Влияние лектина бацилл на цитокиновую активность фагоцитов

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Влияние лектина бацилл на цитокиновую активность фагоцитов

03.00.07 - микробиология

14.00.36 - аллергология и иммунология

Горельникова Е.А.

Саратов - 2006

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный агарный университет им. Н.И. Вавилова»

Научные руководители: доктор биологических наук

Карпунина Лидия Владимировна

доктор биологических наук

Тихомирова Елена Ивановна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Васильев Дмитрий Аркадьевич

доктор медицинских наук, профессор

Девдариани Зураб Леванович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Оренбургский государственный университет»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Внимание исследователей к различным аспектам изучения лектинов, относящихся к биологически активным белкам с широким спектром действия, связано с перспективами их использования в биологии и экспериментальной медицине. За последние годы в лектинологии наметился переход от изучения лектинов растительного и животного происхождения к изучению микробных лектинов. Значительно возрос интерес к лектинам, выделенным из непатогенных бактерий (Линевич, 1979; Лахтин, 1992; Никитина 2001; Карпунина, 2002; 2005; Шендеров, Лахтин, 2004). Эта тенденция не случайна: микробные лектины, выделенные из непатогенных бактерий, характеризуются высокой удельной активностью, большим разнообразием по углеводной специфичности и, что немаловажно, малым токсическим действием на макроорганизм. Специфически связываясь с углеводной детерминантой клеточной поверхности, лектины способны не только блокировать воздействие на клетку тех или иных неблагоприятных факторов, но и специфически активизировать внутриклеточные метаболические процессы, т.е. изменять функциональное состояние клеток и тканей (Луцик, 1985; Мухачёва, 2004; Абросимова, 2006). Являясь биологически активными веществами, бактериальные лектины потенциально могут обладать иммуномодулирующими свойствами, что и было показано в работах ряда авторов (Никитина и др., 2002; Тихомирова и др. 2003; Тихомирова, 2005). лектин бактерия альвеолярный синтез

Наиболее актуальным является направление исследований, связанное с изучением провоспалительных цитокинов. Из литературных данных известно, что в иммунном ответе на ряд инфекционных агентов огромную роль играют начальные этапы инфекционного процесса, связанные с формированием острой фазы воспалительной реакции, опосредованной синтезом провоспалительных цитокинов (Фрейдлин, 1995; Сепиашвили, 2003; Agace, 1993; Yao, 1995). Основными продуцентами провоспалительных цитокинов в организме являются клетки моноцитарно-фагоцитарной системы. Чрезвычайный интерес в настоящее время представляет проблема коррекции иммунного статуса, в том числе и с участием бактериальных лектинов. Однако, сведений о влиянии лектинов микробного происхождения на продукцию провоспалительных цитокинов макрофагами в изученной литературе обнаружено не было. Поэтому, исследование влияния лектина Paenibacillus polymyxa 1460 на синтез провоспалительных цитокинов является интересной и актуальной задачей.

Цель работы состояла в исследовании in vivo и in vitro влияния лектина ЛII P.polymyxa 1460 на синтез провоспалительных цитокинов макрофагами при фагоцитозе бактерий и инфекционном процессе.

Задачи исследования:

1. Изучить синтез провоспалительных цитокинов перитонеальными и альвеолярными макрофагами интактных мышей при фагоцитозе бактерий in vitro.

2. Изучить влияние бактериального лектина ЛII P.polymyxa 1460 in vivo на синтез провоспалительных цитокинов макрофагами мышей при фагоцитозе бактерий.

3. Провести сравнительный анализ действия лектина ЛII P.polymyxa 1460 на синтез провоспалительных цитокинов при фагоцитозе грамположительных и грамотрицательных бактерий.

4. Исследовать взаимодействие лектина ЛII P.polymyxa 1460 in vitro с поверхностными рецепторами альвеолярных и перитонеальных макрофагов и выявить цитокинсинтезирующую активность в этих условиях.

5. Оценить цитокиновый статус организма экспериментальных животных при моделировании стафилококковой, эшерихиозной и иерсиниозной инфекции на фоне действия лектина ЛII P.polymyxa 1460.

