Методы микробиологического анализа

Размещено на http://www.allbest.ru/

Содержание

Введение

Глава 1. Общая характеристика предприятия

1.1 Устройство микробиологической РУП «Пинский ЦСМС»

1.2 Планировка и физическая характеристика помещений

1.3 Оборудование и содержание помещений

1.4 Инструкция по технике безопасности в микробиологической лаборатории

Глава 2. Методы микробиологического анализа

2.1 Методы отбора проб

2.2 Отбор проб продуктов для микробиологического анализа

2.3 Аппаратура, материалы и реактивы

2.4 Подготовка к анализу

Глава 3. Индивидуальное задание. Посев пастерилизованного молока. Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

3.1 Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)

3.2 Приготовление сред

3.3 Сущность метода

3.4 Проведение разведений для посева

3.5 Посев пастрелизованного молока

3.6 Выращивание

3.7 Обработка результатов

Заключение

Литература



Введение

Микробиология изучает мельчайшие, невидимые невооруженным глазом существа - микробы. Они находятся повсюду: в почве, воздухе, воде, на сырье, различных материалах, оборудовании, продуктах питания и т. д. Одни из них безопасны для человека, другие могут вызывать различные заболевания.

Увидеть микроорганизмы, так же как и отдельные клетки, можно только под микроскопом, приготовив соответствующим образом препараты. Поэтому работы на уровне клеток и микроорганизмов проводят в особых лабораториях, которые должны отвечать определенным требованиям. На лабораторном столе должны находиться: спиртовка; штатив для пробирок и бактериальных петель и игл; набор красителей; промывалка; кювета с шинами для окраски препаратов; фильтровальная бумага; карандаш для стекла; дезинфицирующий раствор.

В лаборатории должны быть созданы условия, обеспечивающие стерильность работы, при которых будет исключена возможность попадания как посторонних микроорганизмов извне, так и микроорганизмов из лаборатории в окружающую среду. Поэтому в микробиологической лаборатории необходимо строго соблюдать определенные правила работы и поведения, которые предотвращают возникновение заражения.

При выполнении лабораторных работ по биологии и микробиологии работают с различным биологическим материалом и культурами микроорганизмов. Изучают строение живых организмов и их основную структурную единицу - клетку. Клетки имеют небольшие размеры, поэтому невооруженным глазом их рассмотреть невозможно. Для их изучения готовят определенным образом препараты, которые рассматривают под микроскопом.[3]

Целью производственной практики является закрепление полученных теоретических знаний, и приобретение практического навыка.

Цели и задачи:

- закрепление навыков работы с различными культурами микроорганизмов (бактерий, грибов и актиномицетов);

- изучение методических подходов и теоретических основ определения действия на клетки микроорганизмов химических веществ;

- изучение методических подходов к выделению различных групп бактерий;

- освоение методов культивирования бактерий в различных условиях;

- освоение электрофоретических методов анализа;

- изучение теории и практики центрифугирования;

- изучение методов фракционирования и анализа субклеточных компонентов;

- определение продукции клетками микроорганизмов биологически активных веществ и внеклеточных ферментов;

- самостоятельное приготовление питательных сред, растворов и реактивов, мытья и подготовки к стерилизации лабораторной посуды;

- освоение и использование статистических методов анализа результатов микробиологических и других экспериментов.



Глава 1. Общая характеристика предприятия

1.1 Устройство микробиологической РУП «Пинский ЦСМС»

мезофильный аэробный микроорганизм лаборатория

РУП «Пинский ЦСМС» расположена по адресу г. Пинск, ул. Берковича, 10. Проводит исследования по контролю качества пищевой и с/х продукции, сырья, питьевой воды, безалкогольных напитков, биологически активных добавок, кормов и комбикормового сырья на соответствие технических нормативных правовых актов (ТНПА).

