Биология условно-патогенных микроорганизмов, вызывающих кишечные инфекции

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Биология условно-патогенных микроорганизмов, вызывающих кишечные инфекции

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В последнее время существенно изменилась этиологическая структура возбудителей инфекционных заболеваний, что связано с постоянной эволюцией бактерий и вовлечением в патологические процессы условно-патогенных микроорганизмов, которые в качестве комменсалов присутствуют в составе нормальной микрофлоры людей, а также регистрируются как этиопатогены при различных местных и генерализованных процессах (А.В. Валышев с соавт., 1997; О.Г. Крамарь, 1997; Э.С. Акайзин, 2000; В.М. Бондаренко с соавт., 2001, 2006; Н.В. Чемурзиева, 2008; S. Branger et al., 2005; M.G. Almeida et al., 2008; L. Lombardo, 2008; S. Rabizadeh, 2008; Р. Louis, 2009).

Обладая выраженной биологической и экологической пластичностью, эти микроорганизмы способны к широкому распространению во внешней среде и длительной персистенции в организме человека (С.В. Прозоровский с соавт., 1998; Е.В. Резников, 1999; А.Н.Ш. Мохаммед, 2006; J. Barret et al., 2003; M. Xiong et al., 2004; Т. Hayshi, 2006; J.C. Alverdy et al., 2008; Т. Kanno et al., 2009).

Условно-патогенные бактерии являются причиной многих заболеваний. Доказана их этиологическая роль в возникновении гнойно-воспалительных процессов ЛОР-органов, при пневмониях, заболеваниях мочеполовой системы, менингитах, различных септических осложнениях, глазных болезнях, полиартритах и острых кишечных инфекциях (В.М. Бондаренко с соавт., 2000, 2003; А.Ю. Миронов с соавт., 2000, 2001; Б.Я. Усвяцов с соавт., 2000; В.А. Гриценко с соавт., 2001; Д.В. Иванов с соавт., 2007; И.В. Крапивина с соавт., 2007; Е.В. Матисова, 2010; T. Kiwamoto et al., 2004; К. Endo et al., 2009). Инфекции, вызванные потенциально-патогенными микроорганизмами, имеют склонность к затяжному течению, патогенетической основой которых является персистенция возбудителя в организме хозяина (О.В. Бухарин, 1997, 1999, 2000; Е.А. Загороднева, 2002; И.В. Лиманская, 2006; С.К. Schmitt et al., 1999; Р. Enck et al., 2009; F.M. Ruemmele, 2009).

В общей структуре инфекционной патологии острые кишечные инфекции (ОКИ) остаются одной из основных проблем, занимая по частоте второе место после респираторных вирусных инфекций (И.Л. Шаханина с соавт., 1999; Н.И. Нисевич с соавт., 2001; В.А. Астафьев, 2007; К. Mitsuyama, 2009). Заболеваемость ОКИ в Российской Федерации за последние годы составила 414,6 - 457,9 на 100 тыс. населения и не имеет тенденции к снижению (В.Ф. Учайкин, 2004). При этом возрастает эпидемиологическая роль условно-патогенных микроорганизмов, в том числе энтеробактерий (УПЭБ) (В.И. Покровский с соавт., 1999; Б.Л. Черкасский, 2002; Н.Ю. Жеребцова, 2006; А. Guarino et al., 2009).

Относительно участия УПМ при кишечных инфекциях мнения исследователей разноречивы, так как факт выделения патогена не всегда свидетельствует о его роли при данном заболевании (Н.В. Воротынцева с соавт, 2001; З.Г. Габидуллин с соавт., 2006; А.Р. Мавзютов с соавт., 2007). В подобных ситуациях зачастую более существенным является определение у выделенных культур факторов патогенности. Ценность этого критерия повышается при обнаружении не одного, а нескольких признаков вирулентности и, особенно, в патогенетически значимой дозе и / или уровне активности (О.В. Бухарин с соавт., 1996, 2002, 2006).

До настоящего времени остаются малоизученными вопросы частоты встречаемости и персистенции потенциально-патогенных микроорганизмов в условиях экологического прессинга крупного промышленного города.

Актуальность данной проблемы определяется ухудшением техногенной обстановки, связанной с урбанизацией, климатогеографическими и экологическими условиями обитания человека, снижающими его иммунореактивность, а также воздействующими на микроэкосистемы индивидуума (А.Ю. Миронов с соавт., 2001; Л.А. Леванова с соавт., 2002). При этом нарушения в составе кишечной микрофлоры наступают задолго до клинических симптомов и являются предвестниками определенных патологических процессов (А.А. Воробьев и соавт., 1995; В.М. Бондаренко с соавт., 2002; Н.Ю. Жеребцова с соавт., 2007).

