Рис. 9 Анализ влияния ингибиторов везикулярного транспорта на количество внеклеточных протеасом в кондиционируемой К562 среде. 0 ч - контрольная проба среды, собранной без инкубации с клетками

Клетки инкубировали в бессывороточной среде в присутствии ингибиторов везикулярного транспорта: в среду к клеткам был добавлен 1) DMSO- Bleb (-), 2) блеббистатин - Bleb (+), 3), MetOH - DMA(-) и 4) DMA - DMA(+).

Таким образом, можно заключить, что раковые клетки могут транспортировать внеклеточные протеасомы с помощью везикул, однако большая часть внеклеточных протеасом секретируется раковыми клетками с помощью другого механизма.

Обсуждение

Внеклеточные протеасомы обнаружены в плазме крови, спинномозговой жидкости, в альвеолярном секрете как здоровых людей, так и пациентов с различными патологиями, включая онкологические и аутоиммунные заболевания (Heubner et al., 2011; Lavabre-Bertrand et al., 2001; Mueller et al., 2012; Sixt et al., 2007; Wada et al., 1993). Интересно, что обнаружена зависимость между стадией и тяжестью течения заболевания и концентрацией внеклеточных протеасом (Heubner et al., 2011; Wada et al., 1993). Поэтому предложено рассматривать внеклеточные протеасомы в качестве диагностического и прогностического маркера для оценки тяжести ряда заболеваний и предполагаемой выживаемости пациентов (Heubner et al., 2011). При этом до сих пор неизвестно, благодаря какому механизму протеасомы оказываются во внеклеточном пространстве. Существующие данные в мировой литературе о присутствии протеасом во внеклеточных везикулах не позволяют сделать однозначный вывод о том, во-первых, являются ли экзосомы или микровезикулы основными переносчиками протеасом, и во-вторых, какие именно везикулы транспортируют протеасомы из клетки во внеклеточное пространство. В нашей работе использовались раковые клетки гемобластических линий человека, так как именно при гемобластозах наблюдается повышенная секреция протеасом во внеклеточное пространство (Dutaud et al., 2002; Wada et al., 1993). Было показано, что при кондиционировании минимальной среды клетками К562 протеасомы обнаруживаются в среде уже через полчаса после начала инкубации и постепенно накапливаются на протяжении всего времени культивирования клеток в среде (РИС. 3). В силу отсутствия прямой корреляции между клеточной гибелью и появлением протеасом во внеклеточном пространстве, возможно предположить, что данный белковый протеолитический комплекс секретируется клетками с помощью активного транспорта.

Согласно литературным данным, классический способ секреции белков ЭПР/Гольджи-зависимому пути является маловероятным для протеасом. Известно, что белки протеасом не содержит N-концевого сигнального пептида, необходимого для ко-трансляционного транспорта секреторных белков в ЭПР и далее - в аппарат Гольджи, поэтому протеасомы не должны экспортироваться клеткой по классическому пути. Однако мы проверили этот классический механизм транспорта секреторных белков в отношении протеасом с помощью специфического ингибитора ЭПР/Гольджи-зависимого пути секреции брефелдина А. Клетки человека линии К562 инкубировали в течение 3 часов в присутствии и отсутствии брефелдина А. Как и ожидалось, блокирование классического пути транспорта не повлияло на фиксируемый уровень внеклеточных протеасом (РИС 4). Это подтверждает тот факт, что протеасомы не являются классическим секреторным белком, и транспортируются во внеклеточное пространство по неклассическому пути секреции.

