Взаємодія антиген-антитіло в умовах поверхневого плазмонного резонансу та застосування цього явища для визначення вірусспецифічних макромолекул
Аналіз взаємодії білкової молекули з модифікованою поверхнею сенсора в залежності від рН середовища на прикладі соєвого інгібітора трипсину. Розробка методу визначення вірусу тютюнової мозаїки і білків з використанням поверхневого плазмонного резонансу.
| Рубрика | Биология и естествознание |
| Вид | автореферат |
| Язык | украинский |
| Дата добавления | 27.07.2014 |
| Размер файла | 49,3 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Установлено, что как иммобилизация антивирусных иммуноглобулинов, так и связывание ними ВТМ происходит согласно недиффузно-ограниченной модели Лангмюра второго порядка, что характеризует процесс данного взаимодействия как постепенный, сопровождающийся реорганизацией компонентов монослоя в процессе его формирования.
Разработан и опробован на примере вируса табачной мозаики общий подход к выявлению и количественному определению вирусов методом ППР с помощью специфических антител, иммобилизированных на модифицированной KNCS и белком А St. aureus поверхности сенсора. На примере культуры зеленой водоросли Bracteаcoccus minor, инфицированной ВТМ на стадии зооспор, показано, что такая модификация поверхности сенсора позволяет адекватно определять вирус в клеточных гомогенатах, что подтверждено методами ИФА и световой микроскопии. Показано, что со временем количество вируса в культуре уменьшается.
На модели гексона аденовируса типа 2 и структурного белка Х-вируса картофеля показана возможность использования предложенного подхода для определения вирусных белков. Специфичность и активность антигексоновой сыворотки были определены непрямым методом флюоресцирующих антител. Было показано, что гексон Ад2 связывается со специфичной антисывороткой на поверхности сенсора, последовательно обработанной KNCS и белком А St. аureus. При этом уровень сигнала остается стабильным и после промывания поверхности сенсора буфером, что свидетельствует о том, что связывание состоялось. Титр очищеннях IgG против структурного белка ХВК был определен методами двойной иммунодиффузии в геле и ИФА. Поскольку в связи с небольшими размерами структурного белка ХВК его наличие не выявляется непосредственно, полученный комплекс был допоолнительно обработан IgG, специфичными к структурному белку ХВК. Отклик ППР, полученный при этом, и достаточный уровень сигнала, остающийся после промывания поверхности сенсора буфером, свидетельствует о возможности выявления белка таким способом.
Предложена новая оригинальная процедура количественного определения ви руса путем иммобилизации комплекса специфические IgG-вирус на модифицированную тиоцианатом и белком А поверхность сенсора. При этом величина отклика ППР зависит не только от эффективной толщины образуемых на поверхности сенсора молекулярных структур, а и от их плотности. Были реализованы два подхода к определению вируса в растительных гомогенатах таким способом: определение с помощью открытой системы (когда опыт осуществляется в открытой камере и отсутствует циркуляция жидкости) и определение с помощью закрытой проточной системы.
Предложенный поход был реализован на модели очищенный ВТМ-специфические IgG. Полученные концентрационные зависимости были использованы для определения концентрации вируса в культуре Br. minor, инфицированой ВТМ на стадии зооспор. При иммобилизации комплекса специфические IgG-вирус с разными концентрациями вируса в открытой системе была получена зависимость между концентрацией ви руса в образце и QSPR.
Для проточной системы также была проведена иммобилизация комплекса специфические IgG-вирус с разными концентрациями очищеного вируса, а также с исследовавшимися ранее клеточными гомогенатами. Была получена зависимость между концентрацией вируса в образце и QSPR, с помощью которой была определена концентрация вируса в исследуемых образцах, которая составила 6,5 мкг/мл для клеток Br. minor, инфицированных ВТМ на стадии зооспор и 4,5 мкг/мл для клеток Br. minor, инфицированных ВТМ на стадии зооспор и дважды пересеянных.
На примере Nicotiana tabacum при помощи указаного подхода было исследовано развитие вирусной инфекции в растениях. Было получено согласование между даннями ППР и ИФА.
