Вікові особливості формування імунітету проти хвороби гамборо і антиоксидантного статусу та методи їх корекції у курей кросу ISA BROWN

Размещено на http://www.allbest.ru/

Інститут біології тварин УААН

УДК 636.5:578.262.7:577.1

кандидата ветеринарних наук

Вікові особливості формування імунітету проти хвороби гамборо і антиоксидантного статусу та методи їх корекції у курей кросу ISA BROWN

03.00.04 - Біохімія

Сімонов Маріан Романович

Львів - 2007

Дисертацією є рукопис. імунний антиоксидантний вакцина

Робота виконана в Інституті біології тварин Української академії аграрних наук

Науковий керівник - доктор ветеринарних наук, професор, член-кореспондент УААН Влізло Василь Васильович, Інститут біології тварин УААН, директор

Офіційні опоненти:

доктор біологічних наук, професор Янович Вадим Георгійович, Інститут біології тварин УААН, головний науковий співробітник лабораторії живлення великої рогатої худоби

доктор ветеринарних наук, професор Гунчак Василь Михайлович, Львівська національна академія ветеринарної медицини ім. С. З. Гжицького, професор кафедри фармакології та токсикології

Провідна установа - Білоцерківський державний аграрний університет

Міністерство аграрної політики України, кафедра органічної і біологічної хімії, м. Біла Церква.

Захист відбудеться “ 20 ” березня 2007 р. о “ 1300 ” годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 35.368.01 Інституту біології тварин УААН, за адресою: 79034, м. Львів, вул. В. Стуса, 38.

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Інституту біології тварин УААН за адресою: м. Львів, вул. В. Стуса, 38.

Автореферат розісланий “ 17 ” лютого 2007 р.

Вчений секретар спеціалізованої вченої ради Віщур О. І.

Загальна характеристика роботи

Актуальність теми. Успішний розвиток птахівництва в Україні можливо забезпечити лише при високій рентабельності виробництва. Водночас інтенсивне використання птиці в умовах високої концентрації поголів'я і значного впливу чинників техногенного, виробничого та природного характеру супроводжується зниженням резистентності організму, підвищенням захворюваності та летальності. Аналіз епізоотичної ситуації у птахівництві за останні роки показав, що вона є досить складною. Так, серед диких птахів спостерігається циркуляція вірусу грипу та інших збудників, які є причиною ураження свійської птиці (Герман В. В., 2003; Вержиховський О. М., 2005; Красніков Г. А., 2006). Часто у хворої птиці можуть одночасно реєструватися хвороби Гамборо, Ньюкасла, грип та інші інфекції.

Резистентність птиці до інфекційних захворювань залежить від функціонального стану органів імунної системи. Різні імунодепресивні фактори, що постійно діють на організм, спричиняють зниження резистентності. Зокрема, негативними для птиці є незбалансована годівля, низька якість кормів, недотримання технологічних параметрів утримання, мікробна забрудненість, стреси та багато інших чинників. Особливо шкідливими є постійна дія на організм вірусів, бактерій, мікоплазм й інших інфекційних агентів, які ведуть до виснаження імунітету. Серед збудників хвороб птиці імунну систему уражує вірус хвороби Гамборо. Він проявляє тропізм до лімфоїдних клітин, викликає їх руйнування і блокує імунну відповідь птиці. Ураження системи імунітету спричиняє імунодефіцит і знижує резистентність організму до збудників інфекційних захворювань (Маслянко Р. П., 1999; Бакулов И. А., 2000; Ярчук Б. М. зі співавт., 2002). Тому, актуальною є проблема підвищення життєздатності птиці, завдяки якій забезпечується висока продуктивність та рентабельність птахівництва.

В останні роки активно вивчаються стан резистентності, обміну речовин і антиоксидантної системи у птиці (Ратич І. Б., 1992; Яремко Р. М., 1999; Карпа І. В., 2003; Кирилів Б. Я., 2004). Однак, у літературі є мало даних, що стосуються вивчення даних питань на нових породах, лініях, кросах курей, які завозяться з-за кордону. Зокрема, важливими питаннями, що забезпечують збереженість птиці та її високу продуктивність є вивчення стану специфічного імунітету, природної резистентності, антиоксидантної системи та рівня метаболічних процесів у організмі. В останні роки запропоновано цілий ряд імуномодуляторів, що впливають на імунітет (Передерий В. Г. с соавт., 1990; Нікітенко А. М. зі співавт., 2001; Красніков Г. А. зі співавт., 2002). Однак, необхідно пам'ятати, що будь-який препарат, вибірково діючий на імунну систему, може згубно впливати на організм. Отже, перед застосуванням препаратів слід ґрунтовно вивчити їх дію на органи та системи птиці.

Зв'язок роботи з науковими програмами. Робота є фрагментом тем: “Вивчити роль субстратів у механізмі трансформації поживних речовин корму в птиці та розробити систему ефективного використання рослинної сировини в її раціонах” (01.04. ДР 0101 U003437), “Вивчити механізми дії імунотропних засобів на імуногенез у тварин та розробити способи підвищення імунної функції організму” (02.01. ДР 0101 U003438) Інституту біології тварин УААН на 2001-2005 та 2006-2010 рр., “Розробка методів підвищення ефективності вакцинації проти вірусних захворювань птиці” Інституту біології тварин УААН і Державного науково-дослідного контрольного інституту ветеринарних препаратів та кормових добавок (договір № 13 від 15 серпня 2005 р.), де автор вивчав вікові особливості формування імунітету проти хвороби Гамборо і антиоксидантного статусу та методи їх корекції у курей кросу ISA BROWN.

Мета роботи - встановити вікові особливості імунного та антиоксидантного статусу курей кросу ISA BROWN і розробити методи їх корекції.

