Размещено на http://allbest.ru

Автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата фармацевтичних наук

Фітохімічне вивчення рослин роду Оrchis та розробка рослинних зборів для корекції надмірної ваги

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

оrchis бульбокорень зозулинець збор

Актуальність теми. На сьогодні ожиріння є серйозною медико-соціальною проблемою більшості країн світу. Ожиріння знижує працездатність людини, ускладнює інтелектуальну і фізичну діяльність, призводить до ранньої інвалідизації, передчасного старіння і скорочення тривалості життя. Його розповсюдженість становить від 25 до 53,5% (20-30% складають чоловіки, 30-40% - жінки, 10% - діти шкільного віку). В Україні розповсюдженість надмірної маси тіла складає 29,7% серед жінок і 14,8% серед чоловіків; 40% дорослого населення і 10% дитячого мають надмірну масу тіла. За даними ВООЗ у світі налічується більше чверті мільярда хворих на ожиріння, і ця цифра неухильно збільшується. Смертність серед хворих з тяжкими формами ожиріння у віці 25-30 років у 12 разів вища, ніж у людей з нормальною масою тіла.

Ожиріння є одним із головних чинників виникнення у чоловіків ериктильної дисфункції (ЕД). За статистикою на сьогоднішній день біля 80% чоловіків у світі мають проблеми в сексуальній сфері. Щороку ЕД діагностують у 900000 чоловіків. В Україні ЕД зустрічається у кожного четвертого чоловіка, кожний шостий - безплідний.

Тому ожиріння та порушення репродуктивної функції є проблемами, вирішувати які необхідно на державному рівні. Таким чином, актуальним є пошук шляхів профілактики та боротьби з ожирінням і порушенням сексуальних функцій за допомогою фітопрепаратів. Перспективними об'єктами для дослідження такого спрямування є рослини роду Зозулинець. В народній медицині підземні та надземні органи рослин роду Orchis L. (Зозулинець) використовують при імпотенції, олігоспермії, безплідді, інтоксикаціях. Відомо, що очищений від метаболітів організм людини здатен нормалізувати обмін речовин, що приводить до зниження апетиту та надмірної ваги. Тому детоксикаційні властивості зозулинців привертають увагу з точки зору вивчення можливості використання цих рослин у лікуванні ожиріння та сексуальних порушень. За кордоном на основі бульбокоренів зозулинцю випускають препарати «Конфідо» та «Спеман», які використовуються для лікування ЕД. В нашій країні ці рослини вивчені недостатньо. Саме тому виникла необхідність поглибленого фармакогностичного вивчення рослин роду Зозулинець та рослин, які найчастіше входять до складу зборів для корекції надмірної ваги з метою створення нових лікарських засобів на основі даної сировини.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана у відповідності з планом проблемної комісії «Фармація» МОЗ та АМН України і є фрагментом комплексної науково - дослідної роботи Національного фармацевтичного університету «Фармакогностичне вивчення біологічно активних речовин, створення лікарських засобів рослинного походження» (номер державної реєстрації 0103U000476).

Мета і задачі дослідження. Метою роботи було фітохімічне вивчення представників роду Orchis L.: зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого та розробка складу і стандартизація зборів для корекції надмірної ваги з подальшим впровадженням у промислове виробництво.

Для досягнення цієї мети були поставлені такі задачі:

- проаналізувати та узагальнити сучасні дані літератури з питань ботанічних ознак, географічного розповсюдження, хімічного складу і застосування рослин роду Зозулинець в медицині та інших галузях народного господарства;

- провести попереднє дослідження хімічного складу бульбокоренів (салепу), листя та квіток зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого;

- ідентифікувати біологічно активні речовини (БАР) бульбокоренів (салепу), листя та квіток зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого та встановити їх структуру;

- визначити кількісний вміст основних груп БАР у бульбокоренях (салепі), листі та квітках зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого;

- розробити склад рослинних зборів для корекції надмірної ваги;

- провести стандартизацію зборів та розробити проекти методик контролю якості (МКЯ) на них;

- підтвердити можливість створення нових лікарських засобів з сировини, що вивчалася, шляхом вивчення фармакологічної активності досліджуваних об'єктів.

