Питательные среды

Размещено на http://www.allbest.ru/

Питательные среды

Питательная среда (culture medium) - субстанция, используемая для лабораторного выращивания организмов. В настоящее время известно множество стандартных биологических питательных сред. Основа многих сред, используемых, в частности, для культивирования бактерий, бактериофагов, личинок дрозофил и т.п. - агар. По набору специфических компонентов могут быть выделены минимальная среда, селективная среда и др.

Питательные среды различают по консистенции - жидкие, полужидкие, плотные (твердые); по происхождению - животного, или растительного происхождения и синтетические питательные среды (определенного состава). Жидкие среды готовят на основе водных растворов каких-либо веществ, чаще всего мясной воды, различных гидролизатов, иногда жидких естественных продуктов (молока, крови и др.). Для получения плотных сред к ним добавляют или агар, или желатин, или силикагель в соответствующих концентрациях. Агар представляет собой полисахарид сложного состава, получаемый из морских водорослей. Он имеет плотную волокнистую структуру. Агар плавится при температуре 100°С, но при охлаждении сохраняет жидкую консистенцию до 45°С.

По назначению питательные среды делятся на: I) обычные широко используемые для выращивания большого числа видов микроорганизмов; II) специальные: 1) для культивирования отдельных видов, не растущих или плохо растущих на обычных средах; 2) дифференциально-диагностические, употребляемые для определения родовых или видовых особенностей исследуемых бактериальных культур (сахаролитических, протеолитических, гемолитических и других свойств); 3) селективные - для выделения микробов одного вида из исследуемого материала (из смеси бактерий разных видов); 4) элективные среды (избирательные); 5) среды обогащения (накопительные), в которых подавляется рост сопутствующих бактерий и беспрепятственно развивается, накапливается искомый вид, содержавшийся в небольшой концентрации.

Из перечисленных искусственных питательных сред широко применяют среды животного происхождения - мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), мясопептонная желатина (МПЖ), и др. К любым питательным средам, применяемым для культивирования микроорганизмов, предъявляются основные общие требования: стерильность, оптимальная реакция среды (рН), наличие в среде необходимых питательных веществ (источники азотистого, углеродного питания, ростовые вещества, минеральные элементы), достаточная влажность (в плотных питательных средах)

Приготовление общеупотребительных питательных сред

Мясопептонный бульон (МПБ) - жидкая питательная среда, прозрачная. Исходным материалом для данной среды служит мясная вода: свежее (парное) нежирное говяжье мясо освобождают от костей, жира, фасций и сухожилий, пропускают через мясорубку или нарезают мелкими кусочками, заливают дистиллированной водой в соотношении 1:2 (на 1 кг мяса 2л воды); экстрагируют 20-24 ч, затем варят 1,5 - 2 ч, выкипающее количество жидкости доливают дистиллированной водой до первоначального объема, фильтруют в бутыли или колбы, закрывают ватно - марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при 1 атм 30 мин. Стерилизованная мясная вода может сохранятся длительное время в сухом, темном прохладном месте.

Для приготовления МПБ к 1 л мясной воды добавляют 1 % пептона и 0,5 % х.ч. NaCl. Для культивирования многих групп бактерий требуется слабощелочная среда (рН 7,2-7,6). Так как мясная вода имеет слабокислую реакцию, при изготовлении МПБ после кипячения (растворения) пептона и NaCl бульон подщелачивают (добавляют небольшое количество 10 - 15% - ного раствора КОН или NaОН), кипятят 2 - 3 мин, проверяют рН электропотенциометром или колориметрически компаратором Михаэлиса.

