Гемограмма и лейкоцитарная формула, методы их подсчета, сравнительная характеристика у домашних и диких животных

Кровь -- это биологическая жидкость организма, состоящая из плазмы и клеток крови. К клеткам крови, или ее форменным элементам, относятся эритроциты, лейкоциты и тромбоциты.

Лейкоциты, или «белые кровяные тельца» (Л, White Blood Cells, WBC) -- это гетерогенная группа ядросодержащих клеток периферической крови, отвечающих за функцию иммунитета. Лейкоциты в окрашенных по Романовскому мазках крови различаются по форме ядра (округлое или сегментированное), цвету цитоплазмы, наличию или отсутствию зернистости и ее характеру. В зависимости от наличия специфической зернистости все лейкоциты делят на клетки с зернистостью в цитоплазме (гранулоциты) и без зернистости(агранулоциты). Размеры лейкоцитов колеблются между 6мкм (малые лимфоциты) и 14 мкм (моноциты).

К агранулоцитам относят лимфоциты и моноциты.

Лимфоциты являются вторым по численности клеточным типом в крови большинства животных, а у жвачных -первым. Обычно это округлые клетки с круглым, овальным или слегка вытянутым ядром. Цитоплазма этих клеток может содержать небольшое количество неспецифических единичных, чаще мелких, пылевидных, реже крупных, азурофильных (розово-фиолетовых) гранул. Хроматин состоит из гладких зон просветления, перемежающихся с более плотными и глыбообразными образованиями.

Моноциты могут как присутствовать так и остутствовать в периферической крови. Ядра их могут быть овальными, бобовидными, иметь выпуклости и дольчатость. Ядерный хроматин мелкий или кружевной. В серо-голубой цитоплазме содержится множество отдельных вакуолей различного размера.

Термином «гранулоциты» называют три вида клеток,различающихся характером специфической зернистости.

Обильная мелкая бледно-фиолетовая («нейтрофильная») зернистость типична для нейтрофилов. Крупная необильная,темно-фиолетовая («базофильная») зернистость отличает базофилы.

Крупная обильная неравномерная розово-оранжевая, занимающая всю цитоплазму клетки («эозинофильная») зернистость является признаком эозинофилов.

Наиболее многочисленными клетками в периферической крови большинства млекопитающих являются сегментоядерные нейтрофилы. Их ядро разделено перетяжками на 3-5 сегментов либо в виде палочки или дуги (палочкоядерные). Цитоплазма окрашиватеся от светло-голубого до розового, иногда с бледными плохо различимыми пылевидными зернами.

Эозинофилы в периферической крови могут присутствовать в различных количествах либо отсутствовать. Ядра их напоминают ядра нейтрофилов, однако сегментированность не так выражена. Цитоплазма окрашивается в светло-голубой цвет, содержит красноватые или красновато-оранжевые зерна. У собак они округлые, у кошек - палочковидные, у лошадей - крупные округлые или овальные.

Базофилы редко обнаруживаются в периферической крови домашних животных. Ядра их также сегментированы, базофильные зерна могут быть различных размеров.

Лейкоциты выполняют защитную функцию в организме(иммунитет). Выделяют два вида иммунитета -- специфический и неспецифический. Одно из проявлений неспецифического иммунитета -- способность нейтрофилов, моноцитов и тканевых макрофагов (ими становятся моноциты после выхода за пределы кровеносного русла) фагоцитировать с последующим лизисом микробные объекты, токсины и клеточный детрит. Эозинофилы обеспечивают противопаразитарную защиту и участвуют в аллергических реакциях. Базофилы также участвуют в аллергических реакциях, прежде всего IgE-зависимых.

Продолжительность жизни лейкоцитов, как и их внешний вид и функция, весьма различна. Нейтрофилы циркулируют в крови 4-10 ч, далее выходят в ткани. Моноциты циркулируют в крови 72 ч, далее также выходят в ткани, где превращаются в мигрирующие или фиксированные макрофаги.