Об'єкти дослідження: фармакогностичне вивчення бульбокоренів (салепу), листя та квіток зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого.

Предмет дослідження: виявлення, виділення, ідентифікація БАР з бульбокоренів (салепу), листя та квіток зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого, розробка складу та стандартизація зборів.

Методи дослідження: якісний і кількісний вміст БАР визначали фармакопейними методами: тонкошарова хроматографія (ТШХ), паперова хроматографія (ПХ). Ліпофільні комплекси досліджували за допомогою ТШХ. Для розділення БАР використовували адсорбційну хроматографію на поліаміді, целюлозі, силікагелі і препаративну хроматографію на папері та в тонкому шарі сорбенту. Хімічну будову виділених сполук встановлювали на основі їх хімічних перетворень, даних УФ-, ІЧ-спектрів та температури плавлення. Кількісний вміст БАР визначали титриметричними та спектрофотометричними методами. Морфолого-анатомічну будову компонентів зборів встановлювали за допомогою стереомікроскопу та мікроскопів МБР-1 і МБР-2, знімки мікропрепаратів виконували цифровим фотоапаратом Nikon 5600 та Kodak Easy Shape 5. Фармакологічні дослідження проводили in vivo та in vitro.

Наукова новизна одержаних результатів. Вперше проведено систематичне фітохімічне вивчення БАР бульбокоренів, листя та квіток зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого.

Встановлено в них наявність вільних та зв'язаних цукрів, полісахаридів, амінокислот, органічних та гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин, кумаринів, сапонінів, терпенових сполук, хлорофілів, каротиноїдів.

З бульбокоренів, листя та квіток зозулинцю в індивідуальному стані вперше виділено 20 речовин: 3 похідні коричної кислоти, 1 похідна бензойної кислоти, 3 похідні кумарину, 11 флавоноїдів, 1 тритерпеноїд, 1 стерин.

Визначено кількісний вміст 16 амінокислот, 15 макро- та мікроелементів.

Одержано порошок з бульбокоренів зозулинцю, для якого проведено фармакологічні дослідження з приводу впливу його на еректильну функцію; розроблено та стандартизовано два лікувально-профілактичні збори для корекції надмірної ваги, для яких визначено гостру токсичність, вплив на динаміку маси тіла, а також на полосне та мембранне травлення.

Новизна досліджень підтверджена патентами на корисну модель «Спосіб кількісного визначення стероїдів та флавоноїдів біологічно активних речовин рослинного походження» № 41309; «Спосіб ідентифікації стероїдів в засобах рослинного походження» № 41310; «Спосіб корекції надлишкової маси тіла» № 41593.

Практичне значення отриманих результатів. Розроблені два лікувально-профілактичні збори для корекції надмірної ваги, для яких визначено гостру токсичність і фармакологічну активність. Проведені фармакологічні дослідження впливу порошку зозулинців на еректильну функцію. Розроблено проекти МКЯ на «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 1» та «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 2», які увійшли до фармацевтичної розробки на лікарські засоби з подальшим впровадженням у виробництво на ВАТ «Лубнифарм».

Результати хімічного дослідження представників роду Orchis L. впроваджено в навчальний процес: кафедри якості, стандартизації та сертифікації ліків Інституту підвищення кваліфікації спеціалістів фармації при Національному фармацевтичному університеті; кафедри фармакогнозії з курсом ботаніки Тернопільського державного медичного університету ім. І.Я. Горбачевського; кафедри фармацевтичної хімії та фармакогнозії Луганського державного медичного університету.