Первыми реагируют на изменение среды обитания бактериальные сообщества, являясь точкой приложения любого экотоксиканта. При этом антропогенные факторы, влияя на представителей биоценоза, способствуют образованию гетерогенности популяции по различным биологическим признакам, усилению персистентных свойств и формированию антибиотикорезистентных штаммов (М.Ю. Чернуха с соавт., 2005; О.В. Рыбальченко с соавт., 2007; Н.Ю. Нилова, 2009; А.А. Покателов, 2009).

В связи с этим, изучение и анализ особенностей биологии и экологии УПМ остается актуальной проблемой современной микробиологии. Малоизученность и незначительное количество работ, посвященных профилактике и прогнозированию заболеваний, вызванных условно-патогенными бактериями при различных ситуациях, определяет перспективность избранной темы в теоретическом и практическом аспектах. Анализ распространенности потенциальных патогенов, роли механизмов саморегуляции в жизнедеятельности микробных популяций, связи происходящих изменений с уровнем и структурой заболеваний, вызванных УПБ, обусловили актуальность данной проблемы.

Учитывая вышеизложенное, целью работы явился анализ структуры бактериальных популяций УПМ, колонизирующих больных острыми кишечными инфекциями и обоснование влияния эколого-климатических факторов на заболеваемость ОКИ, вызванными потенциально-патогенными микроорганизмами в условиях крупного промышленного города.

Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространенность условно-патогенных бактерий в биоценозе здоровых людей и больных с кишечной патологией.

2. Оценить биологические свойства и факторы, способствующие патогенности и персистенции УПМ, колонизирующих различные экосистемы в районах с неравнозначным техногенным прессингом.

3. Установить критерии этиологической значимости потенциально-патогенных микроорганизмов в развитии острых кишечных инфекций.

4. Определить значение климатических факторов, влияющих на сезонные колебания заболеваемости ОКИ в регионе обследования.

5. Обосновать биокоррекцию в терапии и профилактике острых кишечных инфекций, этиологически связанных с условно-патогенной флорой.

Научная новизна

Полученные результаты дали основание представить экологию УПМ в условиях крупного промышленного города.

Установлено, что при острых кишечных инфекциях, вызванных потенциально-патогенными микроорганизмами, происходит глубокая структурная перестройка биоценоза и появление у бактерий факторов, способствующих персистенции.

Изучение биологических свойств УПМ дало основание считать, что обитание этих микробов в организме больных ОКИ является оптимальным вариантом их существования.

Определена активация персистентных свойств возбудителя, направленных на деградацию механизмов резистентности хозяина при достоверном изменении микроэкологии кишечника.

Установлена динамическая смена факторов, способствующих персистенции, при существовании условно-патогенных микроорганизмов в абиотических и биотических экосистемах.

Показана возможность использования персистентных свойств микробов в качестве информативных критериев значимости УПМ в развитии острых кишечных инфекций и биоиндикации загрязненности внешней среды.

Обосновано влияние климатических факторов, прежде всего температурного (увеличение средней дневной температуры более чем на +5,0єС), на смену этиологической структуры ОКИ с увеличением значимости стафилококков при стрессовом климатоэкологическом воздействии.

Практическая значимость работы

Установлена распространенность УПМ и заболеваемость ОКИ связанными с ними в условиях крупного промышленного города.

Выявлены биологические характеристики условно-патогенных микроорганизмов, информативные при оценке этиологической значимости данных возбудителей в развитии инфекционного процесса.

Подтверждена необходимость проведения биокоррекции в комплексной терапии острых кишечных инфекций с использованием пробиотиков и кисломолочных продуктов среди населения г. Волгограда.

Предложен способ прогнозирования заболеваемости острыми кишечными инфекциями, вызванными УПМ в крупном промышленном городе в зависимости от климато-метеорологических факторов (рационализаторское предложение №31 от 15.10.10).

Материалы диссертации внедрены в практическую деятельность Управления Роспотребнадзора по Волгоградской области, ВОКИБ №1 и ВОДКИБ, а также используются в учебном процессе на кафедрах инфекционных болезней, детских инфекционных болезней и в работе кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии с клинической микробиологией Волгоградского государственного медицинского университета.

Положения, выносимые на защиту:

1. Клинические штаммы УПМ, выделенные от пациентов при острой кишечной патологии, характеризуются широким спектром факторов патогенности и персистенции, а также множественной антибиотико-резистентностью, что свидетельствует об их этиологической значимости.

2. Уровень заболеваемости кишечными инфекциями, вызванными условно-патогенной флорой, находится в прямой коррелятивной связи с эколого-климатическими особенностями региона исследования. Стрессовое воздействие температурных факторов приводит к смене этиологической структуры ОКИ с доминированием стафилококков.

Апробация работы

Материалы исследования доложены на 65-й, 66-й, 67-й конференциях молодых ученых (2007, 2008, 2009), XII Региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области (2007), II и III Международных Пироговских научных медицинских конференциях (2007, 2008), 55-й региональной научной конференции (2008).