Отдел испытаний аккредитован на независимость и техническую компетентность с 1996 г. В 2005 году прошел проверку на соответствие критериям системы аккредитации Республики Беларусь и аккредитован на независимость и техническую компетентность в соответствии с требованиями СТБ ИСО/МЭК 17025. В 2012 г. статус аккредитованной лаборатории подтвержден и продлен. Регистрационный номер аттестата аккредитации № ВY/l12 02.1.0.1231

В состав отдела испытаний входит микробиологическое подразделение, где проводятся исследование молочной, мясной, плодоовощной продукции, кондитерских изделий, крупы и изделий из крупы, макаронных изделий, изделий масличного сырья и жировых продуктов, рыбы и изделий из рыбы, напитков, питьевой воды, яиц и продуктов из яиц , чая, крахмала, концентратов пищевых, биологически активных добавок, комбикормового сырья и комбикормовой продукции на соответствие ТНПА по содержанию КМАФАнМ, наличию БГКП, Е. coli. сульфитредуцирующихкяостридий, S. aureus, В. cereus, дрожжей и плесеней, L. Monocytogenes, P. aeruginosa, бактерии рода Enterococcus, бактерии рода Proteus, бифидобактерий, молочнокислых м/о, В subtilis, В. Mesentericus, микроскопических грибов в кормах, патогенных м/о, в том числе сальмонелл.

Проводятся исследования по содержанию антибиотиков в продуктах животноводства методом ИФА и с использованием МУ 3049-84.

С РУП «Пинский центр стандартизации, метрологии и сертификации» заключен договор № 64 от 31.01.2013 г. на идентификацию выявленных патогенных м/о, проверку ростовых свойств приготовленных питательных сред и проверку паровых и воздушных стерилизаторов на биологический тест.

1.2 Планировка и физическая характеристика помещений

Микробиологическое отделение расположено на 3 этаже и изолировано от других помещений испытательной лаборатории.

Микробиологическое отделение состоит из пяти изолированных рабочих помещений:

прием и хранение образцов продукции;

приготовление и стерилизация сред и посуды;

бактериологическая с ламинарным боксом;

работа с патогенными и условно-патогенными культурами;

обеззараживание контаминированных питательных сред, мойка и сушка посуды;

Помещения расположены в соответствии с требованиями соблюдений техники безопасности и противоэпидемиологического режима.

Полы в помещениях микробиологического отделения наливной технологии (с гладкой поверхностью, без швов, устойчивые к обработке дезинфицирующих средств,

не скользкие, герметично соединенные со стенкой).

Потолки покрашены масляной краской.

В соответствии с новыми требованиями проведена замена дверей и окон, что обеспечило изоляцию и герметичность помещений, входящих в состав микробиологического отделения. Для достижения гладкой поверхности и доступности обработки дезинфицирующими средствами, окна и двери изготовлены из пластика. Для уменьшения потока прямого солнечного света и предотвращения нагревания поверхностей оборудования солнечными лучами стекла окон затонированы.

Помещения освещаются естественным светом, кроме того, обеспечены достаточным искусственным освещением от светильников с закрытыми рассеивателями.

Лаборатория подключена к городским сетям водоснабжения и канализации. Отопление централизованное.

Все помещения микробиологического отделения обеспечены горячей и холодной водой.

1.3 Оборудование и содержание помещений

Все необходимое оборудование, позволяющее проводить исследования в соответствии с ТИПА, имеется в наличии.

стерилизатор паровой ВК-75

стерилизатор паровой ВК-30-01

шкаф сушильно-стерилизационный SNOL 37/350

термостат типа ТС-80М - 4 шт.

термостат ТГУ-02-200

- термостат электрический суховоздушный ТС-1/80СПУ

холодильник «Атлант» - 3 шт.

микроскоп «Микмед-5»

рН-метр «pH-150 МП»

аквадистилятор ДЭ-4-2

центрифуга лабораторная клиническая ОПн-3

весы лабораторные аналитические ВЛР-200

весы лабораторные квандратные ВЛКТ-500г-М

электронные весы «Scout»

- весы лабораторные УТ-600П-Е

-устройство фильтровальное УФ-1

-облучатель бактерицидный ОБН-150П - 6 шт.

-баня лабораторная шестиместная ПЭ-4300

-плитка электрическая

-лопаточный гомогенизатор BagMixer

-ламинарный шкаф «HERAsafe» 2 класс зашиты

Приборы, оборудование и средства измерений поверены и аттестованы, технически исправлены, подвергнуты аттестованы, технически исправлены, подвергнуты метрологическому контролю в установленные сроки, имеются технические паспорта.

Микробиологическое отделение оснащено новой изготовленной по специальному заказу мебелью. Мебель изготовлена из гладкого непроницаемого материала, легко очищаемого и дезинфицируемого. Конструкция мебели не затрудняет уборку и легко передвигается.