Особистий внесок здобувача. Безпосередньо автором здійснено:

- інформаційний пошук та аналіз літературних даних за темою дисертації;

- встановлено наявність та визначено кількісний вміст основних груп БАР бульбокоренів, листя та квіток зозулинцю прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого: полісахаридів, амінокислот, аскорбінової, гідроксикоричних та органічних кислот, фенольних сполук, кумаринів, флавоноїдів, дубильних речовин, макро- та мікроелементів;

- ідентифіковано та встановлено будову 20 речовин;

- запропоновано та стандартизовано склад зборів для корекції надмірної ваги;

- розроблено проекти МКЯ на «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 1» та «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 2».

Апробація результатів дисертації. Основні положення роботи викладено та обговорено на науково-практичних конференціях різного рівня: Перша науково-практична конференція з міжнародною участю «Сучасні досягнення фармацевтичної технології» (Харків, 2008), І Міжнародна науково-практична конференція «Актуальні питання репродуктивної фармакології» (Харків, 2008), міжнародна науково-практична конференція «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (Белгород, 2008), ювілейна науково-практична конференція з міжнародною участю «Фармакогнозія ХХІ століття. Досягнення та перспективи», присвячена пам'яті к.ф.н., доцента М.І. Борисова (Харків, 2009), the 13 th International Congress «Phytopharm 2009» (Бонн, Німеччина, 2009).

Публікації. За матеріалами дисертаційної роботи опубліковано 13 наукових робіт, у тому числі 5 статей у наукових фахових виданнях, 5 тез доповідей, 3 патенти України.

Обсяг і структура дисертації. Дисертаційна робота викладена на 182 сторінках машинописного тексту, складається зі вступу, огляду літератури, трьох розділів експериментальних досліджень, загальних висновків, 2 додатків, списку використаних джерел літератури. Обсяг основного тексту складає 149 сторінок. Робота ілюстрована 27 рисунками та 30 таблицями. Список використаних джерел включає 203 найменування, з них 138 кирилицею та 65 латиною.

основний зміст роботи

Коротка ботанічна характеристика, хімічний склад, застосування рослин роду Orchis та компонентів рослинних зборів для лікування надмірної ваги (огляд літератури)

В огляді літератури наведено ботанічну характеристику, дані про хімічний склад, застосування в медицині та народному господарстві представників рослин роду Orchis та рослин - компонентів запропонованих зборів. Проведений аналіз літературних даних за темою дисертаційної роботи свідчить про багаторічний досвід використання бульбокоренів зозулинця у народній та науковій медицині. Між тим, було науково не доведено їх застосування для лікування еректильної дисфункції. Надземні частини зозулинців вивчені недостатньо, що створило передумови для комплексного фармакогностичного вивчення рослин роду Зозулинець. Ожиріння є серйозною проблемою, яка дуже часто супроводжує еректильну дисфункції, тому була доцільною розробка рослинних зборів для лікування надмірної ваги.

Виділення комплексів біологічно активних речовин з бульбо коренів та трави зозулинців прованського, шоломоносного, плямистого та сферичного

Об'єктами досліджень були бульбокорені та трава зозулинця прованського, шоломоносного, сферичного, плямистого, а також збір №1, який складається з трави споришу, листя сени, листя кропиви, трави деревію та збір №2, який складається з кори крушини, плодів шипшини, листя м'яти перцевої, коренів вовчугу, плодів фенхелю. Сировина була зібрана у 2005-2008 роках і надана ВАТ «Лубнифарм» для проведення досліджень.

За допомогою якісних реакцій та хроматографії з використанням водних, водно-спиртових, хлороформних, етилацетатних, бутанольних екстрактів у бульбокоренях вільних та зв'язаних цукрів, полісахаридів, амінокислот, органічних та гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин, кумаринів, сапонінів, терпенових сполук, хлорофілів, каротиноїдів; у квітках та листі - сапонінів вільних та зв'язаних цукрів, полісахаридів, амінокислот, органічних та гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин; у зборах № 1 та № 2 - вільних та зв'язаних цукрів, полісахаридів, амінокислот, органічних та гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин, кумаринів, сапонінів, терпенових сполук, хлорофілів, каротиноїдів, антрацен похідних та ефірної олії.

