Оценка биологической активности музейных культур микроорганизмов-антагонистов и их использование для предпосевной обработки семян сосны обыкновенной (Pinus sylvestris L.) in vitro

Размещено на http://www.allbest.ru/

Оценка биологической активности музейных культур микроорганизмов-антагонистов и их использование для предпосевной обработки семян сосны обыкновенной (Pinus sylvestris L.) in vitro

О.Э. Кондакова, И.Д. Гродницкая

Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН, г. Красноярск, Россия

Исследована антагонистическая и ферментативная активность музейных и выделенных из почв лесных питомников и больных растений антагонистов - микроскопических грибов рода Trichoderma и бактерий родов Bacillus и Streptomyces по отношению к фитопатогенным грибам рода Fusarium. Установлено, что все исследуемые антагонисты способны с разной степенью ингибировать рост и развитие изучаемых грибов рода Fusarium. Ферментативная активность (хитиназная, липазная, протеиназная) исследуемых антагонистов различна и зависит от таксономической принадлежности. У микромицетов рода Trichoderma отмечена средняя и сильная, а у бактерий (S. lateritius, B. amyloliquefaciens) - средняя и слабая ферментативная активность. Все исследуемые антагонисты в опытах in vitro увеличивали массовую всхожесть семян сосны обыкновенной в среднем на 32%. Наибольший ростстимулирующий эффект отмечен при применении S. lateritius и T. longibrachiatum. Внесение в почву антагониста T. harzianum вместе с семенами сосны элиминировало численность фитопатогенных грибов (р. Fusarium) под посевами в 2,7-3,3 раза по сравнению с их начальной численностью.

Ключевые слова: фитопатогены; антагонистическая и ферментативная активность; ростстимулирующий эффект; Trichoderma; Bacillus; Streptomyces.

Введение

В настоящее время в лесное хозяйство высокими темпами внедряется биологический метод защиты растений, основанный на использовании микроорганизмов, обладающих антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным микроорганизмам и ростстимулирующей - по отношению к растениям [1-2]. Основными кандидатами в биологической защите хвойных являются микроорганизмы-антагонисты фитопатогенов [2-4]. Антагонистические свойства микроорганизмов проявляются за счет выделения различных по составу биологически активных веществ (ферментов, антибиотиков, гормонов и т.д.), обладающих высокой физиологической активностью и избирательным действием по отношению к фитопатогенам, а также способностью индуцировать системную резистентность растения-хозяина [2, 5]. Из продуктов метаболизма, выделяемых антагонистами, большое значение имеют ферменты группы гидролаз, так как именно они ответственны за гидролиз различных сложных по строению и составу веществ, например хитина -- основного компонента клеточных стенок фитопатогенных грибов [6]. К микроорганизмам-антагонистам относят как бактерии, так и грибы. Часто используемыми антагонистами фитопатогенов являются бактерии родов Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces, грибы рода Trichoderma. Известно, что эти микроорганизмы способны подавлять рост основных возбудителей болезней сеянцев хвойных в лесных питомниках -- грибов рода Fusarium [2, 7-8]. По мнению некоторых авторов, результаты испытаний биологической активности штаммов антагонистов, полученные в лабораторных условиях и в открытом грунте, могут значительно различаться, так как микробный антагонизм в почве протекает с учетом многих природных факторов, часто значительно отличаясь от антагонизма тех же микробов на искусственных питательных средах [1--3]. Неоднозначность результатов, полученных в опытах in vitro и in vivo, связана с различной выживаемостью этих микроорганизмов в почвенном микробном сообществе при различающихся питательных / пищевых ресурсах. Поиск антагонистов должен включать исследования взаимодействия микроорганизмов в контролируемых условиях и в естественной обстановке. Учитывая широкую распространенность грибных болезней сеянцев хвойных в лесных питомниках Сибири, для защиты сеянцев особенно важно подобрать аборигенные штаммы антагонистов, которые способны эффективно снижать численность фитопатогенов и в то же время стимулировать рост и развитие растений для получения качественного посадочного материала в условиях Сибирского региона. Цель исследования - установление биологической активности различных штаммов микроорганизмов с последующей оценкой их влияния на рост и развитие семян сосны обыкновенной.