Процессы разрушения лейкоцитов изучены недостаточно и очень разнообразны. Часть белых клеток гибнет в сосудистом русле и местах воспаления (внедрения патогенного агента) и выводится из организма через желудочно-кишечный тракт, с мочой, слюной и т. д. Большинство лей-коцитов разрушается в легких и селезенке.

В норме все клетки периферической крови являются конечными стадиями дифференцировки определенных рядов кроветворения, не способны к делению, имеют ограниченную продолжительность жизни. Исключение составляют моноциты, превращающиеся после выхода из кровяного русла в тканевые макрофаги./2,3,4/

Анализ гемограммы

Гемограмма - лабораторное исследование периферической крови, представляющее собой качественную и количественную характеристику клеток; включает количество эритроцитов, концентрацию гемоглобина, эритроцитарные индексы, количество лейкоцитов и их относительный состав (лейкоцитарная формула), количество тромбоцитов, СОЭ, морфологическое описание клеток.

Анализ гемограммы включает поэтапное изучение состояния системы эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов на основании оценки данных показателей периферической крови с целями:

- установления типа нарушений в системе форменных элементов крови (наличие анемии, эритроцитоза, лейкоцитоза, лейкопении, лейкоза, тромбоцитоза, тромбоцитопении);

- установления каждого отдельного вида таких нарушений (вида анемии по одному или нескольким из пяти известных критериев;

- вида лейкоцитоза и лейкопении - по типу лейкоцитов, их абсолютному содержанию;

- лейкоза - на основании типирования бластов, что становится возможным при условии знания их этиологии, патогенеза, особенностей картины крови, костного мозга, а также отдельных гематологических симптомов и признаков, как-то: абсолютный и относительный лейкоцитозы и лейкопении, агранулоцитозы, костномозговая недостаточность, сдвиги лейкоцитарной формулы и индекс ядерного сдвига нейтрофилов, лейкемоидные реакции и т.п.;

- распознавания определенных нозологических форм патологии крови, например, анемии Аддисона-Бирмера, анемии Минковского Шоффара, болезни Вакеза и др.;

- предположения характера заболевания и процессов, при которых имеют место установленные гематологические нарушения и их прогнозе.

Анализ гемограммы способствует правильному выбору этиопатогенетической коррекции выявленных гематологических нарушений. /3/

Таблица1

Гемограмма не отражает специфичности патологического процесса, она указывает на характер биологической реакции кроветворных органов. Изменения в гемограмме могут быть во всех группах лейкоцитов. Эозинофилия (увеличение эозинофилов) встречается при многих инфекционных и инвазионных заболеваниях, а также при интоксикациях. В случаях очень тяжелого заболевания эозинофилия переходит в эозинопепию (уменьшение количества эозинофилов). При инфекционных заболеваниях эозинофилия связана с расстройством вегетативной нервной системы, с повышением тонуса блуждающего нерва.

Подсчет количества лейкоцитов

Подсчитывают лейкоциты через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа при затемненном поле, для чего опускают конденсор или суживают диафрагму. Подсчитывают лейкоциты в 100 больших (1600 малых) квадратах расположенных по всей сетке группами по четыре. Считать лейкоциты следует не позже 2-4 ч после взятия крови. Расч?т числа лейкоцитов в 1 мкл (Х) проводят по формуле:

X = т.е. Х = n х 50

где n - число сосчитанных лейкоцитов;

1600 - среднеарифметическое число лейкоцитов в одном малом квадрате;

4000 - во столько раз объ?м одного малого квадрата меньше 1 мкл;

20 - разведение крови.

Ошибка при подсчете составляет в среднем +7 %. Наиболее вероятные источники ошибок: - травмирование тканей ушной раковины при выжимании, выдавливании крови; - неравномерное перемешивание крови; - не очень чистый микрокапилляр и др. /3/

Сравнительная характеристика лейкоцитов у домашних животных

Каждый лабораторный работник должен выявить собственную ошибку путем многократных анализов одной и той же пробы, включая взятие крови. Для выражения количества лейкоцитов в единицах Международной системы (СИ) их число в тысячах следует умножить на 109 . Например, 6,25 х 109 /л.