Документация, используемая при работе с образцами проб, питательные среды, реактивы и посуда хранится в закрытых шкафах.

Микробиологическое отделение располагает необходимой лабораторной посудой, сухими питательными средами и реактивами. Сухие питательные среды и отдельные компоненты хранятся в темном месте, плотно закрытыми при температуре согласно инструкции изготовителя.

Питательные среды готовятся на электрической плитке преимущественно из готовых сухих сред согласно с инструкцией изготовителя.

Измерение и коррекция pH проводится с помощью рН-метра.

Стерилизация питательных сред проводится в автоклаве ВК-30-01

Для контроля режима автоклавирования используются максимальные термометры и одноразовые индикаторы воздушной и паровой стерилизации. Для контроля эффективности паровой и воздушной стерилизации применяются биологические тесты.

Готовые среды хранятся в холодильнике. Агаровые питательные среды перед использованием расплавляются на водяной бане.

Ростовые качества питательных сред проверяются в ГУ «Пинский зональный ЦГиЭ» согласно договора №64 от 31.01.2013 г.

Пробы для микробиологических исследований поступают непосредственно в отделение. Подготовка проб, взятие навесок, проведение разведений и посевы для дальнейшего культивирования проводятся в ламинарном шкафу. Далее посевы проб помещают в термостаты с оптимальными температурами для роста соответствующих видов м/о. Весь процесс исследований проводится согласно ТНПА.

Отработанный материал обеззараживаем в автоклаве ВК-75 в отделении обеззараживания.

Обеззараженная посуда моется, подсушивается, закрывается соответствующим образом и стерилизуется в сушильно-стерилизационном шкафу SNOL.

Контроль эффективности стерилизации проверяется биологическими тестами, необходимый температурный режим - максимальными термометрами и одноразовыми индикаторами воздушной стерилизации.

Стерильная посуда хранится в закрытом шкафу.

Проводится ежедневная текущая уборка помещений влажным способом. В отделении бокса проводится еженедельная генеральная уборка. Дезинфекция проводится в соответствии с действующими санитарными правилами СП 17-129 РБ 2000. Необходимые дезинфицирующие средства имеются.

Микробиологическое состояние рабочих поверхностей, стен и воздуха регулярно контролируется.

В микробиологическом отделении проводятся исследования продуктов питания на содержание остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы, стрептомицина, пенициллина и бацитрацина. Необходимыми тест-культурами отделение располагает. Учет, хранение, пересев тест-культур проводится согласно руководства № 11-7-13-2002 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки м/о I- IV групп патогенности.

Каждое помещение микробиологического отделения оснащено бактерицидными лампами ОБН-150П. Обработка помещений ультрафиолетом проводится два раза в день в течение 30 минут. На каждую лампу ведется индивидуальный журнал, где отмечается отработанное время ламп.

Работу в микробиологическом подразделении выполняют два специалиста с высшим образованием, прошедшие подготовку на курсах повышения квалификации при Белорусском государственном институте усовершенствования врачей и при Белорусском институте повышения квалификации и переподготовки кадров Госстандарта Республики Беларусь. В наличии удостоверение об окончании спецкурсов по обслуживанию сосудов работающих под давлением.

Функциональные обязанности, права и ответственность персонала определены должностными инструкциями.

В своей работе сотрудники микробиологического отделения руководствуются ГОСТами, МУ и другими ТНПА.

Каждые полгода ТНПА актуализируются, рабочие экземпляры находятся на рабочем месте.

Инструктаж сотрудников лаборатории по технике безопасности проводится регулярно согласно установленных сроков. Средствами индивидуальной защиты и рабочей спецодеждой сотрудники обеспечены.[2]

1.4 Инструкция по технике безопасности в микробиологической лаборатории

1. Дезинфицировать рабочие поверхности ежедневно и каждый раз после применения растворов, содержащих бактерии. Рабочая поверхность стола бокса обрабатывается 70% этиловым спиртом непосредственно перед работой и после окончания.

2. Перед мытьем и повторным употреблением, загрязненные предметы дезинфицируются:

- чашки и пробирки с посевами автоклавируются в течение 1 часа 1.5 избыточным атм.;

- обработанные пипетки, предметные стекла и другие виды посуды погружают в 0.5% раствор дезинфицирующего средства «Гексадекон» на 30 мин. Срок годности рабочего раствора 15 дней.

