Размещено на http://www.allbest.ru/

Дипломная работа

Использование нитритометрии для контроля качества сульфаниламидных лекарственных веществ



Содержание

• Введение
• Глава 1. Характеристика сульфаниламидных препаратов
• 1.1 История открытия сульфаниламидных препаратов
• 1.2 Механизм действия сульфамидных препаратов
• 1.3 Связь активности сульфамидных препаратов и их структуры
• 1.4 Классификация сульфамидных препаратов
• 2. Синтез сульфаниламдных препаратов
• 2.1 Получение хлорангидрида сульфаниловой кислоты
• 2.2 Получение амида сульфаниловой кислоты
• 2.3 Омыление ацильной группы и кислотный гидролиз
• 3. Редоксиметрия как титриметрический метод анализа
• 3.1 Характеристика титриметрических методов анализа
• 3.2 Основные термины и определения
• 3.3 Окислительно-восстановительное титрование
• 4. Анализ сульфамидных препаратов
• 4.1 Определение подлинности
• 4.1.1 Реакции, обусловленные ароматической аминогруппой
• 4.1.2 Реакции, обусловленные сульфогруппой
• 4.1.3 Реакции, обусловленные амидной группой
• 4.2 Метод нитритометрии
• 4.3 Нитритометрическое определение сульфамидных препаратов
• 4.4 Проведение нитритометрического исследования
• 4.4.1 Приготовление и стандартизация раствора нитрита натрия
• Заключение
• Список использованной литературы


Введение

В фармацевтическом анализе используются разнообразные методы исследования: физические, физико-химические, химические, биологические. Применение физических и физико-химических методов требует соответствующих приборов и инструментов, поэтому данные методы называют также приборными, или инструментальными.

Использование физических методов основано на измерении физических констант, например, прозрачности или мутности, цветности, влажности, температуры плавления, затвердевания и кипения и др.

С помощью физико-химических методов измеряют физические константы анализируемой системы, которые изменяются в результате химических реакций. К этой группе методов относятся оптические, электрохимические, хроматографические.

Химические методы анализа наиболее распространены и основаны на выполнении химических реакций.

Биологический контроль лекарственных веществ осуществляют на животных, отдельных изолированных органах, группах клеток, на определенных штаммах микроорганизмов. Устанавливают силу фармакологического эффекта или токсичность.

Актуальность темы данной работы заключается в том, что квалифицированный специалист должен умело ориентироваться среди методик, используемых в фармацевтическом анализе и уметь выбирать наиболее чувствительные, специфические, избирательные, быстрые и пригодные для экспресс-анализа заданных веществ в условиях аптеки.

Целью данной работы является рассмотрение редоксиметрии - химический метод анализа лекарственных средств, основанный на проведении окислительно-восстановительных реакций.

Основными задачами данной работы являются характеристика редоксиметрии как титриметрическогометода фармацевтического анализа, а также характеристика и краткое описание основных типов редоксиметрии.



Глава 1. Характеристика сульфаниламидных препаратов

1.1 История открытия сульфаниламидных препаратов

Сульфаниламидные препараты - группа химически синтезированных соединений, используемых для лечения инфекционных болезней, главным образом бактериального происхождения.

Сульфаниламиды стали первыми лекарственными средствами, позволившими проводить успешную профилактику и лечение разнообразных бактериальных инфекций. Благодаря этим препаратам, вошедшим в медицинскую практику с 1930-х годов, удалось значительно снизить смертность от воспаления легких, заражения крови и многих других бактериальных инфекций. Их повсеместное применение во время Второй мировой войны спасло множество жизней.

Открытие носило случайный характер и было связано с текстильной промышленностью, когда в поисках лучших красителей тканей французский химик Гельмо (1908-1909) синтезировал n-аминобензол-сульфамид (белый стрептоцид), получивший широкое распространение в красильной промышленности как основа для образования различных азокрасителей:

Рис.1. Схема получения n-аминобензол-сульфамида



Но никто, однако, не предполагал, что это соединение несет в себе богатые возможности. Сами сульфаниламидные препараты были открыты немецкой корпорацией «И.Г. Фарбениндустри» в ходе исследований азокрасителей - синтетических красителей, в структуру которых входит сульфаниламид. В 1909 году была получена краска - хризоидин, по своей прочности превосходящая многие другие, существовавшие в то время. В 1913 году было установлено, что хризоидин обладает бактерицидным действием, и после испытания он был предложен как лекарственный препарат под названием пиридиум.

В 1932 году химики немецкого концерна «И.Г.Фарбениндустри» получили пронтозил (красный стрептоцид) и в этом же году запатентовали несколько азокрасителей, в том числе и пронтозил.

а в 1934 году венгерский ученый-фармаколог Г.Домагк, руководивший исследовательским отделом корпорации, открыл его небывалое по тем временам лечебное действие на мышей. Он исследовал химиотерапевтическое действие 4-сульфамидо-2',4'-диаминоазобензола.

Рис.2. Г. Домагк - первооткрыватель красного стрептоцида

Эффект был поразительный: все мыши, получившие предварительно по 10 смертельных доз культуры гемолитического стрептококка после введения пронтозила остались живы, а все контрольные мыши погибли. после этого он немедленно приступил к изучению как пронтозила, так и других азокрасителей в качестве средств лечения инфекционных болезней человека, и в итоге показал, что они действительно эффективны.

За открытие пронтозила (известного также как красный стрептоцид) и его лекарственных свойств Домагк в 1939 был награжден Нобелевской премией по физиологии и медицине.

Рис.3. Структурная формула красного стрептоцида

Со времени этих открытий начинается новый выдающийся этап в развитии химиотерапии. Первые данные о лечебном действии подобных красителей послужили толчком для развития работ в этом направлении. Широким исследованиям в этой области способствовало также и то, что в 30-х годах разразилась сильная пандемия крупозного воспаления легких, особенно в странах Азии (Индия, Индонезия и др.). Высокая активность сульфаниламидных препаратов при лечении заболеваний, при которых наблюдалась большая смертность (крупозное воспаление легких, менингит, газовая гангрена, рожистое воспаление), вызвало большой интерес к созданию новых сульфаниламидных соединений во всех странах мира.

В нашей стране создание отечественных сульфаниламидных препаратов относится к 1935-1936 гг. В эти годы появились первые работы в области синтеза и изучения терапевтических свойств сульфаниламидов, выполненные ВНИХФИ им. С. Орджоникидзе под руководством известного химика-органика О.Ю. Магидсона.

