Морфология мотонейронов спинного мозга в норме и при перерезке седалищного нерва у взрослой крысы

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Морфология мотонейронов спинного мозга в норме и при перерезке седалищного нерва у взрослой крысы

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

Благова Наталья Вениаминовна

Саранск - 2011

Работа выполнена в Государственном Бюджетном Образовательном Учреждении Высшего Профессионального Образования Министерства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации «Нижегородская Государственная Медицинская Академия»

Научный руководитель:

доктор биологических наук Ермолин Игорь Леонидович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Кругляков Павел Павлович

доктор медицинских наук, профессор Павлович Евгений Ростиславович

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследований

Вопрос о восстановлении периферических нервов после травмы остается актуальным в современной медицине. В зависимости от тяжести повреждения возникающего при пересечении, разрывах, компрессии нерва наблюдаются длительные нарушения двигательных функций, потеря чувствительности, а так же вегетативно-трофические нарушения, что является следствием дегенерации нервных волокон в дистальном участке нерва и гибели части аксотомированных нейронов.

Вопрос об устойчивости МН к повреждению их аксонов остается до конца не решенным. Ряд исследователей указывают на выживаемость большинства МН при повреждении их аксонов (Carlson J. et al., 1979; Swett J.E. et al., 1991; Vanden-Noven S. et al., 1993; Brannstrom T., Kellerth J.-O., 1999), но эти исследования касаются ранних сроков наблюдения. Данные же о выживаемости МН на отдаленных сроках, как правило, связаны с проведением хирургических манипуляций на поврежденных нервах (Gu H.Y. et al., 2005; Welin D. et al., 2008).

Для оценки посттравматических изменений в спинном мозге после перерезки периферического нерва важную роль имеет анализ количества МН и регенерировавших аксонов в отдаленные сроки, что позволяет наиболее точно определить степень деструктивных и регенераторных процессов, возникающих в популяции МН после травмы. Это дает возможность прогнозировать компенсаторно-восстановительные процессы в спинном мозге и в периферическом нерве в посттравматический период.

Изучение регенерации периферического нерва проводится чаще всего на модели травмы СН крысы. Многие авторы исследуют не конкретную популяцию МН, а общее количество нейронов трех - четырех сегментов поясничного отдела спинного мозга (Terao S. et al., 1997; Behnam-Rasouli M. et al., 2000; Kalmar B. et al., 2002; Tiraihi T., Masoudian N., 2003; Tiraihi T., Rezaie M.J., 2003; Saxena K. et al., 2007). Однако не все аксоны МН люмбального отдела участвуют в формировании СН, и вследствие этого потенциальная возможность их регенерации оценивается не объективно. Для корректной оценки количества МН, выживающих после травмы СН, и способных участвовать в его восстановлении, необходимо оценить количественно популяцию МН данного нерва в норме.

В других работах при оценке эффективности регенерации СН хотя и учитывают конкретную популяцию МН, но указывают их локализацию в разных сегментах спинного мозга. Так по данным J.E. Swett et al. (1986, 1991); R.D. Madison et al. (1996); P. Negredo et al. (2004); B.S. Lutz, D. Lidman (2005); R. Redett еt аl. (2005); A. Jabbar et al. (2007); G.C. de Ruiter et al. (2008) популяция МН, формирующих СН крысы, может располагаться в сегментах спинного мозга от L2 до S1.

В настоящем исследовании метод ретроградного маркирования флуоресцентным красителем позволяет выявить конкретную популяцию нейронов, формирующих СН белой нелинейной крысы, как в норме, так и в условиях посттравматической регенерации после повреждения нерва, что позволяет объективно оценить регенераторные возможности МН. Выявленная динамика количества МН поясничного отдела спинного мозга и их потенциальные возможности на разных сроках эксперимента дает возможность определить отдаленные сроки реабилитации поврежденного нерва.

В связи с этим были определены цель и задачи исследования.

Цель исследования:

Изучить закономерности распределения популяции мотонейронов, формирующих седалищный нерв в норме и при его перерезке у белых нелинейных крыс.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Установить общее количество мотонейронов в исследуемой популяции, их посегментарное распределение и размерные группы в норме у белых нелинейных крыс.

2. Проверить наличие билатеральной симметрии в популяциях мотонейронов формирующих седалищные нервы с обеих сторон в норме.

3. Определить количественно гибель, выживаемость мотонейронов и их размерные группы в динамике с 30-х по 300-е сутки после перерезки седалищного нерва при маркировании раздельно через проксимальную и дистальную культю нерва.

4. Выявить морфологические особенности седалищного нерва на уровне верхней трети бедра у белых нелинейных крыс в норме.

5. Оценить количественно посттравматические изменения в проксимальной и дистальной культе седалищного нерва на 300-е сутки после его перерезки.

6. Определить наиболее отдаленные сроки возможного восстановления двигательной части рефлекторной дуги на основе количественного анализа переживающих мотонейронов.

Научная новизна:

- Установлены сегментарные уровни локализации популяции мотонейронов, формирующих седалищный нерв белой нелинейной крысы в норме.

- Впервые определен количественный состав и размерные группы в популяции мотонейронов сегментов L4, L5, L6, формирующих седалищный нерв у белых нелинейных крыс в норме.

- Выявлена динамика гибели мотонейронов от 30-х до 300-х суток после перерезки седалищного нерва.

- Получены количественные данные о реакции мотонейронов различных размерных групп на перерезку их аксонов.

- Впервые определено количество «регенерирующих» и «резервных» мотонейронов, аксоны которых участвуют в регенерации седалищного нерва.

- Выявлены морфологические особенности посттравматических изменений в проксимальной и дистальной культе седалищного нерва на 300-е сутки после его перерезки.

Научно-практическая значимость работы.

В работе выявлена популяция мотонейронов спинного мозга, аксоны, которых участвуют в формировании седалищного нерва белой нелинейной крысы в норме.

Установлено распределение мотонейронов по отдельным сегментам спинного мозга с правой и левой стороны. Определено изменение количества элиминирующих и переживающих мотонейронов при перерезке их аксонов в седалищном нерве. Среди переживающих мотонейронов выделены:

1) «регенерирующие» - принимающие участие в регенерации (их аксоны преодолевают рубец),

2) «резервные» (их аксоны не преодолели рубец, но они могут, участвовать при определенных условиях в регенерации или элиминировать).