3. Использовать механические устройства для набирания жидкости в пипетки.

4. Часто иыть руки и всегда - перед выходом из лаборатории. Руки работающего перед посевом и после окончания работы в боксе обрабатываются 70% этиловым спиртом, а затем тщательно моются с мылом.

5. Воздух в боксе обеззараживается бактерицидными лампами в течение 0.5-1часа и не менее одного раза в неделю проверяется на бактериологическую обсемененность. Допустимым ростом считается не более 5 колоний на чашке Петри.

6. Обязательна ежедневная влажная уборка помещения лаборатории и бокса.

7. Не менее 1 раза в неделю помещение бокса моют горячей водой с дезинфицирующими растворами и протирают досуха.

8. Работать в спецодежде и не носить ее вне лаборатории.

9. Не есть, не курить и не пить в лаборатории.[6]



Глава 2. Методы микробиологического анализа

2.1 Методы отбора проб

Правила приемки и общие правила отбора проб - по ГОСТ 26809, ГОСТ 3622 и ГОСТ 13928.

Пробы пастеризованного молока и молочных продуктов для микробиологических анализов отбирают до отбора проб для физико-химических и органолептических анализов.

Пробы для микробиологических анализов отбирают в стерильную посуду с помощью стерильных приспособлений.

Отбор проб и перемешивание продукта перед отбором производят отборником, черпаком, ложкой, металлической трубкой, щупом, шпателем или другим соответствующим приспособлением, которые каждый раз перед использованием должны быть простерилизованы фламбированием или в автоклаве.

При отборе проб сырного молока для определения редуктазы допускается обработка металлической трубки или пробника пропариванием, кипячением или хлорированием с последующим ополаскиванием питьевой водой.

2.2 Отбор проб продуктов для микробиологического анализа

Молоко и сливки пастеризованные, сметана в транспортной таре.

От продукции, попавшей в выборку после тщательного перемешивания стерильной мутовкой или черпаком, отбирают 50-60 см продукта в стерильную посуду и закрывают стерильной пробкой.Размещено на http://www.allbest.ru/

От молока и сливок пастеризованных, сметаны, мороженого, сгущенных молочных консервов, сухих молочных продуктов, попавших в выборку в потребительской таре, используют в качестве пробы для анализа по одной единице потребительской тары с продукцией.

Посуду с пробой или пробу в потребительской таре снабжают этикеткой, на которой указывают:

номер пробы;

наименование и сорт продукта (при наличии);

номер и объем партии;

день и час отбора пробы;

должность и подпись лица, отобравшего пробу;

обозначение нормативного документа, по которому вырабатывался продукт.

Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой указывают:

номер пробы;

наименование предприятия-изготовителя;

наименование и сорт продукта (при наличии);

номер и объем партии;

дату и час выработки продукта с момента окончания технологического процесса;

дату и час отбора проб;

должность и подпись лица, отобравшего пробу;

объем необходимых анализов;

обозначение нормативного документа, по которому вырабатывался продукт.

Микробиологические анализы продукта проводят не более чем через 4 ч с момента отбора проб.

Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследования в условиях, обеспечивающих температуру продуктов не выше 6 °С, не допуская подмораживания, а для мороженого - не выше минус 2 °С.



2.3 Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности поверочная цена деления не более 0,001 г для взвешивания реактивов по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные 4-го класса точности поверочная цена деления не более 0,05 г для приготовления навесок исследуемых образцов по ГОСТ 24104.

Термометры стеклянные жидкостные (нертутные), диапазон измерения 0-100 °С, цена деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Термостат, позволяющий поддерживать температуру 15-55 °С с отклонением от заданной температуры +1 °С.

Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569* или автоклав горизонтальный.

Шкаф сушильный, позволяющий поддерживать температуру (160±5) °С.

Анализатор потенциометрический для контроля рН, диапазон измерения рН 3-8, погрешность измерения рН ±0,05 по ГОСТ 19881.

Редуктазник, позволяющий поддерживать температуру 25-55 °С.

Баня водяная

Прибор для счета колоний бактерий.

Микроскоп световой биологический по нормативному документу или других аналогичных марок.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Спиртовка по ГОСТ 23932

Петля бактериологическая.

Лупа складная карманная по ГОСТ 25706.

Пробки резиновые конусные по нормативному документу.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Пергамент по ГОСТ 1341.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Кастрюли разные по ГОСТ 17151.