Для виділення БАР і розділення їх на індивідуальні компоненти використовували методики рідинно-рідинної екстракції, колонкової адсорбційної хроматографії на силікагелі та поліаміді, препаративної хроматографії на папері і в тонкому шарі сорбенту.

На основі фізико-хімічних властивостей отриманих речовин та продуктів їх хімічних перетворень, даних УФ-,ІЧ-, ПМР спектроскопії, порівняння з достовірними зразками встановлено їх структуру: похідні коричної кислоти - ферулова, хлорогенова та неохлорогенова кислоти; похідні бензойної кислоти - галова кислота; похідні кумарину - кумарин, умбеліферон, ескулетин; флавоноїди - катехін, епікатехін, ціанінідин-3-О-глікозид, дельфінідин-3-О-глікозид, апігенін, лютеолін, кемпферол, кверцетин, астрагалін, ізокверцитрин, рутин; тритерпеноїди - урсолова кислота; стерини - в-ситостерин.

Вперше виділені з сировини: з бульбокоренів - ферулова, галова, хлорогенова, неохлорогенова кислоти, умбеліферон, ескулетин, урсолова кислота, -ситостерин; з трави - умбеліферон, ескулетин, катехін, епікатехін, ціанідин-3-О-глікозид, дельфінідин-3-О-глікозид, апігенін, лютеолін, урсолова кислота. Основні фізико-хімічні властивості виділених речовин наведені в табл. 1.

Таблиця 1Основні фізико-хімічні властивості виділених речовин

Примітка. Системи розчинників: 1- н-бутанол-кислота оцтова-вода (4:1:2); 2 - 2% оцтова кислота; 3 - 15% оцтова кислота; 4 - хлороформ-оцтова кислота-вода (13:6:2); 5 - етилацетат-мурашина кислота-вода (3:1:1); 6 - етилацетат-кислота оцтова-кислота мурашина-вода (100:11:11:25).

Похідні коричної кислоти. Речовини 2.1-2.3 на хроматографічному папері давали позитивні реакції на фенольний гідроксил (з заліза (III) хлоридом, діазотованою сульфаніловою кислотою). Кислотні властивості виявлені на підставі утворення синіх плям на ПХ з бромтимоловим синім. При обробці хроматограм реактивом кислоти барбітурової плями речовин 2.2, 2.3 давали блакитне забарвлення, що свідчило про наявність у їх складі кислоти хінної. За результатами хімічних перетворень, даних УФ-спектрів, у порівнянні з вірогідними зразками речовини 2.1-2.3 були ідентифіковані відповідно як ферулова, хлорогенова та неохлорогенова кислоти (див. табл.1).

Похідні бензойної кислоти. Речовина 2.4 утворювала з 1% розчином заліза хлориду синє забарвлення, що свідчило про її фенольну природу. Крім того, при обробці речовини 2.4. лугом утворювалося червоно-фіолетове забарвлення, яке переходило в буре, що дозволило припустити наявність галоїльного угруповання. Про належність речовини 2.4 до гідроксибензойних кислот свідчили дані ІЧ-спектрів. На підставі проведених досліджень і порівнянь з вірогідним зразком речовина 2.4 була ідентифікована як галова кислота (див табл. 1).

Похідні кумарину. Виділені речовини 2.5-2.7 на підставі наявності блакитної, золотисто-жовтої, жовтої флуоресценції в УФ-світлі при обробці хроматограм 10%-ним спиртовим розчином лугу та жовтогарячого забарвлення при денному світлі після обробки хроматограм кислотою сульфанілової діазотованою віднесені до похідних кумарину; розщеплюються йодистоводневою кислотою в середовищі рідкого фенолу та оцтового ангідриду до кумарину, що дозволяє віднести їх до похідних бензо--пірону. На підставі молекулярної маси, елементного складу, фізико-хімічних властивостей, УФ- та ІЧ-спектрів, а також порівняння з достовірними зразками речовини 2.5-2.7 ідентифіковані відповідно як кумарин, умбеліферон, ескулетин (див. табл. 1).