Первым сульфаниламидным препаратом, созданным советскими химиками (О.Ю. Магидсон и М.В. Рубцов), был красный стрептоцид, близкий к химической структуре к зарубежному протонзилу.

В 1935 ученые Пастеровского института (Франция) установили, что «действующим началом» красного стрептоцида является образующийся метаболит - сульфамоилфениламинометилсульфонат натрия (2):

(1) (2) (3)

Рис.3. Структурная формула метаболизма красного стрептоцида

Как и любой азокраситель, красный стрептоцид может быть восстановлен, в результате получается сульфаниламид (3):

Вскоре красный стрептоцид вышел из употребления и, начиная с 1930 годов, на основе молекулы сульфаниламида были синтезированы тысячи различных сульфаниламидов, но медицинское применение нашли лишь около 20 из них. Наиболее широко известны сульфаниламид (стрептоцид) и полученные на его основе сульфатиазол, сульфапиридазин, сульфадиазин, этазол, сульфадоксин, сульфацетамид (сульфацил).

С появлением пенициллина и других антибиотиков, а в последнее время фторхинолонов, применение сульфаниламидов несколько сократилось, однако значения препараты этой группы не потеряли и в ряде случаев успешно используются при инфекционных заболеваниях, вызванных чувствительными к ним микроорганизмами.

1.2 Механизм действия сульфамидных препаратов

Механизм действия на микроорганизмы сульфаниламидов открыл Р. Вудс, установивший, что сульфаниламиды являются структурными аналогами парааминобензойной кислоты (ПАБК), которая участвует в биологическом синтезе фолиевой кислоты, необходимой для протекающих в клетке биохимических процессов. Бактерии, которые используют вместо ПАБК сульфаниламид погибают. В настоящее время получено множество антипаразитарных тантибактериальных и химиопрепаратов.

Химиопрепараты должны действовать этиотропно, а не органотропно. Безвредность препаратов устанавливается при помощи химиотерапевтического индекса (ХТИ) -- отношения минимальной терапевтической дозы к максимально переносимой дозе, который не должен быть больше единицы, иначе препарат применять нельзя.

Различается бактериостатическое действие препарата, заключающееся в прекращении роста и размножения бактерий за счет нарушения биохимических процессов в клетке (тетрациклин, левомицетин, макролиды); бактерицидное действие - гибель клетки (пенициллин, стрептомицин, цефалоспорины, аминогликозиды); бактериолитическое действие - лизис микроорганизма вследствие гидролиза связей между ацетилмурамовой кислотой и ацетилглюкозамином в полисахаридных цепях пептидогликанового слоя клеточной стенки (к примеру, лизоцим) [5, c.20].

Сульфаниламид, наиболее распространенный препарат группы сульфониламидов, получил признание во всем мире. В нашей стране он был введен в медицинскую практику в 1936 году под названием белый стрептоцид. Было установлено, что химиотерапевтическую активность проявляют те соединения, которые содержат в своей молекуле остаток сульфаниламида.

Это открыло широкие возможности для синтеза многочисленных новых сульфаниламидных соединений. Тот факт, что некоторые бактерии не поддаются воздействию красного и белого стрептоцида, привел к синтезу пиридиновых производных и в частности к сульфидину:



Однако, несмотря на его большую эффективность при пневмококковой и гонококковой инфекциях, он оказался очень токсичным и не проявлял активности при стафилококковой инфекции (вследствие высокой токсичности сульфидин в настоящее время не применяется). Это послужило толчком для дальнейших исканий лучших в терапевтическом отношении препаратов этого ряда. Результатом поисков явились тиазольные соединения - норсульфазол и сульфатиазол.

Рис.5. Структурная формула норсульфазола

Эти соединения действуют несколько слабее сульфидина на пневмококки, одинаково с ним на стрептококки и лучше него на стафилококки. Затем были синтезированы пиримидиновые соединения - сульфадиазин, сульфадимезин и др. Хотя они несколько менее активны, чем тиазольные, обладают значительно меньшей токсичностью, и благодаря медленному выделению легче достигается высокая их концентрация в крови.

Рис.6. Структурная формула сульфадимезина



Начиная с 1940 года список лекарственных препаратов пополнился новыми производными сульфаниламида: сульгин, фталазол, дисульфан и др. Вследствие плохой всасываемости эти препараты отличаются нетоксичностью и с успехом применяются для лечения кишечных инфекций. Позднее были получены этазол, дисульформин и ряд других соединений.

Рис.7. Структурная формула этазола

1.3 Связь активности сульфамидных препаратов и их структуры

В 1935 г. О.Ю. Магидсон и М.В. Рубцов (ВНИХФИ), И.Я. Постовский (Свердловский филиал ВНИХФИ) провели систематические исследования сульфаниламидных препаратов. Было установлено, что химиотерапевтическое действие этой группы соединений является частным случаем активности веществ с общей формулой:

,

Рис.8. Общая структурная формула производных сульфамидных препаратов, где Х - Н, арил, алкил, гетероцикл

На сегодняшний день имеется ряд наиболее общих законов в соотношении структура - активность, не всегда, однако, бесспорных.

- Замена NН₂ - группы в положении 4 другим радикалом (-СН₃, -ОН, Сl-, СООН- и др.) ведет к полной потере активности. Но сохраняется при наличии в положении 4 радикалов

-СОNН-; R = N-; НO-NН-; (СН₃)₂N- и др.,

которые при гидролизе или других химических превращениях образуют свободную аминогруппу.

- Перемещение аминогруппы из положения 4 в положение 2 или 3, введение дополнительных радикалов в бензольное ядро приводит к снижению или потере активности.

- Азогруппа (-N=N-) в положении 4 придает более высокий терапевтический эффект по сравнению с аминогруппой. В последующие годы это нашло подтверждение в создании сульфаниламидов пролонгированного действия.

- Действие усиливается при введении кислотных остатков в аминогруппу и слабоосновных заместителей в сульфамидную часть молекулы.

- Замещение водорода в сульфамидной группе позволило получить соединения с пониженной токсичностью и различной степенью активности.

- для препаратов длительного действия характерно наличие шестичленных циклов с двумя атомами азота: пиримидин у сульфамоно-метоксина и сулфадиметоксина, пиридазин у сульфапиридазина, пиразин у сульфалена.