Пробойник.

Чашки Петри по ГОСТ 25336.

Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.

Бюретки исполнения 1, 2, 3-го классов точности, вместимостью 5, 10, 50 см, цена деления 0,1 смРазмещено на http://www.allbest.ru/

.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Пипетки исполнений 1, 4, 5, 6, 7; 1 и 2-го классов точности, вместимостью 1, 2, 5 и 10 см

Размещено на http://www.allbest.ru/

Стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СН по ГОСТ 25336.

Колбы исполнения 2, вместимостью 50, 100, 200, 500, 1000 см 2-го класса точности поРазмещено на http://www.allbest.ru/

ГОСТ 1770-74.

Цилиндры исполнения 1 и 2, вместимостью 50, 100 см по ГОСТ 1770.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Поплавки стеклянные.

Пробирки типов П1, П2, диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диаметром 21 мм, высотой 200 мм по ГОСТ 25336.

Ступки лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147.

Ланцет.

Натрий лимоннокислый 5,5-водный по ГОСТ 22280.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363, раствор с массовой концентрацией 10 г/дм.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156, раствор с массовой концентрацией 100 г/дм.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962* и спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300, 96%-ный раствор.

Масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Магний сернокислый по ГОСТ 4523.

Кристаллический фиолетовый по нормативному документу, раствор с массовой концентрацией 10 г/дм.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Метиленовый голубой, индикатор по нормативному документу или аналогичный производства Индии.

Резазурино-натриевая соль по нормативному документу или резазурин в таблетках производства ГДР.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода питьевая по ГОСТ 2874*.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Желчь бычья и других сельскохозяйственных животных (нативная) по нормативному документу.

Среда сухая Кесслер по нормативному документу.

Среда агаровая модифицированная для определения общего количества бактерий в молоке и молочных продуктах по нормативному документу.

Лактоза по нормативному документу.

Порошок сычужный по нормативному документу.

Бумажки индикаторные по нормативному документу или зарубежного производства.

Индикатор универсальный.

(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3, 4).

2.4. Подготовка к анализу.

Подготовка посуды и материалов

Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1-2%) в течение 15 мин и затем ополаскивают дистиллированной водой.

Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160±5) °С в течение 2 ч или в автоклаве при (121±2) °С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием.

Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу. При отсутствии аппаратуры для стерилизации (для определения редуктазы, бродильной и сычужно-бродильной проб) посуду, пипетки и пробы непосредственно перед испытанием кипятят в дистиллированной воде или конденсате не менее 30 мин. Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.[1]

Количество засеваемого продукта устанавливают с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения в соответствии с табл.1.

Таблица 1

Наименование продукта	Засеваемые объем или масса, см3 или г
Молоко и сливки сырые	0,0001	0,00001	0,000001
Масло сладко-сливочное, вологодское, крестьянское, любительское, бутербродное	0,01	0,001	0,0001
Молоко и сливки пастеризованные	0,1	0,01	0,001
Молоко или сливки сгущенные с сахаром, какао и кофе со сгущенным молоком и сахаром	0,1	0,01	0,001
Молоко сухое, сливки сухие, ЗЦМ, молочно-картофельное пюре	0,01	0,001
Мороженое, молочные коктейли	0,1	0,01
Плавленый сыр	0,1	0,01	0,001
Лактоза	0,1	0,01



Глава 3. Индивидуальное задание

Посев пастерилизованного молока. Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

Производится посев согласно ГОСТ 9225 - 84.С.11

3.1 Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)

Определение количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ или общее микробное число, ОМЧ) относится к оценке численности группы санитарно-показательных микроорганизмов. В составе КМАФАнМ представлены различные таксономические группы микроорганизмов - бактерии, дрожжи, плесневые грибы. Их общая численность свидетельствуют о санитарно-гигиеническом состоянии продукта, степени его обсемененности микрофлорой. Оптимальная температура для роста КМАФАнМ 35-37оС (в аэробных условиях); температурная граница их роста - пределах 20-45оС. Мезофильные микроорганизмы обитают в организме теплокровных животных, а также выживают в почве, воде, воздухе.

