Правила работы и охраны труда в ветеринарных лабораториях

Размещено на http://www.allbest.ru

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВАРОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение Высшего образования «Арктический государственный агротехнологический университет» Факультет ветеринарной медицины

Кафедра внутренних незаразных болезней, фармакологии и акушерства имени профессора Г. П. Сердцева

ЛАБОРАТОРНАЯ ПРАКТИКА

36.05.01 - Ветеринария

Составил(а); Сивцева Софья Иннокентьевна

Курс: студент(ка) группы В(z)-18 4 курс

Проверил(а); д.в.н., доцент Г.П. Протодьяконова,

ассистент О.И. Захарова

2021



Содержание

Введение

1. Правила работы и охраны труда в ветеринарных лабораториях

1.1 Общие Правила работы в лаборатории

1.2 Лабораторный стол

1.3 Требования к подготовке лабораторной посуды

2. Требование, предъявляемые к средам

2.1 Классификация питательных сред

2.2 Этапы приготовления питательной среды

3. Серологический отдел

3.1 Правила отбора проб на серологические исследования

3.2 Реакция агглютинации (РА)

3.3 Реакция преципитации

4. Отдел паразитологии

4.1 Правила отбора проб для паразитологического исследования

5. Отдел биохимии

5.1 Правила отбора проб на исследования мяса на свежесть (ГОСТ-21237-75)

5.2 Методы установления мяса вынужденного убоя - больных, убитых в агональном состоянии или павших животных

5.3 Физико-химические исследования

5.4 Санитарная оценка мяса

Заключение

Список литературы

Приложения



Введение

Лабораторную практику я проходила в ГБУ РС(Я) «Управление ветеринарии с ветеринарно-испытательной лабораторией Намского улуса с филиалом в Жиганском национальном эвенкийском районе». Ветеринарно-бактериологическая лаборатория работает в Намском улуса с 1975г. Постановлением Правительства РС(Я) №51 от 12.02.1993г. с 1994г. Станция по борьбе с болезнями животных было преобразована в Намское ветеринарное управление со штатным расписанием 105 человек. В том числе, 3 инспекторских отдела (групп): 1-я группа - по борьбе с инфекционными болезнями: 1 заведующий, 1 врач, 1 фельдшер, 1 веттехник; 2-я группа - по борьбе с незаразными болезнями животных: 1 заведующий, 1 врач, 1 фельдшер; 3-я группа по ветеринарно-санитарной экспертизе; 1 заведующий, 1 врач. С 2013г. ГБО « Намское ветеринарное управление с испытательной лабораторией» в руководящем аппарате имеет 5 отделов (групп):

Руководство - начальник, юрист-консультант, инспектор отдела кадров, программист и делопроизводиетль;

Бухгалтерия - гл.бухгалтер, экономист, бухгалтер;

Административно-хозяйственный отдел - начальник, инженер по ТБ и ПБ, шофера, сантехник, охранники, уборщицы;

Отдел государственного ветеринарного надзора, ветеринарно-санитарной экспертизы и лабораторного дела - заведующий, 1 врач;

Отдел по профилактике и борьбе с инфекционными и незаразными болезнями животных; по инфекционным болезням - заведующий, врач, фельдшер; по незаразным болезням - заведующий, врач. Кроме этого, 1 независимую испытательную лабораторию, 1 бухгалтерию, 5 ветлечебниц, 10 ветучастков, 4 ветпукта.

В настоящее время начальником в ГБУ РС(Я) «Управление ветеринарии с ветеринарно-испытательной лабораторией Намского улуса с филиалом в Жиганском национальном эвенкийском районе» действует с 26.02.1996 работают: начальник Окоёмов П. П., зам.начальник Колесов С.С., директор Намской ВИЛ Суздалова А.П., зав.отд.лабораторией Румянцева А.Н., и мои наставники Захарова В.Г., Терентьева В.Н., Колесова Г. Д., Охлопкова М.И. общий штат составляет 86 сотрудников.(рис.1)

Ветеринарная-испытательная лаборатория - это учреждение в системе государственной ветеринарной службы. Занимается ветеринарно-санитарной оценки продуктов животного и растительного происхождения, установлением лабораторного диагноза болезней, контроль за качеством и безопасностью которых, возлагается на ветеринарных врачей, ветеринарно-санитарных экспертов. Цель деятельности заключается в предупреждении заболеваний людей антропозоонозами и другими болезнями при потреблении пищевых продуктов и профилактике болезней животных, передающихся через корма животного происхождения. Объектами изучения являются продукты животноводства, растениеводства, пчеловодства, гидробионтов для определения их пригодности к использованию на пищевые и кормовые цели и охраны населения от болезней, общих для человека и животных, охрана территории Российской Федерации от заноса заразных болезней из других государств, а также охрана окружающей среды от загрязнений.

Прежде всего, работа ветеринарной лаборатории направлена, на обеспечение ветеринарного благополучия животноводства, предупреждение и ликвидацию заразных и незаразных болезней животных с целью создания здоровых стад и увеличения производства животноводческих продуктов, а также с целью охраны населения от болезней, общих для человека и животных.



1. Правила работы и охраны труда в ветеринарных лабораториях

Прежде всего, перед прохождением лабораторной практики и получения разрешения к доступу в лабораторию, необходимо ознакомиться с «Правилами работы и охраны труда в ветеринарных лабораториях», утвержденный Министерством Сельского Хозяйства СССР 14 января 1975 г. Согласованный с ЦК профсоюза рабочих и служащих сельского хозяйства и заготовок 10 января 1975 г. Имеет разделы:

1. Общие положения

2. Территория и производственные помещения лаборатории

2.2. Территория лаборатории

2.3. Производственные помещения, их характеристика и санитарно-гигиенические требования к отделке помещений

