В., Болехан А.В., Шабанов П.Д. Противовоспалительная и иммуномодулирующая активность метапрота, трекрезана и полиоксидония и их комбинаций при экспериментальном бронхолёгочном воспалении у крыс // Вестник Смоленской государственной медицинской академии. - 2016, т. 15, № 1. - С. 5-13.

7. Кибальчич Д.А., Белолипецкая В.Г., Благодатских С.В. и др. Фармакокинетика отечественного препарата «Метапрот» у здоровых добровольцев // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2011, т. 74, № 6. - С. 30-32.

8. Ким Л.Б. Соединительная ткань и проблемы социально значимых заболеваний человека // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. - 2010, т. 8, № 1. - С. 162-170.

9. Коненков В.И., Бородин Ю.И., Любарский М.С. Соединительная ткань, как составляющая часть единой протективной системы организма с защитными функциями // В книге: Лимфология. - Новосибирск. - 2012. - С. 102-107.

10. Кузнецов И.А., Смирнов А.М., Куралева О.О. и др. Биологические и фармакологические свойства трекрезана // Современные проблемы науки и образования. - 2015, № 1-1. - С. 1342.

11. Наумова Л.А., Пушкарев С.В. Соединительная ткань как система: отдельные клинические аспекты // Вестник СурГУ. Медицина. - 2009, № 2 (3). - С. 45-56.

12. Новиков В.Е., Илюхин С.А., Пожилова Е.В. Влияние метапрота и гипоксена на развитие воспалительной реакции в эксперименте // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2012, т. 10, № 4. - С. 63-66.

13. Рыбченко И.Н. Научные и практические аспекты применения иммуностимулирующих препаратов для повышения иммунной реактивности животных // Ветеринарный врач. - 2011, № 5. - С. 36-39.

14. Топурия Л.Ю. Фармакокоррекция иммунодефицитных состояний у животных - Оренбург: ОГАУ. - 2008. - 176 с.

15. Шабанов П.Д., Зарубина И.В., Мокренко Е.В. Фармакология трекрезана - нового иммуномодулятора и адаптогена // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2014, т. 12, № 2. - С. 12-27.

16. Шкуратова И.А., Верещак Н.А., Ряпосов М.В., Бодрова О.С., Вершинина И.Ю., Невинный В.К. Коррекция иммунного статуса у высокопродуктивных коров // Ветеринария. - 2008, №2. - С. 11-14.

17. Шкурупий В.А., Ким Л.Б., Ковнер А.В., Черданцева Л.А. Соединительная ткань и проблемы ёе патологических состояний // Бюллетень сибирской медицины. - 2017, т. 16, № 4. - С. 75-85.

18. Шойбонов Б.Б., Буянова С.Н., Петрова В.Д. Модификационный метод определения циркулирующих иммунных комплексов в тесте связывания комплемента ПЭГ-преципитатом // Клинич. лаб. Диагностика. - 2007, №5. - С. 2-35.

Размещено на Allbest.ru