Анализ элиминирующих, «регенерирующих» и «резервных» мотонейронов позволил определить, что наиболее приемлемыми сроками восстановления перерезанного седалищного нерва являются 30-е и 90-е сутки после его повреждения.

Полученные сведения имеют фундаментальное значение и могут послужить для разработки вопросов посттравматической регенерации периферического нерва.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Популяция мотонейронов, участвующая в формировании седалищного нерва белой нелинейной крысы распределена в трех сегментах L4, L5, L6 спинного мозга с преимущественной локализацией в L4 и L5.

2. Соотношение мотонейронов размерных групп после аксотомии на разных сроках в посттравматическом периоде носит вариативный характер и к 300-м суткам возвращается к исходным показателям, но на фоне уменьшения количества нейронов в популяции.

Апробация материалов диссертации.

Основные положения и результаты работы доложены на: Научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РСФСР, академика АМН СССР, Жданова Д.А. (С-Петербург, 2008); Научно-практической конференции с международным участием посвященной 85-летию д.м.н. Степанова П.Ф. (Смоленск, 2009); Х-ом Конгрессе Международной ассоциации морфологов (Ярославль, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 3 статьи в рецензируемых изданиях.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов, списка использованной литературы и приложения. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 42 рисунками, которые включают микрофотографии световой и люминесцентной микроскопии, диаграммы. Библиографический список содержит 227 источников, из них 192 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Работа представляет собой экспериментально-морфологическое исследование и выполнена на 71-м самце белых нелинейных крыс. Контрольную группу составили 20 интактных животных весом 200-300 г, экспериментальную - 51 животное (табл. 1).

Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с требованиями приказа Министерства здравоохранения Российской Федерации от 23 августа 2010г. № 708н «Об утверждении Правил лабораторной практики» (зарегистрирован Министерством юстиции Российской Федерации 13 октября 2010 г. № 18713)

Таблица 1. Распределение животных по срокам эксперимента

Вид эксперимента	Методы (количество животных)
	Окраска по Нисслю	Введение Mini-Ruby	Всего живот-ных
			через проксимальную культю СН	через дистальную культю СН
Исследо- вание сегментов спинного мозга	Норма	3	7*+7**		17
	Пере- резка СН	30 суток		8	5	13**
		90 суток		5	5	10**
		150 суток		5	5	10**
		300 суток		8	7	15**
Исследо- вание СН	Норма		3
	300 суток		3
ИТОГО	71

* - одностороннее введение Mini-Ruby через седалищный нерв

** - двустороннее введение Mini-Ruby через седалищный нерв

Характеристика экспериментальных животных

Контрольные животные. Для установления источника формирования двигательной части СН исследовался поясничный отдел спинного мозга интактных животных

В области люмбального отдела шерсть на спине выстригалась и выбривалась. Кожа разрезалась вдоль позвоночника по остистым отросткам, мышцы удалялись. Наиболее краниальный позвонок, не имеющий сочленения с ребрами в ростральной части, идентифицировался как первый поясничный позвонок - L1. В области позвонков L1-S1 производилась ламинэктомия. Позвоночник вскрывался вдоль остистых отростков, начиная с сегмента S1 и далее в краниальном направлении. Путем тонкого препарирования под контролем микроскопа МБС-1 вскрывалась мягкая мозговая оболочка. Места непосредственного выхода соответствующих вентральных корешков из сегментов спинного мозга были идентифицированы, как середина каждого сегмента. Участки, расположенные на равном удалении от мест выхода корешков, принимали как границы между соседними сегментами, что соответствует исследованиям A.B. Jenny, J. Inukai (1983).

Исследовались сегменты L1-L6, S1 спинного мозга. Была измерена длина каждого вентрального корешка от места выхода через мягкую мозговую оболочку до непосредственного выхода его из вентрального рога. Длина вентрального корешка L1 составила 7,5 мм, L2 - 11 мм, L3 - 18 мм, L4 - 21 мм, L5 - 32 мм, L6 - 31 мм.

Для выявления в сегментах спинного мозга популяции МН, аксоны которых формируют СН, осуществлялось введение красителя через СН в области верхней трети бедра, соответствующее будущему месту перерезки нерва.

У одной группы контрольных животных (n=7) проведено ретроградное маркирование МН флуоресцентным красителем Mini-Ruby с последующим количественным анализом сегментов L1-S1 спинного мозга только с правой стороны. У другой группы животных (n=7) были апплицированы СН с двух сторон.

Для количественного анализа миелиновых нервных волокон в норме были взяты участки правого и левого СН интактных крыс (n=3), соответствующие месту перерезки и введения красителя.

Экспериментальные животные. В группе экспериментальных животных была произведена перерезка СН на уровне верхней трети бедра. Сроки наблюдений - 30, 90, 150 и 300 суток. В конце каждого срока, для выявления категории переживающих МН и среди них «регенерирующих» нейронов, преодолевших зону рубца, проведено их ретроградное маркирование через проксимальную или дистальную культю СН.

Для количественного анализа миелиновых волокон СН, преодолевших зону рубца, через 300 суток после операции у животных (n=3) были взяты проксимальные и дистальные участки травмированного нерва.

Техника экспериментов

Эксперименты на животных выполнены под нембуталовым наркозом (40 мг/кг), который вводился внутрибрюшинно. В области операционного поля на уровне бедра шерсть выстригалась и выбривалась. Кожа обрабатывалась йодом. Разрез кожи производился параллельно бедренной кости. Путем препарирования выделялся правый СН и пересекался на уровне верхней трети бедра.

Перерезка нерва производилась с помощью глазного скальпеля. Наблюдалось расхождение концов нерва на 3 - 4 мм. Культи ориентировались поперечными срезами друг к другу. Операционную рану промывали раствором пенициллина натрия (100000 ЕД в мл) и послойно ушивали непрерывными швами. Операции проводились при соблюдении всех правил асептики и антисептики. Послеоперационных животных содержали отдельно, обеспечив тщательный уход и полноценное питание. Состояние оперированных животных контролировалось на протяжении всего эксперимента.