- Соединение сульфаниламидов и 5-аминосалициловой кислоты с образованием азогруппы из двух аминогрупп дало препараты имеющие одновременно антибактериальный и противовоспалительный эффект.



Рис.9. Структурная формула салазопиридазина

Одним из недостатков сульфаниламидов является их плохая растворимость в воде. Эту проблему смогли решить двумя способами: введением в молекулу готового кислотного остатка и увеличением полярности N-H- связи амидной группы. Последнее достигается соедине-нием атома азота с электроноакцепторными заместителями. В обоих случаях лекарственные вещества представлены солями:

Рис.10. Структурная формула стрептоцида растворимыого

Рис.11. Структурная формула сульфацил-натрия

1.4 Классификация сульфамидных препаратов

Все сульфаниламидные препараты в зависимости от химического строения классифицируются:

1. Алифатические производные

ь Сульфаниламид (стрептоцид);

ь Сульфацетамид натрия (сульфацил-натрий);

ь Уросульфан.

2. Гетероциклические производные

ь Сульфадиметоксин;

ь Сульфален.

3. Ароматические и гетероциклические производные

ь Фталазилсульфатиазол (Фталазол);

ь Салазодин (Салазопиридазин).

Структуры некоторых сульфаниламидных препаратов представлены в табл. №1.

таблица 1. Сульфаниламидные лекарственные препараты

	наименование препарата	Структурная формула	Физико-химические свойства
1	Сульфаниламид Sulfanilamide (Стрептоцид) n-сульфамидо-бензоламинометилен-сульфат натрия		Белый кристаллический порошок, без запаха. Тпл = 164-167 оС. Мало растворим в воде, трудно в спирте, легко растворим в кипящей воде, раство-рим в растворах едких щелочей.
2	Стрептоцид растворимый Streptocidum solubile n-аминобензол-сульфамид		Белый кристалличесий порошок, без запаха. Хорошо растворим в воде. Практически нерастворим в органических растворителях
3	Сульфацил-натрий Sulfacylum-natrium (Альбуцид-натрий) n-аминобензол-сульфонилацетамид-натрий		Белый кристаллический порошок, без запаха. Хорошо растворим в воде. Практически нерастворим в спирте.
4	Уросульфан Urosulfan n-аминобензол-сульфонилмочевина		Белый кристаллический порошок, без запаха. Мало растворим в воде, трудно в спирте, легко в разведённых кислотах и растворах едких щелочей.
5	Сульгин Sulginum n-аминобензол-сульфонилгуанидин		Белый мелкокристаллический порошок. Очень мало растворим в воде и в растворах едких щелочей, мало в спирте.
6	Норсульфазол Norsulfazolum (Сульфатиазол) 2-[n-аминобензол-сульфамидо]-тиазол		Белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристалличес-кий порошок, без запаха. Очень мало рас-творим в воде, мало в спирте, растворим в разведённых минеальных кислотах и растворах едких и углекислых щелочей.
7	Фталазол Phthalazolum 2-[n-фталиламино-бензолсульфамидо]-тиазол		Белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок, без запаха. Практически нерастворим в воде, очень мало растворим в спирте, растворим в водном растворе карбоната натрия.
8	Этазол Aethazolum (Cульфаэтидол) 2-[n-аминобензол-сульфамидо]-5-этил-1,3,4-тиадиазол		Белый или белый со слегка желтоватым от-тенком кристалличес-кий порошок. Практи-чески нерастворим в воде, трудно раство-рим в спирте, легко в растворах щелочей, мало - в разведённых кислотах.
9	Сульфадимезин Sulfadimizinum		Белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок. Практически нерастворим в воде, легко в кислотах и щелочах.
Сульфаниламидные лекарственные препараты пролонгированного действия
10	сульфапиридазин Sulfapyridazinum 6-[n-аминобензол-сульфамидо]-3-етоксипиридазин		Белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок, без запаха, горьковатый на вкус. Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте, легко - в разведённых кислотах и щелочах.
11	сульфамонометоксин Sulfamono-methoxinum 4-[n-аминобензол-сульфамидо]-6-метокси-пиримидин		Белый или белый со слегка кремоватым от-тенком кристалличес-кий порошок. Очень мало растворим в воде, мало растворим в спирте, легко - в разведённой хлористо-водородной кислоте.
12	сулфадиметоксин Sulfadimethoxinum 4-[n-аминобензол-сульфамидо]-2,6-метоксипиримидин		Белый или белый со слегка кремоватым от-тенком кристалличес-кий порошок, без запаха. Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте, легко - в разбавленной хлорис-товодородной кислоте и растворах едких щелочей.
13	сульфален Sulfalenum 2-[n-аминобензол-сульфамидо]-3-метоксипиразин	Препарат сверхдлительного действия	Белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок. Практически нерастворим в воде, легко - в разведённых кислотах и щелочах.
14	Саладозин Saladozine (Салазопиридазин) S-(n-[n-(3-метокси-пиридазин-6)-сульфамидо]-фенилазо)-салициловая кислота		Мелкокристаллический порошок оранжевого цвета. Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте, растворим в растворе едкого натра.
15	Ко-тримоксазол Co-Trimoxozole (Бисептол) Комбинированный препарат, содержащий два действующих вещества: сульфаметоксазол и триметоприм		Белый кристаллический порошок, без запаха или почти без запаха. Практически нерастворим в воде, трудно в спирте, мало в - в хлороформе и эфире, хорошо в аце-тоне, растворим в растворах едких щелочей.