2.4. Санитарно-бытовые помещения

3. Общий режим работы в лаборатории

4. Правила приема патологического и других материалов на исследование

5. Правила работы во вскрывочной

6. Правила работы в виварии

6.6. Условия размещения и содержания лабораторных животных

6.7. Порядок работы со здоровыми (незараженными) животными

6.8. Правила работы в виварии для зараженных животных

7. Правила работы в боксе

7.1. Оборудование и инвентарь бокса

7.2. Режим работы в боксе

8. Правила охраны труда и техники безопасности в подразделениях лаборатории

8.1. Подразделение бактериологической диагностики

8.2. Подразделения по диагностике вирусных болезней

8.3. Серологический отдел (в подразделении серологической диагностики)

8.4. Отдел ветеринарно-санитарной экспертизы

8.5. Работа по диагностике микозов и проведение микотоксикологических исследований, кормов

8.6. Паразитологический отдел

8.7. Отдел (экспедиция) по диагностике болезней рыб

8.8. Химико-токсикологический и биохимический отделы

8.9. Бактериологическая кухня (отдел питательных сред)

8.10. Правила при работе с автоклавом

8.11. Требования по безопасному обращению с электрооборудованием

8.12. Правила работы в радиологическом отделе

9. Меры пожарной безопасности

Согласно требованиям санитарных норм и правил, Намская ветеринарная лаборатория, размещена во втором этаже. Лаборатория имеет 2 входа: один - для работников, второй - для приема материала на исследование. Доступ в помещение лаборатории строго ограничен. Лабораторию условно можно разделить на три зоны. Перед каждым проходом при входе имеются дезковрик; в первой зоне; шкафы для верхней одежды и обуви для сотрудников; во второй зоне; гардеробная, архив, врачебная, моечная, средоварочная, автоклавная; 3 зона- пункт по приемке и регистрации образцов, кабинеты микологии, токсикологии, серологии, паразитологии, биохимии, радиологических исследований, бокс, микробиологических исследований. Все помещения ветеринарной лаборатории подключены к электрическим и теплосетям, а также системе канализации и водоснабжения, непосредственно возле раковин устанавливают бутыли с тубусом, в которых должен постоянно быть дезинфицирующий раствор, оборудованы системой вентиляции воздуха.

Производственные помещения ветеринарной лаборатории имеют стены с гладкими поверхностями, которые легко поддаются очистке и дезинфекции; потолок с легко моющимся покрытием; в каждом помещении имеются большие и герметично закрывающиеся окна, потолочное освещение, обеспечивающее достаточный для осмотра уровень освещенности, а также местное и переносное освещение, полы в производственных помещениях ветеринарной лаборатории покрыты плиткой.

1.1 Общие Правила работы в лаборатории

1. В химической лаборатории следует работать в халате и шапочке. Строго запрещается находиться в лаборатории в верхней одежде или хранить ее там.

2. На лабораторных столах должны находиться только предметы, относящиеся к лабораторной работе; нельзя располагать сумки, портфели и другие посторонние предметы.

3. Методические пособия, рабочие тетради и другую необходимую учебную литературу следует оберегать от попадания на них воды и химических реактивов.

4. Проводить опыты следует с разрешения опытного работника или наставника и только те, которые предусмотрены планом лабораторных работ.

5. Необходимо внимательно читать надписи на этикетках, перед тем как взять какой-либо химический реактив.

6. Вещества нельзя брать руками, пробовать на вкус. Твердые реактивы берут шпателем или специальной ложечкой, жидкие - пипетками.

7. Наливать или насыпать реактивы следует только над лабораторным столом. Пролитые или рассыпанные реактивы немедленно удаляют по указанию преподавателя. Нельзя оставлять открытыми склянки с жидкостями и сухими реактивами. Пробки, закрывающие склянки с растворами, нельзя класть на лабораторный стол.

9. Для опыта необходимо брать вещество или его раствор в количествах, указанных в методических указаниях или преподавателем. Оставшиеся вещества нельзя ссыпать или сливать в сосуд, из которого они были взяты, а следует собирать в предназначенную для этого посуду.

10. Реактивы общего пользования нельзя уносить на свое рабочее место.

11. Определяя вещество по запаху, нельзя делать глубокий вдох; осторожно направляйте к себе газ или пар рукой.

12. Необходимо правильно пользоваться нагревательными приборами и строго соблюдать правила безопасности при нагревании: а) нагревайте жидкости только в небольшом объеме (не более 1/3 объема сосуда); б) отверстие открытого сосуда при нагревании в нем жидкости направляйте в сторону от себя и всех остальных, находящихся в лаборатории; не наклоняйтесь над нагреваемым сосудом; в) после нагревания немедленно гасите пламя.

13. После выполнения опытов необходимо убрать свое рабочее место и сдать его дежурному по группе.

14. В химической лаборатории запрещается употреблять пищевые продукты.

15. Участки кожи, на которые попал реактив, сначала тщательно промойте водой, затем обработайте нейтрализующим веществом: - после кислоты - раствором питьевой соды 3-5 %; - после щелочи - раствором уксусной кислоты 2-3 %.

16. При термических ожогах промыть место ожога раствором перманганата калия 10 % и наложить компресс из спиртового раствора танина.

17. Берегите глаза от попадания химических реактивов! При попадании химического реактива в глаза следует их промыть большим количеством воды и немедленно обратиться к врачу.

18. Места порезов стеклом промывают сильной струей воды, удаляют остатки стекла, обрабатывают рану спиртовым раствором йода или раствором пероксида водорода 3 % и перевязывают стерильным бинтом.

19. После оказания первой помощи пострадавшему необходимо немедленно обратиться в медицинское учреждение.

1.2 Лабораторный стол

Основные рабочие места должны быть оборудованы столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения аппаратуры, посуды и реактивов. Столы должны быть снабжены газовыми или спиртовыми горелками, весами, микроскопами иметь подводку электроэнергии. Поверхность столов покрывают пластиком, что облегчает их мойку и дезинфекцию. Столы снабжают удобными для работы винтовыми табуретами. Лабораторию обязательно оборудуют потолочными или переносными бактерицидными лампами.