Выведение животных из эксперимента производилось в соответствии с «Правилами работы с использованием экспериментальных животных» (Приказ Минвуза от 13.11.1984 года №724).

В конце эксперимента животные под нембуталовым наркозом перфузировались через брюшную аорту раствором параформальдегида на фосфатном буфере (37єС), после чего производилось взятие материала.

Методы гистологического исследования

Метод Ниссля. Данный метод использован для анализа размерных групп МН сегментов спинного мозга в норме (n=3). Проведено окрашивание парафиновых срезов толщиной 15 мкм крезиловым фиолетовым по Нисслю в модификации И.В. Викторова (1969). Для этого использовался забуференный 0,2% раствор крезилового фиолетового прочного рН = 3,6-3,8. В качестве буферной смеси применялись 0,1М раствор уксусной кислоты и 0,1М раствор уксусного натрия.

Морфометрия МН проводилась на центральных срезах с помощью микрометра окулярного МОВ-1-16^х с объективом Х40. Фоторегистрацию производили на микроскопе Carl Zeiss Axiovert 200 в световом режиме камерой Carl Zeiss AxioCam MRc.

Ретроградное маркирование моторных нейронов спинного мозга.

У животных контрольной группы билатеральные СН пересекались на уровне верхней трети бедра. У экспериментальных животных пересечение оперированного нерва производилось на 5 мм проксимальнее или дистальнее рубца. Контрлатеральный нерв пересекался на уровне верхней трети бедра. Затем нервы помещались в силиконовые катетеры, предварительно заполненные 10,0% раствором флуоресцентного красителя Mini-Ruby (10000, dextran, tetramethylrhodamine and lysine; Molecular Probes).

Ретроградное введение красителя производилось в течение двух часов, после этого рана промывалась нормальным физиологическим раствором и обрабатывалась антибиотиком, затем послойно ушивалась. Через 7 дней животное перфузировалось 4,0% раствором параформальдегида на 0,1М фосфатном буфере с PH = 7,2 - 7,4 через брюшную аорту. Сегменты L1-S1 спинного мозга помещались в указанный фиксатор на 24 часа (при комнатной температуре), затем материал переносился в 10,0%-ю сахарозу на фосфатном буфере на 24 часа и в 30,0% сахарозу на 72 часа в холодильник. После этого, сегменты спинного мозга заключались в 1,0% желатину на 0,1М фосфатном буфере с PH = 7,2 - 7,4. В криостате (-25єС) приготавливались поперечные и продольные срезы толщиной 50 мкм. Срезы помещались на предметные стекла, покрытые желатиной на фосфатном буфере, и сушились 2 - 3 часа. После ополаскивания дистиллированной водой сушились в темноте при комнатной температуре в течение 24-х часов. Срезы заключались в равную смесь глицерина с фосфатным буфером и накрывались покровными стеклами.

Препараты изучали на флуоресцентном микроскопе «Micros» MC 200 F (Austria) при длине волны возбуждения флуоресценции 420 - 650 нм. На серийных срезах сегментов L4-L6 спинного мозга осуществлялась идентификация маркированных нейронов в норме. Подсчет количества нейронов с одновременным определением их размерных групп производился с помощью окулярной сетки имеющей 256 квадратов при увеличении Х400. Площадь квадрата составляла 1,18 мм².

Подсчет маркированных нейронов производился по ядрам, поскольку в литературе имеются основания для использования этого метода наравне с методом объемной реконструкции перикарионов, который позволяет более точно определить количество нейронов, но является трудоемким (Ma J. et al., 2001).

Фоторегистрация производилась на флуоресцентном микроскопе Carl Zeiss Axiovert 200 камерой Carl Zeiss AxioCam MRc.

Приготовление полутонких срезов.

Изучение внутриствольного строения СН в норме и после его перерезки производилось на полутонких срезах. Материалом послужили участки СН на уровне верхней трети бедра интактных животных (n=3), а так же проксимальная и дистальная культи нервов экспериментальных крыс (n=3) через 300 суток после его перерезки. Материал фиксировался в 2,0% глютаровом альдегиде на 0,1М фосфатном буфере (РН=7,4). Фиксация проводилась в течение 60-ти минут при комнатной температуре. Далее образцы постфиксировались раствором 1,0% Os2O4 на 0,1М фосфатном буфере (РН=7,4). На следующем этапе образцы обезвоживались в водных растворах этанола: 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, в 3-х порциях 100% этанола и в 100% ацетоне при комнатной температуре по 15 минут в каждом реактиве. После обезвоживания образцы выдерживали в течение 60-ти минут в смеси ацетона с эпоксидной смолой (1:1) при комнатной температуре. Затем образцы заключались в смолу, состоящую из следующих компонентов: Araldite M, Epon 812, Epon Hardener DDSA, Epon Accelerator DMP 30 (22,5 мл, 22,5 мл, 60,0 мл, 0,6 мл соответственно) и пропитывались в ней 60 минут при температуре 37-40є С, а далее производилась их полимеризация в течение 2-х суток при 60-70єС. С блоков готовили полутонкие поперечные срезы толщиной 1мкм на ультратоме Ultracut фирмы Reichert-Jung (Austria). Просмотр материала осуществлялся на микроскопе «Micros» MC 200 F (Austria) в световом режиме.

Статистический анализ

Статистический анализ проведен с помощью компьютерной программы Statistica 6.0. Результаты подсчета представлены в виде M±у, где M - среднее количество нейронов, n - количество животных в каждой группе, у - стандартное отклонение. Для выявления достоверности различий между группами использовались Wilcoxon test и непараметрический критерий Mann-Whitney test. Достоверными считались результаты при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Локализация и количественный анализ популяции мотонейронов седалищного нерва в норме

Для выявления популяции МН, участвующих в формировании СН, нами были проанализированы сегменты L1-L6 и S1 спинного мозга белых нелинейных крыс. Непосредственное место выхода вентрального корешка из соответствующего сегмента спинного мозга идентифицировали, как середину каждого сегмента.

Исследования проводились на двух группах интактных животных. У первой группы введение Mini-Ruby через СН осуществлялось только с правой стороны (n=7). У второй группы - через правый и левый СН (n=7).

