Использование систем гомологичной и сайт-специфической рекомбинации фага гамма для целенаправленной модификации хромосомы Pantoea ananatis
Адаптация высокоэффективного генно-инженерного инструментария, разработанного в настоящее время для E. coli, для использования в клетках близкородственного организма Pantoea ananatis. Гомологичная рекомбинация для создания целенаправленных модификаций.
| Рубрика | Биология и естествознание |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 24.09.2018 |
| Размер файла | 243,5 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Таблица№4. Описание свойств промоторов библиотеки с помощью двух различных методов: измерение активности репортерного белка в-галактозидазы и определение относительного количества мРНК репортерного гена lacZ методом ПЦР в реальном времени.
|
Промотор |
ИПТГ, 0 мМ |
||||
|
Активность в-галактозидазы, ед. Миллера |
Отношение сил промоторов, Atac/AtacN |
Относительное количество мРНКlacZ |
Отношение сил промоторов, мРНКlacZ(Ptac)/ мРНКlacZ (PtacN) |
||
|
Ptac |
6700 |
1 |
53900 |
1 |
|
|
Ptac52 |
550 |
12 |
3500 |
15 |
|
|
Ptac65 |
160 |
42 |
940 |
57 |
Полученная библиотека Ptac-подобных промоторов, узнаваемых Eу70 P. ananatis, была использована для оптимизации экспрессии генов в штамме-продуценте глутаминовой кислоты, созданном на базе P. ananatis, что помогло существенно улучшить его свойства.
ВЫВОДЫ
1. Выявлен токсический эффект от экспрессии генов л Red-системы в клетках P. ananatis, выражающийся в остановке роста бактерий. Отобран штамм SC17(0), способный к росту в условиях индукции экспрессии генов л Red-системы. Показано, что при использовании штамма SC17(0) в качестве реципиента частота л Red-зависимой интеграции линейных фрагментов ДНК с короткими плечами гомологии в хромосому P. ananatis сопоставима с частотой, получаемой в аналогичных экспериментах с E. coli К12.
2. Разработан эффективный генетический инструментарий, позволяющий последовательно вводить множественные модификации в геном P. ananatis, получая штаммы, не содержащие в геноме маркеров устойчивости к антибиотикам. Его основными элементами являются:
· метод введения маркированных мутаций в геном штамма SC17(0) с помощью Red-системы фага л;
· метод переноса маркированных мутаций между штаммами P. ananatis с помощью электропорации геномной ДНК;
· л Xis/Int-зависимое удаление использованных селективных маркеров.
3. Разработана двухстадийная процедура получения немаркированных точечных замен в хромосоме P. ananatis, основанная на использовании двойного селективного/контрселективного маркера и метода л Red-зависимой интеграции двухцепочечных фрагментов ДНК или л Bet-зависимой интеграции олигонуклеотидов. Эффективность проведения такой модификации в модельных экспериментах достигала 25%.
4. Осуществлено конструирование библиотеки искусственных Ptac-подобных промоторов, обеспечивающих различающиеся в диапазоне двух порядков величины уровни транскрипции целевого гена P. ananatis.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ОТРАЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПЕЧАТНЫХ РАБОТАХ
1. Голубева Л.И., Куваева Т.М., Каташкина Ж.И. Использование Red-зависимой системы рекомбинации фага л для получения библиотек промоторов в Enterobacteriaceae. Материалы международной школы-конференции молодых ученых «Биотехнология будущего» в рамках международного симпозиума «ЕС-Россия: перспективы сотрудничества в области биотехнологии в 7-ой Рамочной Программе». Санкт-Петербург, 2006.
2. Joanna I Katashkina, Tatiana M Kuvaeva, Irina G Andreeva, Alexandra Yu Skorokhodova, Irina V Biryukova, Irina L Tokmakova, Lubov I Golubeva and Sergey V Mashko.Construction of stably maintained non-mobilizable derivatives of RSF1010 lacking all known elements essential for mobilization. BMC Biotechnology, 2007, 7:80.
3. Каташкина Ж.И., Голубева Л.И., Куваева Т.М., Гайденко Т.А., Гак Е.Р., Машко С.В. Способ конструирования рекомбинантных бактерий, принадлежащих к роду Pantoea, и способ продукции L-аминокислот с использованием бактерий, принадлежащих к роду Pantoea. Заявка на изобретение RU 2006134574, 2008.
4. Joanna I Katashkina, Yoshihiko Hara, Lyubov I Golubeva, Irina G Andreeva, Tatiana M Kuvaeva and Sergey V Mashko. Use of the л Red-recombineering method for genetic engineering of Pantoea ananatis. BMC Molecular Biology, 2009, 10:34.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Понятие и общее описание механизма рекомбинации генов, классификация и типы форм его реализации: общей и сайт-специфической. Особенности взаимодействий, обусловленных спариванием оснований между комплементарными цепями гомологичных спиралей ДНК.
курсовая работа [37,4 K], добавлен 18.10.2013Рекомбинация у бактериофагов – физическое взаимодействие геномов в смешанно-инфицированных клетках. Детальный анализ межтиповых и внутритиповых рекомбинантов полиовирусов. Генетика бактериофагов, связанная с генетическими особенностями бактерий-хозяев.