Показатель КМАФАнМ характеризует общее содержание микроорганизмов в продукте. Его контроль на всех технологических этапах позволяет проследить, насколько "чистое" сырье поступает на производство, как меняется степень его "чистоты" после тепловой обработки и не претерпевает ли продукт повторного загрязнения после термообработки, во время фасовки и хранения. Показатель КМАФАнМ оценивается по численности мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, выросших в виде видимых колоний на плотной питательной среде после инкубации при 37оС в течение 24-48 часов.

КМАФАнМ - наиболее распространенный тест на микробную безопасность. Данный показатель применяется повсеместно для оценки качества продуктов, за исключением тех, в производстве которых используются специальные микробные культуры (например, пиво, квас, кисломолочные продукты и т.п.). Величина показателя КМАФАнМ зависит от многих факторов. Наиболее важные - режим термической обработки продукта, температурный режим в период его транспортировки, хранения и реализации, влажность продукта и относительная влажность воздуха, наличие кислорода, кислотность продукта и т.д. Увеличение КМАФАнМ свидетельствует о размножении микроорганизмов, в числе которых могут оказаться патогены и микроорганизмы, вызывающие порчу продукта (например, плесени).

Хотя общее количество бактерий КМАФАнМ не может непосредственно свидетельствовать о наличии или отсутствии патогенных бактерий в пищевых продуктах, этот показатель довольно широко используют, например, в молочной промышленности. Показатель КМАФАнМ (ОМЧ) характеризует санитарно-гигиенические режимы производства и условия хранения молочной продукции. Продукты, содержащие большое количество бактерий, даже непатогенных и не изменяющих их органолептические показатели, нельзя считать полноценными. Значительное содержание жизнеспособных бактериальных клеток в пищевых продуктах (за исключением тех, при производстве которых применяют закваски) свидетельствует либо о недостаточно эффективной термической обработке сырья, либо о плохой мойке оборудования, либо о неудовлетворительных условиях хранения продукта. Повышенная бактериальная обсемененность продукта свидетельствует также о его возможной порче.

Для потребителя показатель КМАФАнМ (ОМЧ) характеризует качество, свежесть и безопасность продуктов питания. В то же время, оценка качества продукта только по этому показателю имеет ряд недостатков. Во-первых, это только общая, количественная оценка микроорганизмов, поскольку при исследовании не учитываются патогенные, условно патогенные, психрофильные и термофильные микроорганизмы. Во-вторых, метод неприемлем для продуктов, содержащих технологическую и специфическую микрофлору.

Показатель КМАФАнМ позволяет также оценивать уровень санитарно-гигиенических условий социальной сферы на производстве, он позволяет выявлять нарушения режимов хранения и транспортировки продукта.[5]

3.2 Приготовление сред

Пиготовление заводской среды для определия количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАНМ).

40г порошка растворить в 1дм3 дистиллированной воды, кипятить 1-2 минуты, при наличии осадка профильтровать, установить рН (7.0 ± 0.2), разлить в пробирки или колбы, стерилизовать 15 мин при 121???С.

Среду приготовили согласно прописи. Проверили рН до стерилизации, которая составила 6.9, после автоклавирования 7.0. Проверку рН проводим по рН-метру.

Для разведения образцов готовим раствор хлористого натрия:

Состав:

хлористый натрий - 8,5 г;

питьевая вода - 1000 см3.

Размещено на http://www.allbest.ru/

В 1000 см3 питьевой воды растворяем 8,5 г хлористого натрия, разливаем раствор в чистые пробирки диаметром 21 мм по 10 смРазмещено на http://www.allbest.ru/

, а в колбы - Размещено на http://www.allbest.ru/

по 93 см3 и стерилизуем при (121±2) °С в течение (20±1) мин. После стерилизации в пробирках должно остаться 9 см3 раствора хлористого натрия, а в колбах 90 см3 (количество, которое необходимо для приготовления разведений из посевного материала).

Приготовленные среды проверяем на стерильность. Помещаем чашки Петри с разлитой средой КМАФАНМ в термостат с 37 ?С и выдерживаем 48 часов. Отсутствие колоний на твердой среде говорит о том, что среды стерильны и их можно использовать в работе.

Ростовые свойства сред проверены заранее, на что имеются протоколы испытаний санстанции.

3.3 Сущность метода

Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов размножаться на плотном питательном агаре при (30±1) °С в течение 72 ч.