Для определения посегментарного распределения МН в спинном мозге, участвующих в формировании СН, были приготовлены продольные срезы вентральных рогов, от ростральной части сегмента L1 до каудальной S1, соответствующие IX пластинe Рекседа (Molander C. еt аl., 1984). В сегментах L1-L3, S1 маркированных МН не было выявлено. Маркированные МН располагались в сегментах L4-L6. Здесь они сформировали непрерывный тяж клеток, имеющий среднюю протяженность 8,51±0,13 мм, что согласуется с данными J.E. Swett et al. (1986); M. Behnam-Rasouli et al. (2000). Количество и плотность МН увеличивались в местах выхода корешков L4, L5 и L6. Длина каждого сегмента спинного мозга в среднем составила: L4 - 3,07±0,11 мм, L5 - 2,85±0,10 мм, а L6 - 2,59±0,09 мм.

У второй группы животных был проведен количественный анализ популяций МН в сегментах L4-L6 спинного мозга билатерально.



Рис. 1. Распределение популяции мотонейронов в вентральных рогах поясничных сегментов спинного мозга (1 - заднее латеральное ядро, 2 - собственное ядро, 3 - переднее латеральное ядро)

Выявлено, что популяция МН, маркированных через СН, локализуется в переднем и заднем латеральных, и частично в центральном ядрах (рис 1). В каудальном направлении изменяется плотность расположения МН в передних и задних латеральных группах ядер. Так в сегменте L4, большая плотность маркированных нейронов характерна для переднего латерального ядра, а в сегментах L5 и L6 максимальное количество нейронов наблюдалось в заднем латеральном ядре. В центральном ядре количество маркированных МН было незначительно на протяжении всего клеточного тяжа.

Установлено, что общее количество маркированных МН на правой и левой стороне составляет 816,86±39,37 и 835,42±32,79 соответственно, то есть не имеет достоверных различий. Выявлено, что количество МН в сегментах L4, L5, L6 спинного мозга справа и слева так же, достоверно не отличается (таблица 2).

мотонейрон седалищный нерв крыса

Таблица 2. Общее количество и размерные группы популяции мотонейронов в сегментах спинного мозга в норме. Введение Mini-Ruby через левый и правый седалищный нерв

Сегменты спинного мозга	Левая сторона (n=7)	Правая сторона (n=7)
	Всего (М±у)	Большие нейроны (М±у)	Малые нейроны (М±у)	Всего (М±у)	Большие нейроны (М±у)	Малые нейроны (М±у)
L4	248,14 ±10,96 100%	232,00 ±10,34 93,50%	16,14 ±4,56 6,50%	241,57 ± 82,55 100%	225,00 ± 15,67 93,14%	16,57 ± 2,77 6,86%
L5	360,42 ±7,46 100%	340,00 ±5,63 94,33%	20,42 ±5,13 5,67%	359,29 ± 9,92 100%	338,48 ± 10,19 94,21%	20,81 ±3,59 5,79%
L6	226,86 ±19,04 100%	208,15 ±15,30 91,75%	18,71 ±6,13 8,25%	216,00 ± 22,56 100%	201,51 ± 18,89 93,29%	14,49 ± 5,15 6,71%
ИТОГО	835,42 ± 32,79 100%	780,15 ±26,08 93,37%	55,27 ±9,74 6,63%	816,86 ± 39,37 100%	764,99 ± 33,19 93,65%	51,87 ± 8,63 6,35%

- различия между количеством больших и малых нейронов левой стороны и больших и малых нейронов правой стороны достоверны (р < 0,05)

- достоверных различий между выборками больших нейронов левой и правой стороны не выявлено (р > 0,05)

- достоверных различий между выборками малых нейронов левой и правой стороны не выявлено (р > 0,05)

Показано, что наибольшее количество маркированных МН у интактных животных локализуется в сегменте L5 (43,99% на правой и 43,14% на левой стороне). На долю сегмента L4 приходится 29,57% нейронов справа и 29,70% слева; сегмента L6 - 26,44% и 27,16% соответственно (рис. 2).

Левая сторона спинного мозга Правая сторона спинного мозга

L4 L5 L6

Рис. 2. Распределение популяции мотонейронов по сегментам спинного мозга в норме, введение Mini-Ruby через левый и правый седалищный нерв

Вопрос о размерных группах МН обсуждался во многих известных работах (Aitken J.T., Bridger J.E., 1961; Bryan R.N. et al., 1972; Pellegrini M. et al., 1977; Westbury D.R., 1979, 1982; Brushart T.M., Mesulam M.M., 1980; Peyronnard J.M., Charron L., 1980; Egger D.M., Egger D.L., 1982; Johnson I.P., 1986; Rokx J.T.M. et al., 1987; Horcholle-Bossavit G. et al., 1988; Johnson I.P., Sears T.A., 1988; Madison R.D. et al., 1996).

Основываясь на результатах морфометрии, нами были выделены две размерные группы МН: большие и малые, в зависимости от диаметра их перикарионов. Измерения размеров тел нейронов производились на центральных срезах при наличии ядрышек на препаратах, окрашенных по методу Ниссля. К группе больших МН были отнесены клетки диаметром более 25 мкм, а к малым - с диаметром менее 25 мкм. При маркировании Mini-Ruby размерные группы МН определялись при наличии ядра (Novikova L. еt аl., 1996; Welina D. еt аl., 2009).

При сравнении маркированных МН по размерным группам, было установлено, что их количество распределилось следующим образом - 764,99±33,19 больших и 51,87±8,63 малых на правой и 780,15±26,08 больших и 55,27±9,74 малых на левой стороне спинного мозга (таблица 2).

То есть, наиболее малочисленной оказалась группа малых МН, на их долю приходится в среднем 6,35% нейронов правой и 6,63% левой сторон. Большие клетки составляют основную группу среди популяции маркированных МН - 93,65% справа и 93,37% слева, что соответствует данным Л.Н. Дьячковой с соавт. (1972). Такое соотношение размерных групп характерно и для отдельных сегментов L4, L5 и L6 спинного мозга, как с правой, так и с левой стороны (таблица 2).

Общее количество маркированных МН в сегментах L4-L6 спинного мозга и распределение их по отдельным сегментам с правой и левой стороны в норме не имеет достоверных различий.