Диссертация обсуждена на расширенном заседании кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии с клинической микробиологией 10.11.2010 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, 7 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и указателя литературы, включающего 289 источников, в том числе 216 отечественных и 73 зарубежных. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, иллюстрирована 34 рисунками и 37 таблицами.

Содержание работы

кишечный инфекция патогенный микроорганизм

Материалы и методы исследования

Для реализации поставленных задач нами проанализированы многолетние данные Роспотребнадзора г. Волгограда за 2000-2010 годы по колонизации условно-патогенными микроорганизмами различных групп здоровых и больных людей (867002).

Установили, что потенциальные патогены довольно часто колонизируют организм человека. По средним многолетним данным частота встречаемости УПМ в биоценозе людей составила 8,55%. Наибольший процент обнаружения данных микроорганизмов зарегистрирован у больных острыми кишечными инфекциями (32,36%), а наименьший - в группе здоровых (3,26%).

Микрофлора была изучена у 240 человек, из которых 120 были пациентами с ОКИ и находились на лечении в ВОКИБ №1, группу сравнения составили практически здоровые люди (120), постоянно проживающие в г. Волгограде. Анализу подвергнуты 2400 объектов внешней среды.

Идентифицировано 3103 штамма бактерий, обнаружено 847 культур УПМ, что в среднем составило 27,3%.

Микрофлора кишечника изучалась по методу Haenel (1973) с оценкой биоценоза по М.Э. Микельсаар (1988). Биологический субстрат засевали на дифференциально-диагностические среды. Выросшие культуры подвергали групповой, родовой и видовой идентификации.

При исследовании фекальной микрофлоры учитывали: 1) общее количество бактерий; 2) лакто- и бифидокультуры; 3) энтеробактерии; 4) стафилококки; 5) стрептококки; 6) дрожжеподобные грибы; 7) бактероиды.

Оценку кишечного микробиоценоза осуществляли согласно Отраслевому стандарту «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (2003).

Забор материала с кожных покровов проводили по методике В.С. Крамарь с соавт. (1991). Качественный и количественный состав микрофлоры кожи оценивали, изучая биоценоз 7 биотопов (лоб, грудь, межпальцевые промежутки правой и левой рук, нижняя треть обеих голеней, промежность).

При изучении микрофлоры кожи определяли: 1) общую бактериальную обсемененность; 2) грамположительные кокки; 3) корине-бактерии; 4) дрожжеподобные грибы рода Кандида; 5) грамотрицательные микроорганизмы; 6) бациллы.

Биохимическая идентификация энтеробактерий была проведена с использованием диагностических систем: 1) системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов (СИБ) «Микроген» Н-Новгород; 2) микротест-системы для биохимической идентификации энтеробактерий (МТС-М-12Е).

Идентификацию стафилококков проводили в соответствии с приказом №691 от 28.12.89 г. и методическими рекомендациями А.К. Акатова с соавт. (1998) с использованием диагностических систем: 1) пластины биохимические, дифференцирующие стафилококки (ПБДС) «Диагностические системы» Н-Новгород; 2) микротест-системы для биохимической идентификации стафилококков (МТС-С) г. Махачкала.

Количественное содержание микроорганизмов в фекалиях определяли в перерасчете на 1г посевного материала и степени его разведения, а средний показатель микробной обсемененности кожи - на 1,0 смІ исследуемой поверхности (КОЕ/ед. суб.).

Бактериологическое обследование объектов окружающей среды проводили в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ №215 от 14.04.79 г., при этом учитывали общее микробное число, количество энтеробактерий в единице субстрата или см площади, в дальнейшем проводили выделение чистой культуры и ее идентификацию до вида.

Чувствительность к антибиотикам определяли дискодиффузионным методом с использованием индикаторных дисков НИЦФ (г. Санкт-Петербург).

Признаки патогенности определялись по схеме С.А. Дратвина (1983). Факторы персистенции (АЛА и АИА) оценивались по методикам О.В. Бухарина (1984) и О.В. Бухарина с В.Ю. Соколовым (1990).

Экологию УПМ в различных эконишах изучали по основным критериям М.Э. Микельсаар (1986) и Б.Л. Черкасского (1990).

Осуществлена комплексная оценка климатических параметров среды обитания по данным Волгоградского центра по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием стандартных программ «STATISTICA 5.0.» и MS Excel 2003 в среде Windows ХР в автоматическом режиме и режиме программирования (В.И. Крутов, В.В. Попов, 1989; В.К. Юрьев, 1993; В.М. Зайцев с соавт., 2003).

Результаты исследования и их обсуждение

Анализ статистических материалов Роспотребнадзора показал, что за период 2000-2010 г. в г. Волгограде было зафиксировано 59917 случаев ОКИ, из них 20949, вызванных условно-патогенными микроорганизмами (рис. 1).