Флавоноїди. З флавоноїдних сполук було виділено 11 речовин, які представлені агліконами та глікозидами. За результатами якісних реакцій, хімічних перетворень, даних УФ-, ІЧ-спектроскопії (див. табл. 1) речовини 2.8-2.9 є флавонами - катехін, епікатехін. Речовини 2.10-2.11 представлені глікозидами антоціанів - ціанінідин-3-О-глікозид, дельфінідин-3-О-глікозид. Речовини 2.12-2.15 є флавоновими агліконами - апігенін, лютеолін, кемпферол, кверцетин. Речовини 2.16-2.18 є глікозидами флавоноїдів - астрагалін, ізокверцитрин, рутин.

Терпеноїди. Речовину 2.19 за результатами якісних реакцій і хроматографічного аналізу було віднесено до тритерпеноїдів. В ІЧ-спектрі сполуки 2.19 спостерігалися смуги поглинання при 3300,2750,2200 см^-1 _, що свідчить про наявність гідроксильних груп, 1700 см^-1 відповідала валентним коливанням -С=О, 1600-1620 см^-1 - характерні для С=С зв'язків. При ацетилуванні та метилуванні речовини 2.19 отримували ацетати та метилати, які не давали депресії температури плавлення з відповідними ацетатами і метилатами урсолової кислоти. На підставі молекулярної маси, елементного складу, фізико-хімічних властивостей, УФ- та ІЧ-спектрів, а також порівняння з достовірним зразком речовини 2.19 ідентифікована як урсолова кислота (див. табл. 1).

Стерини. Речовину 2.20 за результатами якісних реакцій, хроматографування в різних системах розчинників з наступною обробкою хроматограм відповідними реактивами, у порівнянні з достовірним зразком було віднесено до стероїдів та ідентифіковано як ?-ситостерин.

Якісний склад та кількісний вміст амінокислот у бкльбокоренях зозулинців визначали за допомогою амінокислотного аналізатора. Результати дослідження наведено у табл. 2.

Таблиця 2 Амінокислотний склад бульбокоренів зозулинців

Примітка* - незамінна амінокислота

Встановлено, що в бульбокоренях містяться 16 амінокислот, з яких 6 - є незамінними. Методом атомно- абсорбційної спектроскопії визначений якісний склад та кількісний вміст мінеральних сполук в бульбокоренях зозулинців (табл. 3)

Таблиця 3 Елементний склад бульбокоренів зозулинця

Встановлено наявність 15 макро- та мікроелементів.

Стандартизація зборів. Вивчення фармакологічних властивостей порошку зозулинців і зборів

З метою розробки проектів методик контролю якості на «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 1» та «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 2» нами досліджено 5 серій кожного збору. Для цього визначали макро- та мікроскопічні ознаки, вміст вологості, золи, проводили визначення якісного складу, встановлювали вміст екстрактивних речовин, окиснюваних поліфенольних речовин і антрацен похідних. У зборі № 1 вміст окиснюваних поліфенольних речовин має бути не менше 4 %, вміст антраценпохідних не менше 0,07 %. У зборі № 2 вміст окиснюваних поліфенольних речовин має бути не менше 4,5 %, вміст антраценпохідних не менше 0,42 %.

На базі кафедри ботаніки Національного фармацевтичного університету при консультативній допомозі професора Хворост О.П. встановлено основні анатомічні діагностичні ознаки збору № 1 та збору № 2.

Вивчення впливу лікувально-профілактичних зборів № 1, № 2 для корекції ваги на динаміку маси тіла та масу внутрішніх органів, на полосне та мембранне травлення, вивчення гострої токсичності проводили під керівництвом професора Яковлевої Л.В.