По данным M.Z. Janjua, S.K. Leong (1984); J.E. Swett еt аl. (1991) R.D. Madison еt аl. (1996); P. Negredo et al. (2004); B.S. Lutz, D. Lidman (2005); R. Redett еt аl. (2005); A. Jabbar еt аl. (2007); G.C. de Ruiter et al. (2008) популяция МН, формирующих СН крысы, может локализоваться в сегментах L2-L6, S1 спинного мозга. Однако данные, полученные в нашем исследовании, свидетельствуют, что у всех групп контрольных животных в сегментах L1, L2, L3 и S1 спинного мозга маркированных МН обнаружено не было. Таким образом, в формировании СН белой нелинейной крысы принимает участие популяция МН спинного мозга, локализованная в сегментах L4, L5 и L6.

Полученные результаты представляют группу контрольных показателей, необходимых для последующего изучения посттравматических изменений в популяции МН после перерезки СН.

2. Посттравматические изменения в популяции мотонейронов после перерезки седалищного нерва

Для установления потенциальных возможностей МН к регенерации была проведена на разных сроках эксперимента раздельная аппликация проксимальной и дистальной культей, перерезанного СН. В результате были выявлены категории МН: элиминирующие и переживающие.

Переживающие включают в себя «регенерирующие» клетки, аксоны которых проросли в дистальную культю и «резервные» нейроны, их аксоны не преодолели рубец, но они могут, участвовать при определенных условиях в регенерации или элиминировать (Ермолин И.Л., 2006; Тимофеева Л.Б. и соавт., 2010; Тимофеева Л.Б. и соавт., 2011).

При маркировании через проксимальную культю СН были выявлены переживающие (таблица 3, рис. 3) и элиминирующие МН. На 30-е сутки в изучаемых сегментах спинного мозга не было обнаружено значительной гибели МН. Важным является факт сохранения переживающих МН, которые составили 87,62% от всей популяции в норме. Полученные данные подтверждают устойчивость МН к повреждению их аксонов на ранних сроках (Carlson J. et al., 1979; Swett J.E. et al., 1991; Vanden-Noven S. et al., 1993; Brushart T.M. et al., 1998; Brannstrom T., Kellerth J.-O., 1999). На 90-е сутки элиминация МН продолжилась, незначительно превысив показатели 30-х суток. Количество переживающих нейронов уменьшилось до 82,02%, что достоверно отличается от нормы. Начиная со 150-х суток и до конца эксперимента, было выявлено статистически значимое увеличение гибели аксотомированных нейронов. Так на 150-е сутки, переживающие МН уменьшились до 61,23%, а к 300-м суткам до 40,41% от нормы (таблица 3). Вероятно, элиминировавшие МН оказались неспособны к восстановлению утраченных и созданию новых контактов (Crouch M.F. еt аl., 1994).

Таблица 3. Общее количество мотонейронов в популяции и распределение их в сегментах спинного мозга при введении Mini-Ruby через седалищный нерв в норме и проксимальную культю после его перерезки на разных сроках эксперимента

Сегменты спинного мозга	Норма (n=7) (М±у)	30 суток (n=8) (М±у)	90 суток (n=5) (М±у)	150 суток (n=5) (М±у)	300 суток (n=8) (М±у)
L4	241,57 ±82,55 100%	200,13 ±34,42* 82,85%	196,20 ±44,01** 81,22%	161,40 ±39,50** 66,81%	108,75 ±15,08** 45,02%
L5	359,29 ±9,92 100%	344,38 ±20,11* 95,85%	318,60 ±35,25** 88,67%	243,80 ±45,35** 67,86%	150,38 ±23,83** 41,85%
L6	216,00 ±22,56 100%	171,25 ±53,86* 79,28%	155,20 ±13,08** 71,85%	95,00 ±29,41** 43,98%	71,00 ±8,28** 32,87%
ИТОГО	816,86 ±39,37 100%	715,75 ±95,17* 87,62%	670,00 ±75,93** 82,02%	500,20 ±106,26** 61,23%	330,13 ±43,10** 40,41%

* - достоверно не отличается от нормы (р > 0,05)

** - достоверно отличается от нормы (р < 0,05)

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

большие нейроны

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

малые нейроны

Рис. 3. Динамика общего количества мотонейронов в популяции и соотношение их размерных групп в сегментах спинного мозга в норме и при введении Mini-Ruby через проксимальную культю седалищного нерва

При введении Mini-Ruby через дистальную культю СН были установлены «регенерирующие» нейроны (таблица 4, рис. 4). Наибольшее количество МН, аксоны которых смогли преодолеть зону рубца, было выявлено на 90-е и 150-е сутки - 34,01% и 30,26% от нормы соответственно. Данные на 30-е и 300-е сутки демонстрируют меньшие значения и так же близки между собой - 23,36% и 24,03% от популяции нейронов в норме соответственно (таблица 4). Количественные показатели «регенерирующих» МН хотя и изменялись на протяжении всего эксперимента, но не были статистически достоверны.

Таблица 4. Общее количество мотонейронов в популяции и распределение их в сегментах спинного мозга при введении Mini-Ruby через седалищный нерв в норме и дистальную культю после его перерезки на разных сроках эксперимента

Сегменты спинного мозга	Норма (n=7) (М±у)	30 суток (n=5) (М±у)	90 суток (n=5) (М±у)	150 суток (n=5) (М±у)	300 суток (n=7) (М±у)
L4	241,57 ±82,55 100%	51,20 ±10,92* 21,19%	79,40 ±38,97* 32,87%	75,80 ±13,99* 31,38%	58,57 ±6,83* 24,25%
L5	359,29 ±9,92 100%	107,60 ±17,99* 29,95%	146,20 ±59,18* 40,69%	122,80 ±45,17* 34,18%	92,43 ±35,89* 25,73%
L6	216,00 ±22,56 100%	32,00 ±7,11* 14,81%	52,20 ±26,64* 24,17%	48,60 ±10,06* 22,50%	45,29 ±5,50* 20,97%
ИТОГО	816,86 ±39,37 100%	190,80 ±10,23* 23,36%	277,80 ±121,89* 34,01%	247,20 ±54,99* 30,26%	196,29 ±42,13* 24,03%

* - достоверно отличается от нормы (р < 0,05)



Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

большие нейроны

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

малые нейроны

Рис. 4. Динамика общего количества мотонейронов в популяции и соотношение их размерных групп в сегментах спинного мозга в норме и при введении Mini-Ruby через дистальную культю седалищного нерва

По данным литературы при различных способах восстановления периферических нервов количество регенерировавших МН увеличилось (Gilmour J.A. et al., 1995; Madison R.D. еt аl., 1996; Brushart T.M. et al., 1998; Valero-Cabre A. et al., 2001, 2004; Redett R. et al., 2005; Puigdellivol-Sanchez A. et al., 2006). Однако в ряде случаев, даже использование методов пластики, не гарантировало успешной регенерации (Negredo P. et al., 2004; de Ruiter G.C. et al., 2008).