Неклассический путь секреции белков может осуществляться различными механизмами: с помощью везикулярных транспортных систем клетки (экзосомы, лизосомы), с участием трансмембранных белков-переносчиков (липидные рафты), «блеббингом» плазматической мембраны (микровезикулы). Согласно литературным данным, протеасомные белки были обнаружены в экзосомах и микровезикулах некоторых клеток ((Haraszti et al., 2016; Liang et al., 2013; Wang et al., 2012)). Кроме того, были обнаружены структурно и функционально интактные протеасомы в микровезикулах(Lai et al., 2012). Поэтому везикулярный транспорт является наиболее вероятным способом секреции внеклеточных протеасом. Однако чтобы определить, какой тип везикул транспортирует протеасомы из клетки во внеклеточное пространство, было решено фракционировать кондиционированную клетками среду методом последовательного центрифугирования на три части: микровезикулы, экзосомы и истощенную везикулами фракцию. Осаждение микровезикул из кондиционированной клетками среды происходит при центрифугировании на невысоких скоростях (20000g). Экзосомы осаждают с помощью ультрацентрифугирования при различных скоростях и временных диапазонах (Jeppesen et al., 2014). Первоначально мы разделили среду на фракции микровезикул и экзосом (ультрацентрифугировали среду при 200000g в течение 16 ч), и оказалось, что ни микровезикулы, ни экзосомы клеток К562 не содержали в себе протеасомных белков (РИС 5). Это было очевидное противоречие литературным данным, поэтому было высказано предположение, что при таких условиях фракционирования среды экзосомы могут разрушаться и выпускать в результате свое содержимое наружу во внеклеточное пространство. Для последующих экспериментов, поэтому было принято решение понизить скорость и время ультрацентрифугирования. После изменения условий осаждения экзосом, мы наблюдали минорную часть от общего количества внеклеточных протеасом в экзосомах и микровезикулах, но общий пул внеклеточных протеасом была обнаружен в обедненной везикулами среде (РИС 6А) Поскольку вестерн-блот анализ идентифицирует лишь отдельные белки протеасомного комплекса и не дает представления о том, присутствуют ли в среде структурно и функционально интактные протеасомы, был проведен анализ химотрипсин-подобной активности в полученных фракциях кондиционированной клетками среды с помощью флуорогенного субстрата Suc-LLVY-AMC и специфического ингибитора протеасом MG132. Оказалось, что протеасомная активность наблюдается только в истощенной везикулами среде (РИС 6Б). В везикулах химотрипсин-подобной активности не обнаружено, что свидетельствует либо об отсутствии полноразмерных функционально активных протеасом в везикулах, либо о крайне малом их количестве. Таким образом, мы показали, что в клетках К562, интактные функционально активные внеклеточные протеасомы находятся в среде, но не в везикулах. Процедура фракционирования кондиционированной среды была повторена на другой клеточной линии человека RPMI-8226. По результатам вестерн-блот анализа у этой клеточной линии основной пул протеасом также обнаруживается в истощенной везикулами среде, и меньшее количество оказывалось в микровезикулах и экзосомах (РИС 7).

Оставалась вероятность того, что внеклеточные везикулы могут разрушаться при осаждении их с помощью ультрацентрифугирования или вскоре после выхода во внеклеточную среду. Чтобы исключить появление внеклеточных протеасом в среду в результате такого разрушения везикул, было решено использовать ингибиторы везикулярного транспорта. Для ингибирования выхода экзосом из мультивезикулярных телец мы использовали DMA, для ингибирования микровезикулярного транспорта - блеббистатин. В результате проведенного анализа жизнеспособности клеток при действии на них этих ингибиторов были подобраны концентрации 1.5 мМ для DMA и 50 мкМ блеббистатина. Оценка изменений количества внеклеточных протеасом в зависимости от действия ингибиторов микровезикулярного и экзосомального транспорта были использованы два разных подхода: иммуноферментный анализ по методу «Сэндвич» и вестерн-блот анализ с помощью специфических антител к протеасомам. Для разрушения везикул к кондиционированной клетками среде добавляли буфер RIPA и подвергали воздействию УЗ. В результате проведенного исследования было показано, что добавление ингибиторов везикулярного транспорта в среду культивирования клеток К562 и RPMI-8226 не оказывало влияния на уровень протеасом (РИС 8).

Таким образом, можно заключить, что раковые клетки могут транспортировать внеклеточные протеасомы с помощью везикул, однако большая часть внеклеточных протеасом секретируется раковыми клетками с помощью другого механизма. Какой же из механизмов неклассического транспорта применим к раковым внеклеточным протеасомам? Для белков, транспортируемых через мембрану напрямую, характерна поликатионная природа пептидов и лабильная, частично развернутая структура (Kueltzo and Middaugh, 2003), поэтому этом способ маловероятен для протеасом. Существует вероятность, что протеасомы выходят во внеклеточное пространство при помощи секреторных лизосом. Известно, что секреторные лизосомы часто обнаруживаются в клетках гемопоэтической линии ((Blott and Griffiths, 2002)), к которой относятся и используемые в данном исследовании клетки. Также возможно, что существует собственный, специфичный для раковых клеток механизм транспорта внеклеточных протеасом. Таким образом, можно заключить, что механизм транспорта внеклеточных протеасом так и остается непонятен, и требует дальнейших исследований.