Вивчення впливу лікувально-профілактичних зборів № 1, № 2 для корекції ваги на динаміку маси тіла та масу внутрішніх органів проводили на білих безпорідних щурах. Препарати, які вивчали вводили у вигляді відварів протягом 28 днів, один раз на добу, внутрішньошлунково, у двох добових дозах: 1 мл/100г та 5 мл/100г маси тіла. Контролем слугувала група інтактних тварин. Оцінювали масу тіла тварин і масу їх внутрішніх органів: печінки, підшлункової залози, нирок та селезінки. Потім розраховували масові коефіцієнти органів як відношення маси органа до маси тіла тварини.

Результати експерименту свідчать, що препарати достовірно знижують природний приріст маси тіла щурів. Слід також відмітити, що не було виявлено вагомої різниці між дією препаратів в двох дозах, які вивчали на самок, у той час як для самців спостерігався дозозалежний ефект.

Вивчення впливу лікувально-профілактичних зборів № 1, № 2 для корекції ваги на масові коефіцієнти внутрішніх органів щурів, зокрема органів, які беруть участь у процесі травлення - печінки та підшлункової залози - виявило відсутність достовірної різниці між контрольною та дослідною групами в масі підшлункової залози, нирок та селезінки, що свідчить про нормальне функціонування органів, відсутність гіпертрофії та ознак недостатності їх розвитку.

Для оцінки впливу препаратів на полосне та мембране травлення досліджували ліполітичну, протеолітичну, а також інвертазну ЛА, ПА, АА та ІА. Ціленаправлено підібраний склад препаратів у перші два тижні їх прийома сприяв активації протеолітичної та амілолітичної активностей дуоденального вмісту та інвертазної активності щіткової кайми кишкового епітелія і таким чином забезпечує повноту розщеплення білкових та вуглеводних компонентів їжі, що збагачує пул вільних амінокислот і глюкози, які необхідні для роботи мозгу та інших органів в умовах зниження маси тіла.

Оскільки при вивченні фармакологічної активності препарати в обох дозах виявили ефективність на однаковому рівні, в якості умовнотерапевтичної була обрана менша доза - 1мл/100г (240мг/кг).

Тестування показало, що лікувально-профілактичні збори № 1, № 2 для корекції ваги в умовнотерапевтичній дозі 1мл/100г не викликають алергезуючої дії (табл. 4, 5).

Таблиця 4 Алергізуюча активність лікувально-профілактичних зборів № 1, № 2 для корекції ваги на моделі активної шкірної анафілаксії

Таблиця 5. Вплив лікувально-профілактичних зборів № 1, № 2 для корекції ваги на показник дегрануляції тучних клітин

З метою розширення асортименту препаратів для лікування еректильної дисфункції у чоловіків були проведені фармакологічні дослідження порошку бульбокоренів зозулинців. Дослідження проводили на кафедрі фармакології під керівництвом професора Дроговоз С.М.

Роботу виконували на 24 статевозрілих білих нелінійних щурах - самцях. В кожній популяції статевозрілих самців щурів реєстрували певний відсоток тварин, котрі не копулюють протягом декількох щотижневих тестів (у білих нелінійних щурів - біля 20%); біля 40-50% самців - були не в змозі виконувати повний копулятивний цикл при першому тестуванні і тільки 30% (в середньому) - виявляли високу сексуальну активність (табл. 6) . Зважаючи на результати третього щотижневого тестування статевої поведінки (базове тестування), були відібрані самці, які виконували протягом тесту лише садки і інтромісії (щури зі зниженою статевою активністю). Препаратом порівняння був обраний препарат «Верона» (табл. 7).

Таблиця 6Динаміка показників при першому тестуванні статевої поведінки самців щурів

Таблиця 7 Вплив тижневого введення порошку бульбокоренів зозулинців

Тижневе введення порошку зозулинців призводило до стимуляції копулятивної поведінки самців зі зниженою сексуальною активністю. У дослідних тварин відносно щурів контрольної групи скорочувався постеякуляторний інтервал, зменшувалася кількість садок і інтромісій, підвищувалася копулятивна ефективність. В результаті активації спаровувальної поведінки збільшувався такий інтегральний показник, як кількість еякуляцій протягом тесту. Препарат має незначну різницю з препаратом порівняння.