фитопатогены сеянцы хвойный антагонистический защита

Материалы и методики исследования

Объектами исследования являлись микроорганизмы-антагонисты и фитопатогенные грибы, выделенные из больных растений и почв лесных питомников Красноярского края и Республики Хакасия, идентифицированные и хранящиеся в музейной коллекции лаборатории микробиологии и экологической биотехнологии Института леса им. В.Н. Сукачева СО РАН (г. Красноярск). Два запатентованных штамма-антагониста предоставлены для исследований на лесных культурах Т.И. Громовых (Trichoderma harzianum ЯИт штамм «Универсальный») и И.И. Гайдашевой (Streptomyces lateritius Pridham, штамм 19М/97) из коллекции Сибирского государственного университета науки и технологии им. М.Ф. Решетнева (г. Красноярск). Поскольку при хранении на питательных средах продолжительное время микроорганизмы способны терять некоторые свои свойства, то для подтверждения их биологической активности, перед применением в полевых опытах, предварительно проводили лабораторные испытания. В опытах использовали микромицеты р. Trichoderma (Т. harzianum, Т. longibrachiatum и Т lignorum) и р. Fusarium (F oxysporum, F moniliforme, Fproliferatum, F moniliforme var. annullatum, F oxysporum) и бактерии (S. lateritius и B. amyloliquefaciens). Перед исследованиями проведена таксономическая / видовая идентификация выделенных из почв и больных растений микроорганизмов-антагонистов и фитопатогенных грибов на основании морфологических методов и молекулярно-генетического метода -- анализ последовательности ДНК (в ЦКП «Геномика», г. Новосибирск).

Определение таксономического положения грибов рр. Trichoderma и Fusarium первоначально осуществляли по морфолого-культуральным признакам, для чего колонии грибов выращивали на сусло-агаре и затем под микроскопом («Микмед 2», Россия), при увеличении 10*40 и 10*100, снабженным устройством для фазово-контрастной микроскопии КФ-4М («ЛОМО», Россия), изучали морфологию мицелия и конидиеносцев. Видовую принадлежность грибов уточняли проведением полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим секвенированием фрагментов рибосомной ДНК [9]. На первом этапе проводили ПЦР, позволяющую выявить полиморфизм в краевых областях локуса ДНК (местах посадки праймеров). Для установления видовой принадлежности изолятов провели прямой анализ нуклеотидных последовательностей секвенированием региона рДНК, включающего следующие последовательности локусов: 18S рРНК, ВТС1, 5^рРНК, ВТС2, 28SрРНК. Результаты секвенирования в формате FASTA использовали для идентификации видов с помощью программы BLAST в Генбанке NCBI и проверяли в международной базе данных Index Fungorum. Идентификацию В. amyloliquefaciens осуществляли секвенированием нуклеотидной последовательности генов на основе выявления 16S рРНК по Сэнгеру.

Наличие антагонистической активности у T harzianum, T lignorum, T longibrachiatum, S. lateritius и B. amyloliquefaciens по отношению к фитопатогенным грибам рода Fusarium определяли классическим методом двойных (встречных) культур [10--13]. Для этого в центр чашки Петри с картофельно-сахарозным агаром (КСА) помещали агаризованный блок (18 мм) с предварительно выращенным грибным фитопатогеном. Вокруг блока бактериологической петлей с суспензией антагониста проводили круг диаметром 6 см (предполагаемая зона для роста фитопатогена) и инкубировали в течение 72 ч при температуре 22°С. Контролем служили чашки с блоком фитопатогена в центре без антагониста [13]. Степень ингибирования (СИ) роста патогена подсчитывали по следующей формуле [12-13]:

СИ = (1 - (А/В)) * 100,

где А -- диаметр колонии фитопатогенного гриба в опыте, мм; В -- диаметр колонии фитопатогенного гриба в контроле, мм. Регистрацию результатов проводили на 5-е, 10-е сутки после начала эксперимента. Визуально отмечали характер роста антагониста и изменение цвета, плотности и толщины колоний фитопатогена [13].

Литическую активность антагонистов определяли с помощью экспресс-тестов: наличие липазы - на желточном агаре, хитиназы - на синтетической среде с хитином, протеиназы - на молочном агаре. О способности антагониста продуцировать экзофермент судили по наличию маслянистого перламутрового слоя над и вокруг колонии (2-недельной) (тест на липазу); образованию зоны просветления вокруг колонии (тест на хитиназу и протеиназу) [13].