Выводы

1. В раковых клетках человека К562 и RPMI-8226 лишь небольшая часть внеклеточных протеасом переносится микровезикулами и экзосомами, что позволяет предположить о существовании отдельного механизма транспорта протеасом для раковых клеток.

2. Ингибирование везикулярного транспорта в клетках К562 и RPMI-8226 не оказывает влияния на количество внеклеточных протеасом, что подтверждает предыдущий вывод.

Список использованной литературы

1. Ben-Nissan, G., and Sharon, M. (2014). Regulating the 20S Proteasome Ubiquitin-Independent Degradation Pathway. Biomolecules 4, 862-884.

2. Blott, E.J., and Griffiths, G.M. (2002). Secretory lysosomes. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 3, 122-131.

3. Bochmann, I., Ebstein, F., Lehmann, A., Wohlschlaeger, J., Sixt, S.U., Kloetzel, P.-M., and Dahlmann, B. (2014). T lymphocytes export proteasomes by way of microparticles: a possible mechanism for generation of extracellular proteasomes. J. Cell. Mol. Med. 18, 59-68.

4. Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72, 248-254.

5. Budenholzer, L., Cheng, C.L., Li, Y., and Hochstrasser, M. (2017). Proteasome Structure and Assembly. J. Mol. Biol.

6. Dahlmann, B., Ruppert, T., Kuehn, L., Merforth, S., and Kloetzel, P.M. (2000). Different proteasome subtypes in a single tissue exhibit different enzymatic properties. J. Mol. Biol. 303, 643-653.

7. Daulny, A., and Tansey, W.P. (2009). Damage control: DNA repair, transcription, and the ubiquitin-proteasome system. DNA Repair 8, 444-448.

8. Ding, Y., Wang, J., Wang, J., Stierhof, Y.-D., Robinson, D.G., and Jiang, L. (2012). Unconventional protein secretion. Trends Plant Sci. 17, 606-615.

9. Dutaud, D., Aubry, L., Henry, L., Levieux, D., Hendil, K.B., Kuehn, L., Bureau, J.P., and Ouali, A. (2002). Development and evaluation of a sandwich ELISA for quantification of the 20S proteasome in human plasma. J. Immunol. Methods 260, 183-193.

10. Egerer, K., Kuckelkorn, U., Rudolph, P.E., Rьckert, J.C., Dцrner, T., Burmester, G.-R., Kloetzel, P.-M., and Feist, E. (2002). Circulating proteasomes are markers of cell damage and immunologic activity in autoimmune diseases. J. Rheumatol. 29, 2045-2052.

11. Ehlinger, A., and Walters, K.J. (2013). Structural insights into proteasome activation by the 19S regulatory particle. Biochemistry (Mosc.) 52, 3618-3628.

12. Frentzel, S., Pesold-Hurt, B., Seelig, A., and Kloetzel, P.M. (1994). 20 S proteasomes are assembled via distinct precursor complexes. Processing of LMP2 and LMP7 proproteins takes place in 13-16 S preproteasome complexes. J. Mol. Biol. 236, 975-981.

13. Glickman, M.H., and Ciechanover, A. (2002). The Ubiquitin-Proteasome Proteolytic Pathway: Destruction for the Sake of Construction. Physiol. Rev. 82, 373-428.

14. Groll, M., Ditzel, L., Lцwe, J., Stock, D., Bochtler, M., Bartunik, H.D., and Huber, R. (1997). Structure of 20S proteasome from yeast at 2.4 A resolution. Nature 386, 463-471.

15. Haraszti, R.A., Didiot, M.-C., Sapp, E., Leszyk, J., Shaffer, S.A., Rockwell, H.E., Gao, F., Narain, N.R., DiFiglia, M., Kiebish, M.A., et al. (2016). High-resolution proteomic and lipidomic analysis of exosomes and microvesicles from different cell sources. J. Extracell. Vesicles 5.

16. Hardeland, U., Kunz, C., Focke, F., Szadkowski, M., and Schar, P. (2007). Cell cycle regulation as a mechanism for functional separation of the apparently redundant uracil DNA glycosylases TDG and UNG2. Nucleic Acids Res. 35, 3859-3867.