Научная новизна

Впервые in vivo и in vitro изучено влияние лектина ЛII, выделенного с поверхности почвенных азотфиксирующих бактерий P.polymyxa 1460, специфичного к галактозамину, глюкуроновой кислоте, фруктозе-1,6-дифосфату, глюкозамину, на синтез провоспалительных цитокинов перитонеальными и альвеолярными макрофагами при фагоцитозе бактерий. Показано, что введение лектина мышам усиливает синтез макрофагами интерлейкина-1 (ИЛ-1) и фактора некроза опухоли-б (ФНО-б) при фагоцитозе in vitro бактерий Staphylococcus aureus 100б и Escherichia coli Ca 53, но снижает при фагоцитозе Yersinia enterocolitica 295_82.

Установлено снижение содержания ИЛ-1 и ИЛ-6 в сыворотке крови экспериментальных животных при стафилококковой, эшерихиозной, иерсиниозной инфекции и ФНО-б при стафилококковой инфекции на фоне действия лектина.

Показано, что специфическое взаимодействие лектина ЛII P.polymyxa 1460 с поверхностными рецепторами альвеолярных и перитонеальных макрофагов способствует изменению продукции цитокинов.

Практическая значимость

Полученные данные вносят существенный вклад в познание спектра биологической активности бактериальных лектинов и открывают перспективы их возможного использования в биологии и экспериментальной медицине.

По материалам диссертационной работы написаны методические рекомендации для студентов старших курсов и аспирантов, специализирующихся в области микробиологии «Изучение влияния лектинов бацилл на синтез цитокинов макрофагами» (в соавторстве с Е.И. Тихомировой, О.В. Кочергиной, Е.С. Мухачёвой и Л.В. Карпуниной), рекомендованные учебно-методической комиссией и одобренные Учёным советом биологического факультета СГУ (протокол №2 от 4 ноября 2003 г.). Материалы диссертационной работы нашли применение при чтении лекций по курсу «Микробиология» для студентов и аспирантов Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова, по курсу «Молекулярная иммунология» для студентов биологического факультета Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Введение лектина ЛII P.polymyxa 1460 мышам неоднозначно влияет на способность макрофагов к синтезу ИЛ-1, ФНО-б при фагоцитозе in vitro разных видов бактерий: цитокинсинтезирующая активность усиливается при фагоцитозе S.aureus 100б и E.coli Ca 53, но снижается при фагоцитозе Y.enterocolitica 295_82.

2. Лектин ЛII P.polymyxa 1460 специфически взаимодействует с поверхностными структурами альвеолярных и перитонеальных макрофагов, изменяя их цитокинсинтезирующую активность.

3. Лектин ЛII способствует снижению в сыворотке крови мышей ИЛ-1 и ИЛ-6 при стафилококковой, эшерихиозной, иерсиниозной инфекции; ФНО_б - при стафилококковой инфекции.

Апробация работы:

Материалы диссертации были представлены на: втором конгрессе «Научная молодёжь на пороге XXI века» (Россия, Томск, 2001); третьем конгрессе «Науки о человеке» (Россия, СГМУ, Томск, 2002); Международной научно-практической школы-конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (Россия, Санкт-Петергбург, 2002); первой и второй региональных конференциях молодых учёных: «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Россия, ИБФРМ РАН, Саратов, 2002; 2004); межрегиональной научной конференции молодых учёных и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа (Россия, Саратов, 2003); объединённом иммунологическом форуме (Россия, Екатеринбург, 2004); конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы за 2002, 2003, 2004 гг. (СГАУ им. Н.И. Вавилова, Саратов), региональной конференции молодых учёных «Вавиловские чтения - 2005» (Россия, Саратов, 2005); международной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Россия, Ульяновск, 2006).

Работа выполнена на кафедре микробиологии и ветсанэкспертизы, переименованной впоследствии с 20.09.2006 г. в кафедру микробиологии, вирусологии и иммунологии факультета ветеринарной медицины Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Изучение биологически-активных веществ (лектинов) в регуляции метаболизма растений и животных».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 работ.