Табл. 1 Лейкограмма взрослых животных (средние данные), %.

Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов. Клинически болезнь проявляется чаще у животных в возрасте старше 4 лет.

Абсолютное количество лимфоидных элементов в 1 мкл крови определяют путем умножения количества лейкоцитов на общий процент лимфоцитов и молодых клеток в лейкоцитарной формуле и деления полученного произведения на 100. Показатель абсолютного количества лимфоцитов оценивают затем по "лейкозному ключу", указанному в таблице 2.

Количество лейкоцитов и лимфоцитов в 1 мкл крови у здорового, подозрительного по заболеванию и больного лейкозом крупного рогатого скота дает основание, согласно "лейкозному ключу", указанному в таблице, оценивать статус животного по лейкозу.

Если количество лейкоцитов в пробе крови у животного, с учетом возраста, будет меньше числа, указанного во 2-й графе таблицы, то результат исследования на лейкоз считают отрицательным (-).

Таблица 2. "Лейкозный ключ" в диагностике лейкоза у КРС

Повышенное содержание в крови лейкоцитов называется лейкоцитозом. Он может быть физиологическим - после приема корма, тяжелой физической работы, при беременности, болевых раздражениях, эмоциях. В этих случаях лейкоцитоз бывает перераспределительным, за счет поступления лейкоцитов из депо - костного мозга, селезенки, лимфатических узлов, при этом, как правило изменений в лейкограмме не отмечается.

 Уменьшенное количество лейкоцитов (лейкопения) наблюдается при угнетении кроветворной ткани, некоторых заболеваниях - паратифе телят, чуме свиней, при поражении лучистой энергией. В этих случаях наблюдаются существенные изменения и в лейкограмме, т.е. в перераспределении числа разных форм лейкоцитов. Определение количества лейкоцитов и выведение лейкограммы для врача имеет большое диагностическое значение. Живут лейкоциты несколько дней, даже часов и только Т-лимфоциты  - месяцы и годы. Разрушаются в печени и селезенке.

Может искажаться и показатель общего числа лейкоцитов. В подобных случаях при микроскопии окрашенных препаратов обнаруживаются агрегаты тромбоцитов, а также макротромбоциты, которые располагаются как единично, так и в небольших скоплениях. Для достоверного пересчета общего количества лейкоцитов используется камера Горяева.(Приложение1, рис.1а,б.,2,3).

При выявлении более 5 ядерных эритроцитов при подсчете на 100 клеток обычно проводят дополнительное вычисление скорректированного числа лейкоцитов./2,3,4/

В ряде случаев при микроскопии мазков крови выявляются клетки - предшественники эритроцитов и лейкоцитов. Чаще при подсчете лейкоцитарной формулы обнаруживаются оксифильные нормобласты - ядерные клетки, предшественники эритроцитов. Их количество указывается в расчете на 100 лейкоцитов. (Приложение В , рис. 4,5).

В некоторых случаях, при микроскопии мазков венозной крови, обнаруживаются клетки - предшественники лейкоцитопоэза - бластные. В норме бластные клетки присутствуют в костном мозге, их появление в периферической крови является неблагоприятным диагностическим критерием и требует комплексного гематологического обследования животного. Нередко данная цитологическая картина мазка крови сопровождается выраженной анемией и высоким лейкоцитозом. На данном этапе бластные клетки не подлежат дифференциации и, как правило, определяются как недифференцированные бластные клетки. В лейкоформуле данные клетки также указываются в процентном соотношении. Для дальнейшей диагностики и верификации диагноза у кошек, в первую очередь, рекомендовано исключить хронические вирусные инфекции - вирусную лейкемию кошек, вирусный иммунодефицит, а также вирусный перитонит), которые могут давать схожую клиническую картину. /5/

Первоначально, для клинической диагностики, наибольший интерес представляют лабораторно-диагностические показатели анемии, лейкоцитоза и лейкопении.