3.4 Проведение разведений для посева

Берем 10г (10мл) молока в стерильную колбу объемом 250мл и добавляем 90 мл стерильного физ. раствора, осторожно перемешиваем круговыми движениями, получили разведение 0.1 . Из данного разведения берем в стерильную пробирку 1мл разведения 0.1 и добавляем 9мл стерильного физ. раствора, перемешиваем, получили разведение 0.01 . Далее берем 1 мл разведения 0.01 в стерильную пробирку и добавляем 9мл стерильного физ. раствора , перемешиваем, получили разведение 0.001 и т.д.

3.5 Посев пастрелизованного молока

Из приготовленного разведения 0.01 вносим по 1мл в 2 чашки Петри, затем берем разведение 0.001 и вносим по 1мл в очередные чашки Петри.

Берем среду КМАФАНМ, остуженную до 45 ?С и вносим около 15-18 мл приоткрывая крышки чашек Петри вносим в каждую чашку, параллельно проводим контрольный образец, т.е. вносим 1мл физ. раствора в стерильную чашку Петри и заливаем 15-18 мл среды КМАФАНМ.

Осторожно круговыми движениями перемешиваем содержимое чашек Петри, даем среде застыть. Затем переворачиваем чашки Петри дном вверх и помещаем в термостат.

3.6 Выращивание

Проводим культивацию при 30 ?С в течение 72 часов.

Предварительный учет выросших микроорганизмов проводим на вторые сутки, окончательный через 72 часа.

3.7 Обработка результатов

Количество выросших колоний подсчитывают на каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне, пользуясь лупой с увеличением в 4-10 раз. Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами. При подсчете колоний рекомендуется пользоваться счетчиками.[1]

Отбираем чашки Петри, в которых выросло не менее 30 и не более 300 КОЕ. Количество микроорганизмов в 1г продукта рассчитывается по формуле :

где n - количество колоний, подсчитанных на чашке Петри,

m - число десятикратных разведений.

Просматриваем чашки Петри разведения 0.01

1 чашка - 270 КОЕ,

2 чашка - 256 КОЕ

Рассчитываем среднее значение на 2 чашки:

Просматриваем чашки Петри разведения 0.001

1 чашка - 29 КОЕ,

2 чашка - 27 КОЕ

Подсчитываем среднее значение на 2 чашки:

Подсчитываем среднее значение по всем чашкам Петри:

Возможен расчет согласно ГОСТ ISO 7218-204с34.

п.10.3.2.1.n

Получили 2.7*104 КОЕ/г, что говорит о том, что данное пастерилизованное молоко соответствует СанПиН от 21 июня 2013 №52 статья 2 п2.2.1 , по которому посев питьевого пастерилизованного молока на КМАФАНМ рост организмов должен быть не более 1*105.

Индивидуальное задание, посев пастерилизованного питьевого молока выполнено согласно ГОСТ 9225-84.С.11.



Заключение

В ходе практики, которая была пройдена в РУП «Пинский ЦСМС», достигнуты следующие задачи: знакомство с деятельностью предприятия; закрепление знаний, полученных в вузе; изучения оборудования, техники, технологии, контрольно-измерительных приборов и оборудования.

Большая часть времени производственной практики была отведена микробиологической лаборатории. Ознакомилась с устройством микробиологической лаборатории. Изучены ее правила по технике безопасности, устройство, имеющееся оборудование. Изучены способы приготовления питательных сред для роста различных микроорганизмов. Производила посевы различного пищевого сырья на питательные среды и следила за ростом микроорганизмон на них.

Выполнила индивидуальное задание «Посев питьевого пастерилизованного молока на определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов».



Литература

1. ГОСТ 9225-84.С.11. «Молоко и молочные продукты. Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты (кроме детских) и устанавливает методы микробиологического анализа.» ;

2. Пояснительная записка РУП «Пинский ЦСМС»;

3.http://labx.narod.ru/documents/rules_microbiology_laboratory.html (доступ 29.10.2014г);

4. http://www.bestpravo.ru/sssr/gn-pravo/w7b/page-2.htm (доступ 29.10.2014г)

5. http://mibio.ru/contents.php?id=75 (доступ 29.10.2014г)

6. Практическое руководство о биологической безопасности в лабораторных условиях, третье издание, Всемирная Организация Здравоохранения, Женева - 2004г;

7. ГОСТ 30518-97 «Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)»;

8. СанПиН от 21 июня 2013г.

Размещено на Allbest.ru

...