17. Heubner, M., Wimberger, P., Dahlmann, B., Kasimir-Bauer, S., Kimmig, R., Peters, J., Wohlschlaeger, J., and Sixt, S.U. (2011). The prognostic impact of circulating proteasome concentrations in patients with epithelial ovarian cancer. Gynecol. Oncol. 120, 233-238.

18. Hough, R., Pratt, G., and Rechsteiner, M. (1987). Purification of two high molecular weight proteases from rabbit reticulocyte lysate. J. Biol. Chem. 262, 8303-8313.

19. Huang, T.T., and D'Andrea, A.D. (2006). Regulation of DNA repair by ubiquitylation. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 323-334.

20. Inobe, T., and Matouschek, A. (2014). Paradigms of protein degradation by the proteasome. Curr. Opin. Struct. Biol. 24, 156-164.

21. Irina M. Konstantinova, Anna S. Tsimokha, and Alexey G. Mittenberg (2008). Role of Proteasomes in Cellular Regulation. In International Review of Cell and Molecular Biology, (Elsevier), pp. 125-181.

22. Jakob, C., Egerer, K., Liebisch, P., Tьrkmen, S., Zavrski, I., Kuckelkorn, U., Heider, U., Kaiser, M., Fleissner, C., Sterz, J., et al. (2007). Circulating proteasome levels are an independent prognostic factor for survival in multiple myeloma. Blood 109, 2100-2105.

23. Jeppesen, D.K., Hvam, M.L., Primdahl-Bengtson, B., Boysen, A.T., Whitehead, B., Dyrskjшt, L., Шrntoft, T.F., Howard, K.A., and Ostenfeld, M.S. (2014). Comparative analysis of discrete exosome fractions obtained by differential centrifugation. J. Extracell. Vesicles 3, 25011.

24. Kisselev, A.F., Akopian, T.N., Woo, K.M., and Goldberg, A.L. (1999). The sizes of peptides generated from protein by mammalian 26 and 20 S proteasomes. Implications for understanding the degradative mechanism and antigen presentation. J. Biol. Chem. 274, 3363-3371.

25. Kisselev, A.F., Garcia-Calvo, M., Overkleeft, H.S., Peterson, E., Pennington, M.W., Ploegh, H.L., Thornberry, N.A., and Goldberg, A.L. (2003). The Caspase-like Sites of Proteasomes, Their Substrate Specificity, New Inhibitors and Substrates, and Allosteric Interactions with the Trypsin-like Sites. J. Biol. Chem. 278, 35869-35877.

26. Kloetzel, P.-M. (2001). Ubiquitin and proteasomes: Antigen processing by the proteasome. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 179.

27. Kueltzo, L.A., and Middaugh, C.R. (2003). Nonclassical transport proteins and peptides: an alternative to classical macromolecule delivery systems. J. Pharm. Sci. 92, 1754-1772.

28. Kulichkova, V.A., Mittenberg, A.G., Ermolaeva, Y. u B., Tsimokha, A.S., Volkova, I.V., Evteeva, I.N., Kozyukharova, I.V., Gauze, L.N., and Konstantinova, I.M. (2004). Specificity of the proteasome population secreted from cells into the culture medium. Dokl. Biol. Sci. Proc. Acad. Sci. USSR Biol. Sci. Sect. 399, 503-506.

29. Kumatori, A., Tanaka, K., Inamura, N., Sone, S., Ogura, T., Matsumoto, T., Tachikawa, T., Shin, S., and Ichihara, A. (1990). Abnormally high expression of proteasomes in human leukemic cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 87, 7071-7075.

30. Laemmli, U.K. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680-685.

31. Lai, R.C., Tan, S.S., Teh, B.J., Sze, S.K., Arslan, F., de Kleijn, D.P., Choo, A., and Lim, S.K. (2012). Proteolytic Potential of the MSC Exosome Proteome: Implications for an Exosome-Mediated Delivery of Therapeutic Proteasome. Int. J. Proteomics 2012.

32. Lavabre-Bertrand, T., Henry, L., Carillo, S., Guiraud, I., Ouali, A., Dutaud, D., Aubry, L., Rossi, J.F., and Bureau, J.P. (2001). Plasma proteasome level is a potential marker in patients with solid tumors and hemopoietic malignancies. Cancer 92, 2493-2500.