ВИСНОВКИ

1. Вперше проведено фітохімічне вивчення біологічно активних речовин представників роду Orchis L.: зозулинцю плямистого, прованського, шоломоносного, сферичного, які культивуються в Україні.

2. За допомогою якісних реакцій, хроматографічних методів аналізу встановлено наявність у бульбокоренях, листі, квітках зозулинцю плямистого, прованського, шоломоносного, сферичного вільних та зв'язаних цукрів, полісахаридів, амінокислот, органічних та гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин, кумаринів, сапонінів, терпенових сполук, хлорофілів, каротиноїдів.

3. За допомогою колонкової адсорбційної хроматографії, рехроматографії на силікагелі та поліамідному сорбенті з бульбокоренів та трави зозулинців в індивідуальному стані вперше виділено 20 сполук: 3 похідні коричної кислоти, 1 похідна бензойної кислоти, 3 похідні кумарину, 11 флавоноїдів, 1 тритерпеноїд, 1 стерин. На основі фізико-хімічних властивостей виділених речовин та продуктів їх хімічних перетворень, даних УФ-, ІЧ -спектроскопії, порівняння з референт-зразками встановлено їх структуру.

4. Визначено кількісний вміст: полісахаридів, амінокислот, аскорбінової, гідроксикоричних та органічних кислот, фенольних сполук, кумаринів, флавоноїдів, дубильних речовин, макро- та мікроелементів. Вперше з бульбокоренів зозулинців одержані фракції полісахаридів (СРПС, ВРПС, ПР та ГЦ) та визначено їх кількісний вміст.

5. Вперше визначено якісний склад та кількісний вміст вільних та зв'язаних амінокислот. Встановлено наявність 16 амінокислот у бульбокоренях зозулинців.

6. Вперше проведено визначення якісного складу та кількісного вмісту макро- та мікроелементів у бульбокоренях зозулинців. Встановлено наявність в них 15 елементів.

7. Вперше отримані ліпофільні фракції з бульбокоренів зозулинців та проведено їх хроматографічне дослідження. Встановлено наявність кумаринів, каротиноїдів та хлорофілів.

8. Проведено фармакологічні дослідження лікувально-профілактичних зборів для корекції надмірної ваги, які підтвердили нормалізацію обмінних процесів при ожирінні та фармакологічні дослідження порошку бульбокоренів зозулинців, які показали здатність впливати на еректильну функцію.

9. Розроблені МКЯ на «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 1» та «Лікувально-профілактичний збір для корекції ваги № 2», які увійшли до фармацевтичної розробки на лікарські засоби з подальшим впровадженням у виробництво на ВАТ «Лубнифарм».

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Кисличенко В. С. Амінокислотний склад екстракту худії та бульбокоренів зозулинцю / В. С. Кисличенко, І. В. Ярошенко, В. Ю. Кузнєцова // Мед. хімія. - 2007. - Т. 9, № 3. - С. 109-111. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

2. Зозулинець як перспективна рослина для розробки коректора еректильної дисфункції у чоловіків./ І. В. Ярошенко, Г. В. Зайченко, Н. Є. Бурда, В. С. Кисличенко // Актуальні питання репродуктивної фармакології : матеріали І Міжнар. наук.-практ. конф. - Харків, 2008. - С. 83. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

3. Кисличенко В. С. Вивчення полісахаридного та елементного складу клубенів салепу / В. С. Кисличенко, І. В. Ярошенко, В. Ю. Кузнєцова // Вісник фармації. - 2008. - № 1 (53). - С. 8-11. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

4. Патент на корисну модель № 41309 Україна, МПК G 01 N 33/15. Спосіб кількісного визначення стероїдів та флавоноїдів біологічно активних речовин рослинного походження / Кисличенко В. С., Журавель І. О., Ярошенко І. В., Тернінко І. І., Бурда Н. Є., Кисличенко О. А., Грубник І. М., Нещерет О. І. - № u 2009 00463; заявл. 22.01.2009; опубл. 12.05.2009, Бюл. № 9. (Особистий внесок - участь в розробці способу кількісного визначення стероїдів та флавоноїдів, участь в оформленні заявки).