Для досягнення мети необхідно було розв'язати наступні завдання:

- дослідити напруженість специфічного імунітету проти хвороби Гамборо у курчат кросу ISA BROWN до та після вакцинацій;

- дослідити інтенсивність перекисного окиснення ліпідів у організмі курей різного віку;

- вивчити стан антиоксидантної системи курей різного віку;

- встановити вплив препаратів “Вірон” та “Ізатізон” на напруженість імунітету проти хвороби Гамборо, стан антиоксидантної системи та деякі показники білкового і вуглеводного обмінів птиці.

Об'єкт досліджень - специфічний імунітет проти хвороби Гамборо, антиоксидантний статус організму курей різного віку і корекція їх порушень препаратами “Вірон” та “Ізатізон”.

Предмет дослідження - титр специфічних антитіл проти хвороби Гамборо, показники білкового і вуглеводного обмінів, продукти перекисного окиснення ліпідів, антиоксидантна система, вітаміни.

Методи дослідження - для досягнення поставленої мети використовували імуноферментні (титр специфічних антитіл проти хвороби Гамборо), біохімічні (загальний білок, білкові фракції, активність ферментів, глюкоза, продукти ПОЛ, вітаміни) та статистичні (середнє арифметичне та його похибка, вірогідність, коефіцієнт варіації, коефіцієнт кореляції) методи.

Наукова новизна одержаних результатів. У результаті проведених досліджень отримано нові дані про вікові особливості імунітету, інтенсивності процесів перекисного окиснення ліпідів та функціональної активності антиоксидантної системи у курей кросу ISA BROWN. Вперше у курчат кросу ISA BROWN встановлено вікові зміни титру специфічних антитіл проти хвороби Гамборо, вмісту загального білка та білкових фракцій, продуктів перекисного окиснення ліпідів (дієнові кон'югати, гідроперекисі ліпідів, малоновий діальдегід), активність антиоксидантної системи (СОД, ГП), вітамінів (Е і А), ферментів (АЛТ, АСТ), глюкози. Встановлено, що титр антитіл проти хвороби Гамборо має тісні кореляційні зв'язки з вмістом гамма-глобулінової фракції сироватки крові. Активність ферментів-трансаміназ (АЛТ і АСТ) та вміст продуктів ПОЛ є високими у ранньому віці курчат та в період їх інтенсивного росту і знижується з початком несучості. Зростання вмісту вітамінів Е та А відбувалось у періоди високого вмісту продуктів ПОЛ. Вперше з'ясовано вплив препаратів “Вірон” та “Ізатізон” на імунологічні, біохімічні та антиоксидантні показники крові курчат кросу ISA BROWN. Встановлено, що дані препарати підвищують титр антитіл проти хвороби Гамборо, активність ферментів антиоксидантної системи, знижують вміст продуктів ПОЛ і сприяють покращенню білкового обміну.

Практичне значення одержаних результатів. На основі проведених досліджень встановлено вікову динаміку специфічного імунітету проти хвороби Гамборо, показників білкового обміну, продуктів перекисного окиснення ліпідів і антиоксидантної системи, що може бути використано для підвищення ефективності вакцинації птиці та збереження поголів'я. Запропоновано схему застосування препаратів “Вірон” та “Ізатізон” для покращення імунітету, обміну речовин і антиоксидантного захисту птиці. Подано заявку на отримання патенту на препарат “Вірон”. Результати досліджень впроваджено у господарстві, де утримують птицю кросу ISA BROWN. За матеріалами дисертаційної роботи видано методичні рекомендації “Корекція імунітету проти хвороби Гамборо та антиоксидантного статусу в курей кросу ISA BROWN”, які затверджені Управлінням ветеринарної медицини у Львівській області (протокол № 2 від 31.01.2007 р.).

Особистий внесок здобувача. Здобувач проаналізував наукову літературу, виконав експериментальну частину роботи, опрацював та статистично опрацював результати досліджень, готував публікації до друку, написав дисертаційну роботу. Аналіз і обговорення отриманих результатів проведено за участю наукового керівника.

Апробація результатів дисертації. Матеріали дисертаційної роботи доповідались на міжнародних науково-практичних конференціях: “Актуальні проблеми розвитку тваринництва, ветеринарної медицини, харчових технологій, економіки та освіти”, присвяченій 220-річчю Львівської національної академії ветеринарної медицини ім. С. З. Гжицького (м. Львів, 2004 р.), “Молоді вчені у вирішенні проблем аграрної науки і практики” (м. Львів, 2004 р.), “Nauka praktyce” (м. Краків, Польща, 2005 р.), “Біологічні основи продуктивності та здоров'я тварин” (м. Львів, 2006 р.), Науково-практичних конференціях молодих науковців і спеціалістів Інституту біології тварин УААН “Актуальні проблеми тваринництва та ветеринарної медицини” (м. Львів, 2005 та 2006 рр.).

Публікації за темою дисертації. За результатами досліджень опубліковано 7 робіт у фахових наукових виданнях, які рекомендовані ВАК України, а також методичні рекомендації та отримано патент.

Структура та обсяг дисертації. Дисертація викладена на 135 сторінках комп'ютерного тексту, містить 18 таблиць (16 сторінок) і 14 рисунків (8 сторінок), складається зі вступу, чотирьох розділів (огляду літератури, вибір напрямів досліджень, матеріал та методи виконання роботи, результати власних досліджень, обговорення результатів досліджень), висновків, пропозицій виробництву, списку використаної літератури, який містить 290 джерел, у тому числі 113 латиною, та 2 додатків.

Вибір напрямів досліджень, матеріал та методи виконання роботи. Роботу виконували протягом 2004-2006 рр. у Інституті біології тварин УААН. Експериментальні дослідження проводились у КТ Племптахорепродуктор “ЕГО” с. Звертів Жовківського р-ну Львівської області. Дослідження напруженості специфічного імунітету проти хвороби Гамборо проводили у Львівській обласній державній лабораторії ветеринарної медицини.