Ключевые слова: вирус табачной мозаики, гексон Ад2, структурный белок Х-вируса картофеля, иммуноглобулины G, белок А Staphylococcus aureus, ориентированная иммобилизация, тиоцианат, поверхностный плазмонный резонанс.
Abstract
Boltovets P.M Antigen-antibody interaction in the surface plasmon resonance conditions and application of this phenomenon for virusspecific macromolecules detection. - Manuscript.
The thesis for a candidate's degree by speciality 03.00.06 - virology. - D.K. Zabolotny Institute of Microbiology and Virology of NAS of Ukraine, V.E. Lashkaryov Institute of Semiconductor Physics of NAS of Ukraine, Kyiv, 2004.
The thesis is concerned to the development of the approach to the exposure of the viruses directly in cell homogenates using specific antibodies by the surface plasmon resonance method. The new modification of the sensor surface for the detection of visusspecific macromolecules by forming of the monomolecular layer with the effective negative charge at it's surface is proposed. This modification prevents proteins denaturation and provides their oriented immobilization.
The general approach to the detection and quantitative determination of viruses by SPR method using specific antibodies, immobilized at the sensor surface modified by KNCS and protein A St. aureus is developed and tested by the example of tobacco mosaic virus. By the example of green algae Bracteаcoccus minor cells infected at the zoospore stage, it was shown, that such a modification of the sensor surface allows adequate detaction of the virus in cell homogenates. It was confirmed by IFA and light microscopy methods. The possibility of the use of this approach for viral proteins was shown on the example of the structure protein of potato virus X and hexon of adenovirus 2. The new original procedure of the quantitative determination of the virus by immobilization of the complex specific IgG-virus at the KNCS and protein A-modified surface was proposed. With the example of Nicotiana tabacum the development of the viral infection in the plant was studied by the mentioned approach. The agreement between SPR and ELISA methods was achieved.
Key words: tobacco mosaic virus, hexon Ad2, potato virus X structural protein, immunoglobulins G, protein A Staphylococcus aureus, oriented immobilization, thiocyanate, surface plasmon resonance.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Імуноглобуліни як найважливіші молекули імунологічної системи, їх здатність специфічно з'єднуватись з антигеном. Розуміння імунологічних механізмів, вивчення будови, властивостей, утворення антитіл. Універсальність, специфічність, гетерогенність антитіл.
реферат [646,3 K], добавлен 14.09.2010Аналіз сучасного стану епідеміології вірусів вищих рослин. Основні терміни та методи оцінки хвороб рослин. Загальна характеристика та особливості мозаїчного вірусу. Шляхи розповсюдження та заходи боротьби з вірусом зморшкуватої мозаїки квасолі в природі.
курсовая работа [385,2 K], добавлен 21.09.2010Визначення терміну життя білків в організмі. Будова протеасоми як спеціального білкового утворення. Роль убіквіну в процесі утилізації білків. Методи виявлення злоякісних утворень або ослаблення імунної системи клітин. Функціональне призначення лізосоми.
презентация [111,1 K], добавлен 24.09.2014Будова, фізичні та хімічні властивості білків. Для виявлення білків у різних матеріалах застосовують кольорові реакції, найважливішими з яких є ксантопротеїнова і біуретова. Елементарний склад, молекулярна маса білків. Застосування білків у промисловості.
реферат [296,8 K], добавлен 09.11.2010Відкриття та дослідження молекули інсуліну, її хімічна будова. Біосинтез інсуліну, регуляція його секреції, функції та перетворення в організмі, властивості та біологічна дія. Методи визначення інсуліну, його застосування для виготовлення препаратів.
реферат [2,7 M], добавлен 09.01.2010Аналіз сутності, складу, будови, особливостей структури білків - складних високомолекулярних природних органічних речовин, що складаються з амінокислот, сполучених пептидними зв'язками. Порівняльні розміри білків та пептидів. Функції білків в організмі.
презентация [357,5 K], добавлен 10.11.2010- Мікроеволюційні зміни фенотипу колорадського жука в популяціях з різним ступенем радіаційного впливу
Вивчення внутрішньовидового поліморфізма надкрил колорадського жука та визначення залежності проявляння окремих морф в залежності від щільності радіоактивного забруднення території. Наявність (відсутність) відмінностей малюнку надкрил та їх частота.