Структура и объём работы

Диссертация состоит из введения, двух глав, включающих обзор литературы, описание материалов и методов, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 123 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и содержит 1 таблицу. Список использованных литературных источников включает 148 наименований, в том числе 66 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектом исследования являлся лектин ЛII, выделенный с поверхности почвенных азотфиксирующих бактерий Paenibacillus polymyxa (Bacillus polymyxa) 1460 (Карпунина, 1993). Культура P.polymyxa 1460 была получена из Чешской коллекции микроорганизмов (СММ). Лектин ЛII выделяли по методу Л.В. Карпуниной (2002).

В работе использовали бактерии: Staphylococcus aureus 100 б, S.aureus 209_P, Escherichia coli Ca 53, полученные из коллекции культур микроорганизмов кафедры микробиологии Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского; E.сoli О1, Yersinia enterocolitica 295_82, Y.enterocolitica 12, полученные из музея культур микроорганизмов кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова».

Перитонеальные макрофаги (ПМФ) забирали из брюшной полости мышей, альвеолярные макрофаги (АМФ) получали из лёгких мышей по общепринятой методике (Кондратьева, Воробьёва, Буракова, 2001). В качестве доноров макрофагов использовали беспородных белых мышей-самцов, весом - 18-20 г, возрастом - 2-3 месяца.

Число жизнеспособных макрофагов определяли методом эксклюзии трипанового синего (Лимфоциты:…, 1990; Кондратьева, Воробьёва, Буракова, 2001).

При моделировании процесса фагоцитоза in vitro лектин бацилл в концентрации 0,4 мкг/мл вводили мышам внутрибрюшинно по 0,2 мл. Исследования проводили через 1, 3, 5 и 7 суток после введения лектина.

Провоспалительные цитокины: фактор некроза опухоли б (ФНО-), интерлейкин 1 (ИЛ-1), интерлейкин 6 (ИЛ-6) определяли с помощью тест-систем иммуноферментных моноклональных, разработанных ГосНИИОЧБ (г. Санкт_Петербург) и производимых фирмами АО «Иммунодиагностика» (г. Санкт_Петербург) и ТОО «Протеиновый контур» (г. Санкт_Петербург).

При изучении влияния лектина ЛII in vivo на цитокинсинтезирующую активность макрофагов ФНО-б, ИЛ-1 определяли в среде культивирования АМФ и ПМФ с бактериями через 30 минут, 1, 6, 12 и 24 часа фагоцитоза.

Для доказательства специфического взаимодействия лектина ЛII с поверхностью макрофагов проводили эксперименты с белком, не обладающим лектиновыми свойствами - бычьим сывороточным альбумином (БСА) и с лектином ЛII (0,004 мкг/мл), блокированным специфичными к нему углеводами (D_галактозамином, глюкуроновой кислотой, фруктозо-1,6-дифосфатом и глюкозамином).

При моделировании инфекционного процесса использовали суточные культуры S.aureus 209-Р, E.coli О1 и Y.enterocolitica 12. Бактерии вводили белым мышам по 0,2 мл внутрибрюшинно в дозе 5 тыс. кл./мл. Лектин ЛII в концентрации 0,4 мкг/мл вводили белым мышам по 0,2 мл внутрибрюшинно за 24 часа и через 1 час после заражения. Через 1, 6 и 24 часа мышей умерщвляли транслокацией шейных позвонков, брали кровь из сердца, получали сыворотку по общепринятой методике (Кондратьева, Воробьёва, Буракова, 2001) и определяли в ней содержание провоспалительных цитокинов.

Статистическую обработку результатов производили по общепринятым методам с использованием t-критерия Стьюдента (Ашмарина, Васильев, Амбросов, 1974; Воробьёв, Елсуков, 1989). Также использовали приложение Excel из пакета Microsoft Office 2003.