Матеріалом для досліджень були кури кросу ISA BROWN з 1- до 129-добового віку.

У 1-му досліді вивчали вікові особливості формування напруженості специфічного імунітету проти хвороби Гамборо та біохімічних показників крові курчат кросу ISA BROWN. Для цього використовували проби крові курчат у 1-, 13-, 25-, 34-, 56-, 71-, 115- та 129-добовому віці. Курчатам, які знаходилися у даному досліді, була проведена аерозольна вакцинація (вакцина D78, сер. № 113227С) проти хвороби Гамборо у 18- та 25-добовому віці.

У 2-му досліді вивчали вплив препаратів “Вірон” та “Ізатізон” на біохімічний статус та напруженість імунітету організму курчат проти хвороби Гамборо. За методом аналогів було сформовано 3 групи курчат (контрольну та дві дослідні) по 120 голів у кожній. Курчатам першої дослідної групи застосовували препарат “Вірон”, розроблений Інститутом біології тварин УААН. Для курчат другої дослідної групи використовували препарат “Ізатізон”, виготовлений науково-виробничим об'єднанням “Добродея”. Препарати володіють комплексною, противірусною, антибактеріальною, антигрибковою та імуномодулюючою дією.

Препарати застосовували аерозольно під час критичних імунологічних періодів, до та після проведення вакцинації проти хвороби Гамборо, а саме у 3-, 10-, 16- та 23-добовому віці з розрахунку 2 мл/м3 площі Вірону та 1 мл/м3 Ізатізону. Курчата контрольної групи оброблялись аерозольно дистильованою водою. У 13- та 20-добовому віці була проведена аерозольна вакцинація курчат проти хвороби Гамборо (вакцина Нобіліс Гамборо D78, сер. № 041357 А).

Визначення титру специфічних антитіл проти хвороби Гамборо у сироватці крові проводили методом імуноферментного аналізу (Павленко М. С. зі співавт., 2001). Вміст загального білка у сироватці крові визначали рефрактометричним методом, кількість білкових фракцій досліджували методом фракціювання у 7,5% поліакриламідному гелі (Холод В. М., 1983). Для визначення активності АЛТ і АСТ у сироватці крові використовували метод Райтмана-Френкеля (Меньшиков В. В. с соавт., 1987). Дослідження вмісту дієнових кон'югатів у крові проводили за методом И. Д. Стальной (1977), гідроперекисів ліпідів у плазмі крові - за методом В. В. Мирончика (1984), малонового діальдегіду в сироватці крові - за методом С. Н. Коробейникова (1989). Визначення рівня вітамінів А і Е в плазмі крові проводили методом рідинної хроматографії на апараті “Міліхром-4” (Скурихин В. Н., 1995). Активність супероксиддисмутази в гемолізатах еритроцитів визначали за методом Е. Е. Дубининой с соавт. (1983), активність глутатіонпероксидази - за методом В. М. Моина (1986). Дослідження концентрації глюкози у сироватці крові проводили за допомогою глюкозооксидазного методу (Меньшиков В. В. с соавт., 1987).

Отримані цифрові дані опрацьовували статистично на персональному комп'ютері за допомогою програми Microsoft Office Excel.

Результати досліджень та їх аналіз

Вікові особливості імунного та антиоксидантного статусу в курей кросу ISA BROWN. У курчат добового віку існує високий материнський імунітет проти хвороби Гамборо. При імуноферментному аналізі сироваток крові встановлено, що титр специфічних антитіл у них складав 6802,572,07 (рис. 1).

Рис. 1. Вікова динаміка титру специфічних антитіл проти хвороби Гамборо

До 25-ї доби життя реєстрували зниження титру антитіл до найнижчого рівня за весь період дослідження (р<0,001). Після проведення вакцинацій проти хвороби Гамборо у 18- та 25-добовому віці встановлено зростання титру специфічних антитіл до 71-ї доби життя на 70,4% (р<0,001), порівняно з 25-ю. При цьому, зростання титру антитіл відбувалося паралельно з підвищенням вмісту гамма-глобулінової фракції (рис. 2) сироватки крові (r = від +0,7 до +0,9). Це пояснюється тим, що гамма-глобуліни містять антитіла проти збудників більшості мікробних і вірусних захворювань. Отже, збільшення у сироватці крові кількості цієї фракції може слугувати показником зростання антитіл.

Вікові зміни загального білка у сироватці крові курчат (рис. 3) характеризувались зниженням його вмісту протягом перших 2,5 тижнів життя (р<0,001) і подальшим зростанням. Причиною зниження вмісту загального білка у ранньому віці може бути низька засвоюваність поживних речовин корму організмом птиці на ранніх стадіях постнатального періоду. Адже у цей час відбувається поступовий перехід живлення з жовткового на поживні речовини корму. Після 20-ти днів життя спостерігався найінтенсивніший приріст живої маси курчат (22,3±0,92 г/добу). Від тоді починає зростати вміст загального білка у сироватці крові. Це відбувається за рахунок збільшення кількості низькомолекулярних білків.

З 25-ї по 115-ту добу життя у сироватці крові курей спостерігається стабілізація вмісту загального білка. У цей час зміни білкових фракцій характеризувалися зниженням вмісту низькомолекулярних білків і зростанням високомолекулярних.