магистерская работа [3,0 M], добавлен 14.12.2014 На основі вивчених еколого-біологічних властивостей рослин водних та прибережно-водних біоценозів проведення визначення стану їхніх ценозів русла річки Сіверський Донець. Визначення видів біоіндикаторів водного середовища, екологічні особливості видів.
курсовая работа [63,9 K], добавлен 07.05.2009Характеристика білків позаклітинного матриксу печінки. Порушення структури еластину. Будова та синтез молекули колагену. Стелатні клітини печінки як основні продуценти компонентів позаклітинного матриксу печінки. Накопичення та зберігання вітаміну А.
курсовая работа [1,1 M], добавлен 25.03.2013Класифікація антигенів, поняття антигенності, імуногенності. Роботи по антигенній структурі глобулярних білків. Послідовні та переривчасті антигенні детермінанти, їх властивості. Блокування зв'язування специфічних антитіл із білком в природному епітопі.
реферат [23,6 K], добавлен 14.09.2010Характеристика ґрунту як середовища проживання мікроорганізмів. Дослідження методів визначення складу мікроорганізмів. Аналіз їх ролі у формуванні ґрунтів та їх родючості. Біологічний кругообіг в ґрунті. Механізм дії мінеральних добрив на мікрофлору.
реферат [96,7 K], добавлен 18.12.2014Аналіз видового складу фітопланктону. Характеристика каскаду Горіхувастих ставків. Визначення обсягу ставка. Особливості складу фітопланктону каскадів Горіхувастих ставків. Визначення первинної продукції фітопланктону і деструкції органічних речовин.
дипломная работа [1,5 M], добавлен 24.01.2013Класифікація біотехнологічних виробництв, їх різновиди, відмінні ознаки та функціональні особливості. Сутність конформації та класифікація білків в залежності від даного параметру. Поняття та зміст генної інженерії, її значення на сьогодні, принципи.
контрольная работа [14,5 K], добавлен 24.11.2011З'ясування генетичного коду: встановлення відповідності між послідовністю нуклеотидів молекули ДНК та амінокислотами молекули білка. Властивості генетичного коду та його варіанти. Відхилення від стандартного генетичного коду. Генетичний код як система.
реферат [35,8 K], добавлен 15.11.2010Сутність статевих хромосом. Типи визначення гомо- та гетерогаметної статі в генетиці. Успадкування ознак, зчеплених зі цими ознаками та якостями. Значення реципрокних схрещувань для їх визначення. Наслідування при нерозходженні статевих хромосом.
презентация [2,8 M], добавлен 04.10.2013Поширеність вірусів рослин та профілактичні заходи, які запобігають зараженню. Методи хіміотерапії для оздоровлення рослин та термотерапії для отримання безвірусних клонів і культур верхівкових меристем. Характеристика і особливості передачі Х-вірусу.
курсовая работа [5,4 M], добавлен 21.09.2010Біотехнологія мікроорганізмів та їх різноманітний світ. Створення мікроорганізмів-продуцентів та отримання генетичних рекомбінантів. Застосування рекомбінантних ДНК для переносу природних генів. Виробництво харчових білків, амінокислот та вітамінів.
реферат [21,8 K], добавлен 16.01.2013Описание химического состава плодов и овощей. Роль обмена веществ и энергии в жизни живых существ. Биологическое значение цикла Кребса. Микро- и макроэволюция как две стороны единого эволюционного процесса. Определение понятий "антиген", "антитело".
контрольная работа [24,2 K], добавлен 13.10.2010Первинні та вторинні статеві ознаки. Ознаки, залежні від статі. Типи хромосомного визначення статі, поняття гіногенезу і гібридогенезу. Роль середовища у визначенні статі. Балансова теорія Бріджеса. Первинне та вторинне нерозходження Х-хромосом.
презентация [3,5 M], добавлен 28.12.2013Синтез мітохондріальних білків і особливості формування мітохондрій. Система синтезу білка в мітохондріях. Продукти мітохондріального білкового синтезу. Синтез мітохондріальних білків у цитоплазмі. Формування окремих компонентів мембран.
реферат [32,1 K], добавлен 07.08.2007