Влияние лектина ЛII Paenibacillus polymyxa 1460 на синтез провоспалительных цитокинов макрофагами при фагоцитозе бактерий

Первоначальным этапом наших исследований было изучение влияния in vitro лектина ЛII P.polymyxa 1460 на синтез ИЛ-1 и ФНО-б макрофагами в процессе фагоцитоза in vitro грамположительных бактерий S.aureus 100б. Результаты исследований позволили установить, что макрофаги, выделенные из организма мышей через сутки после введения лектина, активнее синтезировали провоспалительные цитокины, чем контрольные макрофаги из организма интактных мышей. Наибольшая концентрация цитокинов в среде культивирования фагоцитирующих макрофагов наблюдалась к 6 часам процесса фагоцитоза стафилококка. Отмечено, что перитонеальные макрофаги были более активными в продукции цитокинов, чем альвеолярные. Макрофаги, выделенные из организма мышей на 3 сутки после введения лектина, активно синтезировали ФНО- через 30 минут, 1 и 6 часов фагоцитоза in vitro бактерий, при этом ПМФ также были более активны в продукции цитокинов, чем АМФ. На 5 сутки после введения лектина содержание ФНО_ было на уровне контроля (для ПМФ) и даже ниже его (для АМФ) к 6 часам инкубации макрофагов с бактериальным клетками. Как в отношении ФНО_, так и в отношении ИЛ-1, ПМФ проявляли бульшую цитокинсинтезирующую активность. На 7 сутки после введения лектина наблюдалась общая тенденция к снижению синтеза цитокинов макрофагами по сравнению с данными, полученными на 1, 3 и 5 сутки эксперимента (рис. 1).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 1. Синтез цитокинов макрофагами мышей при фагоцитозе S.aureus 100б в различные сроки после введения лектина ЛII

В связи с отличиями в строении клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактериальных клеток и возможном отличии в их рецепторном аппарате, представляло интерес посмотреть влияние данного лектина на синтез провоспалительных цитокинов ФНО-б и ИЛ-1 макрофагами при фагоцитозе грамотрицательных бактерий E.coli Ca53 и Y.enterocolitica 295_82.

В процессе исследований было обнаружено, что через сутки после введения лектина бацилл наблюдалось снижение синтеза ИЛ-1 альвеолярными и перитонеальными макрофагами при фагоцитозе E.coli Ca 53. На 3 сутки после введения лектина, синтез ИЛ-1 и ФНО- перитонеальными макрофагами увеличивался к 6 часам процесса фагоцитоза эшерихии, но был ниже контрольных значений. Через 5 суток после введения лектина концентрация цитокинов в среде культивирования фагоцитирующих клеток была выше контрольных значений на всех стадиях фагоцитоза. На 7 сутки после введения в организм мышей лектина ЛII альвеолярные макрофаги активнее синтезировали ФНО-б, а перитонеальные - ИЛ-1 при фагоцитозе in vitro эшерихий (рис. 2). Было замечено, что цитокинсинтезирующая активность альвеолярных макрофагов была выше, чем перитонеальных во все сроки исследования.

Полученные данные позволили сделать предположение, что увеличение цитокиновой активности макрофагов из организма мышей после введения лектина ЛII P.polymyxa 1460 может быть объяснено либо непосредственной их стимуляцией путём связывания с соответствующими рецепторами, либо опосредованным взаимодействием лектина с Toll-рецепторами макрофагов или их структурными аналогами, которые ответственны за активацию синтеза цитокинов.

Cравнение цитокиновой активности макрофагов в процессе фагоцитоза грамположительных и грамотрицательных клеток показало бульшую эффективность при фагоцитозе S.aureus 100б на 1 и 3 сутки, в процессе фагоци-

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 2. Синтез цитокинов макрофагами мышей при фагоцитозе E.coli Ca 53 в различные сроки после введения лектина ЛII

тоза Е.соli Са 53 - на 5 и 7 сутки после введения мышам лектина. При этом перитонеальные макрофаги были более активны в синтезе цитокинов при фагоцитозе стафилококка, а альвеолярные - при фагоцитозе эшерихий.

Аналогичные исследования были проведены и в отношении фагоцитоза Y.enterocolitica 295-82 (рис. 3). Показано, что через сутки после введения мышам лектина, синтез цитокинов макрофагами снижался к 6 часам фагоцитоза in vitro иерсиний. Макрофаги, выделенные на 3 и 5 сутки, обладали сходной активностью цитокинов: концентрация ФНО- снижалась до уровня контроля к 6 часам процесса фагоцитоза; а содержание ИЛ_1 в среде культивирования АМФ с иерсиниями было ниже контрольных значений. На 7 сутки после введения лектина синтез ФНО-б в процессе фагоцитоза in vitro был ниже контрольных значений (для ПМФ) или на уровне контроля (для АМФ).