На лабораторном столе устанавливают микроскоп, спиртовую или газовую горелку, обеспечивают набором красителей, бактериологическими петлями, штативом для пробирок, градуированными и пастеровскими пипетками, стеклянным мостиком и ванночкой для окраски препаратов, емкостью с водой для промывания окрашенных препаратов, дезинфицирующей жидкостью, банкой с ватой, марлевыми салфетками, карандашами или маркерами по стеклу, песочными часами, фильтровальной бумагой, нарезанной по размеру предметного стекла, спичками.

Микроскоп помещают на столе, покрывают колпаком из оргстекла или полиэтиленовым чехлом. Поверхность стола протирают ватным тампоном, смоченным дезинфицирующим средством или 70%-ным этанолом. Спирт этиловый указанной выше концентрации может быть использован и для дезинфекции рук.



1.3 Требования к подготовке лабораторной посуды

Лабораторная посуда - специальные и специализированные емкости различного конструктивного исполнения, объема, изготовленные из разнообразных материалов, устойчивых к агрессивным средам и обладающие необходимой термостойкостью, прозрачностью и другими нужными физическими свойствами.

Перед выполнением химического анализа лабораторная посуда должна быть тщательно вымыта. Использование в работе загрязненной, плохо вымытой посуды может привести к получению неправильных результатов.

Стеклянная посуда считается чистой, если на ней нет видимых на глаз загрязнений и при стекании воды по внешней поверхности посуды на ее внутренней поверхности не просматриваются отдельные капли.

Мытье химической посуды должно приводить к удалению загрязнений и обезжириванию ее внутренней поверхности. Мытье водой эффективно лишь в отношении загрязняющих веществ, способных растворяться в ней (причем горячая вода обычно лучше отмывает, чем холодная).

Существуют механические, физические и химические методы очистки и мытья посуды. При использовании механических и физических методов загрязнения удаляются соответственно механическим воздействием (ершами, щетками) или воздействием особых физических условий (высокой температуры, ультразвука), с учетом свойств загрязняющих веществ.

Химические методы основаны на способности определенных веществ вступать в реакции с загрязнениями, тем самым разрушая и облегчая их удаление при дальнейшем мытье с водой. Обработанную химическими средствами посуду необходимо тщательно промыть водопроводной водой и 2-3 раза ополоснуть дистиллированной водой.

Для упрощения процесса подготовки посуды и получения стабильных результатов рекомендуется по возможности для каждого вида исследований выделить свой комплект мерной и лабораторной посуды, которая не используется для других целей.

Сушить посуду после мытья следует далеко не всегда. Вымытую посуду надо перевернуть вверх дном, дать стечь воде, а затем вытереть снаружи чистым полотенцем (но не изнутри). Если же посуду необходимо высушить, ее помещают в сушильный шкаф. Пользоваться посудой после этого можно лишь тогда, когда она остынет и примет температуру рабочего помещения. Полиэтиленовую посуду сушат при комнатной температуре.

При использовании специальной лабораторной посуды и расходных материалов (флаконов с завинчивающимися пробками, металлических или силиконовых колпачков, выдерживающих автоклавирование, микробиологических пробок многоразового использования и других материалов) следует руководствоваться рекомендациями производителя.

Стерилизацию лабораторной посуды осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при 160 °С - в течение 2 часов, 180 °С - в течение 60 мин. или паром в автоклаве при 1 атм. 121 °С - в течение 30 мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу при отсутствии вакуумной сушки в автоклаве. Перед использованием посуду следует маркировать. После стерилизации посуду хранят до использования в закрытом шкафу или ящиках с крышками не более 10 суток при ненарушенной упаковке или невскрытом пенале.

Пробирки и другую лабораторную посуду до стерилизации следует хранить в чистых коробках или ящиках столов, выложенных чистой фильтровальной бумагой.

Сверху подготовленную посуду также следует прикрыть фильтровальной бумагой от пыли и случайной грязи.

Хорошо вымытая стеклянная посуда не образует на стенках отдельных капель, вода стекает со стенок, образуя равномерную тончайшую пленку. Хорошо вымытую в воде посуду обязательно два-три раза споласкивают дистиллированной водой, чтобы удалить соли, содержащиеся в водопроводной воде.



2. Требование, предъявляемые к средам

Питательные среды любого типа должны отвечать ряду общих требований:

- содержать все необходимые для роста микроорганизмов биохимические факторы (источники углерода, азота, фосфора, витаминов);

- иметь оптимальные значения ряда биофизических показателей (рН, окислительно-восстановительный потенциал, изотоничность, наличие активной воды);

- быть стерильными.

2.1 Классификация питательных сред

В микробиологических лабораториях готовят питательные среды для выращивания микроорганизмов с учетом их физиологических потребностей, содержащие различные вещества, необходимые для размножения и роста микроорганизмов. Ко всем питательным средам предъявляются общие требования.

1. Питательные среды должны быть стерильные.

2. Питательные среды должны быть влажные, так как микроорганизмы питаются поверхностью тела путем осмоса и диффузии, а продукты метаболизма выделяются только в растворенном виде.

3. Для большинства бактерий благоприятной является рН в пределах 7,2-7,4.

4. Питательные среды должны содержать все питательные вещества, источники углерода и азота (пептон), обеспечивающие оптимальный рост.

5. Некоторые питательные среды должны быть прозрачными.

6. Для анаэробных бактерий готовят питательные среды, изолированные от воздуха слоем вазелинового масла.

В состав естественных сред входят растительные компоненты: экстракты овощные, соевые, гороховые; животного происхождения: экстракты из мяса, сыворотки крови, яйца, молоко, которые можно отнести к средам неопределенного химического состава. Из этой группы сред широко применяются МПБ (мясопептонный бульон), МПА (мясопептонный агар), РПБ (рыбопептонный бульон).

Синтетическими называют среды, в состав которых вводят физиологически обоснованные количества химически чистых элементов, углеводов, незаменимых аминокислот, витамины, различные минеральные вещества, такие среды относят к средам известного химического состава. При изучении метаболических потребностей микроорганизмов в питательные среды вводят радиоактивно меченые углерод и фосфор.