Нами было установлено, что на протяжении всего эксперимента происходило уменьшение «резервных» МН. Наибольшее их количество выявлено на 30-е и 90-е сутки исследования - 64,26% и 48,01% соответственно. Начиная со 150-х суток, количество данных нейронов сократилось, уменьшившись к концу эксперимента до 16,38% от нормы.

По отдельным изучаемым сегментам спинного мозга маркированные нейроны распределялись неравномерно. Больше всего переживающих и «регенерирующих» МН от нормы выявлено в сегменте L5, меньше всего - в L6. Такое соотношение их количества, с незначительными изменениями было характерно для всех сроков наблюдения (таблица 3,4; рис. 3,4).

Начиная с 30-х суток эксперимента, произошли изменения в соотношении больших и малых МН по сравнению с показателями в норме.

Анализ размерных групп среди переживающих нейронов на 30-е сутки выявил резкое увеличение в 4 раза количества малых МН по сравнению с нормой. Малые МН составили 29,47% от всех переживающих клеток (рис.3). Среди «регенерирующих» МН, также было установлено достоверное увеличение количества малых нейронов, составляющих почти половину - 46,33% (рис.4). Это соответствует результатам исследований C.C. Kao еt аl. (1977); S. Vanden-Noven et al. (1993); L.J. Martin et al. (1999); A.A. Delshad et al. (2008).

На 90-е сутки количество малых МН продолжило увеличиваться, превысив норму в 4,5 раза. Выявлено 35,73% малых МН от всех переживающих (рис.3). Интересно отметить, что среди «регенерирующих» нейронов, была выявлена тенденция их возвращения к показателям в норме. Малые МН составили 7,85% (в норме 6,35%), большие 92,15% (в норме 93,65%) (рис.4). По сравнению с 30-ми сутками, где соотношение больших и малых нейронов было примерно равное, на данном сроке вновь преобладают большие МН. По-видимому, МН, чьи аксоны регенерировали через рубец, смогли восстановиться до исходных размеров (Seniuk N.A., 1992).

На 150-е сутки количество малых МН среди переживающих по сравнению с предыдущим сроком уменьшилось, но все еще превышает норму в 2,6 раза. Малые МН составляют 27,51% от всех переживающих клеток (рис.3). Среди «регенерирующих» МН наблюдалась тенденция к возвращению соотношения размерных групп к норме, как на 90-е сутки. Общее количество малых МН на 150-е сутки составило 8,50%, больших - 91,50% (рис.4).

На 300-е сутки общее количество малых нейронов среди переживающих клеток составило 11,40%, больших нейронов - 88,60%. Такое соотношение размерных групп МН приближается к показателям в норме (рис.3). Аналогичная тенденция касается и «регенерирующих» МН. К концу эксперимента преобладают большие МН над малыми - 94,69% и 5,31% соответственно (рис.4).

По отдельным сегментам изменение соотношения размерных групп МН демонстрирует на всех сроках такую же тенденцию (рис.3,4).

Таким образом, перерезка СН вызвала посттравматические изменения в популяции МН с сочетанием дегенеративных и репаративных процессов на всех сроках наблюдения. Ведущим показателем ретроградной дегенерации является массовая элиминация МН, возникающая вследствие повреждения их аксонов, которая продолжается на всех сроках, не завершаясь и к 300-м суткам эксперимента (таблица 3; рис. 3).

Для выявления возможных изменений в популяции МН контрлатеральной стороны спинного мозга было проведено ее исследование на всех сроках эксперимента. Это было вызвано тем, что по данным J.A. Gilmour еt аl. (1995); S.J. Madorsky еt аl. (1998) повреждение нерва на ипси- стороне вызывает изменения и на противоположной. Кроме этого есть сведения, указывающие на уменьшение количества МН у крыс с возрастом K. Tada еt аl. (1979); I.A. Scarisbrik et al. (1990); D.S. Rootman et al. (1981).

Сравнение популяции маркированных МН контрлатеральной стороны интактных и экспериментальных животных на 30-е, 90-е, 150-е и 300-е сутки, не показало достоверных различий, как по общему количеству нейронов в сегментах L4-L6 спинного мозга, так и по отдельным сегментам. Анализ соотношения больших и малых МН так же, не выявил достоверных различий (рис. 5).



Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

большие нейроны

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

малые нейроны

Рис. 5. Общее количество мотонейронов в популяции и соотношение их размерных групп в сегментах спинного мозга при введении Mini-Ruby через седалищный нерв контрлатеральной стороны

То есть, представляется возможным использовать популяцию МН контрлатеральной стороны экспериментальных животных в качестве контроля при одностороннем воздействии на СН, что согласуется с данными M. Behnam-Rasouli et al. (2000); T. Tiraihi, M.J. Rezaie (2003); B.S. Lutz, D. Lidman (2005); A. Puigdellivol-Sanchez et al. (2006); A. Roozbehi et al. (2006); K. Saxena et al. (2007); A.A. Delshad et al. (2008); T. Chu еt аl. (2008) и др.

3. Морфология седалищного нерва в норме

На уровне верхней трети бедра в СН хорошо различаются четыре пучка нервных волокон, окруженных периневрием. Они соответствуют большеберцовому (n. tibialis), малоберцовому (n. peroneus), икроножному (n. suralis) и боковому икроножному (lateral sural n.) нервам (Bruner R. et al., 1980); Swett J.E., 1986).