Фармакологическая классификация

1. Препараты для резорбтивного действия (хорошо всасывающиеся из желудочно-кишечного тракта)

А. Короткого действия (T1/2 <10 ч):

- Сульфанилаид (стрептоцид)

- Сульфадимедин (сульфадимезин)

- Сульфакарбамид (уросульфан)

Б. Средней длительности действия (T1/2 10-24 ч):

ь Сульфадиазин (сульфазин)

ь Сульфаметоксазол

В. Длительного действия (T1/2 24-48 ч):

ь Сульфамонометоксин

ь Сульфадиметоксин

Г. Сверхдлительного действия (T1/2 > 48 ч):

ь Сульфаметоксипиридазин

ь Сульфален

ь Сульфадоксин

2. Не абсорбируемые в ЖКТ

ь Фталилсульфотиазол (фталазол)

ь Сульфагуанидин (сульгин)

3. Для местного применения

ь Сульфадиазин серебра (дермазин)

4. Соединения с 5-аминосалициловой кислотой

ь Сульфасалазин

Механизм действия

Спектр действия сульфаниламидов довольно широк. Он включает в основном следующие возбудители инфекций:

ь Бактерии (патогенные кокки, кишечная палочка)

ь Хламидии (возбудители трахомы, орнитоза)

ь Актиномицеты

ь Простейшие (плазмодии малярии, возбудитель токсоплазмоза)

Микроорганизмы в своем развитии синтезируют фолиевую кислоту. В процессе метаболизма фолиевая кислота превращается в дигидрофолиевую, из которой образуется тетрадигидрофолиевая кислота. Последняя контролирует биосинтез аминокислот, пуриновых и пиримидиновых оснований.

Механизм противомикробного действия сульфаниламидов связан с их конкурентным антагонизмом с n-аминобензойной кислотой, которая включается в структуру фолиевой кислоты. Но в присутствии сульфаниламидов фермент, осуществляющий биосинтез фолиевой кислоты, вместо n-аминобензойной кислоты использует ее имитатор-антагонист (сульфамидный фрагмент). В результате микроорганизм вместо фолиевой кислоты (1) синтезирует псевдофолиевую кислоту (2).

Эти изменения в структуре блокируют образование нормальных метаболитов. В результате угнетается синтез нуклеиновых кислот, вследствие чего рост и размножение микроорганизмов подавляется (бактериостатический эффект).



2. Синтез сульфаниламдных препаратов

2.1 Получение хлорангидрида сульфаниловой кислоты

Исходные продукты для синтеза должны содержать ацилированную первичную ароматическую аминогруппу (уретановая защита). Это позволяет предохранить ее от изменений в процессе синтеза. Уретановую защиту осуществляют действием хлорангидрида монометилового эфира угольной кислоты (хлорметилуретан). Затем проводят сульфохлорирование хлорсульфоновой кислотой.

анилин N-карбометокси- N-карбометоксисульфаниловая кислота сульфанилхлорид (фенилуретан)

Процесс сульфохлорирования длится 4-8 часов, в зависимости от количества загруженного сырья.

В качестве ацилирующего агента можно взять уксусный ангидрид и тогда процесс образования хлорангидрида сульфаниловой кислоты идёт через стадию образования N-ацетилсульфаниловой кислоты.

2.2 Получение амида сульфаниловой кислоты

Стадия аминирования N-карбметоксисульфанилхлорида выглядит следующим образом:



Реакцию следует проводить в слабощелочной среде, чтобы нейтрализовать выделяющуюся хлористоводородную кислоту, которая может вступить в реакцию с амином, образуя гидрохлориды, и реакция конденсации амина с хлорангидридом ацилсульфаниловой кислоты не пойдет. Эта схема является общей для всех сульфаниламидных препаратов, однако, она индивидуальна для каждого из них в зависимости от радикала R. Например, для получения стрептоцида амидирующим агентом (RNH₂) является аммиак (NH₃), а для получения норсульфазола - 2-аминотиазол:

По этой схеме получают большинство препаратов с гетероциклическим радикалом.

2.3 Омыление ацильной группы и кислотный гидролиз

Для освобождения ароматической аминогруппы необходимо провести омыление ацильной группы, так как ацилированные по ароматической аминогруппе соединения не проявляют фармакологический эффект.

фармацевтический сульфаниламидный титриметрический



Многие сульфаниламидные препараты применяются в кислотной форме. Для получения этой формы необходимо провести кислый гидролиз: на образовавшуюся натриевую соль подействовать раствором кислоты:

В зависимости от радикала “R” синтез конкретного препарата имеет некоторые индивидуальные особенности. Для получения сульфацилнатрия исходным для синтеза берут стрептоцид, который обрабатывают уксусным ангидридом, а затем раствором щёлочи для снятия защиты с аминогруппы и получения натриевой соли по амидной группировке:

На заводе имени Н. А. Семашко разработан метод синтеза сульгина, который заключается в том, что сульфаниламид сплавляют с сульфатом гуанилмочевины в присутствии соды:

Синтез сульгина может осуществляться в различных вариантах. В 1966-1968 гг. во ВНИХФИ был разработан оригинальный способ получения сульгина из кальциевой соли карбометоксисульфанилцианамида:

Уросульфан получается в результате взаимодействия хлорангидрида карбометоксисульфаниловой кислоты с мочевиной и последующего гидролиза продукта конденсации:



Кроме того существует способ получения уросульфана путём гидролиза сульцимида:

Активные сульфаниламиды можно получить, замещая водород, не только в амидной, Но и в ароматической аминогруппе. Например, стрептоцид растворимый получается путем конденсации стрептоцида с бисульфитным производным формальдегида:

Фталазол можно рассматривать как производное норсульфазола, у которого водород аминогруппы в положении 4 замещен на остаток фталевой кислоты. В 1950 г был предложен способ получения фталазола путём спекания фталевого ангидрида с норсульфазолом в электропечи. В этих условиях идёт побочная реакция образования норсульфазол-фталимида, но в условиях щелочного гидролиза с последующим подкислением он также образует фталазол:



3. Редоксиметрия как титриметрический метод анализа

3.1 Характеристика титриметрических методов анализа

Титриметрический (объемный) анализ объединяет группу методов количественного химического анализа, основанных на процессе титрования. Он заключается в измерении объема раствора реагента, израсходованного на эквивалентное взаимодействие с определяемым веществом. По концентрации и объему раствора реагента вычисляют содержание определяемого вещества. Титриметрический метод анализа применим для определения средних и больших содержаний веществ (свыше 1%).

Реакции, используемые в титриметрии, должны удовлетворять следующим основным требованиям:

· реакция должна протекать количественно, т.е. константа равновесия реакции должна быть достаточно велика;

· реакция должна проходить быстро;

· реакция не должна осложняться протеканием побочных реакций;

· должен существовать способ определения окончания реакции [5, c.26].

В зависимости от типа реакции, которая лежит в основе определения, различают следующие методы титриметрического анализа: кислотно-основное, окислительно-восстановительное, осадительное и комплексиметрическое.

