Розробка тест-системи на основі імуноферментного аналізу для визначення антитіл проти вірусу сказу у сироватці крові тварин
Викладення процесу розроблення діагностичної тест-системи на основі імуноферментного аналізу для визначення антитіл проти вірусу сказу у сироватці крові різних видів тварин. Огляд схеми гіперімунізації кролів з метою отримання антирабічних сироваток.
| Рубрика | Биология и естествознание |
| Вид | автореферат |
| Язык | украинский |
| Дата добавления | 28.07.2014 |
| Размер файла | 52,1 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
На третьем этапе вносили пероксидазный коньюгат на основе рекомбинантного белка А Staphyloccocus aureus в рабочем разведении (1:2000) на 5% растворе сухого молока. Инкубирование при +37оС не превышало 40-45 мин. Лунки промывали 6 раз.
Для визуализации реакции вносили субстратную смесь (0,04% ОФД на ЦФБ, рН 5,2 с 0,04% Н2О2). Инкубировали 20 мин в темном месте. Стоп реагент- 2 М Н2SО4 (50 мкл/лунку).
Оценку результатов проводили при длине волн света 492 нм относительно 620 нм, при этом оптическая плотность (ОП) смеси в лунках была пропорциональна концентрации специфических к вирусу бешенства антител в исследуемых сыворотках. Проведение ИФА считалось корректным, если среднее значение ОП в лунках с негативным контролем (К-) не превышало 0,15, среднее значение ОП в лунках с положительным контролем (К+) в разведении 1/10 не ниже 2,0, а среднее значение ОП в лунках с контролем коньюгата не выше 0,1.
Для определения активности исследуемых сывороток в международных единицах мы строили калибровочную кривую референс-сыворотки.
Результаты титрования, полученные в ИФА, сравнивали с результатами полученными в реакции нейтрализации. Разработанная тест-система превышала чувствительность реакции нейтрализации в 50-200 раз. Хотя при увеличении титров в РН всегда было увеличение титров в реакции ИФА прямолинейной кореляции между результатами мы не наблюдали.
Ключевые слова: бешенство, антирабические антитела, иммуноферментный анализ, международные единицы.
Noviytskay O.V. Development of test-system on a basis enzyme-linked immunosorbent assay for determination against a virus of animal. -Manuskript.
Thesis of a scientific degree of the candidate of veterinary sciences on a speciality of 16.00.03- veterinary microbiology and virology. -National Agrarian university, Kyiv, 2004.
In the dissertation results of development of an indirect variant enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of revealing antirabies antibodies in serum of blood of various animals are resulted.
Research of levels humoraly immunity allows to supervise a situation on rabies and to determine efficiency antirabies vaccination of animals, to spevd monitoring reserches. For a relative esti mation of a level antirabies antibodies in blood serums of animals expedient to use an indirect variant ELISA.
At reception cultural rabies antigen (strain Shchelkovo-51.К - a virus of rabies) suitable for use at ELISA on CC NGUK-1 the maximal titre of a virus of rabies during time cultivation did not exceed 2,5-3,0 lg LD50/ml while on CC BHK 21/17 the titre of a virus increased to 3 passage and was equaled 6,0-6,5 lg LD50/ml and during 3-7 passage the virus stably collected in a titre 5,8-6,5 lg LD50/ml.
For reception of diagnostic hyperimmune serum used fivefold immunization of rabbits concentrated cultural purifed antirabies a vaccine from strain Vnukovo-32 for 1,3,7,14 and 30 day with addition adjuvant ISA-25 for 1 and 14 day of a cycle of immunization that has allowed to receive specific whev with a titre 10,39±0,7 log2 UD50 and activity of 210 IU/ ml.
Use as an antigen for sorbtio concentrated 50% polietilenemin and virus of rabies strain Shchelkovo-51.K in concentration of 10 mkg/ml has allowed to spend revealing of antibodies against a virus of rabies.
Effective revealing antibodies in blod serum some kinds of animals occured due to use conjugate on a basis recombinant protein A, labeled to a horse-radish peroxidase in working dilution 1:2000.
Results of titration received in ELISA compared to results received in reactions of neutralization. Except for definition antirabies antibodies and determinations of their titre also determined activity of serum in IU with the help of standard serum. Developed the method exceeded sensivity of reaction of neutralization 50-200 times. Though at increase in titre in reaction of neutralization always there was an increase in titre in ELISA of a straight line corelation between results we did not observe.
Key words rabies, antirabies antibodies, enzyme-linked immunosorbent assay, international units.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Фізіологічні та біологічні характеристики крові. Кількість крові у тварин. Значення депонованої крові, механізми перерозподілу крові між депонованої і циркулюючої. Еритроцити як дихальні пігменти, які здійснюють перенесення кисню і діоксиду вуглецю.
реферат [15,5 K], добавлен 12.11.2010Внутрішнє середовище та його особливості. Функції, кількість і склад крові, її ферментні елементи. Групи крові, резус-фактор, резус-конфлікт і групова несумісність. Переливання крові та використання крові з лікувальної метою, розвиток донорства.
реферат [33,5 K], добавлен 29.11.2009Імуноглобуліни як найважливіші молекули імунологічної системи, їх здатність специфічно з'єднуватись з антигеном. Розуміння імунологічних механізмів, вивчення будови, властивостей, утворення антитіл. Універсальність, специфічність, гетерогенність антитіл.