Рис. 2. Вікова динаміка вмісту

Рис. 3. Вікова динаміка вмісту гамма-глобулінової фракції загального білка сироватки крові

Вікова динаміка змін активності ферментів переамінування у сироватці крові була подібною до коливань загального білка та приростів живої маси. Дослідженнями активності АЛТ у сироватці крові було встановлено її зниження з 1-ї по 13-ту добу життя (із 210,1±21,64 до 127,9±28,66 нкат/л; р<0,05), а потім зростання (до 251,0±40,68 нкат/л; р<0,01) - до 25-го дня, коли вміст ферменту був найбільшим. Динаміка активності АСТ у крові була подібною, проте максимальна активність цього ферменту спостерігалась у добовому віці (959,1±136,15 нкат/л). З 25-ї до 129-ї доби життя встановлено поступове зниження (АЛТ із 251,0±40,68 до 103,3±11,18 нкат/л; р<0,001; АСТ із 730,7±97,15 до 448,8±15,02 нкат/л; р<0,01) активності АЛТ та АСТ у сироватці крові, що свідчить про зменшення процесів переамінування амінокислот в організмі курчат.

Концентрація глюкози у крові курчат була також найвищою при активних приростах живої маси курчат.

Дослідження продуктів ПОЛ у крові курчат показали, що у добовому віці вміст дієнових кон'югатів, гідроперекисів ліпідів та малонового діальдегіду був високим (табл. 1). Це зумовлено впливом підвищеної концентрації атмосферного кисню та інтенсифікацією метаболічної активності тканин. У цей час активність антиоксидантної системи в значній мірі залежить від формування її ще на стадії ембріогенезу. У 19-добовому віці ембріони переходять на легеневе дихання, тому відбувається різке зростання процесів ПОЛ. При цьому, спостерігається найбільше напруження системи антиоксидантного захисту (Спиричев В. Б., 2004; Цехмістренко С. І. зі співавт., 2006). Можливо, цим пояснюється високий вміст продуктів перекисного окиснення ліпідів у крові курчат раннього віку.

Вміст продуктів ПОЛ у крові курей зростав до 25-добового віку. Отримані дані щодо кількості продуктів ПОЛ у крові та приростів живої маси свідчать, що процеси перекисного окиснення ліпідів у організмі курчат активізуються у період активного росту.

Таблиця 1 Вікова динаміка вмісту продуктів ПОЛ у крові курчат (M±m; n=7)

Примітка. Статистично вірогідні різниці, порівняно з першою добою життя, * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001.

Нами встановлено позитивний коефіцієнт кореляції між вмістом продуктів ПОЛ і титром специфічних антитіл проти хвороби Гамборо. Так, між кількістю дієнових кон'югатів та титром специфічних антитіл проти хвороби Гамборо коефіцієнт кореляції зростав з помірного (r = +0,4-0,5) у 1- та 13-добовому віці до сильного ступеня (r= +0,7-0,8) на 25- та 34-ту доби життя. Сильний (r = +0,9) кореляційний зв'язок спостерігався і між титром специфічних антитіл проти хвороби Гамборо та вмістом гідроперекисів ліпідів у крові. З 34-ої по 71-у добу життя курчат у крові (табл. 1) зростала кількість дієнових кон'югатів (р0,001), гідроперекисів ліпідів (р0,01) та малонового діальдегіду (р0,001). У цей час зростала позитивна кореляційна залежність між концентрацією малонового діальдегіду та титром специфічних антитіл проти хвороби Гамборо з помірної (r = +0,4-0,5) в 1- та 13-добовому віці до сильної (r = +0,7-0,9) у 56- та 71-добовому віці. Високий позитивний кореляційний зв'язок пояснюється тим, що продукти ПОЛ проявляють стимулюючий вплив на біосинтез імуноглобулінів (Фомин Н. А. с соавт., 1997; Норейко Б. В., 2004).

При дослідженні вмісту вітамінів Е і А у сироватці крові курчат встановлено їх тісний кореляційний зв'язок з продуктами ПОЛ. Так, найвищий вміст вітаміну Е встановлено у крові добових курчат (57,6±10,75 мкмоль/л). У цей час також високим був вміст продуктів ПОЛ. Це може пояснюватися достатнім забезпеченням вітаміном Е організму курчат з резервних субстанцій яєць та збільшенням активності процесів ПОЛ на пізніх стадіях розвитку ембріона і початкових етапах росту курчат (Surai P. F. et al., 1995; Ионов И. А., 1997). У період з 1-ї по 115-ту добу життя виявлено поступове зниження (із 57,6±10,75 до 10,8±1,50 мкмоль/л; р0,01) концентрації вітаміну Е в сироватці крові. Токоферол є головним жиророзчинним антиоксидантом, який включається у процеси гальмування утворення ПОЛ шляхом реакції з гідропероксильними радикалами жирних кислот, внаслідок цього настає зменшення вмісту продуктів ПОЛ у крові.

Динаміка змін вмісту вітаміну А в сироватці крові дещо відрізнялась від вітаміну Е. Зокрема, встановлено незначне зростання концентрації ретинолу до 34-ї доби життя (із 1,1±0,11 до 1,3±0,22 мкмоль/л), що може пояснюватися посиленням компенсаторної антиоксидантної функції вітаміну А при умові зниження вмісту вітаміну Е. Зниження вмісту вітаміну А в сироватці крові із 34-ї до 115-ї доби життя (до 0,7±0,11 мкмоль/л; р0,05) може бути пов'язано з певними перебудовами фізіологічного і функціонального стану організму курчат у критичні періоди росту, включаючи і зростання активності процесів ПОЛ. При дослідженні плазми крові курчат на 129-ту добу життя, порівняно з 115-ю добою, встановлено збільшення вмісту як токоферолу (із 10,8±1,50 до 28,1±1,58 мкмоль/л; р0,001), так i ретинолу (із 0,7±0,11 до 2,1±0,10 мкмоль/л; р0,001). Отже, вміст вітамінів антиоксидантної системи залежить від віку курей, вмісту продуктів ПОЛ та інтенсивності обміну речовин. Проведені дослідження показали, що у 71- та 115-добовому віці курей існує дуже сильний від'ємний (r = -0,8-1,0) кореляційний зв'язок між вмістом досліджуваних вітамінів-антиоксидантів та первинних і вторинних продуктів ПОЛ у крові курчат, що свідчить про антиоксидантну дію токоферолу та ретинолу.

