Рыбий жир витаминизированный

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рыбий жир витаминизированный

Рыбий жир витаминизированный представляет собой очищенное жирное масло, полученное из сырой печени Gadus morhua L. и других видов Gadidae, твердые вещества при этом удаляются путем охлаждения и фильтрации.

Прозрачная маслянистая жидкость от светло-желтого до желтого цвета со слабым специфическим, непрогорклым запахом и вкусом.

Мало растворим в спирте 95%, очень легко растворим в эфире и хлороформе.

Подлинность (идентификация).

А. 0,1 г испытуемого образца растворяют в 1 мл хлороформа Р и прибавляют 5 мл раствора сурьмы (III) хлорида Р; появляется нестойкое синее окрашивание (ретинол).

В. 1 каплю испытуемого образца растворяют в 20 каплях хлороформа Р, взбалтывают с 1 каплей кислоты серной Р; появляется сине-фиолетовое окрашивание, переходящее в бурое (липохром).

Испытания на чистоту

Прозрачность (ГФ РБ 2.2.1). 10,0 мл испытуемого образца, предварительно разогретого до температуры (35-40) оС, помещают в прозрачную пробирку, медленно охлаждают при непрерывном перемешивании стеклянным термометром до 0оС и выдерживают в течение 3 ч при этой температуре.

По истечении указанного времени испытуемый образец должен быть прозрачным.

Плотность (ГФ РБ 2.2.5). От 0,917 г/мл до 0,928 г/мл.

Число омыления (ГФ РБ 2.5.6). От 180 до 190.

Йодное число (ГФ РБ 2.5.4). От 150 до 180.

Кислотное число (ГФ РБ 2.5.1). Не более 1,1.

Неомыляемые вещества (ГФ РБ 2.5.7). Не более 1,5%. 3,000 г испытуемого образца помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 20 мл свежеприготовленного 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч при температуре кипения смеси. Затем прибавляют 80 мл воды Р и нагревают в течение 30 мин. Полученный раствор должен быть прозрачным. При необходимости омыление продолжают до получения прозрачного раствора. После охлаждения содержимое колбы количественно переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл и неомыляемые вещества извлекают эфиром Р трижды порциями по 50, 25 и 25 мл. При образовании эмульсии к эфирному раствору прибавляют 5 капель спирта 95% Р.

Объединенные эфирные извлечения помещают в делительную воронку и промывают двумя порциями спирта 50% Р по 25 мл, а затем несколькими порциями воды Р по 40 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (индикатор - раствор фенолфталеина Р1). Промытые эфирные извлечения фильтруют через бумажный фильтр с 8 г натрия сульфата безводного Р в высушенную до постоянной массы колбу. Фильтр с натрия сульфатом промывают 3 раза эфиром Р по 10 мл, фильтрат собирают в ту же колбу.

Эфир отгоняют на роторном испарителе без нагрева. Полученный остаток сушат при температуре (100 - 105) оС до постоянной массы.

Альдегиды. Не более 14,0 мг в 100 г испытуемого образца в пересчете на коричный альдегид. Определение проводят методом абсорбционной спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой областях (ГФ РБ 2.2.25).

Испытуемый раствор А. 1,000 г испытуемого образца помещают в мерную колбу с притертой пробкой вместимостью 25 мл, растворяют в смеси спирта 95% Р и хлороформа Р (1:1) и доводят объем раствора до метки той же смесью растворителей.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора (А1) на фотоэлектроколориметре при длине волны около 360 нм или на спектрофотометре при длине волны 350 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения А используют смесь спирта 95% Р и хлороформа Р ( 1:1 ).

Испытуемый раствор В. 10 мл испытуемого раствора А помещают в колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл свежеприготовленного раствора 5 г/л бензидина Р в смеси спирта 95% Р и кислоты уксусной ледяной Р (1:1), тщательно перемешивают и выдерживают 15 мин.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора (А2) в тех же условиях, что и испытуемый раствор А. В качестве раствора сравнения В используют смесь спирта 95% Р и хлороформа Р (1:1) с 1 мл свежеприготовленного раствора 5 г/л бензидина Р в смеси спирта 95% Р и кислоты уксусной ледяной Р (1:1).

Раствор сравнения. 0,100 г коричного альдегида Р растворяют в 30 мл смеси хлороформа Р и спирта 95% Р (1:1) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора до метки той же смесью.

Срок хранения - 1 сутки.

Построение градуировочного графика. В мерные колбы вместимостью 25 мл с притертыми пробками вносят 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0 и 10,0 мл раствора сравнения. В каждую колбу прибавляют смесь спирта 95% Р и хлороформа Р (1:1) до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Из каждой колбы отбирают пипеткой по 10 мл раствора и помещают его в сухую колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл. Добавляют 1 мл свежеприготовленного раствора 5 г/л бензидина Р в смеси спирта 95% Р и кислоты уксусной ледяной Р (1:1), перемешивают и выдерживают 15 мин.

