Стволовые клетки и молекулярная биология

Таким образом, введение новых генов в стволовые клетки (генная терапия) раскрывает новые возможности для регенеративной медицины.

11. Инжиниринг контроля стволовых клеток

Существует значительный интерес к изучению стволовых клеток, как к их базовым биологическим функциям в течение развития и взрослого состояния, так и к вопросам их использования в качестве нового источника специализированных клеток для восстановления ткани. Является ли мотивацией исследования фундаментальная биология или биомедицинское приложение, прогресс зависит от изучения того, как лучше контролировать функции стволовых клеток на количественном и молекулярном уровне.

Существует несколько важнейших проблем в поле исследования, включая идентификацию новых сигналов и выявление условий, которые регулируют и влияют на клеточную функцию, и приложение этой информации для дизайна биопроцессов стволовых клеток и терапий. Оба эти направления могут получить значительную выгоду от синтеза биологических данных в количественные и все более механистичные модели, которые не только описывают, но также предсказывают, как окружение стволовых клеток может контролировать их судьбу.

Ранние модели контроля стволовых клеток использовали допущение, что судьба стволовых клеток определяется стохастическими, самоинициирующимися процессами, теперь появились гибридные детерминистско - стохастические модели с увеличивающимся молекулярным разрешением, которые описывают регуляцию окружением. По мере того, как понимание механизмов клеточного контроля расширяется от клеточной поверхности по направлению к ядру, эти усилия могут найти кульминацию в развитии программы культуры стволовых клеток, или серии сигналов, обеспечивающих определенную траекторию развития, как функцию времени/29/.

Таким образом, ранние модели контроля стволовых клеток использовали допущение, что судьба стволовых клеток определяется стохастическими, самоинициирующимися процессами, теперь появились гибридные детерминистско-стохастические модели с увеличивающимся молекулярным разрешением. Эти усилия могут найти кульминацию в развитии программы культуры стволовых клеток.



12. Влияние трансгенных технологий на функциональную геномику

Технологии переноса генов у млекопитающих находятся в фокусе возобновившегося интереса из-за последнего акцента на анализе функции гена в постгеномную эру. Тремя важными направлениями развития в этой области являются трансгеника, гены- мишени и пересадка ядер или клонирование животных. Эти технологические инновации увеличили нашу способность анализировать функцию гена на уровне целого организма и обеспечили средства для модификации экспрессии гена. Представлены различные приложения и технологии, включая инжиниринг хромосом, стволовые клетки и генные ловушки. Влияние мышиных технологий и геномики на функциональный анализ также обсуждается/42/

Получение взрослых животных путем ядерного клонирования из взрослых донорских клеток чрезвычайно неэффективно, поскольку большинство клонов гибнет вскоре после имплантации. Напротив, клонирование из ядер эмбриональных стволовых клеток значительно более эффективно, чем из взрослых донорских клеток.

Однако, независимо от типов донорских клеток, все клоны, которые выживают до рождения, не страдают серьезными ненормальностями фенотипа или экспрессии генов. Все имеющиеся данные согласованы с взглядом, что все аномальные фенотипы клонированых животных вызваны поврежденным эпигенетическим репрограммированием донорского ядра. Дефектное репрограммирование, по-видимому, вызвано самим процессом клонирования, также как и эпигенетическим состоянием донорского ядра. По контрасту с репродуктивным клонироваием дефектное репрограммирование донорского ядра не имеет тенденции вмешиваться в приложения технологии переноса ядер для терапевтических целей (терапевтическое клонирование)/18/.

Пути прямого превращения одной соматической клетки в другую (процесс, известный, как трансдифферецировка) облегчит трудности, связанные с современными процедурами трансплантации ядер и будет полезен для получения клеток для замещения в терапевтических целях. Было показано, что взрослые стволовые клетки имеют более широкий дифференцировочный потенциал, чем предполагалось, и могут преобразовываться в другие ткани, чем те, в которых они являются резидентами. Кроме того, новые стратегии трансдифферецировки были развиты. Приводится иллюстрация функционального репрограммирования соматической клетки с использованием ядерных и цитоплазматических экстрактов из другого соматического клеточного типа.