реферат [39,8 K], добавлен 15.12.2010Сущность процесса адаптации. Стресс как неспецифический стимулятор. Резервы продуктивности биологических систем. Использование резервов организма в спорте, медицине. Построение модели адаптации организма к факторам, выводящим его из состояния равновесия.
курсовая работа [261,7 K], добавлен 25.11.2013Разработка универсального метода клонирования фрагментов ДНК с использованием II-S типа эндонуклеаз рестрикции. Определение активности ДНК-полимеразы фага Т4. Выделение РНК-лигазы, полинуклеотидкиназы фага Т4. Анализ методов и результатов исследования.
дипломная работа [66,5 K], добавлен 23.08.2011ДНК - материальная основа наследственности бактерий. Изменчивость бактерий (модификации, мутации, генетические рекомбинации). Генетика вирусов. Механизмы образования лекарственной устойчивости бактерий. Получение и использование вакцины и сыворотки.
реферат [509,3 K], добавлен 28.01.2010Выявление параллелизма в поведении генов и хромосом в ходе формирования гамет и оплодотворения. Понятие генетической рекомбинации, исследование явления на дрозофилах, проведенное Т. Морганом. Основные положения хромосомной теории наследственности.
презентация [582,2 K], добавлен 28.12.2011Исследование истории появления, происхождения, эволюции и особенностей строения Y-хромосом, половой хромосомы человека и других млекопитающих, которая имеется лишь у особей мужского пола. Анализ вероятности исчезновения Y-хромосомы вследствие мутации.
реферат [284,9 K], добавлен 15.09.2011Протеасомо-опосредованный гидролиз белков. Функции и синтез липоевой кислоты в Escherichia coli. Использование LplA-лигазы в биохимических исследованиях. Методы работы с бактериями Escherichia coli. Денатурирующий электрофорез в полиакриламидном геле.
курсовая работа [1,1 M], добавлен 23.01.2018Исследование понятия биологических часов человека, способности организма чувствовать и измерять время. Ритм изменения функционального состояния человека. Адаптация организмов к смене дня и ночи. Обзор теории гормонального влияния на биоритмы человека.
реферат [24,0 K], добавлен 08.03.2014Этапы роста, развития организма. Возрастная периодизация. Общая периодизация онтогенеза. Физико-биологические и социальные факторы эволюции человека разумного. Этническая антропология. Антропологический состав народов мира в настоящее время и в прошлом.
реферат [42,6 K], добавлен 31.10.2008История развития паразитизма как формы взаимоотношения между паразитами и их хозяевами. Рассмотрение видов факультативных и облигатных микроорганизмов. Описание процессов мутации и рекомбинации генов - основной силы эволюции микробного паразитизма
презентация [247,6 K], добавлен 28.12.2011Адаптация организма к условиям среды в общебиологическом плане, ее необходимость для сохранения как индивидуума, так и вида. Способы защиты от неблагоприятных условий окружающей среды. Анабиоз, оцепенение, зимняя спячка, миграция, активация ферментов.
реферат [38,2 K], добавлен 20.09.2009Перекрестная адаптация организма к одному фактору среды, ее способствование приспособлению к другим факторам. Молекулярные основы адаптации человека и ее практическое значение. Приспосабливаемость живого организма к повреждающим факторам внешней среды.
реферат [198,3 K], добавлен 20.09.2009Исследование строения, деятельности функциональных систем организма, особенности и принципы их организации. Теории изучения закономерностей развития организма ребенка и особенностей функционирования его физиологических систем на разных этапах онтогенеза.
контрольная работа [22,9 K], добавлен 08.08.2009Социально-биологические основы физической культуры. Функциональные системы организма. Адаптация как процесс приспособления его строения и функций к условиям существования. Аэробная и анаэробная производительность организма. Обмен веществ (метаболизм).
презентация [7,4 M], добавлен 16.03.2014Адаптация как одно из ключевых понятий в экологии человека. Основные механизмы адаптации человека. Физиологические и биохимические основы адаптации. Адаптация организма к физическим нагрузкам. Снижение возбудимости при развитии запредельного торможения.
реферат [22,8 K], добавлен 25.06.2011Токсичные элементы: мышьяк и селен, пути их возникновения в окружающей среде, попадания в сырье и продукты питания, в организм человека. Механизм биологического действия токсичных элементов. Опасности использования генно-модифицированных организмов.
контрольная работа [22,1 K], добавлен 17.10.2015Понятие и основные методы генной инженерии. Методика выделения ДНК на примере ДНК плазмид. Принципы действия системы рестрикции-модификации. Перенос и обнаружение клонируемых генов в клетках. Конструирование и введение в клетки рекомбинантных молекул ДНК.
реферат [22,1 K], добавлен 23.01.2010Наследственная информация, понятие хромосомы. Последствия изменения числа хромосом в кариотипе человека. Процедура определения кариотипа. Хромосомная теория наследственности, генетика пола. Явление наследования, сцепленного с полом. Хромосомные болезни.
контрольная работа [15,9 K], добавлен 24.12.2011Химический состав и уровни организации хроматина. Варианты гистонов и их действие на хроматин. Понятие и примеры кариотипов. Эволюция хромосом млекопитающих. Теломерные районы хромосом и схема работы теломеразы. Y-хромосома и карта Х-хромосомы человека.
контрольная работа [1,4 M], добавлен 14.02.2016