При сравнении влияния лектина на синтез цитокинов при фагоцитозе E.coli Ca53 и Y.enterocolitica 295_82, можно отметить понижение содержания цитокинов в среде культивирования макрофагов с иерсиниями. Одним из объяснений полученных результатов возможно является наличие в клетках иерсиний Yop белков, которые препятствуют высвобождению ФНО_б макрофагами. С другой стороны, факт снижения содержания цитокинов в среде культивирования макрофагов с Y.enterocolitica 295_82 на завершающих стадиях процесса фагоцитоза, вероятно, может быть связан с аутокринной регуляцией функций макрофагов данными цитокинами при их связывании с экспрессированными на поверхности в процессе активации рецепторами.

Таким образом, сравнительный анализ влияния лектина ЛII P.polymyxa 1460 на синтез провоспалительных цитокинов в процессе фагоцитоза грамположительных и грамотрицательных бактерий показал, что их содержание зависит от объекта фагоцитоза. Можно сделать предположение, что действие лектина на фагоциты связано не только с особенностями строения клеточной стенки бактерии и наличием факторов патогенности возбудителя, но и со спецификой рецепторных структур.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 3. Синтез цитокинов макрофагами мышей при фагоцитозе Y.enterocolitica 295_82 в различные сроки после введения лектина ЛII

Исследование специфичности влияния лектина ЛII in vitro на синтез провоспалительных цитокинов

С целью подтверждения участия лектина в синтезе цитокинов фагоцитирующими макрофагами in vitro определяли изменение количества цитокинов, продуцируемых фагоцитирующими макрофагами под влиянием лектина ЛII, блокированного специфичными углеводами и под влиянием белка, не обладающего лектиновыми свойствами - бычьего сывороточного альбумина (БСА).

Одинаковое количество цитокинов, синтезируемых контрольными ПМФ и ПМФ под действием блокированного лектина, явилось свидетельством специфичного взаимодействия лектина ЛII P.polymyxa 1460 с поверхностными структурами перитонеальных макрофагов. Данное взаимодействие могло быть обусловлено наличием необходимых углеводных гаптенов на поверхности макрофагов для лектина бацилл. Увеличение количества ФНО_б, продуцируемого альвеолярными макрофагами под действием лектина ЛII, блокированного специфичными углеводами, свидетельствовало о том, что на молекулярном уровне лектин ЛII P.polymyxa 1460 помимо специфического взаимодействия с рецепторными структурами альвеолярных макрофагов может участвовать и в различных неспецифических реакциях (рис. 4).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 4. Синтез цитокинов макрофагами при фагоцитозе Y.enterocolitica 295-82 на фоне действия in vitro лектина ЛII, блокированного смесью углеводов

При изучении влияния на синтез цитокинов белка нелектиновой природы - БСА показано значительное уменьшение синтеза ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-б по сравнению с контролем и альвеолярными макрофагами под действием лектина бацилл. Это свидетельствовало о неспецифическом связывании БСА с поверхностью макрофагов.

Представленные отличия в синтезе ФНО-, ИЛ-1 и ИЛ-6 макрофагами при действии in vitro БСА и лектина ЛII, а также результаты экспериментов по влиянию лектина, блокированного смесью углеводов, показывают возможность специфического связывания лектина ЛII с поверхностными рецепторами макрофагов. Данное специфическое взаимодействие лектина с поверхностными рецепторами макрофагов возможно приводит к изменению метаболизма клеток макрофагов, способствуя их более активному синтезу цитокинов при фагоцитозе S.aureus 100б и E.coli Ca53, а также приводит к снижению цитокинсинтезирующей активности в случае с Y.enterocolitica 295_82.