Репрограммирование 293T фибробластов в экстракте из Т клеток засвидетельствовано поглощением ядра, сборкой транскрипционных факторов, индукцией активности хроматинового ремоделирующего комплекса, изменениями в композиции хроматина и активации, специфичных для лимфоидной ткани генов. Репрограммированные клетки экспрессировали специфичные для Т клеток поверхностные молекулы и комплекс регуляторных функций.

Мы предположили, что in vitro клеточное репрограммирование может создать возможности для получения изогенных клеток для замещения в терапевтических приложениях. Система также, похоже, создает мощный инструмент для изучения механизмов ядерного репрограммирования, как это происходит in vitro/15/.

Таким образом, для анализа функции гена в настоящее время используются новейшие технологии: трасгенику, гены - мишени и пересадку ядер или клонирование животных.



13. Сигнальная трансдукция у стволовых клеток

Вместе со своим лигандом, фактором стволовых клеток, рецептор тирозин-киназы c-Kit является ключевым контролируюшим рецептором для некоторых клеточных типов, включая гематопоэтические стволовые клетки, тучные клетки, меланоциты и зародышевые клетки.

Мутации в c-Kit были описаны в некоторых опухолях человека, включая тестикулярную герминому, острую миелоидную лейкемию и желудочно - кищечные опухоли.

Стимуляция c-Kit его лигандами ведет к димеризации рецепторов, активации его внутренней тирозин - киназной активности и фосфорилированию ключевых тирозиновых остатков в рецепторе. Эти фосфорилированные тирозиновые остатки служат как места связывания для некоторых сигнальных трансдуцирующих молекул, содержащих Src гомологичные 2 домены, которые таким образом рекрутируются рецептором и активируются много раз путем фосфорлирования репецтора/37/.

Таким образом, вместе со своим лигандом, фактором стволовых клеток, рецептор тирозин-киназы c-Kit является ключевым контролируюшим рецептором для некоторых клеточных типов, включая гематопоэтические стволовые клетки.



14. Маркеры и механизмы трансплантационной толерантности

Трансплантационная толерантность может быть индуцирована у взрослых грызунов путем использования монклональных антител против корецептора или костимулирующих молекул на поверхности Т клеток. В настоящее время выделено две хорошо охарактеризованных популяции Т клеток, демонстрирующих регуляторную способностью: ”натуральные ” CD4+CD25+ Т клетки и продуцирующие иинтерлейкин_10 Tr1 клетки.

Хотя оба типа регуляторных Т клеток могут индуцировать трансплантационную толерантность при определенных условиях, не ясно играет ли они какую-то роль в индуцированной лекарством доминантной толерантности, в первую очередь из-за отсутствия точно определенных молекулярных или функциональных маркеров.

Сходно с этим, хотя дендритные клетки могут быть фармакологически манипулируемы для достижения толерантности, фенотип таких популяций остается плохо определенным. Использовался серийный анализ экспрессии генов с 29 различными Т - клетками и библиотеками антиген - презентирующих клеток для определения экспрессии генов, связанной с иммунной регуляцией.

Найдено, что независимо полученные, регуляторные сходные с Tr1 клоны были высоко согласованы, в их образцах экспрессии генов с совершенно отличными CD4+CD25+ регуляторными Т клетками из селезенки. Дендритные клетки, обработанные индуцирующим толерантность агентами IL-10 или витамином D3, демонстрировали экспрессию генов, отражающую функциональную специализацию общую с наиболее незрелыми дендритными клетками, полученными от эмбриональных стволовых клеток/7/.

Таким образом, в настоящее время выделено две хорошо охарактеризованных популяции Т клеток, демонстрирующих регуляторную способность: ”натуральные ” CD4+CD25+ Т клетки и продуцирующие иинтерлейкин_10 Tr1 клетки. Оба типа регуляторных Т клеток могут индуцировать трансплантационную толерантность. Дендритные клетки также, по - видимому, участвуют в достижении толерантности,



15. Регенерация у амфибий и стволовые клетки

Головастики и взрослые особи хвостатых амфибий и лягушачьи головастики регенерируют свои конечности через процесс гистолиза и дедифференцировки зрелых клеток, локализованных на поверхности ампутации, которые накапливаются под эпителием раны как бластема стволовых клеток.