Рис. 1. Динамика заболеваемости острыми кишечными инфекциями в г. Волгограде (2000-2010 гг.)

Выявлено, что кишечные инфекции, обусловленные УПМ, регистрируются ежегодно, и неуклонно растет их удельный вес, так в 2006 г. он составил 37,9%, в 2007-м - 43,5%, в 2010-м - 44,6%.

Основными возбудителями этих инфекций являлись протеи, клебсиеллы и цитробактер (35,0%; 33,8% и 20,5% соответственно). Среди этиопатогенов были морганеллы (5,2%), золотистый стафилококк (3,4%), провиденции (1,4%), псевдомонады и энтеробактеры (0,3% равнозначно), гафнии (0,1%).

Число больных ОКИ, связанных с УПБ по данным ВОКИБ №1 за период 2000-2004 г. составило 28,1%, в 2005-2009 г. - 41,5%. В среднем условно-патогенные микроорганизмы высевались в 33,8% наблюдений. Максимальное количество заболевших фиксировалось в 2008 г. и 2010 г., составив 108,8 и 165,3, а минимальное - в 2005-м - 65,9 на 100000 населения.

Учитывая климатогеографические, экологические и техногенные особенности, город разделен на 3 топодема: северный, центральный и южный (Н.И. Латышевская с соавт., 2000).

Установлено, что среднегодовая заболеваемость ОКИ, обусловленными УПМ, в южном районе была значительно выше, чем в северном, и в 1,7 раза превышала показатель центрального топодема. Уровень данной патологии соответственно равнялся 120,0, 73,5 и 70,3 на 100000 населения.

Обращает на себя внимание неодинаковая заболеваемость в рассматриваемом периоде. Так, в 2000-2004 гг. в северном и южном топодемах показатель был равен соответственно 71,8 и 109,9, а в центральном 65,8 на 100000. Временной интервал с 2005 по 2009 г. характеризовался ростом кишечных инфекций во всех районах города, особенно южного топодема, составив 130,1±17,4 на 100000 населения.

Выявлено, что высокий уровень заболеваемости ОКИ отмечался в районах с неблагоприятной техногенной нагрузкой (Кировском и Красноармейском), что составило - 176,8 и 156,0 на 100000 населения соответственно. Центральный топодем (Центральный и Ворошиловский районы) являлся более благоприятным как по экологическому показателю, так и по уровню заболеваемости ОКИ, вызванными условно-патогенными бактериями, что равнялось 64,4 и 71,1 на 100000 населения.

Эпидемический процесс при всех инфекционных патологиях протекает с сезонными колебаниями, особенно выраженными при ОКИ.

Изучение помесячной заболеваемости острыми кишечными инфекциями позволило установить определенную динамику обнаружения УПМ (рис. 2).

Рис. 2. Среднемесячная заболеваемость острыми кишечными инфекциями, вызванными условно-патогенными микроорганизмами (2000-2009 гг.)

Показано, что в зимние месяцы года заболеваемость держалась на одном уровне (5,1; 5,4; 6,5% соответственно), при этом ее рост наблюдался с мая месяца, с подъемом, приходящимся на июнь - сентябрь, при этом в августе превышал среднегодовую на 80%, снижаясь в октябре - ноябре, и достигая минимальных значений в декабре (табл. 1).

Таблица 1. Среднемесячная заболеваемость острыми кишечными инфекциями, вызванными условно-патогенными микроорганизмами (2000-2009)

Показатель	Месяцы
	I	II	III	IV	V	VI	VII	VIII	IX	X	XI	XII	М
%	5,4	6,5	7,1	7,0	7,1	8,1	11,1	14,9	12,9	8,4	6,4	5,1	8,3

Изучив корреляционные связи между ОКИ, вызванными различными этиопатогенами, установили, что уровни клебсиеллезов, протеозов, энтеро- и цитробактериозов находятся в прямой связи между собой, наиболее выраженной в летне-осенний период, и подъем заболеваемости всеми нозологическими формами происходит параллельно в зависимости от влияния метеорологических параметров и эпидемиологических факторов (рис. 3).

Рис. 3. Помесячная заболеваемость кишечными инфекциями, вызванными УПМ, в показателях на 100000 населения

Учитывая различия в частоте встречаемости острых кишечных инфекций в топодемах города и выраженные сезонные колебания, представляло интерес изучение влияния климато-метеорологических факторов на показатели заболеваемости населения кишечными инфекциями. Для решения поставленной задачи провели корреляционный анализ различных погодных составляющих климата г. Волгограда (влажность, температура воздуха, количество солнечных дней, давление, скорость ветра, уровень осадков) и заболеваемости ОКИ.

По материалам многолетних наблюдений (2000-2009 гг.) был составлен график, отражающий влияние климатических условий на кишечные инфекции, вызванные УПМ (рис. 4). Установлена графическая зависимость заболеваемости ОКИ от метеорологических факторов, применимая только к данному региону исследования.

