Принципы микробиологической диагностики инфекционного заболевания: бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Размещено на http://www.allbest.ru/

ФГБОУ ВО «СМОЛЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра микробиологии

Реферат

По дисциплине « Микробиология»

На тему: «Принципы микробиологической диагностики инфекционного заболевания: бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний»

Выполнила студентка 1 курса 103 группы Факультета Фармации

Туровец О.А.

Проверил преподаватель: О.В. Азовскова

Смоленск 2020

Содержание

Введение

1. Основа бактериологического метода

2. Требования отбора, транспортировки и хранения исследуемого материала

3. Особенности бактериологического метода диагностики

Введение

бактериологический инфекционный болезнь возбудитель

Применение бактериологического метода дает возможность выделить возбудителя в чистой культуре из материала, полученного от больного, и идентифицировать его на основании изучения комплекса свойств. Большинство бактерий способны к культивированию на различных искусственных питательных средах (кроме хламидий и риккетсий), поэтому бактериологический метод имеет важное значение в диагностике многих инфекционных болезней.

1. Основа бактериологического метода

Использование бактериологического метода позволяет выделить возбудителя заболевания в чистой культуре и точно идентифицировать его принадлежность. При клинической оценке бактериологических исследований следует помнить, что выделение микроба еще не означает определение возбудителя. Чтобы выделенный микроб назвать возбудителем, необходимо провести клиниколабораторные параллели и ответить на вопрос: может ли выделенный микроб обусловить данную клиническую картину? Выделенный микроорганизм может быть и возбудителем основного заболевания, и причиной сопутствующего заболевания, а может совершенно не иметь никакого отношения ни к основной, ни к сопутствующей патологии.

Бактериологический метод основан на способности возбудителя продолжать свою жизнедеятельность вне организма, для чего используют различные субстраты (среды), при помещении в которые возбудитель может размножаться и проявлять свои биохимические свойства. То есть этот метод заключается в посеве биологического материала больного на питательные среды с последующей идентификацией возбудителя и изучением его морфологических признаков и ферментативной активности. Так же возможно провести определение чувствительности выделенной культуры к химиопрепаратам.

Большинство бактерий способно расти на различных питательных средах. Исключение составляют хламидии и риккетсии, не растущие in vitro вне клеточных структур. Используемая среда должна содержать вещества, утилизируемые бактериями для различных биосинтетических процессов.

Для успешного проведения бактериологического анализа необходим правильный подбор сред, температурного режима, что обусловлено особенностью и спецификой микроорганизмов. Например, возбудители брюшного тифа и паратифов лучше растут на средах с добавлением желчи (желчный бульон), лептоспиры и менингококки -- на средах с добавлением сыворотки, возбудитель холеры -- в щелочном бульоне, возбудителю чумы для нормального роста необходимо добавление микробов-«кормилок».

2. Требования отбора, транспортировки и хранения исследуемого материала

К основным требованиям, предъявляемым к отбору и транспортировке материала для бактериологического исследования, относят:

· взятие материала до начала этиотропного лечения;

· соблюдение условий стерильности при сборе материала;

· техническую правильность сбора материала;

· достаточное количество материала;

· обеспечение температурного режима хранения и транспортировки материала;

· сведение к минимальному промежутка времени между сбором материала и посевом на плотные питательные среды.

Транспортировка материала в лабораторию должна быть осуществлена по возможности немедленно, но не более чем в течение 1--2 ч после его взятия. Пробы материала должны находиться при определенном температурном режиме; в частности, стерильные в норме материалы (кровь, спинномозговая жидкость) хранят и доставляют в лабораторию при 37 °С. Нестерильные материалы (моча, отделяемое дыхательных путей и др.) хранят при комнатной температуре не более 1--2 ч или не более суток при 4 °С (условия бытового холодильника). При невозможности доставки проб в лабораторию в регламентированные сроки рекомендуют использовать транспортные среды, предназначенные для сохранения жизнеспособности возбудителей в условиях консервации.

Кровь для исследования следует брать у больного в период подъема температуры тела, в начале появления лихорадки. Рекомендуется исследовать 3--4 пробы крови, взятые с интервалом 4--6 ч, что обоснованно с точки зрения снижения риска «упустить» транзиторную бактериемию и повышения возможности подтвердить этиологическую роль выделенной из крови условно-патогенной микрофлоры (например, Staphylococcus epidermidis), если эта микрофлора обнаруживается в нескольких пробах венозной крови. Пробу крови в количестве 10 мл у взрослого и 5 мл у детей засевают минимум в два флакона со средой для аэробных и анаэробных микроорганизмов в соотношении 1:10. Желательно однократное исследование и артериальной крови.

Взятие спинномозговой жидкости (СМЖ) производит врач при люмбальной пункции в количестве 1--2 мл в сухую стерильную пробирку. Пробу немедленно доставляют в лабораторию, где к ее исследованию приступают также немедленно. При отсутствии такой возможности материал сохраняется при 37 °С в течение нескольких часов. Существенно повышает количество положительных результатов бактериологического исследования посев 1--2 капель СМЖ в пробирку, содержащую полужидкую среду с глюкозой, и в чашку Петри с «кровяным» агаром. Для пересылки материала используют изотермальные ящики, грелки, термосы или любую другую упаковку, где поддерживается температура около 37 °С.