33. Liang, B., Peng, P., Chen, S., Li, L., Zhang, M., Cao, D., Yang, J., Li, H., Gui, T., Li, X., et al. (2013). Characterization and proteomic analysis of ovarian cancer-derived exosomes. J. Proteomics 80, 171-182.

34. Liu, M., Dhanwada, K.R., Birt, D.F., Hecht, S., and Pelling, J.C. (1994). Increase in p53 protein half-life in mouse keratinocytes following UV-B irradiation. Carcinogenesis 15, 1089-1092.

35. Lцwe, J., Stock, D., Jap, B., Zwickl, P., Baumeister, W., and Huber, R. (1995). Crystal structure of the 20S proteasome from the archaeon T. acidophilum at 3.4 A resolution. Science 268, 533-539.

36. Lynnerup, N., Kjeldsen, H., Heegaard, S., Jacobsen, C., and Heinemeier, J. (2008). Radiocarbon Dating of the Human Eye Lens Crystallines Reveal Proteins without Carbon Turnover throughout Life. PLoS ONE 3.

37. Maupin-Furlow, J. (2012). Proteasomes and protein conjugation across domains of life. Nat. Rev. Microbiol. 10, 100-111.

38. Maupin-Furlow, J.A., Humbard, M.A., Kirkland, P.A., Li, W., Reuter, C.J., Wright, A.J., and Zhou, G. (2006). Proteasomes from structure to function: perspectives from Archaea. Curr. Top. Dev. Biol. 75, 125-169.

39. Mittenberg, A.G., Moiseeva, T.N., and Barlev, N.A. (2008). Role of proteasomes in transcription and their regulation by covalent modifications. Front. Biosci. J. Virtual Libr. 13, 7184-7192.

40. Mueller, O., Anlasik, T., Wiedemann, J., Thomassen, J., Wohlschlaeger, J., Hagel, V., Keyvani, K., Schwieger, I., Dahlmann, B., Sure, U., et al. (2012). Circulating extracellular proteasome in the cerebrospinal fluid: a study on concentration and proteolytic activity. J. Mol. Neurosci. MN 46, 509-515.

41. Murata, S., Sasaki, K., Kishimoto, T., Niwa, S.-I., Hayashi, H., Takahama, Y., and Tanaka, K. (2007). Regulation of CD8+ T cell development by thymus-specific proteasomes. Science 316, 1349-1353.

42. Nandi, D., Woodward, E., Ginsburg, D.B., and Monaco, J.J. (1997). Intermediates in the formation of mouse 20S proteasomes: implications for the assembly of precursor beta subunits. EMBO J. 16, 5363-5375.

43. Otero, M.G., Alloatti, M., Cromberg, L.E., Almenar-Queralt, A., Encalada, S.E., Pozo Devoto, V.M., Bruno, L., Goldstein, L.S.B., and Falzone, T.L. (2014). Fast axonal transport of the proteasome complex depends on membrane interaction and molecular motor function. J. Cell Sci. 127, 1537-1549.

44. Qian, M.-X., Pang, Y., Liu, C.H., Haratake, K., Du, B.-Y., Ji, D.-Y., Wang, G.-F., Zhu, Q.-Q., Song, W., Yu, Y., et al. (2013). Acetylation-Mediated Proteasomal Degradation of Core Histones during DNA Repair and Spermatogenesis. Cell 153, 1012-1024.

45. Qureshi, N., Vogel, S.N., Van Way, C., Papasian, C.J., Qureshi, A.A., and Morrison, D.C. (2005). The proteasome: A Central Regulator of Inflammation and Macrophage Function. Immunol. Res. 31, 243-260.

46. Radivojac, P., Vacic, V., Haynes, C., Cocklin, R.R., Mohan, A., Heyen, J.W., Goebl, M.G., and Iakoucheva, L.M. (2010). Identification, analysis, and prediction of protein ubiquitination sites. Proteins 78, 365-380.

47. Raiborg, C., and Stenmark, H. (2009). The ESCRT machinery in endosomal sorting of ubiquitylated membrane proteins. Nature 458, 445-452.

48. Raposo, G., and Stoorvogel, W. (2013). Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends. J. Cell Biol. 200, 373-383.