Влияние лектина ЛII на цитокиновый статус мышей при моделировании инфекционного процесса

В дальнейших экспериментах представляло интерес оценить действие лектина бацилл на содержания провоспалительных цитокинов в сыворотке крови экспериментальных животных при моделировании инфекционного процесса, вызываемого S.aureus 209-P, E.сoli О1, Y.enterocolitica 12. Было показано, что введение бактериального лектина P.polymyxa 1460 за 24 часа и через 1 час после заражения изменяет цитокиновый статус экспериментальных животных при моделировании инфекционного процесса. Отмечена тенденция к снижению содержания ИЛ-1 и ИЛ-6 при всех моделируемых инфекциях независимо от схемы введения лектина (рис. 5.). Уменьшение концентрации этих цитокинов было наиболее выражено при эшерихиозной инфекции. При стафилококковой и иерсиниозной инфекции через 6 и 24 часа после заражения отмечена разная степень снижения содержания цитокинов в зависимости от схемы введения лектина и срока инфекционного процесса. Для ФНО-б отмечено снижение содержания в сыворотке крови мышей при стафилококковой инфекции независимо от схемы введения лектина. Показано динамическое увеличение содержания ФНО-б при введении лектина за 24 часа до инфицирования Y.enterocolitica 12. При эшерихиозной инфекции увеличение содержания ФНО-б происходило через 1 и 6 часов и зависело от схемы введения лектина (рис. 5). Описание функционирования системы лектин - макрофаг - синтез цитокинов представляется весьма сложной задачей. Во многом этому способствует синергизм действия провоспалительных цитокинов и их аутокринная регуляция самим макрофагом в ответ на проникновение инфицирующих агентов. Анализируя возможные механизмы влияния лектина бацилл на продукцию провоспалительных цитокинов, можно предположить его связывание с рецепторами на поверхности моноцитов/макрофагов, что в свою очередь изменяет синтез этих цитокинов.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 5. Содержание провоспалительных цитокинов в сыворотке крови мышей при моделировании инфекционного процесса на фоне действия лектина

Таким образом, представленные исследования свидетельствуют о влиянии лектина бацилл на цитокинсинтезирующую активность макрофагов при фагоцитозе бактерий и инфекционном процессе. Вполне возможно с помощью бактериальных лектинов можно осуществлять коррекцию иммунного статуса инфицированных животных на фоне развития тяжёлого патологического процесса. Полученные результаты вносят существенный вклад в представление о биологической активности лектинов микробного происхождения, особенно в отношении клеток иммунной системы.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что лектин ЛII P.polymyxa 1460 in vivo оказывает влияние на цитокинсинтезирующую способность макрофагов при фагоцитозе S.aureus 100б, E.coli Ca 53, Y.enterocolitica 295_82.

2. Впервые показано, что введение лектина ЛII в концентрации 0,4 мкг/мл белым мышам усиливает синтез провоспалительных цитокинов ИЛ-1 и ФНО-б макрофагами на 1 и 3 сутки при фагоцитозе S.aureus 100б и на 5 и 7 сутки при фагоцитозе E.coli Ca 53.

3. Впервые обнаружено, что лектин бацилл ЛII снижает синтез ИЛ-1 и ФНО-б макрофагами при фагоцитозе Y.enterocolitica 295_82 по сравнению с контрольными фагоцитирующими клетками.

4. Выявлены различия в цитокинсинтезирующей способности перитонеальных и альвеолярных макрофагов на фоне действия лектина ЛII in vivo: ПМФ активнее синтезировали ИЛ-1 и ФНО-б, чем АМФ при фагоцитозе S.aureus 100б, а при фагоцитозе E.coli Ca 53 более активными были АМФ.

5. Показано, что изменение цитокинсинтезирующей активности альвеолярных и перитонеальных макрофагов обусловлено специфическим взаимодействием лектина ЛII с их поверхностными структурами. При действии лектина ЛII, блокированного специфичными углеводами, цитокин-синтезирующая активность макрофагов не изменялась по сравнению с контролем. Использование в аналогичных условиях белка нелектиновой природы - БСА значительно уменьшало синтез ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-б по сравнению с контролем и макрофагами под действием лектина.

6. Установлено, что лектин ЛII способствует снижению в сыворотке крови мышей ИЛ-1 и ИЛ-6 при стафилококковой, эшерихиозной, иерсиниозной инфекции; ФНО_б при стафилококковой инфекции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кочергина О.В., Новосёлова (Горельникова) Е.А., Мухачёва Е.С., Тихомирова Е.И., Карпунина Л.В. Влияние бактериального лектина на активность процесса фагоцитоза и индукцию цитокинов // Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой: Тез. первой региональной конференции молодых учёных, Саратов, 26 - 27 марта 2002. - Саратов, 2002. - С. 34 - 36.