В лабораторных экспериментах проверяли ростстимулирующие свойства антагонистов на семенах сосны обыкновенной (Pinus sylvestris L.), предварительно обработав их водными суспензиями этих антагонистов. Для этого наращивали биомассу исследуемых микроорганизмов на плотных питательных средах в чашках Петри (микромицеты - на сусло-агаре, актиномицеты - на крахмало-аммиачном агаре, бактерии рода Bacillus - на мясо-пептонном агаре), инкубировали в течение 72 ч в термостате при температуре 27°С до стадии активного спорулирования. Затем смывом получали водную суспензию клеток (бактерий) или конидий (грибов) с титром (10⁸ клеток (конидий) / мл) согласно методам [10]. Лабораторную всхожесть семян сосны обыкновенной определяли по стандартной методике [14]. Перед обработкой семян сосны водными суспензиями антагонистов их предварительно замачивали в 0,05%-ном растворе KMnO₄ в течение 18 ч и оставляли просохнуть при комнатной температуре. Затем семена замачивали в водных суспензиях антагонистов (10⁷ спор/г) на 2 часа и в стерильной воде (контроль) на то же время. Обработка семян сосны KMnO₄ способствовала гибели вегетативных клеток многих бактерий и грибов, существенно уменьшив общую микробную численность и, тем самым, позволив развиваться популяциям микробов-антагонистов на их поверхности. Предварительные опыты показали, что марганцово-кислый калий не оказывал негативного влияния на микроорганизмов-антагонистов [15].

После просушки семена сосны высевали в заранее подготовленные пластиковые кюветы с темно-серой почвой, взятой на опытном лесопитомнике и характеризующейся высоким плодородием, высевали по 50 семян на кювету в трехкратной повторности. Лабораторный эксперимент для оценки ростстимулирующих свойств антагонистов на семенах сосны обыкновенной проводили в течение 40 дней при комнатной температуре и систематическом (каждые 2 дня) поливе. Учитывали всхожесть семян (общее число проросших семян за весь период исследования, выраженное в процентах от общего числа семян, взятых для проращивания) и количество проростков (число живых проростков в день подсчета) сосны в каждом варианте опыта. Поведены следующие варианты обработки семян: контроль (Н₂О); T harzianum; T longibrachiatum; S. lateritius; B. amyloliquefaciens.

Особенности взаимоотношений между антагонистами и фитопатогенами (развитие / подавление) в почве проверяли следующим образом: в пластиковые кюветы с посевами семян сосны, обработанных водной суспензией T harzianum, методом полива вносили 50 мл водной суспензии грибов р. Fusarium, титр которых выше, чем у антагониста (10⁹ конидий / мл). Численность фитопатогенов и триходермы на 1 г почвы определяли методом высева почвенной суспензии на среду Чапека в чашки Петри и подсчета выросших колоний каждые пять дней [14].

Результаты исследования и обсуждение

Рядом исследователей отмечается потеря биологической активности у штаммов при длительном хранении и периодических пересевах на питательные среды. В этой связи, хранящиеся в музее ИЛ СО РАН выделенные из почв питомников микробы-антагонисты, в лабораторных условиях проверяли на наличие антагонистической и ферментативной активности. Перед экспериментами у выделенных изолятов определяли видовую принадлежность с помощью морфологических показателей (макро- и микроконидии, наличие перегородок у макроконидий, хламидоспоры) и уточняли видовую принадлежность молекулярно-генетическим анализом ДНК у грибов на основе последовательности нуклеотидов 18S рРНК, у бактерии на основе 16S рРНК.

Антагонистическая и ферментативная активность исследуемых микробов-антагонистов. Для оценки степени проявления антагонистической активности и механизмов действия на фитопатогены исследовали влияние антагонистов (T harzianum, T lignorum, T longibrachiatum, S. lateritius и B. amyloliquefaciens) на пять штаммов фитопатогенных грибов рода Fusarium (F. oxysporum, F. moniliforme, F. proliferatum, F. moniliforme var annullatum, F. oxysporum В3) в лабораторных условиях (in vitro) методом двойных культур. Результаты исследований показали, что в контроле все патогены интенсивно разрастались и занимали практически всю площадь чашки Петри, в среднем диаметр их колоний составил 6,44 см, при этом они образовывали хорошо развитый воздушный мицелий с ярким пигментом (F proliferatum, F oxysporum В3). Большинство антагонистов сдерживали рост и развитие фитопатогенов, у которых в некоторых случаях терялась способность образовывать развитый воздушный мицелий и вырабатывать пигмент (табл. 1).