Рис. 4. Климатические условия г. Волгограда и заболеваемость ОКИ

Проведенный анализ показал, что максимальное влияние на величину заболеваемости острыми кишечными инфекциями оказывала средняя температура воздуха, в то время как относительная влажность находилась в обратной корреляционной зависимости.

Связь уровня заболеваемости ОКИ с высокой летней температурой воздуха отмечают многие авторы (В.Д. Беляков с соавт., 1987; А.Д. Карцев, 1991). Для установления корреляционной связи этих явлений нами сочтено целесообразным изучение влияния экстремально высоких температур воздуха в летние месяцы 2010 г. на этиологическую структуру ОКИ и динамику заболеваемости населения кишечной патологией, вызванной УПМ.

По данным Волгоградского центра по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды летом 2010 г. зафиксированы максимальные температурные рекорды, что расценивается как самое теплое и засушливое лето за последние 100 лет. Температура воздуха превышала средние многолетние показатели в июне на +4,3єС, в июле на +5,4єС и в августе - на +6,5єС. Отклонение температуры воздуха от нормы на +5,0єС и выше сохранялось в течение 38 дней, а превышение данного климатического параметра более +9,0єС регистрировалось в течение 19 суток. На фоне высоких температур отмечались низкие показатели относительной влажности воздуха (46-49%) и уровня осадков (3-4 мм).

Анализ состава интестинальной микрофлоры у пациентов позволил установить определенную динамику высева УПБ в 2010 г. В начале года превалировали этиологически значимые протеи и клебсиеллы. Однако в июле наблюдался выраженный рост заболеваемости кишечной патологией, стафилококковой природы, с достижением максимальных значений в августе, с превышением среднегодовых показателей на 65,1%, и высоким уровнем заболеваемости в октябре - ноябре.

Выявлены существенные изменения в динамике острых кишечных инфекций в 2010 г. по сравнению с данными последнего десятилетия. Максимальный подъем ОКИ, вызванных условными патогенами, закономерно фиксировался в августе, однако произошла значительная смена в их этиологической структуре с доминированием стафилококков.

Пиковый подъем клебсиеллезов в 2010 г. приходился на июнь - август, цитробактериозов - на сентябрь - ноябрь, а протеозов - на октябрь месяц, при этом отсутствовал характерный скачковый прирост. Установлено, что на фоне снижения этиологической значимости УПЭБ, отмечалось значительное увеличение роли стафилококков в инфекционной патологии (рис. 5).



Рис. 5. Динамика заболеваемости ОКИ, вызванными УПМ по месяцам в зависимости от климатических условий г. Волгограда в 2010 г.

Следует отметить, что установленная графическая зависимость заболеваемости кишечными инфекциями от метеофакторов является ориентировочной и применима только к изучаемому географическому региону.

Полученные результаты показали, что увеличение средней дневной температуры более чем на +5,0єС, а также снижение относительной влажности до 49% и уровня осадков до 3 - 4 мм (8 - 11% от нормы) вызвало резкое нарастание этиологической значимости стафилококков в развитии ОКИ. Максимальный подъем заболеваемости данной нозологией регистрировался при температуре воздуха +39,2єС - +41,1єС.

Установлено, что аномально высокая летняя температура воздуха оказывает стрессовое воздействие на УПЭБ, подавляя их жизнедеятельность и патогенный потенциал, что приводит к изменению этиологической структуры заболеваний. В свою очередь стафилококки, по-видимому, менее подвержены негативным влияниям высоких температур и имеют более выраженные адаптивно-приспособительные возможности по сравнению с другими возбудителями, что позволяет им проявить свои патогенные свойства при отсутствии конкуренции со стороны других бактерий. Таким образом, очень высокая заболеваемость ОКИ в 2010 г. обусловлена резким избирательным повышением этиологической значимости стафилококков в результате активации их факторов патогенности и персистенции.

Проанализировав статистические данные ВОКИБ №1 по заболеваемости кишечными инфекциями, вызванными УПМ, выявили, что за период 2005-2009 гг. проходило лечение с данной патологией 4737 человек, из них 2188 мужчин и 2549 женщин, что составило 46,2% и 53,8% соответственно. Распределение больных по возрасту и полу представлено на рис. 6.

Рис. 6. Распределение больных ОКИ, обусловленными УПМ по возрасту и полу

Анализ полученных данных свидетельствует, что среди больных превалировали лица молодого трудоспособного возраста 18-44 лет (59,7%).

Изучив клинику ОКИ, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, установили, что, несмотря на их полиэтиологичность, ведущие симптомы при той или иной патологии отсутствовали, и проявления были неспецифичны. Среди нозологических форм было 2018 гастроэнтероколитов (42,6%), 1009 - гастроэнтеритов (21,3%), 1075 - энтероколитов (22,7%), 180 - энтеритов, 138 - колитов и 317 случаев бактериальных пищевых отравлений.