В настоящее время в диагностических лабораториях в большинстве случаях используют готовые сухие питательные среды, выпускаемые предприятиями биологической промышленности в виде порошков (рис.2). Что значительно облегчают и упрощают работу приготовления питательных сред. Хранят в закрытых шкафах, с пояснением в строго определённой полке в зависимости от вида питательного средства.

2.2 Этапы приготовления питательной среды

1. Взвешивание: отбирают навески компонентов питательной среды на аналитических весах;

2. Растворение: компоненты питательной среды растворяют в предварительно нагретой до 70 °С дистиллированной воде. Растворы макро- и микросолей готовят отдельно. Растворы фосфатов входящих в состав макросолей также готовят отдельно, т. к. в процессе стерилизации в автоклаве они выпадают в осадок и в дальнейшем вновь требуют растворения.

3. Кипячение: растворы питательных сред кипятят на водяной бане в течении 2 мин.

4. Установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.

5. Фильтрация жидких и расплавленных плотных сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена - они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр. (рис.3)

6. Розлив сред: питательные среды разливают не более чем на ѕ емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.

7. Стерилизация: для стерилизации питательный сред используют термический способ: стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование), дробная стерилизация (тиндализация), кипячение. Режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте. При автоклавировании 3-5 % жидкости теряется в результате испарения, поэтому рекомендуется в приготавливаемые среды добавлять сверх объема примерно 5 % дистиллированной воды. Тогда после стерилизации среда будет иметь требуемую концентрацию.

8. Контроль:

- для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают.

- химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов.

- для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды.

Анализы в лаборатории должны выполняться в строгом соответствии с нормативной документацией. Неточность или несвоевременность проведения анализов приводит к браку, к уменьшению выхода целевых продуктов. Специалист должен постоянно совершенствовать свои знания, осваивать новые приборы, методы испытания. Знать устройство и правила обращения с лабораторным оборудованием, следить за его исправностью, докладывать старшему по смене о всех замеченных отклонениях, четко и аккуратно записывать в рабочие журналы, данные по анализам. При приеме и сдаче смены особое внимание необходимо обращать на правильный учет и хранение драгоценных материалов и ядовитых веществ.

Несмотря на внедрение автоматических анализаторов качества, доля ручного труда достаточно высока. Задача внутреннего лабораторного контроля является определение химических и физических свойств конечных и промежуточных продуктов исследования.



3. Серологический отдел

Отдел проводит диагностические исследования, основанные на иммунологических свойствах крови и сыворотки животных, выявляя наличие антител к возбудителям инфекционных и инвазионных болезней (вирусные, бактериальные и паразитарные) болезни: бруцеллез (РА, РСК, РИД), лептоспироз (РМА), хламидиоз (РДСК), листериоз (РСК), сап (РА), случную болезнь (РСК), паратуберкулез (РСК), блютанг (РДСК), токсоплазмоз (РСК), инфекционный эпидидимит (РДСК), су-ауру (реакция с формалином).

Я провела лабораторную практику по выявлению лейкоза и бруцеллеза. Диагностические исследования на лейкоз проводятся 2 раза в год начиная с 6-и месячного возраста. Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования - реакция диффузионной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле-агара (РИД). Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота.

Диагностика бруцеллеза так же проводится 2 раза в год, серологическим методом при котором широко используется розбенгал проба (РБП), реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК) и реакция иммунодиффузии (РИД). Эти методы основаны на выявлении антител к возбудителю бруцеллеза.

Серологический метод является основным, а иногда и единственным критерием оценки благополучия животных по бруцеллезу и лейкозу. Проводятся серологические исследования сельскохозяйственных животных при закупе, продаже, для участия в выставках племенных животных, соревнований.



3.1 Правила отбора проб на серологические исследования

Кровь берут утром до кормления животных (у жвачных -- в любое время) в количестве не менее (5-7) мл. Для многоразовых пробирок кровь выдерживают при температуре (30-38)°С (в термостате), на инфекционный эпидидимит -- при температуре (20-30) °С -- 1 ч или при комнатной температуре (8-10) ч, для свертывания. Сгусток крови от стенок пробирки отделяют стальной спицей, затем пробирки выдерживают при 4-100С (в прохладном месте). Через сутки сыворотку отделяют в сухие стерильные пробирки. Пробы нумеруют в соответствии с описью животных и направляют для исследования в лабораторию в свежем или консервированном виде.

Можно направлять в лабораторию цельную кровь, не отделяя сыворотку, но при условии, что в пути ее не будут встряхивать, и она не подвергнется гемолизу. Пробирки закрывают пробками и устанавливают для транспортировки в строго вертикальном положении. Зимой пробы с кровью (сывороткой) упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзали. Так же кровь можно отбирать в вакуумные системы для забора крови (пробирки для получения сыворотки с активатором свертывания или активатором свертывания с гелем). С момента отбора проб крови до доставки ее в лаборатории должно пройти не более 48 часов. Консервирование сывороток проводят: -добавлением 1 капли 5%-ного раствора фенола на каждый мл сыворотки при тщательном перемешивании;

-сухой борной кислотой до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка (не подлежат консервированию борной кислотой сыворотки крови для исследования на хламидиоз, лейкоз крупного рогатого скота);

-путем однократного замораживания (не подлежат замораживанию сыворотки крови для исследования на паратуберкулезный энтерит, случную болезнь, инфекционный эпидидимит баранов).

Консервированию подлежит только сыворотка крови. Кровь консервировать запрещено. Неконсервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 суток со дня взятия крови при условии хранения их при 4-80С. Сыворотки консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 суток, замороженные сыворотки - в течении 3 суток после однократного оттаивания. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию не подлежат.

Кровь от абортировавших или подозрительных в заболевании животных для получения сыворотки отбирают дважды: при выявлении аборта, в период клинического проявления болезни и повторно, от них же, через 14-21 день. Сыворотки хранят при -20°С (морозильная камера) и доставляют в лабораторию одномоментно. Животных, вакцинированных против хламидийного аборта, серологически не исследуют в течение 1 года.