По результатам микроскопирования и визуального скрининга антагонистической активности исследуемых штаммов по отношению к грибам рода Fusarium отмечали два механизма воздействия: 1) образование зоны антагонистического действия -- зона сдерживания роста патогена (антагонизм); 2) гиперпаразитизм -- использование антагонистом патогена в качестве субстрата, захват большой площади питательной среды и рост на патогене. Отмечено, что все три микромицета р. Trichoderma способны к гиперпаразитизму, при этом Т кашапит и Т longiЪrachiatum - к Е oxysporum, Е топіІірогте и Е рюІфгаШт, а Т Іщпогит - к Е топіІірогте, Е рюІфгаШт. Гриб Т. кашапит проявлял максимальную степень подавления роста (разница диаметров колоний фитопатогенного гриба в опыте и контроле, выраженная в процентах) у Е oxysporum и Е рюІфгаШт с эффектом гиперпаразитизма на 10-е сутки (степень ингибирования 100%). По отношению к Е тотМуОтте var аппиІШит и Е oxysporum уже на 5-е сутки степень ингибирования составляла 59 и 53%, на 10-е - 84% (см. табл. 1). Ингибирование роста Е топіІірогте меньше других - 7-22% (на 5-е и 10-е сутки соответственно) (см. табл. 1). Кроме того, грибы Е oxysporum, Е рюІфгаШт, Е топіІірогте var аппиІШит в присутствии антагонистов (триходермы) не образовывали плотного воздушного мицелия по сравнению с контрольными.

Т а б л и ц а 1 [Table 1]

Степень ингибирования роста колоний грибов р. Fusarium антагонистами, % [Degree of Fusarium colonies growth inhibition (ID) by antagonists, %]

Микромицет Т 1щпотт проявлял гиперпаразитизм к штаммам Е тотМУогте на 5-е сутки и Е рт1фтШт - на 10-е сутки с максимальной степенью ингибирования (100%) (см. табл. 1). В вариантах с Е oxysporum, Е тотИУогте var стпиИаШт, Е oxysporum В3 зафиксировано проявление гиперпаразитизма, гриб Т. 1щпотт образовывал плотный валик из мицелия вокруг колоний патогенов, степень ингибирования роста которых на 10-е сутки составила 41, 56 и 67% соответственно. Отмечено, что во всех вариантах опыта Т. lignorum образовывал хорошо развитый воздушный мицелий с окраской от белого до желто-зеленого цвета и ингибировал рост воздушного мицелия у Е oxysporum и Е тотМОте vсr сппиПсШт.

Микромицет T longibrachiatum проявлял антагонизм по отношению к F moniliforme, F moniliforme var annullatum и F oxysporum B3 уже на 5-е сутки. Максимальную степень ингибирования роста F moniliforme var annullatum (100%) и F proliferatum (74%) наблюдали на 10-е сутки (см. табл. 1). Наиболее устойчивым к воздействию T. longibrachiatum оказался F. moniliforme, у которого на 10-е сутки отмечена минимальная СИ (13%). Отмечено слабое развитие мицелия у F oxysporum при выращивании двойной культуры с антагонистом, а при выращивании антагониста с F. oxysporum В3 последний терял способность образовывать яркий фиолетово-розовый пигмент. Антагонистическая активность бактерий по отношению к фитопатогенам значительно ниже, чем у триходермы (см. табл. 1). Самую низкую СИ к грибам рода Fusarium проявил штамм S. lateritius. Максимальная степень ингибирования роста патогенов 1521% наблюдалась на 5-е сутки, затем воздействие антагониста прекращалось (см. табл. 1). При этом только у F oxysporum наблюдали слабо развитый воздушный мицелий, у остальных изолятов отмечали хорошо развитый мицелий и способность образовывать яркий розово-фиолетовый пигмент.

Фунгистатическое воздействие на все патогены рода Fusarium со стороны бактерий B. amyloliquefaciens проявлялось как на 5-е, так и на 10-е сутки (см. табл. 1). Наибольшая активность антагониста зарегистрирована по отношению к F. proliferatum и F. oxysporum В3 на 10-е сутки (54 и 64%). Менее всего B. amyloliquefaciens подавлял рост F. oxysporum, ингибирование которого отмечено только на 10-е сутки (31%) (см. табл. 1). При совместном выращивании бацилл и патогенов в двойной культуре F. proliferatum и F. oxysporum В3 выделяли пигмент, а у F. proliferatum подавлялось развитие воздушного мицелия.