Эти стволовые клетки нуждаются в ростовых и трофических факторах из апикальной эпидермальной шапочки (чехла) и нервах, которые реиннервируют бластему и необходимы для их выживания и пролиферации стволовых клеток. Члены семейства факторов роста фибробластов, синтезируемые как апикальным эпидермальным чехлом, так и нервами, фактор роста глии, субстанция P, и трасферрин нервов являются предполагаемыми факторами выживания и пролиферации.

Стволовые клетки из фибробластов и мышечных клеток могут трансдиференцироваться в другие клеточные типы при регенерации. Регеририрующая бластема является самоорганизующейся системой, основанной на позиционной информации, наследованной от родителей клетками конечностей. Ретиноиды, действующие чрез ядерные рецепторы, были использованы совместно с Assays для клеточной адгезии для того, чтобы показать, что позиционная идентичность клеток бластемы закодирована на клеточной поверхности.

Эти молекулы участвуют в сети сигнализации от клетки к клетке, которая восстанавливает исходную структуру конечности. Другими интересными системами, которые регенерируют путем гистолиза и дедифферецировки пигментированных эпителиальных клеток, являются нейрональная ретина и хрусталики.

Члены семейства факторов роста фибробластов также важны для регенерации этих структур. Механизм регенерации у амфибий путем дедифференцировки важен для развития регенеративной медицины, поскольку понимание этого механизма может предложить идеи, как мы можем химически индуцировать регенерацию тканей млекопитающих/46/.

Таким образом, регенерация конечностей у амфибий проходит с участием стволовых клеток.



16. Регуляция теломеразы

В большинстве соматических клеток человека отсутствует теломеразная активность, поскольку они не экспрессируют гена теломеразы обратной траскриптазы. Наоборот, большинство опухолевых клеток экспрессируют теломеразу и являются положительными по теломразе.

Для большинства опухолей не ясно, связана ли экспрессия теломеразы с их происхождением от теломеразоположительных стволовых клеток или происходит из определимых ядерных и цитоплазматических теломераз; у теломераза - положительных клеток от 0,2 до 6 мРНК молекул/ клетку может быть определено.

Это заставляет предполагать, что экспрессия регулируется изменениями в скорости транскрипции гена теломеразы. В опухолевых клетках экспрессия теломеразы ведет себя как рецессивная черта, указывая, что отсутствие экспрессии в нормальных клетках связано с наличием одного или нескольких репессоров.

Исследования с монохромосомными гибридами указывают, что несколько хромосом могут кодировать такие репесоры. Несколько факторов транскрипции, супрессоров опухолей, ингибиторов клеточного цикла, молекул, детерминирующих клеточную судьбу, рецепторов гормонов и вирусных белков участвуют в контроле экспрессии теломеразы; но эти исследования еще не дали ясного объяснения для специфической экспессии опухолями гена теломеразы, и cis-действующиих элементы, которые являются мишенями репрессии в нормальных клетках, еще должны быть индентифицированы/10/.

Теломераза является рибонуклеопротеином, который катализирует добавление TTAGGG повторов к теломерам, повторяющимся структурам ДНК, найденным на концах линейных хромосом. Большая часть соматических тканей человека не проявляет теломеразной активности и претерпевает укорочение теломерных последовательностей при каждом клеточном делении. Это сокращение теломеров приводит к репликативному старению in vitro и, вероятно, in vivo.

Теломеразная активность присутствует в большинстве опухолей, предотвращая сокращение теломеров и поэтому обеспечивая неограниченные деления клеток. Теломеразная активность регулируется в течение развития человека, претерпевая подавление почти во всех системах органов от эмбриогенеза и далее.

Однако регулируемая активность теломеразы обнаруживается в базальных/стволовых клеточных компартментах высоко регенерирующих тканях, таких, как иммунная система, кожа и кишечник. Виды птиц демонстрируют репрессию теломеразы и сокращение теломеров, сходное с таковым у человека. Однако грызуны сохраняют теломераза - компетентность на протяжении всей жизни и у них не было обнаружено сокращение теломеров после клеточных делений. Регулирование теломеразной активности у растений менее понятно, хотя ранние указания предполагают повсеместную компетентность/13/.