Для исследования на лейкоз гематологическим методом направляется кровь. Ее отбирают в пробирки с антикоагулянтом (трилон Б из расчета 0,1 мл 10%-ного раствора на 1 мл крови). Для предотвращения свертывания крови содержимое пробирки сразу же тщательно перемешивают, путем переворачивая пробирки несколько раз. Так же кровь можно отбирать в вакуумные системы для забора крови (пробирки для гематологических исследований с ЭДТА К2/К3). Стабилизированную кровь направляют для исследования в лабораторию в день взятия, от момента взятия крови до исследования ее в лаборатории должно пройти не более 36 часов. При разрешении спорных вопросов дает заключение по результатам исследований в установленном порядке, предусмотренном действующими нормативными документами. Пробы, взятые для гематологических и серологических исследований крови, маркируют и отправляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают наименование хозяйства (отделение, ферма), номер или кличку, пол и возраст животного.



3.2 Реакция агглютинации (РА)

Наиболее распространенным методом диагностики бруцеллёза является серологическая диагностика, при которой с помощью различных реакций проводится выявление специфических антител к бруцеллёзу. Сущность метода заключается в выявлении специфических антител в сыворотке крови животных, основанном на способности антител сыворотки агглютинировать бруцеллезный антиген, результатом чего является формирование выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в вцде крупных или мелких хлопьев розового цвета. (рис.4) РА проводят в соответствии ГОСТ 34105--2017.

Реакция агглютинации (РА) основана на применении корпускулярного антигена (взвесь бактерий, сенсибилизированных эритроцитов, частиц латекса и др.), взаимодействующего со специфическими антителами, в результате чего образующийся комплекс антиген -- антитело выпадает в виде осадка. Эту реакцию широко применяют в лабораторной практике для серологической диагностики бактериальных инфекций и для идентификации выделенных микроорганизмов. РА используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза (реакции Райта, Хеддльсона), туляремии, лептоспироза (РАЛ -- реакция агглютинации и лизиса лептоспир), листериоза, сыпного тифа (РАР -- реакция агглютинации риккетсий), шигеллеза, иерсиниоза, псевдотуберкулеза и др. Реакция непрямой, или пассивной, агглютинации (РИГА или РПГА). Для постановки этой реакции используют эритроциты животных (барана, обезьяны, морских свинок, некоторых птиц), сенсибилизированных антителами или антигеном, что достигается инкубацией взвеси эритроцитов и раствора антигена или иммунной сыворотки. Диагностикумы, полученные на основе эритроцитов, сенсибилизированных антигенами, называют антигенными эритроцитарными диагностикумами. Они предназначены для определения антител в серийных разведениях сывороток крови, например, эритроцитарные шигеллезные диагностикумы, эритроцитарные сальмонеллезные О - диагностикумы. Соответственно диагностикумы на основе эритроцитов, сенсибилизированных специфическими иммуноглобулинами, называют антительными (иммуноглобулиновыми) диагностикумами и они служат для выявления антигенов в различном материале, например эритроцитарный иммуноглобулиновый дифтерийный диагностикум для РИГА, применяемый для выявления дифтерийного экзотоксина коринебактерий в жидкой питательной среде при посеве в нее материала из носа и ротоглотки. Реакцию гемагглютинации применяют для диагностики как бактериальных (брюшной тиф, паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), так и вирусных (грипп, аденовирусные инфекции, корь и др.) инфекций. По чувствительности и специфичности РИГА превосходит РА.

Реакцию длительного связывания комплемента (РДСК) применяют вместо РСК для исследования сывороток, обладающих антикомплементарными свойствами. Сущность реакции состоит в образовании иммунного комплекса антигена и антител в присутствии комплемента на холоде в течение нескольких часов. (рис.5)

По результатам исследования антитела на бруцеллёз не выявлены. (рис.4)

3.3 Реакция преципитации

В реакции преципитации (РП) в результате взаимодействия антител с высокодисперсными растворимыми антигенами (белки, полисахариды) образуются комплексы с участием комплемента -- преципитаты. Это чувствительный тест, используемый для выявления и характеристики разнообразных антигенов и антител. Простейшим примером качественной РП является образование непрозрачной полосы преципитации в пробирке на границе наслоения антигена на иммунную сыворотку -- реакция кольцепреципитации. Широко применяют различные разновидности РП в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлектрофорез).

Сущность метода заключается в выявлении в сыворотке крови животных с помощью реакции иммунодиффузии (РИД) преципи-тирующих антител против антигенов онкорнавируса типа С крупного рогатого скота, то есть выявление лейкоза.

Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов. Клинически болезнь проявляется чаще у животных в возрасте старше 4 лет. Болезнь протекает вначале бессимптомно, затем проявляется персистентным лимфоцитозом и (или) образованием опухолевидных разрастаний в кроветворных и других органах и тканях. После установления опухолевой природы лейкоза болезнь как у животных, так и у человека получила название гемобластозы, то есть опухолевые заболевания крови. По характеру и месту локализации опухолевых разрастаний, а также по морфологии и принадлежности пролиферирующих клеток к определенным росткам гемопоэза гемобластозы разделены на две группы:

-лейкозы - системные поражения органов кроветворения, включающие лимфоидную, миелоидную, моноцитарную и недифференцированную формы;

-гематосаркомы - сопровождающиеся опухолевым ростом. К ним относятся лимфосаркома, ретикулосаркома, лимфогрануломатоз и миеломная болезнь.

Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является опухолеродный РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae. Источник возбудителя инфекции - животное, зараженное ВЛКРС. Факторами передачи являются кровь, молоко и другие секреты и экскреты, содержащие лимфоидные клетки, инфицированные ВЛКРС. Заражение может происходить при совместном содержании здоровых и инфицированных ВЛКРС животных.

Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования - реакция диффузионной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле агара (РИД).

Из числа положительно реагирующих в РИД животных (инфицированных ВЛКРС) с помощью гематологического метода выявляют больных лейкозом.

Для проведения исследования применяют: чашки биологические Петри; рН-метр; штамп для приготовления лунок; баню водяную, обеспечивающую температуру нагрева 50 °С и более; раствор буферный, pH 7,2; агар очищенный по ГОСТ 17206--71; антиген двойной, состоящий из гликопротеидного (гп) и поли-петидного (р24) антигенов онкорнавируса типа С крупного рогатого скота.