В результате проведенных исследований установлено, что микробы-антагонисты показали разную степень ингибирования в зависимости от времени инкубирования (5-е или 10-е сутки) и вида патогена. Отмеченные у микромицетов рода Trichoderma способности к антагонизму и гиперпаразитизму свидетельствуют о полифункциональном механизме воздействия на патогены - они способны не только сдерживать и подавлять рост грибов р. Fusarium посредством выделения антагонистических веществ, но также способны использовать их мицелий в качестве субстрата. Известно [16-19], что грибы рода Trichoderma являются гиперпаразитами по отношению ко многим фитопатогенным микромицетам. Ингибирование роста патогенов обусловлено способностью микопаразита гидролизовывать клеточные стенки грибов-хозяев и использовать их в качестве субстрата за счет продуцируемых ферментов и выделяемых токсинов.

У исследуемых антагонистов проверяли активность образования литических ферментов, с помощью которых осуществляется способность к гиперпаразитизму. Именно литические ферменты, как известно, ответственны за способность антагонистов не только гидролизовывать сложные органические соединения, давая им преимущества, но и гидролизовывать клеточные стенки патогенов, используя их как субстрат. Исследовали штаммы антагонистов на наличие трех основных литических ферментов -- хитиназы, липазы и протеиназы. Липаза - широко распространенный в живых организмах термостабильный фермент, относящийся к классу гидролаз, катализирует расщепление сложноэфирных связей в липидах, необходим для гидролиза молекул триацилглицеридов с образованием диглицеридов, моноглицеридов, жирных кислот и глицерина; катализирует реакцию этерификации и переэтерификации [16-17]. В результате исследований три антагониста из пяти показали наличие липазной активности: сильной - Т harzianum и средней - S. ШегШш, Т. 1щпогит (табл. 2).

Т а б л и ц а 2 [Table 2]

Способность к образованию литических ферментов у испытуемых антагонистов [Ability to produce lytic enzymes in tested antagonists]

Примечание. Степень проявления ферментативной активности определяли визуально: - отсутствие; + очень слабая; ++ слабая; +++ средняя; ++++ сильная. [Note. Degree of enzyme activity expression was defined visually: - absence; + very weak; ++ weak; +++ average; ++++ strong].

Еще один важный фермент, выделяемый микроорганизмами, -- хитиназа отвечает за деградацию хитина до мономеров и N-ацетилглюкозаминов. Благодаря хитиназе микроорганизмы способны деградировать хитин, распространенный в живых организмах, размягчая клеточную стенку грибов и делая возможным их использование в качестве субстрата [20]. В литературе есть данные, что представители родов Bacillus, Streptomyces, Trichoderma обладают хитинолитической активностью, но наиболее активными деструкторами хитина являются именно актиномицеты. Результаты экспресс-тестов показали, что наиболее высокой хитиназной активностью обладают S.lateritius, T. harzianum, T. longibrachiatum, средней -- T. lignorum, что согласуется с литературными данными [21]. У бактерий B. amyloliquefaciens отмечена довольно слабая хитиназная активность (см. табл. 2).

За гидролиз казеина отвечают протеолитические ферменты (протеиназы). Протеиназы -- экзоферменты микроорганизмов и растений, катализируют гидролитическое расщепление белков растительных и животных остатков и органического удобрения до полипептидов, а затем до аминокислот, действуя на пептидную связь [8, 22]. Результаты тестирования исследуемых микроорганизмов показали, что сильной протеиназной активностью обладали S.lateritius и T. harzianum, слабой - B. amyloliquefaciens и T. longibrachiatum, а гриб T. lignorum вовсе утратил способность вырабатывать этот фермент (см. табл. 2). Способность к гиперпаразитизму и высокая хитиназная активность микромицетов рода Trichoderma, указывают на их потенциальные возможности к гидролизу клеточных стенок фитопатогенов.