У пациентов с кишечными инфекциями, отмечено увеличение частоты и обсемененности УПМ кожных покровов, при этом данные микроорганизмы чаще вегетировали в промежности (46,7%) с максимальной плотностью микробной колонизации (1,3•10⁴ КОЕ/см²). С высокой частотой УПБ встречались на открытых покровах: межпальцевых промежутках правой и левой руки (12,6 и 11,7%) со средней величиной бактериальной обсемененности этих биотопов равной 4,8•10³±0,1 КОЕ/см². Наименее заселенной микроорганизмами была правая голень и лоб (5,7 и 5,8%) (табл. 2).

Таблица 2. Частота встречаемости и видовой состав микроорганизмов, колонизирующих кожу обследуемых групп, M+m, %, КОЕ/см²

Микроорганизмы	Больные ОКИ	Здоровые
	Частота обнаружения, %	Обсеменен-ность, КОЕ/см2	Частота обнаружения, %	Обсеменен-ность, КОЕ/см2
Micrococcus spp.	70,0±12,8	2,0х103	100±0,0	2,4х106
S.epidermidis	82,5±11,5	1,0х103	43,3±8,2	1,2х103
S.saprophyticus	35,0±9,8	0,5х102	49,1±6,4	1,0х102
S.aureus	37,5±11,2	1,0х102	26,7±5,3	0,5х102
Streptococcus spp.	9,2±2,4	1,0х102	7,5±1,1	1,0х101
Corynebacterium	47,5±11,7	2,5х102	56,7±10,1	8,2х103
Bacillaceae spp.	67,5±21,5	2,0х102	47,5±9,2	1,0х101
Pseudomonadaceae	2,5±0,6	1,0х101	1,7±0,1	2,0х101
Candida spp.	22,5±10,7	1,8х102	16,7±1,3	1,4х102
E.coli	82,5±14,8	4,0х103	10,0±6,3	2,0х102
Klebsiella spp.	22,5±6,5	5,2х103	6,7±1,1	1,0х102
Proteus spp.	5,0±0,9	2,2х103	4,2±0,8	1,0х102
Enterobacter spp.	3,3±1,6	6,2х102	1,7±0,2	2,0х102
Citrobacter spp.	9,2±2,1	2,1х102	3,3±0,3	1,0х102

Установлено, что у 34,2% обследуемых потенциальные патогены колонизировали один биотоп, у 4,2% - два, у 7,1% - три, у 2,5% - четыре, тогда как у здоровых людей было обсеменено не более двух экониш.

При исследовании микрофлоры кишечника больных в 73,3% наблюдений установлен дефицит бифидобактерий (10⁴ - 10⁶ КОЕ/г), в 80,0% - снижение уровня лактобактерий до концентраций 10² - 10⁵ и в 100% случаев - повышенное содержание условно-патогенных микроорганизмов в титрах 10⁶ - 10⁸ КОЕ/г, с максимальными цифрами при энтероколитах. Колонизация эшерихиями у 31,7% была ниже показателей группы сравнения (1,3•10⁸±0,7 КОЕ/г против 1,5•10⁹±0,3 КОЕ/г) (р0,05).

Снижение содержания лактобактерий до 10⁶ КОЕ/г сопровождалось повышением количества клебсиелл (10⁷ - 10⁸ КОЕ/г) и лактозоотрицательных эшерихий (10⁸ КОЕ/г), а обсемененность цитробактером и протеем нарастала на фоне уменьшения концентрации бифидобактерий и E.coli.

У людей, проживающих в районах, неравнозначных по экологическому прессингу выявлены существенные различия как в частоте высеваемости отдельных представителей факультативной группы, так и в массивности обсеменения ими кишечника. Более стойкие и выраженные нарушения состава фекальной микрофлоры отмечались у больных, проживающих в южном топодеме (рис. 7).

Рис. 7. Частота встречаемости УПМ в кишечном биоценозе лиц обследуемых групп

Полученные данные свидетельствует о том, что обстановка «техногенного прессинга» в районе проживания приводит к изменениям таксономической структуры кишечного микробиоценоза: снижению количества нормальных симбионтов, и как следствие, повышению содержания УПМ, с последующим увеличением заболеваний вызванных этой группой бактерий.

Длительное персистирование условно-патогенного микроба в организме хозяина, бесспорно, является биологической целесообразностью. Наиболее оптимальным вариантом его жизнедеятельности является устойчивое сосуществование с макроорганизмом, что возможно при наличии определенных биологических свойств у микроорганизма, с одной стороны, и дефектности защитных факторов - с другой.

Представляло интерес изучение у патогенов секретируемых факторов персистенции, направленных на деградацию механизмов резистентности хозяина (О.В. Бухарин, 1990; 2000; 2006). С этой целью определены антилизоцимная и антиинтерфероновая активности.