Мясопептонный агар (МПА) - плотная питательная среда. К МПА добавляют 2-3 % промытого мелко нарезанного агар-агара (безазотистое органическое вещество, получаемое из морских водорослей), нагревают до расплавления агара, доводят до кипения, в горячем виде проверяют рН, затем, если необходимо, устанавливают до нужного уровня, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Чтобы агар не уплотнился, фильтрацию проводят в аппарате Коха при 100 0Сили пользуются специальной металической двустенной воронкой, внутр которой (между стенками) заливается горячая вода. Фильтрованный горячий агар разливают по пробиркам и колбам, стерилизуют 20-30 мин в автоклаве при 1 атм. После стерилизации пробирки с расплавленным МПА раскладывают в наклонном положении, чтобы конец с пробиркой был выше другого, оставляют при комнатной температуре, среда уплотняется, становится твердой. Получается скошенная поверхностьагара, удобная для посева бактерий. Полужидкий мясо-пептонный агар (ПМПА) готовят так же, как МПА, лишь с той разницей, что к МПБ добавляют 0,25 % агара. Кипятят при помешивании до полного расплавления, устанавливают Рн 7,4-7,6, фильтруют в горячем виде, стерилизуют в автоклаве.

Приготовление специальных питательных сред (животного происхождения)

Мясопептонная желатина (МПЖ) к МПБ добавляют 10-20 % желатины, расплавляют ее и в горячем виде устанавливают реакцию среды, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в стерильные пробирки, стерилизуют текучим паром дробно.

Сахарный (глюкозный) МПБ. К обычному МПБ добавляют 1-2 % глюкозы, разливают в стерильные пробирки и колбочки, стерилизуют текучим паром дробно или автоклавируют при 0,5 атм. 20 мин.

Сахарный МПА. К расплавленному и остуженному МПА добавляют 1-2 % глюкозы, разливают в горячем виде, стерилизуют так же, как и глюкозный МПБ.

Кровяной МПА. Асептично полученную дефибринированную кровь лошади (или барана) добавляют к расплавленному и остуженному МПА, осторожно перемешивают врашением колбочки, затем разливают в стерильные чашки Петри. Агар, остывая, уплотняется, чашки ставят в термостат дном вверх для подсыхания. Чтобы получить дефибринированную кровь, кровь берут из яремной вены иглой в стерильный флакон (или колбочку) со стеклянными (фарфоровыми) бусами или шариками, встряхивают осторожно вращательными (круговыми) движениями 15-20 мин, предотвращая свертывание. Фибрин осаждается на бусах.

Дифференциально-диагностические среды.

Среды Гисса. Основой сред Гисса является пептонная вода (0,5 % NaCl, 1 % пептона, растворенного в дистиллированной воде), к которой добавляют 0,5-1 % углевода и 0,5 % индикатора Андредэ, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки (2-4 см), опущенные вверх дном. Стерилизуют текучим паром дробно. Среда бесцветная. Среды Гисса готовят жидкие и полужидкие. Жидкие среды готовят с индикатором Андредэ, представляющий собой раствор кислого фуксина (0,5 г), 16 мл 1 %-ного раствора NaCl в 100 мл дистиллированной воды.

Полужидкие среды (без «газовок») Гисса готовят с индикатором ВР (смесь красителя водного голубого с розоловой кислотой), выпускают в сухом виде. 2 г порошка среды растворяют в 100 мл дистилиллированной воды, разливают в пробирки и стерилизуют при 120 0С - 20 мин.

Селективная и дифференциально-диагностическая среда

Молоко (обезжиренное) - естественная среда животного происхождения. Молоко слегка подщелачивают добавлением 1 %-ной двууглекислой соды, проверяют реакцию лакмусовой бумажкой - легкое посинение ее свидетельствует о слабощелочной реакции молока. Фильтруют, разливают в стерильные пробирки, стерилизуют текучим паром дробно.

Список используемой литературы:

питательная среда мясопептонный агар

1. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии, - Т.С. Костенко, Е.И. Скаршевская, С.С. Гительсон, - Москва ВО «АГРОПРОМИЗДАТ» 1989 г.

2. Микробиология, - Н.Р. Асонов, - Москва, «АГРОПРОМИЗДАТ» 1989 г.

Размещено на Allbest.ru