Особенностью лейкоцитов является то, что они могут самостоятельно двигаться, проходить сквозь стенки капилляров и проникать в межтканевое пространство Образование лейкоцитов (лейкопоэз) проходит в костном мозге и лимфоузлах. Число лейкоцитов в течение дня может изменяться под 89 действием различных факторов, не выходя, однако, за пределы референсных значений.

Физиологическое повышение уровня лейкоцитов (физиологический лейкоцитоз) возникает:

- при поступлении их в кровеносное русло из кровяных депо после при?ма богатой белком пищи у плотоядных, (поэтому желательно проводить анализ натощак);

- после физической нагрузки (не рекомендуются физические усилия до взятия крови);

- во второй половине дня (желательно взятие крови для анализа проводить утром);

- при стрессах; - воздействие физиологических факторов (боль, физическая нагрузка, воздействие солнечного света и УФ-лучей);

- во второй половине беременности и при родах.

Реактивный физиологический лейкоцитоз обеспечивается перераспределением пристеночного и циркулирующего пулов нейтрофилов, мобилизацией костномозгового пула. При стимуляции лейкопоэза под действием инфекционных агентов, токсинов, под действием факторов воспаления и некроза тканей, эндогенных токсинов число лейкоцитов растет за счет увеличения их образования в костном мозге и лимфоузлах. Патологический лейкоцитоз в результате стимуляции лейкопоэза при:

-инфекционно-воспалительных процессах (остеомиелит, пневмония, сепсис, менингит, флегмона, абсцесс, полиартрит, пиелонефрит, перитонит), бактериальной, вирусной или грибковой этиологии;

- интоксикациях, в том числе эндогенные (диабетический ацидоз, эклампсия, уремия, подагра);

- ожогах и травмах; - острых кровотечениях; - оперативных вмешательствах;

- инфарктах внутренних органов (миокарда, легких, почек, селезенки); - злокачественных опухолях;

- глюкокортикоидной терапии;

- острых и хронических анемиях различной этиологии (гемолитическая, постгеморрагическая);

- опухолевых лейкоцитозах: миело- и лимфолейкозах. Снижение числа лейкоцитов (лейкопения) является результатом угнетения функций кроветворных органов, пониженной реактивности организма.

Смена лейкоцитоза лейкопенией при воспалительных и септических заболеваниях служит показателем снижения резистентности организма, ухудшения состояния больного животного. Различают функциональные и органические лейкопении.

Функциональные лейкопении возникают: - при морфологически полноценном костном мозге в результате угнетающего действия различных веществ; - некоторых вирусных и бактериальных инфекциях (грипп, вирусный гепатит, сепсис, милиарный туберкулез);

- дачи сульфаниламидов, левомицетина, анальгетиков, нестероидных противовоспалительных средств, тиреостатиков, цитостатиков; - воздействии ионизирующего излучения;

- лейкопенических формах лейкозов;

- спленомегалии, состоянии после спленэктомии; - гипо- и аплазии костного мозга;

- анафилактическом шоке;

- истощении и кахексии. /1/.

Заключение

Приложение А

Рис.1 А-клетки в камере Горяева

Б. Камера Горяева

Рис 2. Микроскопическая картина лейкоцитоза, окраска по Паппенгейму, х1000

Рис.3 Микроскопическая картина лейкопении, окраска по Паппенгейму, х10

Приложение В

Рис.4 Оксифильные нормобласты в мазке крови. Окраска по Паппенгейму, х1000

Рис.5 Агрегатные и пунктатные тромбоциты в мазке крови кошки. Окраска бриллиантовым крезиловым синим, х1000

Рис 6

Размещено на Allbest.ru