Измеряют оптическую плотность полученных растворов на фотоэлектроколориметре при длине волны около 360 нм или спектрофотометре при длине волны 350 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения С используют смесь спирта 95% Р и хлороформа Р (1:1).

Калибровочный график строят, откладывая по оси абсцисс количества коричного альдегида в миллилитрах, внесенных в мерные колбы вместимостью 25 мл, а по оси ординат - соответствующие им значения оптической плотности А21,1 (1,1 - поправка на изменение объема после добавления раствора 5 г/л бензидина Р в смеси спирта 95% Р и кислоты уксусной ледяной Р (1:1).

Содержание коричного альдегида (С) в 1 мл испытуемого раствора находят по градуировочному графику по оптической плотности: , где 1,1 - поправка на изменение объема при прибавлении к 10 мл испытуемого раствора 1 мл раствора 5 г/л бензидина Р в смеси спирта 95% Р и кислоты уксусной ледяной Р (1:1).

Содержание альдегидов в препарате в мг % в пересчете на коричный альдегид вычисляют по формуле:

где С - содержание коричного альдегида в 1 мл испытуемого раствора, найденное по калибровочному графику в миллиграммах;

V - объем раствора испытуемого образца, взятого для анализа в мл;

а - навеска испытуемого образца в г.

Ретинол. От 850 до 1150 МЕ в 1,0 г испытуемого образца. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (ГФ РБ 2.2.29).

Испытуемый раствор. 1,0000 г испытуемого образца помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 0,1 г кислоты аскорбиновой Р, 30 мл свежеприготовленного спиртового раствора 100 г/л калия гидроксида Р и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин при температуре кипения смеси. Смесь тотчас охлаждают, количественно переносят с помощью 50 мл воды Р в делительную воронку вместимостью 250 мл и извлекают эфиром Р трижды: один раз 50 мл и дважды - по 30 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают сначала 30 мл воды Р, затем 50 мл раствора 40 г/л калия гидроксида Р и снова водой Р порциями по 40 мл до исчезновения щелочной реакции в последней порции промывных вод (индикатор - раствор фенолфталеина Р1). Промытые эфирные извлечения медленно фильтруют через бумажный фильтр с 8 г натрия сульфата безводного Р в колбу для отгона.

Фильтр с натрия сульфатом безводным Р трижды промывают эфиром Р по 10 мл в ту же колбу. Эфир отгоняют в токе азота на водяной бане при температуре не выше 40 оС.

Остаток растворяют в 0,5 мл спирта 95% Р.

Раствор сравнения. 0,0280 г ФСО ретинола ацетата помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в спирте 95% Р, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 100 мкл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 95% Р до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Активность 1,0 г 100% ретинола ацетата - 2907000 МЕ.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Колонка:

- размеры: длина - 125 мм, диаметр - 2 мм, или аналогичная;

- неподвижная фаза: силикагель октадецилсилильный для хроматографии Р (3 мкм);

- подвижная фаза: спирт 95% Р-вода Р (98:2), дегазированная любым удобным способом;

- скорость подвижной фазы -- 1,5 мл/мин;

- детектирование при длине волны 300 нм;

- температура колонки - от 18 оС до 22оС.

Пригодность хроматографической системы: см. «Эргокальциферол».

Эргокальциферол. От 85 до 115 МЕ в 1,0 г испытуемого образца. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (ГФ РБ 2.2.29).

Испытуемый раствор 1. 40 мкл испытуемого раствора (см. «Ретинол») растворяют в 1 мл спирта 95% Р.

Раствор сравнения 1. 0,0250 г ФСО эргокальциферола помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в спирте 95% Р, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 20 мкл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 95% Р до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Активность 1,0 г эргокальциферола - 40 000 000 МЕ.

По 20 мкл испытуемого раствора 1 и раствора сравнения попеременно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в условиях проведения испытания «Ретинол».

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения и раствор сравнения 1:

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пикам ретинола ацетата и эргокальциферола, должна быть не менее 1000 теоретических тарелок;

- степень разделения пиков, рассчитанная по пикам ретинола ацетата и эргокальциферола, должна быть не менее 10;

- относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площадей пиков ретинола ацетата и эргокальциферола, должно быть не более 3%;

- коэффициент симметрии пика, рассчитанный по пикам ретинола ацетата и эргокальциферола, должен быть не менее 1,5.

Хлорорганические пестициды. Не более 0,05 мг/кг. Определение проводят методом газовой хроматографии (ГФ РБ 2.2.28).

Испытуемый раствор. 5,000 г испытуемого образца растворяют в 50 мл гексана Р, переносят в делительную воронку, добавляют 30 мл кислоты серной Р , осторожно перемешивают и после разделения слоев сливают отработанную кислоту. Очистку повторяют до получения бесцветного кислотного слоя (около 10 раз). Воронку после обработки 4 порцией кислоты серной Р промывают водой Р для удаления осмоленных продуктов на стенках. Полученный раствор промывают двумя порциями по 15 мл раствора 10 г/л натрия гидрокарбоната Р, затем водой Р до нейтральной реакции, фильтруют через натрия сульфат безводный Р, слой осушителя тщательно промывают гексаном Р и отжимают стеклянной пробкой. Объединенные гексановые растворы упаривают на роторном испарителе и добавляют 5 мл гексана Р.