Установлено, что подавляющее большинство штаммов, изолированных от больных, обладало персистентными характеристиками: 80,0% культур (164) деградировали лизоцим и 66,8% (137) инактивировали интерферон. Максимальные значения АЛА демонстрировали бактерии семейства Enterobacteriaceae: 95,1% штаммов Klebsiella (4,5±1,7 мкг/мл), 92,6% - Proteus (4,8±0,5), 60,0% - Enterobacter (3,4±1,0), 59,5% - Citrobacter (3,8±1,1) и 94,3% изолятов E.coli (3,7±0,4). Антилизоцимная способность была хорошо выражена у Ps.aeruginosa - 4,8±0,8 мкг/мл, более низкая активность обнаружена у грибов рода Candida - 4,3±1,1 и культур S.aureus - 2,6±0,4 мкг/мл.

Выявлено, что частота встречаемости АИА у условно-патогенных микроорганизмов колебалась от 93,8% у S.aureus (1,9±0,2 у. е.) до 32,0% у Enterobacter (1,6±0,4). Большинство штаммов обладало средним уровнем активности. Максимальные значения данного признака проявляли штаммы Proteus (3,5±0,8), Klebsiella (2,5±0,9) и E.coli (3,0±0,1).

Таким образом, положительные АЛА и АИА и их выраженные количественные значения были характерны практически для всех штаммов изолированных от пациентов с ОКИ одноименной этиологии, что позволяет их использовать как маркеры патогенности.

Изучение распространения антилизоцимной и антиинтерфероновой активности внутри популяций УПМ показало их неоднородность как по частоте встречаемости, так и по интенсивности выраженности признаков в зависимости от экологической ниши обитания.

В современных условиях в результате применения антибиотиков и других химиопрепаратов с терапевтической и профилактической целью, а также возникающая к ним устойчивость требует постоянного определения чувствительности возбудителей к этим лекарственным средствам. В связи с этим представлялось интересным изучить чувствительность условно-патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

Установлено, что в микрофлоре больных ОКИ широко циркулируют штаммы, обладающие множественной лекарственной устойчивостью, так Proteus spр. и M.morganii имели резистентность к 8 и более препаратам (34,6 и 12,5% соответственно), Citrobacter к 4 - 5 видам лекарственных средств (61,5%), клебсиеллы к 2 - 3 антибиотикам (86,3%). Энтеробактеры характеризовались монорезистентностью. Среди стафилококков 31,3% культур проявляли устойчивость к 3 - 4 препаратам, в том числе оксациллину.

Анализ полученных данных выявил, что резистентность большинства клинических изолятов носит множественный характер, в то время как устойчивые культуры, выделенные от практически здоровых людей, встречались реже (37,8%) и характеризовались монорезистентностью.

Таким образом, проведенные исследования показали, что условно-патогенные микроорганизмы, колонизирующие различные экологические ниши, отличаются гетерогенностью популяций по биологическим и персистентным свойствам.

В настоящее время наряду с использованием химиотерапевтических препаратов в лечении острых кишечных инфекций значительное внимание уделяется патогенетической терапии, приоритетным направлением которой является восстановление эубиоза.

В связи с этим была проведена коррекция микробиоценоза кишечника у пациентов с ОКИ биологическими препаратами «Колибактерин», «Бифидумбактерин», «Энтерол» и «Наринэ».

Наиболее выраженный терапевтический эффект зарегистрирован при применении кисломолочной смеси «Наринэ», о чем свидетельствовало увеличение содержания бифидо- и лактобактерий (1,6•10⁹±0,3 и 2,2•10⁹±0,1 КОЕ/г соответственно) и снижение частоты выделения эшерихий с атипичными свойствами, при этом количество УПМ уменьшилось в 3,7 раза (со 100,0% до 26,7%). Установлено, что использование биопрепарата «Наринэ» способствует не только повышению количества нормальных симбионтов в кишечнике и элиминации условно-патогенных микроорганизмов, но и обладает эффектом угнетения их персистентных свойств.

Раннее выявление нарушений микроэкологии кишечника человека необходимо для донозологического обнаружения дестабилизации микроэкосистемы. Своевременная коррекция дефицита симбионтов в интестинальной микрофлоре создает условия для адекватного функционирования желудочно-кишечного тракта и обусловливает проведение этиотропного лечения в соответствии с данными антибиотикограмм и применение биокоррекции.

Выводы

1. Условно-патогенные микроорганизмы, весьма распространены в биоценозах различных групп людей, с наибольшей частотой встречаемости у больных острыми кишечными инфекциями (32,36%).

2. При ОКИ, этиологически связанных с условно-патогенной флорой, происходит глубокая структурная перестройка микробиоценозов, что способствует персистенции патогенов. Частота обнаружения которой, а также степень ее активности тесно связаны с экологической напряженностью в исследуемом регионе и наиболее выражены в южном топодеме.