2. Новосёлова (Горельникова) Е.А., Кочергина О.В., Мухачёва Е.С. Влияние лектина Л II Вacillus polymyxa на индукцию цитокинов // Науки о человеке: Сб. статей третьего конгресса мол. учёных и специалистов, Томск, 16-17 мая 2002. - Томск, 2002. - С. 185 - 186.

3. Кочергина О.В., Новосёлова (Горельникова) Е.А., Мухачёва Е.С. Влияние лектина Л II Вacillus polymyxa 1460 на активность процесса фагоцитоза // Науки о человеке: Сб. статей третьего конгресса мол. учёных и специалистов, Томск, 16-17 мая 2002. - Томск, 2002. - С. 175 - 176.

4. Горельникова Е.А. Тихомирова Е.И.. Кочергина О.В. Рудик Д.В., Мухачёва Е.С. Синтез провоспалительных цитокинов макрофагами мышей при действии лектина Л II Раеnibacillus polymyxa 1460 // Актуальные проблемы медицины и биологии: Сб. научных работ, Томск, 2003. - Вып. 2. - С. 106 - 107.

5. Кочергина О.В., Тихомирова Е.И., Горельникова Е.А., Рудик Д.В., Карпунина Л.В. Изменение фагоцитарной активности макрофагов при действии лектина ЛII Раеnibacillus polymyxa 1460 // Актуальные проблемы медицины и биологии: Сб. научных работ, Томск, 2003. - Вып. 2. - С. 112 - 114.

6. Тихомирова Е.И, Абросимова О.В., Горельникова Е.А., Карпунина Л.В. Особенности фагоцитоза патогенных бактерий и индукция цитокинов на фоне действия бактериального лектина // Russion Journal of Immunology. - 2004. - V. 9. - P. 55.

7. Горельникова Е.А., Абросимова О.В. Влияние лектина бацилл на синтез провоспалительных цитокинов при фагоцитозе Yersinia enterocolitica // Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой: Тез. второй региональной конференции мол. учёных, Саратов, 26-28 октября 2004. - Саратов, 2004. - С. 29 - 30.

8. Абросимова О.В., Горельникова Е.А. Анализ активности фагоцитоза энтеропатогенных бактерий на фоне действия лектина Paenibacillus polymyxa // Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой: Тез. второй региональной конференции мол. учёных, Саратов, 26-28 октября 2004. - Саратов, 2004. - С. 28 - 29.

9. Горельникова Е.А., Абросимова О.В., Тихомирова Е.И., Карпунина Л.В. Синтез ИЛ-1 и ФНО-б макрофагами мышей на фоне действия бактериального лектина // Успехи современного естествознания. - 2004.- №4. - С. 104-105.

10. Абросимова О.В., Горельникова Е.А., Тихомирова Е.И., Карпунина Л.В. Некоторые аспекты действия бактериального лектина на фагоцитирующие макрофаги мышей // Успехи современного естествознания. - 2004.- №4. - С. 97-98.

11. Горельникова Е.А., Тихомирова Е.И., Карпунина Л.В. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa на синтез цитокинов при фагоцитозе Yersinia enterocolitica // Вавиловские чтения - 2005: Материалы конференции, посвященной 118-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 23 - 25 ноября 2005, секция ветеринарии и биотехнологии. - Саратов, 2005. - С. 31-34.

12. Горельникова Е.А., Тихомирова Е.И., Карпунина Л.В. Цитокинсинтезирующая активность макрофагов в процессе фагоцитоза бактерий при действии лектина Paenibacillus polymyxa // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2006. - №1. - С. 17 - 20.

13. Карпунина Л.В., Тихомирова Е.И., Горельникова Е.А. Лектин бацилл в изучении синтеза цитокинов при фагоцитозе некоторых энтеробактерий // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: Материалы международной конференции, 21-23 июля 2006, Ульяновск, 2006. - Ульяновск, 2006. - С. 100 - 102.

Размещено на Allbest.ru