Потеря теломеразного равновесия и связанной с ним хромосом - геномной нестабильности могут способствовать развитию опухолей. Теломерная функция может иметь контрастирующие роли: запускать последовательность событий репликации и способствовать опухолегенезу, и эти роли могут варьировать между клеточными типами в зависимости от экспрессии энзима теломеразы, уровня индуцированных мутаций и эффективности/дефектности, связанных с репарацией ДНК путей.

Идентифицирован альтернативный механизм поддержания теломеров в мышиных эмбриональных стволовых клетках, у которых отсутствует теломеразный РНК сайт (mTER), методом амплификации нетеломерных последовательностей, смежных с существующими короткими участками теломерных повторов.

Это исследование по идентификации теломераза - независимых или альтернативных механизмов, участвующих в поддержании (сохранении) теломеров в клетках млекопитающих, показало участие потенциальных факторов репарации ДНК в таких путях. Мыши, дефицитные по сенсорной молекуле ДНК - разрыва, PARP-1 (поли [АДФ] - рибополимераза), увеличивали уровни хромосомной нестабильности, связанной с экстенсивным сокращением теломеров.

Ku80 нулевые клетки показали сокращение теломеров, связанное с экстенсивным слиянием концов хромосомы, в то время Ku80+/-клетки показывавали промежуточный уровень сокращения теломеров. Инактивация PARP-1 в p53-/-клетках приводила к дисфункциональным теломерам и выраженной хромосомной нестабильности, ведущей к увеличению встречаемости опухолей у мышей. Интересно, что гаплонедостаточность PARP-1 в Ku80 нулевых клетках вызывала более выраженное сокращение теломеров и хромосомные аберрации по сравнению либо с PARP-1 или Ku80 единичных нулевых клеток, а у Ku80+/-PARP-/- развивались спонтанные опухоли /16/.

Теломеры, концы линейных хромосом, сокращаются с каждым циклом ДНК репликации. Потеря теломерных ДНК ведет к старению, состоянию в котором клетки уже не делятся, и кризису, который запускает клеточную смерть. Для предотвращения этого феномена, раковые и стволовые клетки должны сохранять свои теломеры, например, экспрессируя теломеразу, энзим, который расширяет теломеры. По мере того, как наши знания о сохранении теломеров расширяются, открываются возможности для применения биологии теломеров в клинической медицине.

Области текущих исследований включают развитие диагностических и прогностических маркеров рака; создание хемотерапевтических агентов, основанное на ингибировании теломераз, иммунный ответ на теломеразу, основанная на теломеразе генная терапия; инжиниринг омоложенных тканей путем восстановления экспрессии теломераз /49/.

Эпигенетика изучает стойкие изменения, влияющие на геном особи в течение развития и старения, но не обязательно передающиеся следующим поколениям. Среди этих наиболее хорошо изученных эпигенетических изменений - уменьшение концов хромосомы или теломеров. Теломеры являются специализированными структурами, состоящими из характеристических повторов ДНК последовательностей и комплекса ассоциированных белков, которые покрывают и защищают концы хромосомы и служат для сохранения целостности генома. В большинстве соматических клеток последовательные циклы клеточных делений связаны с уменьшением длины теломеров.

Такое прогрессивное изнашивание длины теломеров приводит к потери способности к репликации (клеточное старение). С целью предотвратить зародышевую линию и субпопуляцию стволовых клеток от старения, возникли механизмы, препятствующие износу теломеров в этих клеточных компартментах. Наиболее общим и хорошо изученным механизмом является активация рибонуклеопротеинового энзиматического комплекса, известного, как теломераза.

Активность теломеразы предотвращает потерю репликативной способности путем сохранения длины теломеров и интергальности хромосом. Поэтому детальные исследования механизмов, управляющих активностью теломеразы, были проведены при развитии и дифференцировке. Раннее эмбриональное развитие и клеточная дифференцировка связаны с прогрессивным уменьшением теломеразной активности. Это уменьшение активности принципиально опосредовано на уровне промотора для гена, кодируюшего каталитическую субъединицу теломеразного комплекса.