Інтенсивні процеси обміну речовин у виведених курчат супроводжувались високим вмістом первинних та вторинних продуктів перекисного окиснення ліпідів і низькою активністю системи антиоксидантного захисту. Однією з можливих причин низької активності СОД у добовому віці вважають її здатність до ушкодження за надлишку активних форм кисню при переході від гіпоксії кінця ембріонального розвитку до гіпероксії в перші дні життя (Цехмістренко С. І., 1999; Данченко О. О. зі співавт., 2002). Протягом першого тижня життя спостерігалось зростання активності супероксиддисмутази та глутатіонпероксидази. При порівнянні курчат тижневого віку з 20-добовими встановлено зростання активності СОД із 30,9±1,43 до 38,1±1,10 ум. од/мл (р0,001), а ГП - із 0,9±0,10 до 2,0±0,33 нмоль/мл (р0,01). У період з 20-ї по 48-му добу життя в організмі курчат відбувається поступове зниження (р0,05-0,001) вмісту первинних та вторинних продуктів ПОЛ і активності СОД та ГП (із 38,1±1,10 до 33,1±1,50 ум. од/мл та із 2,0±0,33 до 1,7±0,27 мкмоль/л, відповідно; р0,01). Отже, зміни активності ферментів антиоксидантної системи пов'язані з активними процесами білкового обміну в період інтенсивного росту та високими показниками первинних і вторинних продуктів перекисного окиснення ліпідів.

Корекція специфічного імунітету та антиоксидантного статусу курчат. Дослідження крові курчат різних груп показали, що формування імунітету проти хвороби Гамборо у дослідної птиці відбувається швидше і рівень титру є вищим, порівняно з контрольною (рис. 4). При імуноферментному дослідженні сироватки крові курчат добового віку встановлено добру однорідність титру антитіл проти хвороби Гамборо (6924,272,84). До 7-го дня життя спостерігали зниження титру специфічних антитіл у сироватці крові курчат всіх груп. Через 8 діб після другої вакцинації відмічали зростання титру антитіл у курчат всіх груп. При цьому, у птиці1-ї дослідної групи він був вищим на 14,7%, а 2-ї на - 8%, порівняно з контрольною, що свідчить про імуностимулюючий вплив застосованих препаратів на процеси антитілогенезу в організмі курчат дослідних груп.

Рис. 4. Титр специфічних антитіл проти хвороби Гамборо у сироватці крові курчат різних груп

Титр антитіл, отриманий через 18 діб (48-ма доба життя птиці) після повторної вакцинації, свідчить про її успішність і утворення в організмі високої напруженості поствакцинального імунітету проти хвороби Гамборо. Проте, обробка отриманих результатів показала вищу напруженість імунітету у курчат дослідних груп, порівняно з контрольною. У курчат першої дослідної групи титр специфічних антитіл був вищим на 29,5% (4329±214,0; р0,05) при коефіцієнті варіації (КВ) 33%, другої - на 24,5% (4039±72,0; р0,05) при КВ 37%, порівняно з контрольними (3050±365,0).

За період досліду у сироватці крові курчат дослідних груп був вищим (р0,05-0,001; рис. 5) вміст гамма-глобулінової фракції. Вже з 7-добового віку спостерігається дуже сильна позитивна кореляційна залежність (r = +0,7-0,9) між титром специфічних антитіл проти хвороби Гамборо та вмістом гамма-глобулінової фракції сироватки крові. З цього можна зробити висновок про імуностимулюючий вплив застосованих препаратів, оскільки гамма-глобуліни - основна фракція крові, яка відповідає за захист організму від антигенів і містить антитіла (Маслянко Р. П., 1999; Холод В. М. с соавт., 2005).

Рис. 5. Вміст гамма-глобулінової фракції у сироватці крові курчат різних груп

На 48-у добу життя у сироватці крові курчат першої дослідної групи вміст загального білка складав 32,5±0,85 (р0,05) г/л, а у другій - 33,7±0,79 проти 31,7±0,49 у контрольній, що свідчить про позитивний вплив препаратів на синтез протеїнів у організмі. Це підтверджується вищою активністю амінотрансфераз у період інтенсивного росту. Так, активність АСТ у сироватці крові курчат 1-ї дослідної групи складала 889,6±33,48 нкат/л (р<0,01), 2-ї - 886,1±42,98 (р<0,05) проти 750,6±31,70 у контролі, АЛТ - 417,0±6,81 (р<0,05) та 392,5±9,88 нкат/л (р<0,05) проти 299,1±50,21, відповідно, що вказує на активніші процеси переамінування амінокислот у дослідних курчат.

У цей період у плазмі крові курчат дослідних груп концентрація глюкози була вищою (7,4±0,13 ммоль/л у 1-й дослідній групі, р<0,01; та 7,1±0,21 ммоль/л у 2-й дослідній групі проти 6,6±0,27 ммоль/л у контрольній), що є ознакою їх інтенсивного росту.