Титрование можно проводить из отдельных навесок и пипетированием. В первом случае титруют все количество определяемого вещества. При пипетировании исследуемый раствор (или навеску вещества) количественно переносят в мерную колбу, доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Далее из мерной колбы отбирают пипеткой несколько проб раствора (аликвоты) для параллельных титрований.



3.2 Основные термины и определения

Титрование - процесс постепенного контролируемого приливания раствора с точно известной концентрацией к определенному объему другого раствора.

Титрант (титрованный, рабочий раствор) - раствор, который приливают, имеет точно известную концентрацию.

Титруемый раствор - раствор, к которому приливают титрант.

Титриметрическая система - смесь веществ, образовавшаяся при взаимодействии титранта и титруемого вещества.

Точка эквивалентности (т.э.) - момент титрования, когда число эквивалентов титранта равно числу эквивалентов определяемого вещества.

Индикатор - вещество или прибор, применяемые для установления конечной точки титрования, которая обычно мало отличается от точки эквивалентности [2, c.32].

Стандарт (исходное вещество, установочное вещество) - химическое соединение, используемое для приготовления раствора с точно известной концентрацией (первичный стандарт), удовлетворяющее ряду требований:

· вещество должно быть химически чистым;

· состав вещества должен строго соответствовать формуле;

· вещество должно быть устойчивым при хранении в твердом виде и в растворе;

· должно иметь возможно большую молярную массу эквивалента.

Лишь немногие вещества удовлетворяют этим требованиям.

Стандартизация титранта - процесс определения точной концентрации титранта титрованием ранее стандартизированного раствора или установочного вещества.

Прямое титрование - один из способов титрования, когда определяемое вещество в процессе титрования непосредственно реагирует титрантом. Например, титрование кислот основаниями и наоборот.

Обратное титрование - один из способов титрования, когда к анализируемому веществу добавляют известное количество другого вещества, а затем избыток этого вещества, не вступившего в реакцию, оттитровывают соответствующим стандартным раствором.

Заместительное титрование - один из способов титрования, когда после реакции определяемого вещества с избытком вспомогательного реагента оттитровывают продукт реакции, количество вещества эквивалента которого в точности равно количеству вещества эквивалента определяемого вещества [3, 5].

3.3 Окислительно-восстановительное титрование

Окислительно-восстановительное титрование основано на реакциях окисления-восстановления.

Титрантами в методах редоксиметрии служат растворы окислителей и восстановителей. Чаще употребляются растворы окислителей в связи с их большей устойчивостью. Виды окислительно-восстановительного титрования называются по применяемому титранту.

Таблица 1. Основные типы титрантов в редоксиметрии [1, 4]

Титрант	Вид редоксиметрии
KMnO4 I2 KBrO3 Br2 K2Cr2O7 ICl NaNO2 Ce(SO4)2	перманганатометрия иодиметрия броматометрия бромометрия дихроматометрия хлориодиметрия нитритометрия цериметрия

Для определения точки эквивалентности применяют инструментальные и индикаторные способы. В индикаторных способах используют окислительно-восстановительные (редокс-) индикаторы, специфические индикаторы, необратимые индикаторы.

Редокс-индикаторы изменяют цвет при изменении окислительно-восстановительного потенциала системы. Они существуют в двух формах, окисленной и восстановленной, причем цвет одной формы отличается от цвета другой. Переход индикатора из одной формы в другую и изменение его окраски происходит при определенном потенциале (Е⁰_Ind).

Специфические индикаторы образуют интенсивно окрашенные соединения с одним из компонентов окислительно-восстановительной системы. Наиболее часто используется крахмал - индикатор на свободный йод, в присутствии которого крахмал при комнатной температуре синеет. Иногда используют тиоцианат аммония (титрование солей Fe³⁺). В точке эквивалентности при его применении раствор из красного становится бесцветным.

Необратимые индикаторы - красители, необратимо обесцвечивающиеся под действием окислителей [4, c.82-83].



4. Анализ сульфамидных препаратов

4.1 Определение подлинности

Большинство сульфаниламидных препаратов обладают амфотерными свойствами. Эти свойства обусловлены наличием ароматической аминогруппы обладающей основными свойствами и амидной группы с подвижным атомом водорода, обладающей кислотными свойствами. Кислотные свойства выражены сильнее, чем основные. Наличие этих двух групп даёт возможность образования растворимых в воде солей:

Для испытаний подлинности сульфаниламидов используют общие и частные реакции, обусловленные наличием тех или иных функциональных групп в молекулах.

4.1.1 Реакции, обусловленные ароматической аминогруппой

Реакции конденсации.

1. Сульфаниламиды образуют в щелочной среде продукты конденсации с 2,4-динитрохлорбензолом (желтого цвета) с образованием хиноидных цвиттер-ионов имеет вид:



2. в кислой среде окрашенные продукты конденсации с альдегидами типа шиффовых оснований. В качестве реактивов используют n-диметиламино-бензальдегид (желтое или оранжевое окрашивание), ванилин (желтое), формальдегид (желто-оранжевое или розовое), уксуснокислый раствор фурфурола (красное или малиново-красное).

Лигниновая проба.

Своеобразной разновидностью реакции образования шиффовых оснований является лигниновая проба, используемая для экспресс-анализа. Она выполняется на древесине или газетной бумаге, при нанесении на которую сульфаниламида (или другого первичного ароматического амина) и капли разведенной хлороводородной кислоты появляется оранжево-желтое окрашивание. Сущность происходящего химического процесса в том, что лигнин содержит ароматические альдегиды: n-оксибензальдегид, сиреневый альдегид, ванилин (в зависимости от вида лигнина). Альдегиды взаимодействуют с первичными ароматическими аминами, образуя Шиффовы основания

Реакции диазотирования.

При действии на сульфамид нитритом натрия в кислой среде образуется соль диазония, которая при сочетании с различными фенолами в щелочной среде образует азокраситель. Сочетание с первичными аминами наиболее легко протекает в слабокислой среде. В сильно кислой среде (pH=1-3) образуется соль амина, которая препятствует азосочетанию:

В щелочной среде (pH=10) преобладает свободный амин, соль диазония инактивируется вследствие образования диазонат-иона:

Оптимальное условие азосочетания: pH = 9. На первой стадии идёт диазотирование в среде соляной кислоты, а затем реакция азосочетания с фенолами в слабощелочной среде:



Сульфаниламиды с замещенной аминогруппой дают эту реакцию после предварительного гидролиза, который проводят нагреванием с разведенной хлороводородной кислотой.