5 Патент на корисну модель № 41310 Україна, МПК B 01 D 15/08. Спосіб ідентифікації стероїдів в засобах рослинного походження / Кисличенко В. С., Журавель І. О., Ярошенко І. В., Тернінко І. І., Бурда Н. Є., Кисличенко О. А., Грубник І. М., Нещерет О. І. - № u 2009 00464; заявл. 22.01.2009; опубл. 12.05.2009, Бюл. № 9. (Особистий внесок - участь в розробці способу ідентифікації стероїдів, участь в оформленні заявки).

6. Патент на корисну модель № 41593 Україна, МПК А 61 К 36/00, А 61 К 8/00. Спосіб корекції надлишкової маси тіла / Кисличенко В. С., Журавель І. О., Ярошенко І. В., Бурда Н. Є., Грубник І. М. - № u 2009 00453; заявл. 22.01.2009; опубл. 25.05.2009, Бюл. № 10. (Особистий внесок - участь в розробці способу корекції надлишкової маси тіла, участь в оформленні заявки).

7. Фармакогностическое исследование цветков и листьев ятрышника / И. В. Ярошенко, Н. Е. Бурда, И. А. Журавель, В. С. Кисличенко // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании : материалы Междунар. науч.-практ. конф. - Белгород, 2008. - С. 287-289. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

8. Якісне визначення біологічно активних речовин в лікарських зборах для корекції надмірної маси тіла / І. В. Ярошенко, Н. Є. Бурда, І. О. Журавель, В. С. Кисличенко // Український журнал клінічної та лабораторної медицини. - 2009. - Т. 4, № 2. - С. 34-27. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

9. Якісне визначення гідроксикоричних кислот у квітках і листі зозулинця / Ярошенко І. В., Бурда Н. Є., Журавель І. О., Кисличенко В. С. // Фармакогнозія ХХІ століття. Досягнення та перспективи : тез. доп. ювіл. наук.-практ. конф. з міжнар. участю, присвяч. пам'яті канд. фармац. наук, доц. Михайла Івановича Борисова (до 80-річчя від дня народж.), м. Харків, 26 берез. 2009 р.- Х., 2009.- С. 286. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

10. Ярошенко І. В. Сучасні підходи до розробки складу рослинних зборів для корекції надмірної ваги / І. В. Ярошенко, В. С. Кисличенко // Сучасні досягнення фармацевтичної технології : тез. доп. Першої наук.-практ. конф. з міжнар. участю, 20-21 листоп. 2008 р. - Х. : Вид-во НФаУ, 2009. - С. 122. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

11. A phytochemical study of flowers and leaves of four Orchis species / V. S. Kyslychenko, I. V. Yaroshenko, N. Ye. Burda, I. A. Zhuravel // Phytopharm 2009 : materials The 13 th International Congress. - Bonn, 2009. - Р. 70. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень, участь в оформленні роботи).

12. Ідентифікація органічних кислот у листі та квітках зозулинця / І. В. Ярошенко, Н. Є. Бурда, І. О. Журавель, В. С. Кисличенко, В. Ю. Кузнєцова // Збірник наукових праць співробітників НМАПО ім. П. Л. Шупика. - К., 2009. - Вип. 18, кн. 3. - С. 511-514. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень).

13. Кількісне визначення органічних кислот в листі та квітках Orchis militaris L., Orchis maculata L., Orchis provincialis Balb., Orchis sphaerica M.B. / І. В. Ярошенко, І. О. Журавель, В. С. Кисличенко, Н. Є. Бурда // Український журнал клінічної та лабораторної медицини. - 2009. - Т. 4, № 3. - С. 70-72. (Особистий внесок - здійснення фітохімічних досліджень).

Размещено на Allbest.ru