Аналіз отриманих результатів протягом досліду показав, що в курчат контрольної групи поряд з найвищим вмістом продуктів ПОЛ (р<0,05-0,01) активність ферментів антиоксидантної системи була вірогідно (р<0,05-0,01) нижчою, порівняно з дослідними (табл. 2). У віці 28-ми діб, після чотириразового застосування препаратів “Вірон” та “Ізатізон”, вміст первинних продуктів ПОЛ був нижчим у крові курчат 1-ї та 2-ї дослідних груп, відповідно на 7,8% та 11,8%, порівняно з контрольними. На 28- та 48-добу життя вміст гідроперекисів ліпідів у крові курчат дослідних груп був вірогідно нижчим (р0,05-0,01), що може свідчити про покращення функціональної активності системи антиоксидантного захисту. Так, супероксиддисмутазна та глутатіонпероксидазна активність в крові курчат дослідних груп зростала (р0,05). Порівнюючи вміст малонового діальдегіду у крові 20- та 48-добових курчат, ми спостерігали поступове зниження (р0,01-0,001) його концентрації у курчат всіх груп. Однак, у контрольної птиці вміст вторинних продуктів ПОЛ у крові був вірогідно (р0,05-0,01) вищим, порівняно з дослідними.

Таким чином, на основі інтерпретації результатів, отриманих при дослідженні титру антитіл проти хвороби Гамборо, можна зробити висновок про створення в організмі курчат дослідних груп ефективного імунітету проти хвороби Гамборо після застосування препаратів “Вірон” та “Ізатізон”. Аналіз даних, отриманих при дослідженні активності антиоксидантної системи та вмісту первинних і вторинних продуктів перекисного окиснення ліпідів, вказує на стимулюючий вплив застосованих препаратів на систему антиоксидантного захисту. Кращі прирости маси тіла у дослідних курчат є ознакою покращення обміну речовин та зниження негативних впливів стрес-факторів. Протягом проведених досліджень збереженість курчат контрольної групи становила 96,5%, а дослідних - 100%.

Таблиця 2 Показники антиоксидантної системи у крові курчат різних груп (M±m; n=5)

Примітка. Статистично вірогідні різниці, порівняно з контрольною групою, * - р0,05, ** - р<0,01.

Висновки

У дисертаційній роботі теоретично обґрунтовано і експериментально доведено вирішення нової наукової проблеми щодо підвищення ефективності вакцинації та резистентності птиці проти хвороби Гамборо. Відповідно до поставленої мети і завдань досліджень отримано нові дані вікових змін напруженості імунітету проти хвороби Гамборо, білків сироватки крові, вмісту продуктів ПОЛ, активності антиоксидантної системи та амінотрансфераз, вмісту глюкози у крові курчат кросу ISA BROWN з 1-ї по 129-ту добу життя. Встановлено вплив препаратів “Вірон” та “Ізатізон” на підвищення імунітету проти хвороби Гамборо, резистентності організму курчат, біохімічний статус і антиоксидантну систему.

1. У сироватці крові курчат кросу ISA BROWN титр специфічних антитіл проти хвороби Гамборо знижується з 1-ї по 25-ту добу життя (із 6802,5±72,07 до 1241,2±69,47; р<0,001) та зростає після проведених вакцинацій з 25-ї по 129-ту (із 1241,2±69,47 до 3629,3±150,53; р<0,001).

2. З тижневого віку реєструється сильна позитивна кореляційна залежність (r = +0,7 - +0,9) між вмістом гамма-глобулінової фракції сироватки крові та титром специфічних антитіл.

3. Вміст загального білка у сироватці крові курчат знижується з 1-ї до 18-ї доби життя (із 32,5±0,78 до 23,5±0,49 г/л; р<0,001), потім зростає до 25-ї доби (33,1±2,71 г/л) і тримається стабільно до 129-ї в межах від 33,1±2,71 до 30,4±1,32 г/л.

4. З віком курчат відбувається заміщення низькомолекулярних білків сироватки крові на високомолекулярні, тому найвищий вміст альбумінів реєструється протягом перших 20-ти діб життя, а глобулінів - у наступний період.

5. У крові добових курчат встановлено високий вміст первинних та вторинних продуктів перекисного окиснення ліпідів. До 2-тижневого віку відбувається зниження вмісту продуктів ПОЛ (дієнових кон'югатів із 5,6±0,80 до 3,3±0,57 мкмоль/л; р<0,05; гідроперекисів ліпідів із 1,1±0,16 до 0,7±0,11 од.Е 480/мл; р<0,05; малонового діальдегіду із 9,5±0,89 до 5,2±0,51 мкмоль/л; р<0,001) та зростання до 71-ї доби життя (дієнових кон'югатів із 3,3±0,57 до 9,8±1,01 мкмоль/л; р<0,001; гідроперекисів ліпідів із 0,7±0,11 до 1,1±0,14 од. Е 480/мл; р<0,01; малонового діальдегіду із 5,2±0,51 до 7,8 ±0,59 мкмоль/л; р<0,01).

6. Вміст токоферолу та ретинолу в сироватці крові курчат знижується з віком: вітамін Е у 1-добовому віці складав 57,6±10,75 мкмоль/л, а у 115-добовому - 10,8±1,50 мкмоль/л (р<0,01), вітамін А - 1,1±0,11 мкмоль/л та 0,7±0,11 мкмоль/л (р<0,05), відповідно.

7. Концентрація глюкози у сироватці крові курчат знижується із 7,4±0,34 ммоль/л у добовому віці до 4,5±0,62 ммоль/л (р<0,001) на 71-шу добу і залежить від інтенсивності росту.

8. У період з 13-ї по 18-ту добу життя зареєстровано найвищі прирости живої маси курчат (22,3±0,92 г/добу). Період інтенсивних процесів росту та розвитку характеризується високими показниками у сироватці крові вмісту загального білка, постальбумінів, альбумінів, альфа- та бета-глобулінів, глюкози, продуктів ПОЛ та активності амінотрансфераз.

