Влияние стволовых клеток на иммунный ответ у мышей BALB/с, зараженных вирусом лейкоза Раушера и переносимость препаратов субалин.

Размещено на http://www.allbest.ru/

ВЛИЯНИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ИММУННЫЙ ОТВЕТ У МЫШЕЙ BALB/с, ЗАРАЖЕННЫХ ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА РАУШЕРА И ПЕРЕНОСИМОСТЬ ПРЕПАРАТОВ СУБАЛИН И СИЛЬВЕРОЛ

Я. Л. Русакова

С. Н. Магер

В. В. Храмцов

Модель лейкоза Раушера - это модель экспериментального лейкоза вируса Раушера (RLV-вирус), вызывающего у мышей эритробластоз, реже лимфолейкоз или миелолейкоз [1]. Инфекция восприимчивых мышей, таких как BALB/c, вирусом Раушера приводит к быстрой, постоянной виремии, пролиферации эритроидных клеток-предшественников, анемии и спленомегалии [2, 3]. Особенности иммунологического ответа при лейкозе Раушера у мышей изучены недостаточно. Известно, что восприимчивость к лейкемии Раушера контролируют, по крайней мере, два гена. Некоторые исследователи, например В. Morse, указывают на медленное прогрессивное ухудшение эритропоэза у мышей BALB/c, зараженных RLV, развивающуюся гипохромную анемию, неэффективный эритропоэз и инфильтрацию печени, селезенки, периферической крови эритроидными клетками-предшественниками.

В своих работах, посвященных изучению гемопоэза мышей, инфицированных вирусом лейкоза Раушера, de N. J. Both с соавт. наблюдали через 5 дней после заражения возникновение лейкемических островков в красной пульпе, которые быстро распространялись по всей селезенке, и, спустя 3 недели после инфекции, приблизительно 60 % селезенки состояли из больших незрелых эритробластоподобных клеток [6]. Отмечали также тромбоцитопению [7]. Есть исследования, подтверждающие, что важную роль в защите организма против этого ретровируса выполняют макрофаги [8].

В большинстве исследований зараженные мыши умирали спустя 4-6 недель после инфекции, обычно из-за разрыва чрезвычайно увеличенной селезенки. Вирус лейкемии Раушера вызывает иммунодепрессию в организме восприимчивых мышей с ослаблением стимуляции Т-лимфоцитов [9-11] с помощью механизмов, сходных с механизмами вирусов кори, вируса иммунодефицита человека и цитомегаловируса [12].

В вопросах эффективной противолейкозной терапии остается много не изученного. В публикациях появляются сообщения об изучении воздействий препаратов разных групп для терапии опухолей, в том числе лейкозов. В. М. Бергольц, Н.С. Кисляк, В. С. Еремеев [13] изучили и разработали оптимальный вариант лечения лейкоза Раушера в эксперименте на мышах с применением разных комбинаций ЦФ и ПАФ. ЦФ-циклофосфамид, алкилирующее средство, которое оказывает противоопухолевое, цитостатическое, иммунодепрессивное действие. ПАФ - адъювант Фрейда полный - масляная эмульсия, содержащая жирные кислоты и вакцину БЦЖ или липополисахариды микобактерий туберкулеза.

В настоящее время в результате внутрипородного скрещивания выведено много пород и линий мышей, характеризующихся высокой или, наоборот, низкой заболеваемостью спонтанным лейкозом. С учетом этого некоторыми исследователями предпринимались попытки экспериментального воспроизведения лейкоза с последующим применением средств стабилизации или лечения патологического процесса.

Цель исследований - изучить особенности иммунного ответа у мышей, зараженных RLV, на одномоментное введение вируса лейкоза Раушера с мононуклеарными стволовыми клетками, оценить переносимость и воздействие пробиотика субалина и препарата серебра сильверола.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

иммунологический зараженный мышь лейкоз

Работа выполнялась в 2009-2011 гг. в лаборатории экспериментальной хирургии и морфологии ФГУ ННИИПК Росмедтехнологий (зав. лаб. д-р мед. наук, проф. П. М. Ларионов); часть исследований (оценка функциональной активности лимфоидных клеток in vitro при тестировании спонтанной, Т- и В-митоген-индуцированной пролиферации клеток селезёнки) была проведена на базе Научно-исследовательского института клинической иммунологии (д-р мед. наук, ведущий научный сотрудник О. П. Колесникова).

Работа проводилась на 8 группах животных по 12 голов в каждой. Схема постановки включала использование антигена (АГ), стволовых клеток (СК), субалина, сильверола, АГ+СК, АГ+субалин, АГ+ сильверол интактных животных (контроль). Для оценки функциональной активности лимфоидных клеток изучали влияние антигенов на спонтанную и стимулированную митогенами пролиферацию спленоцитов. Пролиферативную активность клеток оценивали по включению Н³- тимидина в ДНК делящихся клеток. Результаты оценивали в имп/мин. на 100x10³ клеток, подсчитывали средние значения по триплету. Оценку данных проводили в абсолютных значениях.

Методом микроскопирования в крови определяли абсолютное количество лейкоцитов и эритроцитов с последующим выведением лейкоцитарной формулы. Были выведены кривые летальности мышей. Наблюдение за мышами проводили в течение 11 мес.

Статистическую обработку полученных данных проводили методом подсчета средних арифметических (М), стандартных ошибок (m). В таблицах информация представлена в виде M ± m. Уровень значимости различий вариационных рядов оценивали параметрическим t- критерием Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 1. Кривая летальности мышей групп «Сильверол», «АГ+сильверол»

Рис. 2. Кривая летальности мышей групп «Субалин», «АГ+субалин»

Рис 3. Кривая летальности мышей групп «АГ», интактные (контроль), «СК», «АГ+СК»

Была экспериментально воспроизведена хроническая форма лейкоза Раушера мышей. Путем пальпаторного метода исследования определяли размеры селезенки (2 раза в неделю). В группе «АГ » увеличение селезенки у животных произошло на 4-й неделе после заражения. Такие же изменения были зарегистрированы у мышей в группе «АГ+ субалин». Животные, которым вводили сильверол, погибли в течение первых двух суток с явлениями перитонита. Животные, зараженные вирусом, гибли постепенно в течение 11 мес, начиная с 25-го дня после заражения. К этому сроку наблюдения (11 мес), летальность этой группы составила 100 %. В группе «АГ+СК» первое животное погибло через 3 мес после заражения, другие в последующем в течение 9 мес. В группе «СК» выживаемость животных составила 100 %. В группе «Субалин» в течение 2,5 мес погибло 58,3 % животных. Примерно такая же летальность наблюдалась в группе «АГ+ субалин» за этот же период времени. В дальнейшем оставшиеся 5 животных (41,7 %) из группы «Субалин», сохраняли стабильно удовлетворительное состояние на протяжении всего времени наблюдения.

Таким образом, мы наблюдали гибель животных, которым вводили сильверол, хроническое развитие лейкоза Раушера у животных, которым вводили вирус, и некоторую задержку гибели у мышей, которым вместе с вирусом Раушера вводили стволовые клетки.

Результаты гематологического исследования экспериментальных животных методом световой микроскопии представлены в табл. 1.

Таблица 1 Средние показатели лейкоцитарной формулы в мазках крови мышей BALB/c (расчет в% от 100 клеток)