49. Ravid, T., and Hochstrasser, M. (2008). Diversity of degradation signals in the ubiquitin-proteasome system. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, 679-690.

50. Roth, G.A., Moser, B., Krenn, C., Roth?Walter, F., Hetz, H., Richter, S., Brunner, M., Jensen?Jarolim, E., Wolner, E., Hoetzenecker, K., et al. (2005). Heightened levels of circulating 20S proteasome in critically ill patients. Eur. J. Clin. Invest. 35, 399-403.

51. Savina, A., Furlбn, M., Vidal, M., and Colombo, M.I. (2003). Exosome Release Is Regulated by a Calcium-dependent Mechanism in K562 Cells. J. Biol. Chem. 278, 20083-20090.

52. Simpson, M.V. (1953). The release of labeled amino acids from the proteins of rat liver slices. J. Biol. Chem. 201, 143-154.

53. Sixt, S.U., and Dahlmann, B. (2008). Extracellular, circulating proteasomes and ubiquitin -- Incidence and relevance. Biochim. Biophys. Acta BBA - Mol. Basis Dis. 1782, 817-823.

54. Sixt, S.U., and Peters, J. (2010). Extracellular alveolar proteasome: possible role in lung injury and repair. Proc. Am. Thorac. Soc. 7, 91-96.

55. Sixt, S.U., Beiderlinden, M., Jennissen, H.P., and Peters, J. (2007). Extracellular proteasome in the human alveolar space: a new housekeeping enzyme? Am. J. Physiol.-Lung Cell. Mol. Physiol. 292, L1280-L1288.

56. Sixt, S.U., Costabel, U., Bonella, F., Grunert, K., Alami, R., Hakenbeck, J., Bauer, P., Dahlmann, B., Schmid, K.W., Peters, J., et al. (2014). Alveolar and intraparenchymal proteasome in sarcoidosis. Respir. Med. 108, 1534-1541.

57. Smith, D.M., Benaroudj, N., and Goldberg, A. (2006). Proteasomes and their associated ATPases: A destructive combination. J. Struct. Biol. 156, 72-83.

58. Vlachostergios, P.J., Patrikidou, A., Daliani, D.D., and Papandreou, C.N. (2009). The ubiquitin-proteasome system in cancer, a major player in DNA repair. Part 1: post-translational regulation. J. Cell. Mol. Med. 13, 3006-3018.

59. Wada, M., Kosaka, M., Saito, S., Sano, T., Tanaka, K., and Ichihara, A. (1993). Serum concentration and localization in tumor cells of proteasomes in patients with hematologic malignancy and their pathophysiologic significance. J. Lab. Clin. Med. 121, 215-223.

60. Wang, Z., Hill, S., Luther, J.M., Hachey, D.L., and Schey, K.L. (2012). Proteomic analysis of urine exosomes by multidimensional protein identification technology (MudPIT). Proteomics 12, 329-338.

61. Wawrzynczak, E. (2006). Prognostic proteasome.

62. Waxman, L., Fagan, J.M., and Goldberg, A.L. (1987). Demonstration of two distinct high molecular weight proteases in rabbit reticulocytes, one of which degrades ubiquitin conjugates. J. Biol. Chem. 262, 2451-2457.

63. Wilkinson, K.D. (2005). The discovery of ubiquitin-dependent proteolysis. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 15280-15282.

64. Wуjcik, C., and DeMartino, G.N. (2003). Intracellular localization of proteasomes. Int. J. Biochem. Cell Biol. 35, 579-589.

65. Zoeger, A., Blau, M., Egerer, K., Feist, E., and Dahlmann, B. (2006). Circulating Proteasomes Are Functional and Have a Subtype Pattern Distinct from 20S Proteasomes in Major Blood Cells. Clin. Chem. 52, 2079-2086.

66. Зайкова Ю.Я., Куличкова В.А., Гаузе Л.Н., Ермолаева Ю.Б., and Цимоха А.С. (2011). Сравнительный анализ вне- и внутриклеточных протеасом клеток человека линии к562. Цитология.

67. Зайкова Ю.Я., Куличкова В.А., Митенкова К.А., and Цимоха А.С. (2014). Способы выделения и очистки внеклеточных протеасом и оценка их пептидазных активностей. Цитология.

Размещено на Allbest.ru