9. Застосування препаратів “Вірон” та “Ізатізон” до і після вакцинації проти хвороби Гамборо сприяє створенню в організмі курчат ефективного специфічного імунітету. Титр специфічних антитіл проти хвороби Гамборо на 48-му добу життя у сироватці крові курчат 1-ї дослідної групи складав 4329,0±647,0 (р<0,05), у 2-ї - 4039,0±557,0 (р<0,05), порівняно з 3050,0±436,0 у контрольній.

10. Препарати “Вірон” та “Ізатізон” позитивно впливають на систему антиоксидантного захисту, спричиняючи зростанню активності ферментів СОД та ГП (р<0,05-0,01) і зниженню вмісту первинних та вторинних продуктів ПОЛ (дієнових кон'югатів, гідроперекисів ліпідів, малонового діальдегіду; р<0,05-0,01).

11. У курчат дослідних груп інтенсивніше протікають процеси обміну речовин, покращується резистентність і стан антиоксидантного захисту, що спричиняє зростання маси тіла (на 18%) та збереженість птиці (на 3,5%).

Пропозиції виробництву

1. Для створення стійкого поствакцинального імунітету проти хвороби Гамборо, покращення обміну речовин та антиоксидантного захисту організму курчат під час критичних імунологічних періодів (3-5, 12-20 доба життя, середина другого місяця життя) і три доби до та три доби після проведення вакцинації (ревакцинації) слід застосовувати препарати “Вірон” з розрахунку 2 мл/м3 або “Ізатізон” - 1 мл/м3.

2. Отримані результати високої кореляційної залежності між титром специфічних антитіл проти хвороби Гамборо та гамма-глобуліновою фракцією сироватки крові вказують на те, що дослідження вмісту гамма-глобулінів можна застосовувати для відносної оцінки поствакцинального імунітету курчат.

Список праць, опублікованих за темою дисертації

1. Сімонов М. Р. Зміни показників білкового обміну та активності трансаміназ у крові курчат залежно від віку // Наук. вісн. Львівської держ. академ. вет. медицини ім. С. З. Гжицького. - 2004. - Т. 6, № 3, Вип. 3. - С. 192-196.

2. Сімонов М. Р. Стан перекисного окиснення ліпідів у молодняку курей яєчного напрямку продуктивності різного віку // Наук.-техн. бюл. Інституту біології тварин УААН і ДНДКІ ветпреп. та корм. добавок. - Львів, 2005. - Вип. 6, № 1. - С. 149-153.

3. Сімонов М. Р. Вплив критичних імунологічних та фізіологічних періодів росту і розвитку курчат кросу ISA BROWN на імунологічні та антиоксидантні показники крові // Наук.-техн. бюл. Інституту біології тварин УААН і ДНДКІ ветпреп. та корм. добавок. - Львів, 2006. - Вип. 7, № 3, 4. - С. 75-80.

4. Влізло В. В., Сімонов М. Р. Взаємозв'язок між титром антитіл проти хвороби Гамборо та вмістом білків у сироватці крові курчат // Біологія тварин. - 2005. - Т. 7, № 1, 2. - С. 77-80. (Дисертант провів експериментальні дослідження, статистичну обробку отриманих результатів та їх аналіз).

5. Simonov M., Vlizlo V. Dynamika zmian koncentracji dwualdehydu malonowego oraz witamin A I E we krwi kurcz№t w pierwszych dniach їycia // Rocz. Nauk. Zoot. - Krakow, 2005. - P. 423-426. (Диссертант провів експериментальні дослідження, статистичну обробку отриманих результатів та їх аналіз).

6. Влізло В. В., Сімонов М. Р. Вплив препаратів-імуномодуляторів на імунологічні, оксидантні та антиоксидантні показники крові курчат // Наук.-техн. бюл. Інституту біології тварин УААН і ДНДКІ ветпреп. та корм. добавок. - Львів, 2006. - Вип. 7, № 1, 2. - С. 160-164. (Дисертант провів експериментальні дослідження, статистичну обробку отриманих результатів та їх аналіз).

7. Влізло В., Сімонов М., Каплінський В. Засоби підвищення резистентності курчат // Ветеринарна медицина України. - 2006. - № 7. - С. 12-14. (Дисертант провів експериментальні дослідження титру специфічних антитіл проти хвороби Гамборо, активності антиоксидантної системи та показників білкового обміну, статистичну обробку отриманих результатів та їх аналіз).

8. Влізло В. В., Сімонов М. Р., Наконечна О. М. Корекція імунітету проти хвороби Гамборо та антиоксидантного статусу у курей кросу ISA BROWN: Методичні рекомендації. - Львів, 2007. - 24 с. (Дисертант провів аналіз експериментальних досліджень та підготовив рекомендації до друку).

9. Комплексний препарат пролонгованої дії “Вірон” / В. В. Влізло, М. Р. Сімонов, Л. В. Лозюк, В. В. Каплінський, Р. М. Лозюк, О. С. Грабовська; Заявка на винахід 7 МПК А61к 31/00 (Зареєстр. u № 2006 09020 від 14.08.2006 р.).

Сімонов М. Р. Вікові особливості формування імунітету проти хвороби Гамборо і антиоксидантного статусу та методи їх корекції у курей кросу ISA BROWN. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 03.00.04 - біохімія. - Інститут біології тварин УААН, Львів, 2007.