Внутри пучков, окруженных периневрием, миелиновые нервные волокна располагаются равномерно и отделены друг от друга тонкими прослойками соединительной ткани, содержащей сосуды. По нашим данным количество миелиновых волокон СН на уровне верхней трети бедра составило 5301,00±499,04 на левой и 5371,33±548,69 на правой стороне (рис. 6).

На полутонких срезах СН в норме все миелиновые волокна были разделены по калибру на три группы. Диаметр крупных волокон составил 9,78±0,98 мкм, средних - 5,86±0,68 мкм, мелких - 3,07±0,33 мкм. Аналогичное разделение миелиновых волокон по диаметру производили Н.А. Щудло с соавт. (2001), но в седалищном нерве собаки.

Крупные миелиновые волокна были наиболее многочисленны, как с левой - 48,16%, так и с правой - 50,02% стороны. Волокна среднего калибра составили 43,87% слева и 43,58% справа. Самой малочисленной оказалась группа мелких волокон - 7,97% слева и 6,39% справа (рис.6).

Рис. 6. Общее количество и размерные группы миелиновых нервных волокон в левом и правом седалищных нервах в норме (Всего - общее количество волокон, Кр - крупные волокна, Ср - средние волокна, М - мелкие волокна)

Статистически достоверных различий между общим количеством миелиновых нервных волокон и соотношением их размерных групп в левом и правом СН не найдено (р > 0,05), что соответствует исследованиям D. Prodanov, H.K.P. Feirabend (2007).

4. Изменение структуры седалищного нерва после его перерезки

Структурное и функциональное восстановление периферических нервов после перерезки у крысы на ранних сроках (до 100 суток) достаточно изучено (Le Beau J.M. et al., 1988; Hasan N.A-K.E-S. et al., 1996; Kadoya T. et al, 2005). Данные же касающиеся более длительных периодов наблюдений связаны или с хирургическим восстановлением поврежденных нервов молодых крыс (Kawasaki Y. et al., 2000; Meek M.F. et al., 2007), или предотвращением регенерации в дистальные участки нервов (Peyronnard J.M. et al., 1986; Kerezoudi E. et al., 1995). В связи с этим, нами было проведено исследование СН на 300-е сутки после его перерезки.

Известно, что в области травмы формируется рубец, который делит поврежденный нерв на проксимальную и дистальную культи (Григорович K.A., 1969,1981; Щудло M.M., 1999; Morris J.H. et al., 1972; Ahmed A.M., Weller R.O., 1979 и др.).

Таблица 5. Общее количество и соотношение размерных групп миелиновых нервных волокон в интактном нерве, в проксимальной и дистальной культе седалищного нерва на 300-е сутки после его перерезки

Кол-во волокон Размерные группы	Интактный нерв (n=3)	Проксимальная культя (n=3)	Дистальная культя (n=3)
Общее кол-во волокон (М±у)	5371,33 ±548,69 100%	4288,33 ±464,17* 79,84%	3348,67 ±1072,64* 62,34%
Крупные волокна (М±у)	2687,00 ±286,97 100%	1543,33 ±211,52* 57,44%	683,67 ±52,62* 25,44%
Средние волокна (М±у)	2341,00 ±551,07 100%	1837,00 ±145,43* 78,47%	1323,67 ±430,59* 56,54%
Мелкие волокна (М±у)	343,33 ±108,65 100%	908,00 ±329,46* 264,47%	1341,33 ±802,65* 390,68%

* - различия между интактным нервом и данными выборками достоверны при (р < 0,05)

По нашим наблюдениям к 300-м суткам в проксимальной культе СН на уровне 5-ти мм от рубца сохраняется пучковость и все оболочки, характерные для интактного нерва. Однако в эпи- и периневрии жировая ткань выражена в большей степени, чем в норме. Общее количество миелиновых волокон уменьшилось до 79,84% от интактного нерва. При этом наблюдается уменьшение количества волокон диаметром более 4 мкм (что соответствует данным Dyck P.J. et al., 1981). По нашим данным крупных волокон становится 57,44%, а средних 78,47% от нормы. Число волокон мелкого калибра существенно увеличивается, достигая 264,47% от интактного нерва (таблица 5).

В дистальной культе СН на уровне 5-ти мм от рубца наружные оболочки нерва сохраняются, но в эпиневрии выявляются регенерирующие нервные волокна, а эндоневрий толще, чем в норме. Внутриствольная организация нервного ствола значительно отличается от интактного нерва, что выражается в появлении мелкопучковости. Визуальный анализ выявил преобладание нервных волокон с тонкими миелиновыми оболочками, крупные волокна не многочисленны (согласуется с данными Le Beau J.M. et al., 1988; Giannini C. et al., 1989). По нашим наблюдениям пучки образованы в основном продольно ориентированными миелиновыми нервными волокнами. Значительная их часть образует мультипликации. Общее количество миелиновых волокон уменьшается до 62,34% от нормы (что соответствует данным Horch K.W., Lisney S.J., 1981; Le Beau J.M. et al., 1988; Giannini C. et al., 1989). При этом особенно уменьшилось количество крупных волокон до 25,44% от нормы. Средние и мелкие нервные волокна демонстрируют практически одинаковые абсолютные показатели, однако по сравнению с нормой количество средних волокон уменьшилось до 56,54%, а мелких наоборот увеличилось до 390,68% (таблица 5). Увеличение волокон мелкого калибра можно объяснить тем, что, преодолевая зону соединительнотканного рубца, диаметр волокон уменьшается с появлением множественных мультипликаций.

В нашем исследовании перерезка СН к 300-м суткам привела к гибели значительного количества аксотомированных МН. Показатель переживающих и «регенерирующих» нейронов к данному сроку в изучаемой популяции МН значительно уменьшился, достигая 40,41% и 24,03% от нормы соответственно. То есть, гибель аксотомированных нейронов повлекла за собой уменьшение количества миелиновых волокон поврежденного СН. С другой стороны, изменения, произошедшие в проксимальной и дистальной культях данного нерва, и негативное влияние соединительнотканного рубца (Зяблов В.И., Карлсон Б.М., 1986; Гретен А.Г., 1990; Величанская А.Г., Гретен А.Г., 2004; Ермолин И.Л., 2006; Cajal S.R., 1928 и др.) привело к дегенеративным изменениям в популяции МН.