Выяснение деталей механизма, участвующего в регулировании длины тепломеров и теломеразной активности будут иметь важные и далеко идущие приложения в понимании многих аспектов здоровья и болезни человека, начиная от синдромов ускоренного старения до патогенеза рака среди прочих. Более того, результаты исследований в этой области, вероятно, найдут в будущем приложение в развитии стратегий для предотвращения клеточного старения в регенеративной медицине и терапии стволовыми клетками /47/.

Теломеры являются терминальными концами хромосом и состоят из повторяющихся последовательностей TTAGGG. Хромосомы теряют небольшое количество дезокисрибонуклниновой кислоты (ДНК) после каждого клеточного деления. Гипотетическая функция теломерной ДНК состоит в разрешении только конечного числа клеточных делений без потери функциональных генов.

Вторая предложенная функция теломерной ДНК - это предотвращение нежелательных взаимодействий между концами хромосом и клеточными энзимами репарации. В клетках, сохраняющих способность к пролиферации, таких, как стволовые клетки и раковые клетки, длина теломеров поддерживается обратной транскриптазой, теломеразой. Каждый значительный тип человеческих опухолей изучался на теломеразную активность, и приблизительно от 80% до 90% продемонстрировали присутствие теломеразы. В данной статье мы обозреваются существующие методы определения теломеразы и обсуждаются их сильные и слабые стороны /3/ .

Теломераза является энзимом, который удлиняет теломерные повторы, специализированные структуры концов хромосом, которые обеспечивают стабильность генома и компенсируют физиологический процесс сокращения теломеров. Он участвует в клеточном старении, бессмертии и канцерогенезе. Более 85% человеческих опухолей и 95% немиелоцитных раков кожи показывают теломеразную активность по контрасту с нормальными тканями. Это заставляет предположить, что теломеразная активность может играть важную роль в канцерогенезе.

Последние исследования показывают, что теломераза активна не только в эмбриональных тканях и тканях зародышевой линии, но также в некоторых нормальных тканях. В коже эта активность была прослежена у содержащего стволовые клетки базального эпидермального клеточного слоя, что, возможно, отражает присутствие теломераза - компетентных стволовых клеток. Эти открытия требуют пересмотра интерпретации теломеразной активности в опухолях кожи и других тканей. Поскольку причинная связь между теломеразной активностью и опухолями еще не продемонстрирована, требуется некоторая осторожность в выводах /26/.

Таким образом, стволовые клетки, как и опухолевые клетки, содержат фермент теломеразу, которая позволяет сохранить теломерные концевые участки хромосом, которые сокращаются при каждом клеточном делении, что приводит в конце концов к смерти клеток.



Заключение

С помощью молекулярной биологии достигнут большой прогресс в понимании основных вопросов биологии стволовых клеток: самообновления и дифференцировки, а также управления ими. Следует отметить, что новейшие методы молекулярной биологии, например, интерференция РНК, сразу же находят применение в молекулярной биологии стволовых клеток и оказываются весьма продуктивными.



Литература

1.Avots A, Harder F, Schmittwolf C, Petrovic S, Muller AM. Plasticity of hematopoietic stem cells and cellular memory. Immunol Rev. 2002;187:9-21

2.Bapat SA, Mishra GC. Stem cell pharmacogenomics. Curr Top Med Chem. 2004;4(13):1371-83.

3.Blechner MD, Mandavilli SR, Tsongalis GJ. Measuring telomerase activity for the early detection of cancer. Conn Med. 2001 ;65(11):643-8.

4.Bunting KD, Hawley RG. Integrative molecular and developmental biology of adult stem cells. Biol Cell. 2003;95(9):563-78.

5.Cavaleri F, Scholer HR. Nanog: a new recruit to the embryonic stem cell orchestra. Cell. 2003;113(5):551-2.

6.Chambers I. The molecular basis of pluripotency in mouse embryonic stem cells. Cloning Stem Cells. 2004;6(4):386-91.

7.Cobbold SP, Nolan KF, Graca L, Castejon R, Le Moine A, Frewin M, Humm S, Adams E, Thompson S, Zelenika D, Paterson A, Yates S, Fairchild PJ, Waldmann H. Regulatory T cells and dendritic cells in transplantation tolerance: molecular markers and mechanisms. Immunol Rev. 2003;196:109-24.

8.Czyz J, Wobus A. Embryonic stem cell differentiation: the role of extracellular factors. Differentiation. 2001;68(4-5):167-74.