Испражнения для бактериологического исследования отбирают с помощью стерильных деревянных шпателей в количестве 3--5 г в стерильный сосуд с плотно закрывающейся крышкой. Исследование взятого материала должно быть начато не позже чем через 2 ч. Если невозможно приступить к исследованию в течение этого времени, следует отобрать небольшое количество материала, который помещают в соответствующую транспортную среду. При отборе испражнений следует стремиться направлять для исследования патологические примеси (слизь, гной, частицы эпителия и др.), если они имеются, избегая попадания в материал примеси крови, обладающей бактерицидными свойствами.

Для взятия материала могут быть использованы ректальные тампоны (с ватным наконечником). Тампон должен быть увлажнен стерильным изотоническим раствором натрия хлорида или транспортной средой (но не масляным гелем). Его вводят per rectum на глубину 5--6 см и, поворачивая тампон, осторожно его извлекают, контролируя появление на тампоне фекальной окраски. Тампон помещают в сухую пробирку, если к исследованию материала приступят в течение 2 ч, в ином случае -- в транспортную среду.

Мочу (средняя порция свободно выпущенной мочи) в количестве 3--5 мл собирают в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Предпочтительней отбирать утренние порции мочи.

Желчь собирают во время дуоденального зондирования в процедурном кабинете отдельно по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, соблюдая правила асептики.

Промывные воды желудка собирают в стерильные банки в количестве 20--50 мл. Следует иметь в виду, что промывание желудка в этих случаях проводят только индифферентными (не обладающими бактериостатическим или бактерицидным действием на микроорганизмы) растворами -- лучше кипяченой водой (без добавления соды, перманганата калия и пр.).

Мокрота. Утреннюю мокроту, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную банку. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой с целью механического удаления остатков пищи, слущенного эпителия и микрофлоры ротовой полости.

Промывные воды бронхов. При бронхоскопии вводят не более 5 мл изотонического раствора натрия хлорида с последующим его отсасыванием в стерильную пробирку.

Отделяемое глотки, ротовой полости и носа. Материал из ротовой полости берут натощак или через 2 ч после еды стерильным ватным тампоном либо ложечкой со слизистой оболочки и ее пораженных участков у входов протоков слюнных желез, поверхности языка, из язвочек. При наличии пленки последнюю снимают стерильным пинцетом. Материал из носовой полости забирают сухим стерильным ватным тампоном, который вводят в глубь полости носа. Материал из носоглотки берут стерильным заднеглоточным ватным тампоном, который осторожно вводят через носовое отверстие в носоглотку. Если при этом начинается кашель, тампон не удаляют до окончания кашля. Для проведения анализа на дифтерию исследуют одновременно пленки и слизь из носа и глотки, беря материал разными тампонами.

Исследуемый материал засевают на плотные питательные среды, используя специальные методики для получения роста отдельных колоний микроорганизмов, которые далее отсевают с целью выделения чистой культуры возбудителя.

3. Особенности бактериологического метода диагностики

Важный признак -- своеобразие роста микробной флоры, что позволяет различать виды, роды и даже типы бактерий. Некоторые микроорганизмы выделяют гемолизины -- ферменты, разрушающие эритроциты, поэтому чашки с посевами следует рассматривать против источника света. Подобный рост характерен для пневмококка, стрептококка, стафилококка и листерии.

филококка и листерии. Для изучения особенностей метаболизма бактерий используют дифференциальнодиагностические среды, включающие различные индикаторы. К ним относятся среда Эндо, Левина для семейства энтеробактерий. К дифференциальнодиагностическим средам относятся среды, определяющие способность микроорганизмов ферментировать углеводы, расщеплять белки. Достаточно широко используются хроматографические методы, позволяющие установить систематическое положение каждого вида. Для изучения биохимической активности бактерий широко применяют системы индикаторных бумажек или наборы мультимикротестов, например для дифференциальной диагностики энтеробактерий и нейссерий.

Основным недостатком бактериологического метода исследования является его продолжительность. Для быстрорастущих возбудителей (холерный вибрион, дифтерийные бактерии) это может быть 32-36-48 ч, для большинства микроорганизмов минимальный срок составляет 3-4 дня, а для медленно растущих бактерий (например, возбудители туберкулеза, бруцеллеза) этот срок исчисляется неделями. Другим существенным недостатком бактериологического исследования является то, что из инфицированного материала не всегда удается получить рост возбудителя. Это может быть связано с его низкой концентрацией в биологическом материале, трудностями культивирования отдельных групп микроорганизмов, возможностью перехода бактерий в некультивируемое состояние -- L-формы, проведенным лечением антибактериальными препаратами до забора материала и т. д.

Заключение

В связи с разнообразием самих бактерий и их питательных потребностей создать универсальную среду практически невозможно. В настоящее время идет совершенствование культурального метода диагностики в направлении повышения качества питательных сред, создания селективных сред для различных групп бактерий. В современных условиях, когда в патологии человека существенно возросла роль условно-патогенных микроорганизмов, только бактериологический метод позволяет оценить их истинную роль в инфекционном процессе.

Список литературы

1. «Дифференциальная диагностика инфекционных болезней» / А. П.Казанцев, Т.М.Зубик, К.С.--Иванов, В. А.Казанцев./ 1999 г.

2. Гурина С.В., Соколова И.П., «Микробиология», СПб, 2000 г.

3. А.К Ющук, А.Б.Венгеров «Инфекционные болезни»- М 2003г.

4. Методическое пособие: «Диагностика инфекционных заболеваний. Часть 2. Лабораторные специальные методы», С. В. Бурова, М. П. Онухова, Т. Я. Чернобровкин.

Размещено на Allbest.ru