В качестве азосоставляющего может выступать амин, который в оптимальной области pH = 5-7 образует с солью диазония азокраситель основного характера. Наиболее широкое применение в качестве реагента нашел дихлорид N-(1-нафтил)-этилендиамин: реагент Братонна-Маршал-ла. Замещение может идти как в положение 2, так и в положение 4:

4.1.2 Реакции, обусловленные сульфогруппой

Все сульфаниламидные препараты имеют в своем составе серу сульфамидной группы. Для открытия серы, необходимо окислить органическую часть молекулы концентрированной азотной кислотой, при этом сера переходит в сульфогруппу, которую легко можно обнаружить с раствором хлорида бария:



4.1.3 Реакции, обусловленные амидной группой

Водород амидной группы обуславливает возможность взаимодействия сульфаниламидов с солями тяжелых металлов (CuSO₄, CoCl₂ и др.). Получаемые соединения представляют собой окрашенные вещества, растворимые и нерастворимые в воде. При этом цвет осадка или раствора для каждого сульфаниламидного препарата различный, что дает возможность отличать один препарат от другого. Последнее характеризует эту реакцию как частную, определяющую индивидуальность препарата.

Реакция выполняется с натриевыми солями сульфаниламидов. Поэтому сульфаниламиды, представляющие кислую форму, нейтрализуют щелочью, затем добавляют раствор соли тяжелого металла. Следует избегать избытка щелочи, так как в этом случае может образовываться гидроксид металла, который будет маскировать основную реакцию.

ФС рекомендует использовать реакцию с раствором хлорида кобальта при испытании на подлинность сульфадиметоксина. Образуется ярко-розовый с лиловым оттенком аморфный осадок. Сульфаниламид в этих условиях образует голубоватый с синеватым оттенком осадок, а сульфален приобретает голубое окрашивание.



На характер протекания реакции оказывает влияние заместители в сульфамидной группе. В случае гетероцикла, возможно образование внутримолекулярной связи и комплексные соединения не растворяются в воде. Реакция с сульфатом меди (II), как и с хлоридом кобальта (II), может быть использована для отличия сульфаниламидов друга от друга.

Например, норсульфазол с раствором сульфата меди (II) образует грязно-фиолетовый осадок, переходящий в тёмно-лиловый, а стрептоцид - зеленоватый с голубым оттенком осадок.

Образование комплексной соли с ионами тяжёлых металлов - это групповая реакция. Цветовой эффекти осадка или раствора приведён в таблице 2.

таблица 2. Цветные реакции сульфаниламидных препаратов с солями тяжёлых металлов

№	Препарат	Цвет осадка или раствора с реактивами
		CoCl2	CuSO4
1	Сульфаниламид (Стрептоцид)	Голубоватый с сиреневым оттенком	Зеленоватый с голубым оттенком
2	Стрептоцид растворимый	Осадка не образуется	Осадка не образуется
3	Сульфацил-натрий (Альбуцид-натрий)	Осадка не образуется	Голубой осадок, с зеленоватым оттенком
4	Уросульфан	Осадка не образуется	Светло-зелёный
5	Сульгин	Осадка не образуется	Осадка не образуется
6	Норсульфазол (Сульфатиазол)	Сиреневый осадок, переходящий в грязно-фиолетовый	Грязно-фиолетовый осадок, переходящий в тёмно-лиловый
7	Фталазол	Осадка не образуется	Грязно-зеленовато-серый
8	Этазол (Cульфаэтидол)	Белый осадок	Травенисто-зелёный осадок, переходящий в темно-зелёный
9	Сульфадимизин	Розовато-сиреневый осадок	Жёлто-зелёный осадок, переходящий в красно-бурый
10	сульфапиридазин	Розовый	Травянисто-зелёный
11	сульфамонометоксин	Светло-зелёный	Розово-малиновый
12	сулфадиметоксин	Ярко-розовый с лиловым оттенком аморфный осадок	Зелёный
13	сульфален	Голубое окрашивание	Грязно-зелёное окрашивание раствора, преходящее в зеленовато-голубое

С солями серебра вещества данной группы образуют соединения в виде белого осадка. Реакция протекает количественно.

Были исследованы методом УФ-спектрофотометрии оптические характеристики продуктов взаимодействия некоторых сульфаниламидов с сульфатом меди (I) в присутствии гидроксиламина.

Установлено, в частности, что сульфадиметоксин имеет три максимума поглощения (при 210, 245, 327 нм). Эти константы предлагаются для идентификации данного лекарственного вещества. Анализ УФ-спектров поглощения образующихся окрашенных соединений позволил отнести происходящие взаимодействия к реакциям комплексообразования.



4.2 Метод нитритометрии

Нитритометрия, или нитритометрическое титрование, - метод количественного определения веществ с использованием титранта - раствора нитрита натрия NaNO₂ . Метод - фармакопейный, широко применяется в анализе различных веществ, в том числе многих фармацевтических препаратов.

Сущность метода. Метод основан на использовании полуреакции, протекающей в кислой среде:

Стандартный ОВ понтециал редокс-пары при комнатной температуре равен 0,98 В. Реальный ОВ потенциал этой редокс-пары увеличивается с ростом концентрации ионов водорода:

поэтому с повышением кислотности среды окислительные свойства нитрит-иона возрастают. Нитритометрическое титрование ведут в кислой среде.

Поскольку в указанной ОВ полуреакции участвует один электрон, то фактор эквивалентности нитрита натрия равен единице; молярная масса эквивалента равна молярной массе; молярная концентрация эквивалента равна молярной концентрации нитрита натрия.

Титрант метода. В качестве титранта используют обычно водный раствор нитрита натрия NaNO_2, чаще всего - с молярной концентрацией 0,5 или 0,1 моль/л. Раствор вначале готовят с приблизительно требуемой концентрацией, а затем стандартизуют - в большинстве случаев по стандартному раствору сульфаниловой кислоты NH₂C₆H₄SO₃H или перманганата калия.

Иногда для стандартизации растворов нитрита натрия применяют n-аминобензойную кислоту, n-аминоэтилбензоат, гидразин-сульфат, сульфаминовую кислоту.

Для приготовления 0,1 моль/л раствора титранта растворяют 7,3 г нитрита натрия в воде в мерной колбе на 1 л и доводят водой объем раствора до метки. Затем раствор стандартизуют или по сульфаниловой кислоте, или по стрептоциду, или по перманганату калия.