Антиген хранят при минус 20°С или лиофилизируют. Перед постановкой РИД приготовленный антиген сравнивают со стандартным антигеном, проверенным на специфичность и активность; сыворотку положительную с преципитирующими антителами с титром антител к гп-антигену от 1 : 16 до 1 :32 в РИД. Сыворотку получают от естественно или экспериментально зараженного крупного рогатого скота или овец; сыворотку контрольную отрицательную.

Подготовка к исследованию

Расплавленный 0,8 %-ный раствор агара наносят разномерным слоем толщиной 2--3 мм на плоские стекла, чашки Петри или пластинки. После застывания агара специальным штампом делают лунки, не допуская образования трещин между ними и отслоения агара от дна чашки. Если в лунках до постановки реакции скапливается жидкость, то ее удаляют. Лунки для иммунодиффузии сразу после их образования закапывают агаром для предотвращения проникновения антигена или сыворотки под агаровый слой.

Проведение исследования

Антиген и контрольную сыворотку вносят в лунки в соответствии с чертежом. Антиген (А) вносят в центральную лунку, две диаметрально противоположные лунки заполняют контрольной сывороткой (КС). Оставшиеся четыре периферические лунки (1, 2, 3 ,4) заполняют испытуемыми сыворотками. Точкой, относительно которой идет нумерация лунок с испытуемыми сыворотками, служит отметка в геле верхней части чашки.

Для внесения компонентов в лунки используют стерильные пипетки, не допуская при этом контаминацию реагентов и сывороток бактериями и другими веществами. Лунки заполняют до исчезновения мениска. После заполнения всех лунок чашки закрывают крышками и хранят во влажной камере при температуре от 18 до 27 °С.

Реакцию учитывают через 48--72 ч. Чашки просматривают на темном фоне, направляя сфокусированный луч осветителя на дно чашки под углом 30--45°. Реакцию оценивают по контрольной линии преципитата. Если она отсутствует или слабо выражена, то реакцию считают неудавшейся и ее следует повторить. Линия преципитации, формируемая контрольной сывороткой и антигеном, должна быть четкой, иметь форму прямой, концы которой должны доходить до лунок с испытуемыми сыворотками, располагаться на одинаковом расстоянии от лунок (А и КС).

Обработка результатов

В зависимости от наличия и титра специфических антител против антигенов онкорнавируса сыворотки квалифицируются на положительно, отрицательно и сомнительно реагирующие.

Положительно реагирующей считают сыворотку:

-если между лунками с антигеном и испытуемой сывороткой образуется полоса преципитации, которая соединяется с контрольной линией;

-если линия преципитации между лунками с сывороткой и антигеном отсутствует, но контрольная линия образует вблизи лунки с испытуемой сывороткой изгиб, направленный в сторону лунки с антигеном;

-если образуется вторая линия преципитации, которая располагается ближе к лунке с испытуемой сывороткой и указывает на наличие в сыворотке преципитирующих против второго антигена антител (р24) онкорнавируса типа С крупного рогатого скота;

-если контрольная линия значительно укорочена со стороны лунки с испытуемой сывороткой и имеет размытый изгиб в сторону лунки с антигеном или расположена очень близко к лунке с антигеном;

Примечание. Более четкая линия образуется, если такую сыворотку разбавить в соотношении 1 : 4 или 1 : 8; если образовалась неспецифическая линия преципитации -- позиция 6.

Отрицательно реагирующей считают сыворотку:

-если контрольная линия преципитации продолжается до лунки с испытуемой сывороткой без загибов или с небольшим загибом в сторону лунки с контрольной сывороткой (рис.7)

-если у сформировалась неспецифическая линия преципитации; при этом она перекрещивается с контрольной линией.

Сомнительно реагирующей считают сыворотку, если контрольная линия преципитации плохо просматривается вследствие наличия неспецифической линии преципитации. В этом случае проводят повторное взятие крови у этого животного и исследование сыворотки.

Если сомнительная реакция была зафиксирована дважды, с интервалом 1 месяц между исследованиями, сыворотку считают положительно реагирующей.

Сомнительная реакция может быть в результате подтекания положительно реагирующей сыворотки под слой агара к лунке с отрицательно реагирующей сывороткой или контаминации образца отрицательно реагирующей сыворотки -- положительно реагирующей. В этом случае исследование повторяют.

По результатам исследования антитела на лейкоз не выявлена.



4. Отдел паразитологии

К группе инвазионных болезней относятся заразные болезни, возбудителями которых являются животные организмы (гельминты, паукообразные, насекомые и простейшие). Животные заражаются этими болезнями алиментарным путем (пассивно паразиты попадают в рот вместе с кормом и водой), контактно (при соприкосновении здорового животного с больным, а также через предметы ухода), внутриутробно (плод заражается в матке в период беременности самки), посредством кровососущих членистоногих (клещей). Все инвазионные заболевания, в зависимости от возбудителя, делят на несколько групп: гельминтозы, протозоозы, арахнозы и энтомозы.

Предупреждение и ликвидация инфекционных и инвазионных болезней животных входит в задачу Государственной ветеринарной службы Российской Федерации (ст. 5 Закона РФ «О ветеринарии»), ведомственной ветеринарно-санитарной и производственной ветеринарной службы. Государственный ветеринарный надзор за организацией и проведением вышеуказанных мероприятий осуществляют межведомственные органы Государственной ветеринарной службы (ст. 8 Закона РФ «О ветеринарии»).

4.1 Правила отбора проб для паразитологического исследования

Чаще всего при лабораторной диагностике гельминтозов исследуют фекалии, так как яйца и личинки наиболее распространенных гельминтов выделяются во внешнюю среду именно с ними.

Пробы фекалий массой 10 г берут рукой в резиновой перчатке из прямой кишки или из только что выделившихся при испаражнении фекалий. В последнем случае снимают верхнюю часть экскрементов, не соприкасавшуюся с полом или почвой. Всякий раз после взятия порции фекалий перчатку необходимо мыть теплой водой для того, чтобы не занести яйца или личинки гельминтов из фекалий инвазированного животного в пробу фекалий свободного от гельминтов животного.