У дисертації експериментально і теоретично обґрунтовані показники імунологічного та антиоксидантного статусу курчат кросу ISA BROWN та нові підходи до їх корекції. У результаті проведених досліджень отримано нові дані про вікові особливості імунітету, інтенсивність процесів перекисного окиснення ліпідів та функціональну активність антиоксидантної системи у курей кросу ISA BROWN. Встановлено, що у сироватці крові курчат титр специфічних антитіл проти хвороби Гамборо знижується з 1-ї по 25-ту добу життя та зростає після проведених вакцинацій. З тижневого віку реєструється сильна позитивна кореляційна залежність між вмістом гамма-глобулінової фракції сироватки крові та титром специфічних антитіл (r = +0,7- +0,9). З віком курчат відбувається заміщення низькомолекулярних білків сироватки крові на високомолекулярні. Вперше з'ясовано вплив препаратів “Вірон” та “Ізатізон” на імунологічні, біохімічні та антиоксидантні показники крові курчат кросу ISA BROWN. Встановлено, що дані препарати підвищують титр антитіл проти хвороби Гамборо, сприяють покращенню білкового обміну, активності антиоксидантної системи та знижують вміст продуктів ПОЛ. У курчат дослідних груп інтенсивніше протікають процеси обміну речовин, покращується резистентність і стан антиоксидантного захисту, що спричиняє зростання маси тіла (на 18%) та збереженість птиці (на 3,5%).

Ключові слова: курчата, імунітет проти хвороби Гамборо, білковий обмін, продукти перекисного окиснення ліпідів, ферменти антиоксидантного захисту, вітаміни А і Е.

Симонов М. Р. Возрастные особенности формирования иммунитета против болезни Гамборо и антиоксидантного статуса и методы их коррекции у кур кросса ISA BROWN. - Рукопись.

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук по специальности 03.00.04 - биохимия. - Институт биологии животных УААН, Львов, 2007.

В диссертации экспериментально и теоретически обосновано показатели иммунологического и антиоксидантного статуса цыплят кросса ISA BROWN и новые подходы к их коррекции. В результате проведенных исследований получены новые данные о вековых особенностях иммунитета, интенсивности процессов перекисного окисления липидов и функциональной активности антиоксидантной системы у кур кросса ISA BROWN. Впервые у цыплят кросса ISA BROWN установлены вековые изменения титра специфических антител против болезни Гамборо, содержания общего белка и белковых фракций, продуктов перекисного окисления липидов (диеновые конъюгаты, гидроперекиси липидов, малоновый диальдегид), витаминов (Е и А), ферментов антиоксидантной защиты (СОД, ГП), аминотрансфераз, глюкозы. Установлено, что титр антител против болезни Гамборо имеет тесные позитивные корреляционные связи с содержанием гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови (r = +0,7 - +0,9). Титр специфических антител против болезни Гамборо снижается из суточного до 25-дневного возраста и увеличивается после проведенных вакцинаций. С возрастом цыплят происходит замещение низкомолекулярных белков сыворотки крови на высокомолекулярные, поэтому наивысшее содержание альбуминов регистрируется на протяжении первых 20-ти суток жизни, а глобулинов - в следующий период. Активность ферментов-трансаминаз (АЛТ и АСТ) и содержание продуктов ПОЛ в крови высокие в раннем возрасте цыплят и в период их интенсивного роста. Количество витаминов Е и А в сыворотке крови цыплят возрастает в периоды высокого содержания продуктов ПОЛ. Самое низкое содержание ретинола и токоферола в сыворотке крови цыплят было зарегистрировано в 115-суточном возрасте. В период с 13- до 18-суточного возраста, зарегистрированы наивысшие приросты живой массы цыплят. Период интенсивных процессов роста и развития характеризуется высокими показателями в сыворотке крови содержания общего белка, постальбуминов, альбуминов, альфа- и в-глобулинов, глюкозы, продуктов ПОЛ и активности аминотрансфераз.

Впервые выяснено влияние препаратов “Вирон” и “Изатизон” на иммунологические, биохимические и антиоксидантные показатели крови цыплят кросса ISA BROWN. Данные препараты повышают титр антител против болезни Гамборо, способствуют улучшению белкового обмена, активности антиоксидантной системы и снижают содержание продуктов ПОЛ. У цыплят опытных групп интенсивнее протекают процессы обмена веществ, улучшается резистентность и состояние антиоксидантной защиты, которые ведут к росту массы тела (на 18%) и сохраненность птицы (на 3,5%).

Ключевые слова: цыплята, иммунитет против болезни Гамборо, белковый обмен, продукты перекисного окисления липидов, ферменты антиоксидантной защиты, витамины А и Е.

Simonov M. R. Age peculiarities of immune and antioxidant status of chickens ISA BROWN cross and methods of their correction. - Manuscript.

Dissertation for the receipt of scientific degree of candidate of sciences on 03.00.04 - biochemistry. - Institute of Biology Animals of UAAS, Lviv, 2007.

In dissertation are experimentally and theoretically described indexes of immunological and antioxidant status of chickens ISA BROWN cross and new approaches to their correction. As a result of researchers new it has been got a data about the age features of immunity, intensity of lipid peroxidation processes and functional activity of the antioxidant system of the chickens ISA BROWN cross. It is set that in the blood whey of chickens the title of specific antibodies against illness of Gamboro goes down from 1-st till 25-th day of life and grows after the conducted vaccinations. From a week's age strong positive correlation dependence is registered between maintenance of gamma-globulin fraction of blood whey and title of specific antibodies (r = +0,7 - +0,9). With age of chickens there is substituting for the low molecular proteins of blood whey on high molecular. For the first time it was shown the influence of “Viron” and “Izatizon” preparations on immunological, biochemical and antioxidant indexes of cross ISA BROWN chickens blood. It is set that these preparations promote the title of antibodies against illness of Gamboro, help to improve the protein exchange, activity of the antioxidant system and reduce maintenance of lipid peroxidation products. In chickens from experimental groups the processes of matters exchange flow more intensive, improves resistance and state of antioxidant defense, which draws a growth of body mass (on 18%) and improves storage of birds (on 3,5%).

Keywords: chickens, immunity against illness of Gamboro, aluminous exchange, products of lipid peroxidation, enzymes of antioxidant defense, vitamins A and E.

Размещено на Allbest.ru