Стандартизация по сульфаниловой кислоте. Стандартный раствор сульфаниловой кислоты готовят, растворяя точную навеску ее в воде в присутствии гидрокарбоната натрия NaHCO₃, с тем чтобы образовалось водорастворимая смесь.

Для приготовления раствора ~0,2г (точная навеска) сульфаниловой кислоты, которую предварительно дважды перекристаллизовывают из воды и высушивают при ~120 ^оС до постоянной массы, смешивают с 0,1 г NaHCO_3, 10 мл воды и затем прибавляют к смеси еще 60 мл воды, 10 мл разбавленной HCI, 1 г KBr (для ускорения реакции) и титруют стандартизуемым раствором нитрита натрия.

Реакция сульфаниловой кислоты с нитритом натрия в соляно-кислой среде с образованием соли диазония:



протекает медленно, поэтому раствор нитрита натрия прибавляют при интенсивном перемешивании в начале титрования со скоростью ~0,2 мл в минуту, а в конце титрования (когда остается прибавить ~0,5 мл раствора) - со скоростью 0,05 мл в минуту.

Конец титрования определяют либо потенциометрически, либо визуально индикаторным методом в присутствии индикатора - смеси тропеолина 00 с метиленовым синим или нейтрального красного.

Стандартизованный раствор нитрита натрия хранят в темном месте в сосудах из темного стекла с притертыми пробками.

Аналогично готовят, стандартизируют и хранят 0,05 моль/л раствор нитрита натрия.

Стандартизация по перманганату калия. Проводится методом обратного перманганатометрического титрования с иодометрическим окончанием. К точно известному объему стандартного раствора перманганата калия, взятого в избытке по сравнению со стехиометрическим количеством, прибавляют серную кислоту, раствор нагревают до ~40^оС для ускорения протекания реакции, после этого добавляют точно измеренный объем стандартизуемого раствора нитрита натрия и оставляют смесь на 15-20 минут. При этом протекает реакция

Затем к раствору добавляют избыток 10%-ного раствора иодида калия, накрывают колбу стеклом и оставляют смесь на ~5 минут в темном месте. Иодид калия взаимодействует с непрореагировавшим остатком перманганата калия с образованием иода:

Образовавшуюся смесь разбавляют небольшим количеством воды и оттитровывают выделившийся иод стандартным 0,05 моль/л раствором тиосульфата натрия до слабо-желтой окраски раствора (цвет остаточного недотитрованного иода), после чего прибавляют небольшое количество1-2%-ного раствора крахмала - раствор окрашивается в синий цвет. Продолжают титрование до резкого перехода окраски раствора из синей в бесцветную.

Расчет результатов титрования проводят обычным способом, исходя из закона эквивалентов:

Нитрит-ион неустойчив в кислой среде и разлагается с образованием газообразных оксидов азота:



Поэтому при проведении нитритометрического титрования раствор нитрита натрия прибавляют к кислому титруемому раствору; сам же раствор нитрита натрия перед титрованием не подкисляют.

Водные растворы нитрита натрия умеренной концентрации относительно устойчивы. В сильно разбавленных растворах происходит окисление нитрит-иона до нитрат-иона.

Определение конца титрования. Окончание титрования в нитритометрии чаще всего фиксируют электрометрически, проводя потенциометрическое титрование.

При визуальной индикаторной фиксации КТТ в нитритометрии применяются две группы индикаторов: внутренние и внешние.

В качестве внутренних используют редокс-индикаторы, такие как тропеолин 00 (в КТТ окраска из красной переходит в желтую), его смесь с метиленовым синим (окраска малиновой переходит в синюю), нейтральный красный (окраска из красно-фиолетовой переходит в синюю), а также сафранин Ж, метаниловый желтый, кислотный синий 2К.

В качестве внешних индикаторов обычно применяют иодидкрахмальную бумагу, которая представляет собой фильтрованную бумагу, пропитанную раствором крахмала и иодида калия и затем высушенную.

Контроль за ходом титрования ведут, периодически отбирая каплю титруемого раствора и нанося его на иодидкрахмальную бумагу. До достижения ТЭ в титруемом растворе нет окислителя - нитрит-ионов, поэтому при нанесении капли такого раствора на иодидкрахмальную бумагу иодид-ионы не окисляются, иод не образуется и бумага не синеет. После достижения ТЭ прибавление уже одной капли избыточного титранта приводит к появлению в растворе нитрит-ионов, поэтому при нанесении капли такого раствора на иодидкрахмальную бумагу иодид-ионы окисляются нитрит-ионами до иода:



Образующийся йод в присутствии крахмала окрашивает бумагу в синий цвет. Титрование прекращают тогда, когда капля титруемого раствора, отобранная через примерно одну минуту после прибавления титранта к титруемому раствору, сразу же окрашивает бумагу в синий цвет.

Параллельно проводят контрольный опыт для определения избыточного расхода титранта.

Применение нитритометрии. Нитритометрическое титрование применяется для определения как неорганических веществ - олова (II), мышьяка(III), железа(II), гидразина и его производных, так и - особенно- в количественном анализе органических соединений, содержащих первичную или вторичную ароматическую аминогруппу, ароматических нитропроизводных (после предварительного восстановления нитрогруппы до аминогруппы), гидразидов, включая определение таких широко используемых фармацевтических препаратов, как анастезин, дикаин, левомитецин, наганин, новокаин, новокаинамид, норсульфазол, парацетамол, стрептоцид, сульгин, сульфадимезин, сульфацил-натрий, уротропин, этазол и др.

Так, нитритометрическое определение железа(II) основано на реакции

Титрование ведут в присутствии комплексона ЭДТА, который связывает образующееся железо(III) в устойчивый комплексонат, смещая равновесие вправо и тем самым увеличивая полноту протекание реакции.

Чаще всего методом нитритометрического титрования определяют том натрия в соляно-кислой или серо-кислой среде в присутствии бромид-ионов (ускоряют реакцию) образуют соли диазония:

Где R - ароматический радикал.

Окончание титрования часто фиксируют потенциометрическим методом; однако можно использовать и визуальную индикаторную фиксацию КТТ в присутствии как внешнего индикатора (иодидкрахмальная бумага), так и внутренних индикаторов.