9.Davidson EH, Rast JP, Oliveri P, Ransick A, Calestani C, Yuh CH, Minokawa T, Amore G, Hinman V, Arenas-Mena C, Otim O, Brown CT, Livi CB, Lee PY, Revilla R, Rust AG, Pan Z, Schilstra MJ, Clarke PJ, Arnone MI, Rowen L, Cameron RA, McClay DR, Hood L, Bolouri H. A genomic regulatory network for development. Science. 2002 Mar 1;295(5560):1669-78.

10.Ducrest AL, Szutorisz H, Lingner J, Nabholz M. Regulation of the human telomerase reverse transcriptase gene. Oncogene. 2002 Jan 21;21(4):541-52.

11.Era T. Bcr-Abl is a "molecular switch" for the decision for growth and differentiation in hematopoietic stem cells. Int J Hematol. 2002; 76(1):35-43.

12.Faubert A, Lessard J, Sauvageau G. Are genetic determinants of asymmetric stem cell division active in hematopoietic stem cells? Oncogene. 2004 ;23(43):7247-55.

13.Forsyth NR, Wright WE, Shay JW. Telomerase and differentiation in multicellular organisms: turn it off, turn it on, and turn it off again. Differentiation. 2002 Jan;69(4-5):188-97.

14.Flickinger RA. Transcriptional frequency and cell determination. J Theor Biol. 2005;232(2):151-6.

15.Hakelien AM, Collas P.Novel approaches to transdifferentiation. Cloning Stem Cells. 2002;4(4):379-87.

16.Hande MP. DNA repair factors and telomere-chromosome integrity in mammalian cells. Cytogenet Genome Res. 2004;104(1-4):116-22.

17.Hutchison CJ, Worman HJ. A-type lamins: guardians of the soma? Nat Cell Biol. 2004;6(11):1062-7.

18.Jeanisch R, Eggan K, Humpherys D, Rideout W, Hochedlinger K. Nuclear cloning, stem cells, and genomic reprogramming. Cloning Stem Cells. 2002;4(4):389-96.

19.Joshi C, Enver T. Molecular complexities of stem cells. Curr Opin Hematol. 2003;10(3):220-8.

20.Kaminski N, Friedman N. Practical approaches to analyzing results of microarray experiments. Am J Respir Cell Mol Biol. 2002;27(2):125-32.

21.Kassem M. Mesenchymal stem cells: biological characteristics and potential clinical applications. Cloning Stem Cells. 2004;6(4):369-74.

22.Kassem M, Kristiansen M, Abdallah BM. Mesenchymal stem cells: cell biology and potential use in therapy. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2004;95(5):209-14.

23.Larochelle A, Dunbar CE. Genetic manipulation of hematopoietic stem cells. Semin Hematol. 2004 ;41(4):257-71.

24.Lessard J, Faubert A, Sauvageau G. Genetic programs regulating HSC specification, maintenance and expansion. Oncogene. 2004;23(43):7199-209.

25.Liang Y, Van Zant G. Genetic control of stem-cell properties and stem cells in aging. Curr Opin Hematol. 2003 May;10(3):195-202.

26.Lubbe J, Nakazawa H, Burg G. Telomerase. Hautarzt. 1997 ; 48(9):615-21.

27.Martin-Rendon E, Watt SM. Exploitation of stem cell plasticity. Transfus Med. 2003;13(6):325-49.

28.Musina RA, Egorov EE, Beliavskii AV. Stem cells: properties and perspectives of therapeutic use. Mol Biol . 2004;38(4):563-77.

29.O'Neill A, Schaffer DV. The biology and engineering of stem-cell control. Biotechnol Appl Biochem. 2004;40(Pt 1):5-16.

30.Pan GJ, Chang ZY, Scholer HR, Pei D. Stem cell pluripotency and transcription factor Oct4. Cell Res. 2002;12(5-6):321-9.

31.Perez-Iratxeta C, Palidwor G, Porter CJ, Sanche NA, Huska MR, Suomela BP, Muro EM, Krzyzanowski PM, Hughes E, Campbell PA, Rudnicki MA, Andrade MA. Study of stem cell function using microarray experiments. FEBS Lett. 2005; 579(8):1795-801.