От крупного рогатого скота, лошадей, собак фекалии берут индивидуально, в соответствии с кличкой или номером животных. Для исследования овец, оленей, свиней, кроликов и пушных зверей практически не всегда удается индивидуальное взятия проб. В таких случаях надо строго регистрировать взятый материал в упаковке и описи сопроводительного документа в соответствии с группой (отарой) животных или станком и клеткой, в которых содержатся животные.

Обследуют 10% поголовья животных хозяйства, фермы, отары. Пробы помета от птиц для исследования берут от 5% поголовья.

Доставлять пробы фекалий следует в стеклянных банках, полиэтиленовых мешочках, в плотной оберточной или пергаментной бумаге и в прочих упаковках с обязательной описью проб в сопроводительном документе.

В сопроводительном документе указывают: хозяйство, отделение, бригаду, участок, ферму, вид животных, на какие гельминтозы исследовать, дату взятия и направление материала.

Кличка, номер животных или отара, станок, клетка должны соответствовать номеру пробы фекалий на упаковке. Доставляют пробы в лабораторию в день их взятия.

В лабораторной практике исследование кала проводили методом Фюллеборна. Для выполнения исследования методом Фюллеборна готовят насыщенный раствор поваренной соли (NaCl). В посуду с кипящей водой кладут поваренную соль (из расчета 400-420 г соли на 1 л воды) и продолжают кипятить при слабом нагревании до тех пор, пока соль не прекращает растворяться (на дне посуды остается нерастворенная соль, а на поверхности жидкости появляется тонкая пленка). Раствор роли в горячем состоянии фильтруют через слой ваты или марлю. После остывания раствора на дне посуды выпадает осадок соли (признак правильности приготовления раствора нужной концентрации). Используют в работе над осадочную жидкость без взмучивания осадка.

Порцию исследуемых фекалий в количестве около 10 г помещают в ступку, добавляют около 80-100 мл насыщенного раствора поваренной соли и тщательно перемешивают с помощью пестика (без интенсивного растирания фекалий) до равномерной взвеси. Взвесь фильтруют через металлическое сито или один слой марли в цилиндрический стаканчик (или банку) емкостью 100-150 мл и отстаивают в течение 10-15 минут, после чего с поверхности жидкости снимают копрологической петлей пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопического исследования. Желательно исследовать не менее трех пленок, снятых с разных участков поверхности жидкости в стаканчике. Стандартную копрологическую петлю можно изготовить из тонкой медной проволоки (одна жилка многожильного электрического провода) длиной 10-12 см, скрутив на ее конце кольцевую петлю на круглом карандаше и подогнув петлю под углом 90°. Петля многоразового пользования. Перед использованием ее прожигают на пламени горелки или тщательно промывают.

Пленка жидкости, помещенная на предметное стекло, должна немедленно исследоваться, так как в ней, при подсыхании, выпадают кристаллы соли, затрудняющие обнаружение яиц гельминтов.

По результатом исследования яйца гельминтов, ооцисты кокцидий не обнаружены.



5. Отдел биохимии

Настоящий стандарт распространяется на мясо и субпродукты от всех видов убойного скота и устанавливает методы бактериологического исследования для выявления в них аэробных бактерий (бацилл сибирской язвы, бактерий из рода сальмонелл, бактерий из рода кишечной палочки-Эшерихий, бактерий из рода протея, бактерий рожи свиней, бактерий листериоза, бактерий пастереллеза, бактерий из группы кокков) и анаэробных бактерий (патогенных и токсигенных клостридий).

Бактериологическое исследование мяса и субпродуктов производят во всех случаях, предусмотренных действующей нормативно-технической документацией, правилами ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов и другими нормативными актами, а также по требованию органов, осуществляющих ветеринарный или санитарный надзор.

5.1 Правила отбора проб на исследования мяса на свежесть (ГОСТ-21237-75)

Отбор проб берут в зависимости от характера заболевания на бактериологическое исследование направляют от туши:

- часть мышцы сгибателя или разгибателя передней и задней конечностей туши длиной не менее 8 см или кусок другой мышцы размером не менее 8x6x6 см;

- лимфатические узлы - поверхностный шейный или собственно подкрыльцовый и наружный подвздошный вместе с окружающей их соединительной и жировой тканью, а от свиней - поверхностный шейный дорзальный (при отсутствии патологических изменений в области головы и шеи) или подкрыльцовый первого ребра и надколенный;

- долю печени с печеночным лимфатическим узлом или желчным пузырем, освобожденным от желчи, почку и селезенку.

Для бактериологического исследования на листериоз направляют: головной мозг, долю печени и почку.

Для бактериологического исследования на возбудителя сибирской язвы направляют лимфатический узел пораженного органа или лимфатический узел, собирающий лимфу с места локализации подозрительного фокуса, отечную ткань, ухо, а у свиней, кроме того, подчелюстной лимфатический узел.

При исследовании полутуш или четвертин туш берут кусок мышцы, лимфатические узлы и трубчатую кость.

При исследовании соленого мяса, находящегося в бочечной таре, берут образцы мяса и имеющиеся лимфатические узлы сверху, из середины и со дна бочки, а также, при наличии, трубчатую кость и рассол. Примечание. Если берут часть печени, почки, селезенки, то поверхность разреза прижигают.

Образцы завертывают каждый в отдельности в полиэтиленовую пленку по ГОСТ 10354 или пергамент по ГОСТ 1341, помещают в бумажный пакет, на котором ставят дату отбора образца, номер туши и направляют в лабораторию в общей таре (ящике).

При необходимости пересылки образцов в лабораторию, расположенную за пределами предприятия или хозяйства, где отбирают образцы, тару с образцами опечатывают или пломбируют.

В сопроводительном документе указывают:

- наименование предприятия или хозяйства, где отобран образец, и его адрес;

- номера образцов;

- причину направления образцов на исследование;

- краткие патологоанатомические данные и предполагаемый диагноз;

- дату взятия образцов и подпись лица, направившего их на исследование.