4.3 Нитритометрическое определение сульфамидных препаратов

Этот метод рекомендуется НД для количественного определения сульфаниламидов, являющихся первичными ароматическими аминами. Определение основано на способности первичных аминов образовывать в кислой среде диазосоединения:

ФС устанавливает нитритометрию для количественного опреде-ления: сульфаниламида, сульфацетамида натрия, сульфодиметоксина, сульфалена. Титрант - нитрит натрия (0,1 М раствор). Титруют в присутствии KBr при 18-20 єС или при 0-10 єС. KBr катализирует процесс диазотирования, а охлаждение реакционной смеси позволяет избежать потерь азотистой кислоты и предотвратить разложение соли диазония. Точку эквивалентности можно установить: с помощью внутренних индикаторов (тропеолин 00, нейтральный красный, смесь тропеолина 00 с метиленовым синим); внешних индикаторов (йодкрахмальная бумага) или потенциометрически.



4.4 Проведение нитритометрического исследования

Целью данного исследования является изучение метода нитритометрии, использование его для контроля качества сульфамидных лекарственных препаратов.

Рассмотрим задачи проводимого исследования

1. Выбор метода нитритометрии для лекарственных средств сульфамидных препаратов.

2. Проведение фармакопейного метода количественного контроля содержания стрептоцида - сульфамидного препарата в порошках лекарственных средств.

3. Определение доброкачественности порошков лекарственных средств с целью использования их в лабораторном практикуме.

4.4.1 Приготовление и стандартизация раствора нитрита натрия

Рассчитали массу навески нитрита натрия, необходимую для приготовления 200 мл раствора с С(NaNO₂) = 0,1 моль/л.

Молекулярная масса NaNO₂ согласно справочным данным составляет 69 г/мл. Отсюда найдем требуемую массу чистого:

г

Взвесили на технохимических весах рассчитанное количество нитрита натрия. Растворили навеску в воде, хорошо перемешали, перелили в склянку.

Приготовили стандартный раствор сульфаниловой кислоты

Рассчитайте массу навески сульфаниловой кислоты, необходимой для приготовления 100,0 мл раствора с концентрацией C(NH₂C₆H₄SO₃H) = 0,1000 моль/л. М(NH₂C₆H₄SO₃H) = 173,2 г/моль.

г

Взвесили на аналитических весах 1,732 г сульфаниловой кислоты.

Количественно перенесли сульфаниловую кислоту в мерную колбу, добавили 2 г NaHCO₃, растворили в воде, довели раствор до метки дистиллированной водой и хорошо перемешайте. Рассчитайте молярную концентрацию и титр раствора сульфаниловой кислоты.

Стандартизация раствора нитрита натрия.

Сульфаниловая кислота реагирует с нитритом натрия в кислой среде с образованием диазосоединения:

NH₂C₆H₄SO₃H + NaNO₂ + 2HCl + NaCl + 2H₂O

Реакция диазотирования проходит медленно, для ускорения в реакционную смесь добавили KBr.

Ход работы.

1. Заполнили бюретку раствором NaNO₂.

2. В колбу для титрования отмерили пипеткой раствор сульфаниловой кислоты, добавили 10 мл 2 моль/л раствора HCl, 1 г KBr, 4 капли раствора индикатора тропеолина 00 и 2 капли раствора индикатора метиленового синего. Раствор окрасился в красно-фиолетовый цвет.

3. Оттитровали раствор в колбе раствором NaNO₂ до перехода окраски в голубую. Титруйте медленно, в начале титрования примерно по 2 мл в минуту, в конце 0,05 мл в минуту.

4. Повторили титрование не менее трех раз.

5. Рассчитали молярную концентрацию и титр раствора NaNO₂.

При взаимодействии стрептоцида с нитритом натрия идет реакция:



H₂NO₂SC₆H₄NH₂ + NaNO₂ + 2HCl + NaCl + 2H₂O.

В расчетах использовали соотношение, что 1 моль стрептоцида реагирует с 1 моль NaNO₂, следовательно f_экв.(стрептоцида) = 1, М(стрептоцида) = 172,2 г/моль.

Таким образом, получили следующие результаты определения:

Масса навески, взятая для анализа	Молярная масса эквивалента	C	Объем титранта
гр	г/моль	Моль/л	мл
1,38	69	0,0975	V1= 19,6 V2=19,4 V2=19,5 Vcp=19,5

моль/л

Ход работы.

1. На аналитических весах взяли навеску стрептоцида около 0,3 г (с точностью 0,0002 г), количественно перенесли в коническую колбу для титрования, растворили в 20 мл 2 моль/л HCl. Добавьте 60 мл воды, 1 г KBr, 4 капли раствора тропеолина 00 и 2 капли метиленового синего.

2. Заполните бюретку стандартизированным раствором NaNO₂.

3. Оттитровали смесь раствором NaNO₂ до перехода окраски из фиолетовой в голубую. Титрование проводили медленно, вначале около 2 мл/мин, в конце 0,05 мл/мин.

4. Повторили определение несколько раз.

5. Рассчитали массовую долю стрептоцида в препарате.



Масса навески, взятая для анализа	Молярная масса эквивалента	титр	Объем титранта	Фактическое содержание	Требования ФС
гр	г/моль	г/мл	мл	%	%
0,3	172,2	0,002994	V1= 17,9 V2=17,8 Vcp=17,8	99,8	Не менее 99,5

г

г/мл

Вывод: порошок стрептоцид разрешается использовать в лабораторных целях.

Стрептоцид растворимый - линимент 5% (масса лекарственной формы - 30 г) -- густая или студнеобразная лекарственная масса для наружного применения, которая втирается в кожу. Согласно Приказу Минздрава СССР от 27.09.1991 N 276 допускаются отклонения от массы +/- 15%.

Ход работы.

1. На аналитических весах взяли навеску лекарственной формы около 5 г (с точностью 0,1 г), количественно перенесли в коническую колбу для титрования, перемешали, дождавшись полного растворения препарата, растворили в 20 мл 2 моль/л HCl. Добавили 60 мл воды, 1 г KBr, 4 капли раствора тропеолина 00 и 2 капли метиленового синего.

2. Заполните бюретку стандартизированным раствором NaNO₂.

3. Оттитровали смесь раствором NaNO₂ до перехода окраски из фиолетовой в голубую. Титрование проводили медленно, вначале около 2 мл/мин, в конце 0,05 мл/мин.

...