Влияние предпосевной обработки семян на рост и развитие проростков сосны обыкновенной in vitro. Ранее нами показано, что микроорганизмы, обладающие антагонистической активностью, способны стимулировать рост и развитие растений, а также изменять почвенную микробиоту, тем самым улучшая фитосанитарное состояние почвы и сеянцев хвойных в искусственных фитоценозах [23-24]. В наших исследованиях особое значение придавалось использованию аборигенных штаммов антагонистов, так как их биологическая активность непосредственно связана с местом обитания и со всем почвенным комплексом в целом.

Основываясь на результатах антагонистической и ферментативной активности исследуемых антагонистов, в опытах in vitro проводили их испытания на способность стимулировать прорастание семян сосны обыкновенной. Результаты опыта по влиянию микробной обработки на всхожесть семян, рост и развитие проростков сосны показали, что обработка всеми антагонистами стимулировала прорастание семян сосны по сравнению с контролем (рис. 1). Это сказалось как на всхожести семян, так и на количестве проростков в конце эксперимента. Максимальную всхожесть семян сосны обыкновенной отмечали в варианте с T. longibrachiatum, а наибольшее количество проростков к концу эксперимента - в вариантах S. lateritius, T. longibrachiatum и T.harzianum, что превышало контроль в 1,2-1,4 раза (см. рис. 1).

harzianum longibrachiatum lateritius amyloliquefaciens

¦ 10th day D25th day ? 30th day D35th day D40th day

Рис. 1. Средняя арифметическая количества проростков сосны обыкновенной в течение 40 дней эксперимента при различных вариантах обработки семян, % [Fig. 1. Arithmetic mean of the number of Scots pine sprouts during 40 days of the experiment with different seed treatment types, %]

Исследование взаимоотношений между разными грибами в лабораторных условиях дает возможность изучать влияние отдельных факторов окружающей среды на гиперпаразитизм в почве. Поскольку изучение влияния всех природных факторов на взаимоотношения между грибами представляется маловероятным, в наших экспериментах проведены количественные учеты грибов р. Fusarium в ризосфере проростков с учетом воздействия на них антагониста T. harzianum. Путем высева почвенных суспензий на чашки Петри с питательной средой Чапека регистрировали снижение численности грибов р. Fusarium. К концу опыта численность популяций фитопатогенов уменьшилась в 2,7--3,3 раза по сравнению с начальной численностью за счет гиперпаразитизма триходермы, что уже не влияло на поражаемость проростков сосны обыкновенной. В то же время снизилась и численность внесенного антагониста T. harzianum в 1,6 раза в связи с уменьшением субстрата (фитопатогенов) и процессами восстановления структуры микробного пула в почве (рис. 2).

Рис. 2. Изменение численности фитопатогенных микромицетов р. Fusarium под воздействием антагониста Trichoderma harzianum [Fig. 2. Changes in the number of Fusarium phytopathogenic micromyce- tes under the influence of Trichoderma harzianum antagonist]

Положительные результаты испытаний музейных культур микроорганизмов-антагонистов, полученные в опытах in vitro, дают основание полагать, что внесение этих антагонистов вместе с семенами хвойных в почвы лесных питомников позволит увеличить выход и улучшить качество посадочного материала.

Выводы

1. Установлено, что музейные культуры микроорганизмов обладали различной антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным грибам рода Fusarium. Микромицеты р. Trichoderma проявляли в 2-5 раз более высокую степень ингибирования (до 100%) роста патогенов, чем бактерии, демонстрировали неравномерный избирательный (видовой) гиперпаразитизм по отношению к патогенам, активно разрастаясь на поверхности колоний последних.

2. Способность к продуцированию литических ферментов у антагонистов различалась в зависимости от таксономической принадлежности: T harzianum проявлял высокую активность всех трех ферментов, T lignorum, S. lateritius -- высокую липазную, T longibrachiatum - эндохитиназную, S.lateritius - протеиназную активность. У B. amyloliquefaciens отмечали слабую хитиназную и протеиназную активность.

3. Исследуемые антагонисты обладали ростстимулирующей способностью (in vitro), что отразилось на прорастании семян сосны обыкновенной. Максимальную всхожесть семян сосны отмечали в варианте с T longibrachiatum, а наибольшее количество проростков к концу эксперимента - в вариантах S. lateritius, T longibrachiatum и T harzianum, что превышало значения в контроле в 1,2--1,4 раза.

4. Внесение T harzianum вместе с семенами сосны обыкновенной привело к уменьшению численности фитопатогенных грибов (р. Fusarium) в 2,7--3,3 раза.

Литература