32.Pomerantz J, Blau HM. Nuclear reprogramming: a key to stem cell function in regenerative medicine. Nat Cell Biol. 2004 ; 6(9):810-6.

33.Rao RR, Stice SL. Gene expression profiling of embryonic stem cells leads to greater understanding of pluripotency and early developmental events. Biol Reprod. 2004;71(6):1772-8.

34.Rasmussen TP. Embryonic stem cell differentiation: a chromatin perspective. Reprod Biol Endocrinol. 2003;1(1):100.

35.Rizzino A. Embryonic stem cells provide a powerful and versatile model system. Vitam Horm. 2002;64:1-42.

36.Robson P. The maturing of the human embryonic stem cell transcriptome profile. Trends Biotechnol. 2004;22(12):609-12.

37.Ronnstrand L. Signal transduction via the stem cell factor receptor/c-Kit. Cell Mol Life Sci. 2004;61(19-20):2535-48.

38.Sauvageau G, Iscove NN, Humphries RK. In vitro and in vivo expansion of hematopoietic stem cells. Oncogene. 2004;23(43):7223-32.

39.Scherr M, Eder M. Modulation of gene expression by siRNA in hematopoietic cells. Curr Opin Drug Discov Devel. 2005;8(2):262-9.

40.Scherr M, Steinmann D, Eder M. RNA interference (RNAi) in hematology. Ann Hematol. 2004 Jan;83(1):1-8.2003

41.Shashikant CS, Ruddle FH. Impact of transgenic technologies on functional genomics. Curr Issues Mol Biol. 2003;5(3):75-98.

42.Snoeck HW. Quantitative trait analysis in the investigation of function and aging of hematopoietic stem cells. Methods Mol Med. 2005;105:47-62.

43.Stadtfeld M, Varas F, Graf T. Fluorescent protein-cell labeling and its application in time-lapse analysis of hematopoietic differentiation. Methods Mol Med. 2005;105:395-412.

44.Steidl U, Kronenwett R, Martin S, Haas R. Molecular biology of hematopoietic stem cells. Vitam Horm. 2003;66:1-28.

45.Stein MI, Zhu J, Emerson SG. Molecular pathways regulating the self-renewal of hematopoietic stem cells. Exp Hematol. 2004 ;32(12):1129-36.

46.Stocum DL.Amphibian regeneration and stem cells. Curr Top Microbiol Immunol. 2004;280:1-70.

47.Tzukerman M, Selig S, Skorecki K. Telomeres and telomerase in human health and disease. J Pediatr Endocrinol Metab. 2002; 15(3):229-40.

48.Uher F, Hajdu M, Vas V. Self-renewal and differentiation of hematopoietic stem cells: a molecular approach (a review). Acta Microbiol Immunol Hung. 2003;50(1):3-21.

49.Ulaner GA. Telomere maintenance in clinical medicine. Am J Med. 2004;117(4):262-9.

50.Wall NR, Shi Y. Small RNA: can RNA interference be exploited for therapy? Lancet. 2003;362(9393):1401-3.

51.Young HE, Duplaa C, Romero-Ramos M, Chesselet MF, Vourc'h P, Yost MJ, Ericson K, Terracio L, Asahara T, Masuda H, Tamura-Ninomiya S, Detmer K, Bray RA, Steele TA, Hixson D, el-Kalay M, Tobin BW, Russ RD, Horst MN, Floyd JA, Henson NL, Hawkins KC, Groom J, Parikh A, Blake L, Bland LJ, Thompson AJ, Kirincich A, Moreau C, Hudson J, Bowyer FP 3rd, Lin TJ, Black AC Jr. Adult reserve stem cells and their potential for tissue engineering. Cell Biochem Biophys. 2004;40(1):1-80.

52.Zhu J, Emerson SG. Hematopoietic cytokines, transcription factors and lineage commitment. Oncogene. 2002;21(21):3295-313.

53.Zou GM, Yoder MC. Application of RNA interference to study stem cell function: current status and future perspectives. Biol Cell. 2005; 97(3): 211-9.

54.Zou GM, Yoder MC. Application of RNA interference to study stem cell function: current status and future perspectives. Biol Cell. 2005; 97(3): 211-9.

Размещено на Allbest.ru

...