реферат [646,3 K], добавлен 14.09.2010Дослідження мікрофлори повітря та води. Загальна характеристика родини Herpesviridae. Будова і властивості герпес-вірусів. Реплікація герпес-вірусів. Групи крові та інфекційні захворювання. Нова вакцина проти вірусу герпесу. Екологічні зони України.
научная работа [1,3 M], добавлен 03.11.2015Загальна характеристика гемоглобінової системи в крові риб та її роль в підтриманні гомеостазу організму. Стан системи гемоглобіну (крові) за дії екстремальних факторів довкілля, температури, кислотних дощів. Токсикологічна характеристика інсектицидів.
дипломная работа [358,7 K], добавлен 16.09.2010Поширеність вірусів рослин та профілактичні заходи, які запобігають зараженню. Методи хіміотерапії для оздоровлення рослин та термотерапії для отримання безвірусних клонів і культур верхівкових меристем. Характеристика і особливості передачі Х-вірусу.
курсовая работа [5,4 M], добавлен 21.09.2010Загальна характеристика круглих червів або нематодів - типу двобічно-симетричних червоподібних тварин, який налічує близько 300 тис. видів. Епітеліально-м'язовий мішок, травна, кровоносна та дихальна системи. Будова видільної, нервової, статевої системи.
реферат [22,5 K], добавлен 15.04.2011На основі вивчених еколого-біологічних властивостей рослин водних та прибережно-водних біоценозів проведення визначення стану їхніх ценозів русла річки Сіверський Донець. Визначення видів біоіндикаторів водного середовища, екологічні особливості видів.
курсовая работа [63,9 K], добавлен 07.05.2009Уявлення про ознаки пристосування тварин до захисту від ворогів у природі, причини зникнення тварин. Шляхи охорони і збереження тварин у природі; ознаки пристосування окремих тварин. Сприйняття об'єктів природи, їх цінність; охорона тваринного світу.
конспект урока [113,2 K], добавлен 10.01.2010Поняття про популяцію. Нові методи у функційній геноміці. Імуно-генетичні маркери, їх класифікація. Властивості набутого імунітету. Методи аналізу поліморфізму білків. Функційна геноміка сільськогосподарських тварин. Метод мікрочіпів, нутрігеноміка.
курс лекций [1,8 M], добавлен 28.12.2013Міжвидові взаємовідношення та їх основні прояви. Суть взаємокорисного співжиття різних видів, симбіоз безхребетних тварин з одноклітинними водоростями, комах з квітковими рослинами. Хижацтво і паразитизм як форми міжвидової боротьби за існування.
реферат [29,4 K], добавлен 15.04.2010Ступені організації тварин. Амеба і людиноподібна мавпа як антиподи тваринного світу. Вища організація нервової системи у тварин. Приручення дельфінів, спостереження за поведінкою. Експерименти над восьминогами, значення розвитку головного мозку в комах.
реферат [4,7 M], добавлен 15.04.2010Антиоксидантна система як захист проти вільних радикалів. Гістамін:історія вивчення, структура, шляхи синтезу і вивільнення. Визначення активності супероксиддисмутази, каталази, глутатіонпероксидази, вплив на неї наявності гістаміну в нирці щура.
курсовая работа [1,7 M], добавлен 22.06.2014Природно-екологічні умови Березнівського району. Біологічні особливості видового складу тварин - гідробіонтів річки Случ. Облік водної ентомофауни. Кількісна оцінка видового складу тварин літоралі р. Случ. Методика дослідження тварин літоралі р. Случ.
дипломная работа [6,6 M], добавлен 29.11.2011Домашні тварини як такі види тварин, що живуть з людиною та розводяться нею. Оцінка ролі та значення домашніх тварин в розвитку і вихованні дітей. День Захисту Тварин, історія його зародження і розвитку. Основні тварини Червоної Книги України, їх захист.
реферат [13,3 K], добавлен 07.04.2011Зміст поняття "клон". Вдале клонування соматичних клітин. Реагрегація бластерометрів, трансплантація ядер ембріонів. Перенесення ядра соматичної клітини в яйцеклітину. Відхилення, порушення розвитку клонованих тварин різних видів. Трансгенні риби.
лекция [2,4 M], добавлен 28.12.2013Очі – один з найважливіших винаходів природи. Прості й складні очі в тварин. Досконалий для водного простору зір восьминогів. Складні і розміщені на спеціальних стебельцях очі ракоподібних. Вісім простих очок в павукоподібних. Фасеткові очі комах.
реферат [2,1 M], добавлен 23.03.2011Вивчення розповсюдження безхребетних тварин у водоймах з різною глибиною та чистотою води. Фактори, що сприяють розмноженню у воді того чи іншого різновиду безхребетних. Способи життя безхребетних тварин та їх організацію в різноманітних таксонах.
контрольная работа [570,1 K], добавлен 15.09.2010Характеристика будови, опис та систематика основних класів, царств, підцарств та рядів тварин. Особливості будови та функціонування підцарств одноклітинних, багатоклітинних, класу ракоподібних, павукоподібних, комах, типу хордових тварин та ссавців.
конспект урока [4,8 M], добавлен 19.07.2011Використання природних ресурсів фауни. Методи і способи обліку ссавців Бистрицької улоговини. Характеристика поширених видів. Таксономічні одиниці представників регіону. Екологія поширених видів. Збереження та відтворення популяцій. Охорона диких тварин.
дипломная работа [3,4 M], добавлен 13.04.2011