В практике исследовала мясо вынужденного убоя свинины с. Тумул, ул. Прядезникова д.1. Отбор проб произвел ветспециалист Андреева Н.Я. в присутствии владельца.

Вынужденный убой животных производится только по разрешению ветеринарного врача (фельдшера). Предубойная выдержка животных, доставленных на мясокомбинат для вынужденного убоя, не проводится. О причинах вынужденного убоя животных в хозяйствах должен быть составлен акт, подписанный ветеринарным врачом. Этот акт и заключение ветеринарной лаборатории о результатах бактериологического исследования туши вынужденно убитого животного совместно с ветеринарным свидетельством должны сопровождать указанную тушу при доставке на мясокомбинат, где она повторно подвергается бактериологическому исследованию.

Кроме того, в обязательном порядке проводят бактериологическое и, в случае необходимости, физико-химическое исследование, но с обязательной пробой варки на выявление посторонних запахов, несвойственных мясу.

5.2 Методы установления мяса вынужденного убоя - больных, убитых в агональном состоянии или павших животных

Патологоанатомическое и органолептическое исследование при определении мяса от больного убитого в агональном состоянии или павшего животного необходимо учитывать следующие внешние признаки: состояние места зареза, степень обескровливания, наличие гипостазов и цвет лимфоузлов на разрезе.

Состояние места зареза. Под зарезом понимают место перерезки кровеносных сосудов при убое животного. Для создания видимости нормально прирезанного животного владельцы нередко делают разрезы шеи у павших животных, втирают в место разреза кровь, подвешивают их за задние конечности для лучшего стока крови и т. д.

Между разрезом прижизненным и посмертным имеются следующие различия: прижизненный разрез неровный вследствие сокращения мышц, ткани в области зареза инфильтрированы (пропитаны) кровью в большей степени, по сравнению с глубже лежащими. Разрез сделанный после смерти животного более ровный, кровь почти не пропитывает ткани, имеющаяся на поверхности тканей кровь легко смывается водой. Ткани по степени инфильтрации кровью в области зареза не отличаются от тканей глубже расположенных.

Степень обескровливания туши. Туши полученные от животных больных, и особенно от животных находившихся в агональном состоянии, или павших, бывают плохо или очень плохо обескровленными. Туши темно-красного цвета, на разрезах обнаруживают мелкие и крупные кровеносные сосуды, заполненные кровью. Межреберные сосуды выглядят в виде темных прожилок. Если отделить от туши лопатку, то можно обнаружить сосуды, заполненные кровью.

Если вложить в свежий разрез полоску фильтровальной бумаги (длиной 10 см. и шириной 1,5 см.) и оставить ее там, на несколько минут, то при плохом обескровливании кровью пропитается не только та часть бумаги, которая соприкасается с мясом, но и свободный ее конец (этот метод не приемлем для мяса оттаянного), жировая ткань имеет розовый или красноватый цвет.

При хорошем обескровливании мясо малинового или красного цвета, жир белый или желтый, на разрезе мышц крови нет. Сосуды под плеврой и брюшиной не просвечиваются, межреберные сосуды выглядят в виде светлых тяжей.

Цвет лимфатических узлов на разрезе. Лимфоузлы на разрезе в тушах здоровых животных и своевременно разделанных имеют светло-серый или желтоватый цвет. В мясе животных, тяжело больных, убитых в агональном состоянии, или павших, лимфоузлы на разрезе имеют сиренево-розовую окраску. Кроме того, в зависимости от заболеваний в лимфоузлах будут обнаруживаться их увеличение, различные формы воспалительных процессов, кровоизлияния, некрозы, гипертрофии.

Наличие гипостазов. Под гипостазами понимают посмертное и предсмертное при длительной агонии перераспределение (стекание) крови в нижележащие части тела. Пропитываются кровью в большей степени ткани на той стороне тела, на которой лежало больное животное. То же самое наблюдается на парных органах (почки, легкие). Гипостазы не следует путать с кровоподтеками. Кровоподтеки возникают в подкожной клетчатке в результате нарушения целостности кровеносных сосудов вследствие ушибов. Они имеют локальный и поверхностный характер, а гипостазы диффузный (разлитой) и при гипостазах кровью инфильтрируется и глубокие слои тканей. Гипостазы могут образовываться не только после смерти животного, но еще при жизни. Они могут образовываться при длительно протекающей агонии, когда у животного ослаблена сердечная деятельность и кровь постепенно застаивается в ниже лежащих участках тела. Таким образом, обнаружение гипостазов свидетельствует о том, что мясо получено от павшего животного, которое пролежало в неразделанном виде определенное время, либо от животного находившегося в состоянии длительной агонии. Если же животное находилось в агональном состоянии непродолжительное время и было прирезано, то гипостазы могут отсутствовать. Поэтому отсутствие гипостазов еще не есть показатель того, что, мясо получено не агонирующего животного.

Выяснение факта получения мяса от животных, находившихся в агональном состоянии или павших имеет принципиальное значение, так как такое мясо является опасным для здоровья человека и согласно ветеринарному законодательству в пищу не допускается и подлежит утилизации или уничтожению.

Проба варкой. Мясо, полученное от тяжело больных, находящихся в состоянии агонии или павших животных можно в определенной степени выявить при помощи органолептического метода, так называемой пробы варкой. Для этого 20 гр. измельченного мяса до состояния фарша помещают в коническую колбу на 100 мл., заливают 60 мл. дистиллированной воды, перемешивают, закрывают часовым стеклом, ставят в кипящую водяную баню и нагревают до 80-85єС, до появления паров. Затем приоткрывают крышку и определяют запах и состояние бульона. Бульон из мяса тяжело больных, агонирующих или павших животных, как правило, имеет неприятный, или медикаментозный запах, он мутный с хлопьями. И наоборот, бульон из мяса здоровых животных имеет приятный, специфический мясной запах и он прозрачный. Пробовать на вкус не рекомендуется.

...