3. Клинические штаммы, колонизирующие больных кишечными инфекциями, характеризуются широким спектром факторов патогенности и персистенции, а также множественной антибиотикорезистентностью, что свидетельствует об их этиологической значимости.

4. Острые кишечные инфекции, обусловленные УПМ, развиваются циклически с подъемами и спадами, с четко выраженной зависимостью от метеорологических параметров. Так в 2010 г. заболеваемость данной патологией на изучаемой территории являлась следствием аномально высокой летней температуры, приведшей к активации персистентных свойств стафилококков и смене этиологической структуры ОКИ.

5. Высокий терапевтический эффект биокоррекции при лечении кишечных инфекций свидетельствуют о необходимости включения пробиотиков и кисломолочных продуктов в комплексную терапию данных заболеваний, что способствует обеспечению протективного эффекта в отношении УПМ, восстановлению интестинального микробиоценоза и исчезновению клинических проявлений болезни.

Список печатных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Энтеробактерии в биоценозе внешней среды Южного топодема / Михайлова Л.В. // Материалы 65-й юбилейной открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». - Волгоград, 2007. - С. 141-142.

2. Распространенность условно-патогенных микроорганизмов на объектах внешней среды в условиях крупного промышленного города / Михайлова Л.В., Блинцова Л.А., Матвеева Н.Л. // Вестник Российского государственного медицинского университета. - №2 (55). - Москва, 2007. - С. 250.

3. Условно-патогенные бактерии в структуре заболеваемости острыми кишечными инфекциями / Михайлова Л.В., Загороднева Е.А. // Материалы межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука: итоги и перспективы». Саратов, 2007. - С. 62-63.

4. Климато-экологическое влияние на структуру заболеваемости острыми кишечными инфекциями, вызванными условно-патогенными бактериями в условиях крупного города / Михайлова Л.В., Загороднева Е.А. // XII Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области. - Волгоград, 2007. - С. 28 - 29.

5. Микрофлора кишечника людей различных возрастных групп / Михайлова Л.В., Тонкушина Л.В., Спирюкова У.А. // Материалы 66-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». - Волгоград, 2008. - С. 145-146.

6. Роль условно-патогенных микроорганизмов в структуре заболеваемости острыми кишечными инфекциями в условиях крупного промышленного города / Михайлова Л.В. // Вестник Российского государственного медицинского университета. - №2 (61). - Москва, 2008. - С. 314.

7. Дезаминирование дикарбоновых кислот и их амидов у штаммов Е.coli, выделенных у здоровых людей / Михайлова Л.В., Тонкушина Л.В., Спирюкова У.А. и др. // Проблемы и перспективы современной науки. Сборник научных трудов. - Вып. 1. - Томск, 2008. - С. 85 - 86.

8. Эшерихии в биоценозе кишечника людей, живущих в крупном промышленном городе / Михайлова Л.В., Крамарь В.С., Тонкушина Л.В., и др. // 55-я юбилейная региональная научная конференция профессорско-преподавательского коллектива Волгоградского государственного медицинского университета «Современная инновационная медицина - населению Волгоградской области». Сборник научных трудов. - Волгоград, 2008. - С. 65-67.

9. Распространенность клебсиелл в различных экологических нишах крупного промышленного города / Михайлова Л.В., Тонкушина Л.В., Покателов А.А. и др. // Материалы 67-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». - Волгоград, 2009. - С. 161-162.

10. Колонизация S.aureus практически здоровых людей и больных хирургических и терапевтических стационаров крупного промышленного города / Михайлова Л.В., Крамарь В.С., Крамарь В.О., Антонов В.А. и др. // Сборник Ученые Волгограда - развитию города. Волгоград, 2009. С. 241-244.

11. Биологические свойства условно-патогенных микроорганизмов, вызывающих острые кишечные инфекции / Михайлова Л.В., Крамарь О.Г. // Фундаментальные науки и практика. Сборник научных работ с материалами трудов 2-ой международной телеконференции. - Т.1, №2. - Томск, 2010. - С. 80.

12. Состав фекальной микрофлоры больных острыми кишечными инфекциями в зависимости от сезона года / Михайлова Л.В., Крамарь О.Г. // Фундаментальные науки и практика. Сборник научных работ с материалами трудов 2-ой международной телеконференции. - Т.1, №2. - Томск, 2010. - С. 80-81.

13. Микроэкология человека, коррекция дисбактериоза / Михайлова Л.В., Крамарь В.С., Крамарь В.О., Савченко Т.Н. и др. // Вестник ВолГМУ. - Вып.4 (36). - Волгоград, 2010. - С. 73-76.

14. Факторы, способствующие персистенции условно-патогенных микроорганизмов / Михайлова Л.В., Крамарь В.О., Савченко Т.Н., Климова Т.Н. // Вестник ВолГМУ. - Вып.4 (36). - Волгоград, 2010. - С. 76-79.

Размещено на Allbest.ru

...