Таким образом, из проведенных исследований и обзора литературы, очевидно, что полное восстановление СН после его перерезки даже при использовании хирургических методов не дает существенных результатов. То есть, для повышения показателей регенерации совместно с анатомическим восстановлением необходимо применять дополнительно различные стимуляторы и факторы роста нервов (Челышев Ю.А., 1995; Zochodne D.W., Cheng C., 2000; Zochodne D.W., 2000).

Важным вопросом является установление оптимальных сроков для проведения мероприятий по анатомическому восстановлению перерезанного нерва. В нашем случае эти сроки определены количеством «резервных» МН и ограничены 30-ми и 90-ми сутками после его повреждения.

ВЫВОДЫ

1. Популяция мотонейронов, участвующих в формировании седалищного нерва у белой нелинейной крысы в норме, локализуется в сегментах L4-L6 спинного мозга. В пластине Рекседа данная популяция имеет длину 8,51±0,13 мм, расширяясь в местах выхода вентральных корешков. Сегменты имеют разную длину: L4 - 3,07±0,11 мм; L5 - 2,85±0,10 мм; L6 - 2,59±0,09 мм. Посегментарно мотонейроны распределяются неравномерно. Наибольшее их количество локализуется в сегменте L5 - 43,99% на правой стороне и 43,14% на левой стороне (от всей популяции). На долю сегмента L4 приходится 29,57% нейронов справа и 29,70% слева, сегмента L6 - 26,44% справа и 27,16% слева.

2. В популяции мотонейронов седалищного нерва в норме выделены две размерные группы: большие (d>25 мкм) и малые (d<25 мкм). Группа больших мотонейронов составляет 93,65% с правой и 93,37% с левой стороны, а малых - 6,35% справа и 6,63% слева.

3. После перерезки седалищного нерва в популяции выделены категории элиминирующих и переживающих мотонейронов, последняя включает «регенерирующие» и «резервные» клетки. Среди элиминирующих нейронов выявлена тенденция к увеличению их количества на всех сроках эксперимента, достигающая к 300-м суткам 59,59% от популяции. На сроках 30, 90, 150 и 300 суток количество «регенерирующих» нейронов составляло 23,36%, 34,01%, 30,26% и 24,03% от нормы, а «резервных» - 64,26%, 48,01%, 30,97% и 16,38% соответственно. Основываясь на полученных данных, сроки восстановления двигательной части рефлекторной дуги ограничены 90-ми сутками.

4. Перерезка седалищного нерва на ранних сроках приводит к изменению соотношения размерных групп мотонейронов, в сторону увеличения малых нейронов. Среди «регенерирующих» мотонейронов процентное соотношение размерных групп приближается к показателям в норме на 90-е сутки, а среди переживающих - на 300-е сутки эксперимента.

5. В седалищном нерве белой нелинейной крысы количество миелиновых волокон на уровне верхней трети бедра в норме составляет 5371,33±548,69 на правой и 5301,00±499,04 на левой стороне.

Перерезка седалищного нерва на 300-е сутки приводит к изменению архитектоники нерва. В проксимальной культе общее количество миелиновых волокон уменьшается до 79,84%, а в дистальной культе до 62,34% по сравнению с интактным нервом. В дистальной культе появляется мелкопучковость и уменьшается калибр миелиновых нервных волокон вследствие их мультипликаций.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ермолин И.Л., Величанская А.Г., Тимофеева Л.Б., Благова Н.В., Ермолина Е.А. / Выживаемость нейронов после повреждения их отростков у взрослой крысы // Морфология - 2008. - Т.134, №5 - С. 68.

2. Благова Н.В., Ермолин И.Л., Величанская А.Г., Ермолина Е.А. / Количественный анализ билатеральных мотонейронов поясничного отдела спинного мозга у половозрелых крыс в норме // Научно-практическая конференция с международным участием, посвящённая 85-летию со дня рождения д.м.н., профессора Степанова П.Ф. - Смоленск - 2009. - С. 14-15.

3. Благова Н.В., Ермолин И.Л. / Количественный анализ популяции мотонейронов спинного мозга, участвующих в образовании седалищного нерва // Морфология - 2010. - №4 - С. 33.

4. Благова Н.В., Ермолин И.Л. / Особенности распределения популяции мотонейронов спинного мозга участвующих в седалищном нерве взрослых крыс // Журнал теоретической и практической медицины - 2010. - Т.8, спец. выпуск - С. 76-77.

5. Тимофеева Л.Б., Благова Н.В., Величанская А.Г., Балалаева И.В., Ермолин И.Л. / Морфология популяций чувствительных и моторных нейронов, формирующих седалищный нерв в норме и при его перерезке у взрослых крыс // Современные технологии в медицине - 2010. - №3. - С. 18-23.

6. Тимофеева Л.Б., Благова Н.В., Величанская А.Г., Ермолин И.Л. / Динамика количества чувствительных и моторных нейронов, участвующих в регенерации седалищного нерва крысы после его перерезки // Морфологические ведомости - 2011. - №1. - С. 52-57.

7. Тимофеева Л.Б., Благова Н.В., Величанская А.Г., Ермолин И.Л. / Устойчивость чувствительных и моторных нейронов в ответ на перерезку их периферических отростков // Современные технологии в медицине - 2011. - №2. - С. 114-117.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

«регенерирующие» нейроны - ретроградно маркированные через дистальную культю регенерировавшего нерва, их аксоны преодолевают рубец

«резервные» нейроны - их аксоны не преодолели рубец, но они могут, участвовать при определенных условиях в регенерации или элиминировать

переживающие нейроны - ретроградно маркированные через проксимальную культю регенерировавшего нерва

МН - мотонейроны

СН - седалищный нерв

L1 - 1-й поясничный сегмент

L2 - 2-й поясничный сегмент

L3 - 3-й поясничный сегмент

L4 - 4-й поясничный сегмент

L5 - 5-й поясничный сегмент

L6 - 6-й поясничный сегмент

S1 - 1-й сакральный сегмент

Размещено на Allbest.ru

...