Раствор сравнения А. 0,0200 г ФСО -гексахлорциклогексана (ГХЦГ) и 0,0300 г ФСО или ГСО -ГХЦГ растворяют в 50 мл гексана Р. Полученный раствор разбавляют в 10 раз.

Раствор сравнения Б. 0,0140 г ФСО или ГСО 4,4I - дихлордифенилдихлорэтилена (ДДЭ), 0,0180 г ФСО или ГСО 4,4I-дихлордифенилдихлорметилметана (ДДД), 0,0400 г ФСО или ГСО 4,4I-дихлордифенилтрихлорметилметана (ДДТ) растворяют в 100 мл гексана Р.

Раствор сравнения В. Помещают 2 мл раствора А и 2 мл раствора Б в мерную колбу емкостью 200 мл. Объем раствора доводят до метки гексаном Р.

Полученный раствор в 5 мкл содержит (в нг): -ГХЦГ - 3,0; -ГХЦГ - 2,0; ДДЭ - 7,0; ДДД - 9,0; ДДТ - 20,0.

10 мл раствора сравнения В переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объем раствора до метки гексаном Р (раствор № 1);

35 мл раствора №1 соединяют с 15 мл гексана Р (раствор № 2);

20 мл раствора №1 соединяют с 20 мл гексана Р (раствор № 3);

15 мл раствора №1 соединяют с 35 мл гексана Р (раствор № 4).

Содержание отдельных пестицидов в каждом растворе приведено в Таблице.

Таблица

По 5 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения попеременно хроматографируют на газовом хроматографе с детектором по захвату электронов в следующих условиях:

- колонка газохроматографическая стеклянная длиной 1-2 м и с внутренним диаметром 3 мм, заполненная сорбентом хроматон N-AW DMCS c частицами размером 0,125-0,160 мм, 0,16-0,20 мм или хроматон N-AW HMCS с размером частиц 0,16-0,20 мм;

- жидкая фаза - SE-30 (5%), XE (или OV-17) (5%);

- скорость потока газа-носителя (азот для хроматографии Р) - 80 мл/мин, для поддува детектора - 150 мл/мин;

-температура: колонки 210 оС; испарителя 230 оС; детектора 250 оС;

- рабочая шкала электрометра 1-210-11 А;

- порядок удерживания пиков: -ГХЦГ, -ГХЦГ, ДДЭ, ДДД, ДДТ.

Гексан Р проверяют на хроматографическую чистоту. 100 мл гексана упаривают до 2 мл и 4-6 мкл полученного раствора вводят в хроматограф. На хроматограмме не должно быть посторонних пиков.

Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе (Х, мг/кг) вычисляют по высоте пика ХОП и таблице по формуле:

где h - высота пика испытуемого раствора в сантиметрах;

h1 - высота пика стандартного образца вещества сравнения (СОВС) в сантиметрах;

С - количество пестицидов, введенное в хроматограф раствором СОВС, в нонаграммах (см. Таблица);

V - объем испытуемого раствора в миллилитрах;

V1 - объем испытуемого раствора, взятого на анализ, в микролитрах;

а - навеска испытуемого образца в граммах;

1000 - коэффициент пересчета микролитров в миллилитры;

1000 - коэффициент пересчета граммов в килограммы;

1000000 - коэффициент пересчета нонаграммов в миллиграммы.

Найденное количество пестицидов суммируют.

Показатель преломления (ГФ РБ 2.2.6). От 1,477 до 1,482.

Перекисное число (ГФ РБ 2.5.5). Не более 10,0 ммоль О2/кг. 5,000 г испытуемого образца помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 10 мл хлороформа Р, быстро перемешивают до растворения, прибавляют 15 мл кислоты уксусной ледяной Р и 1 мл раствора 100 г/л калия йодида Р, после чего колбу сразу же закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 1 мин и оставляют на 5 мин в темном месте при температуре 20оС. Затем прибавляют 75 мл воды Р, тщательно перемешивают, прибавляют 5 капель раствора крахмала Р и титруют 0,02 М раствором натрия тиосульфата Р (# 5 г натрия тиосульфата Р и 0,04 г натрия карбоната Р растворяют в воде, свободной от углерода диоксида Р и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл) до появления сине-фиолетового окрашивания. При титровании раствор защищают от прямых солнечных лучей. рыбий жир витаминизированный

Параллельно проводят контрольный опыт.

Тяжелые металлы (ГФ РБ 2.4.8, метод С). Не более 0,00125% (12,5 ppm). При определении из сульфатной золы, полученной из 0,8 г испытуемого образца. Эталон готовят с использованием 1 мл эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) P.

Микробиологическая чистота (ГФ РБ 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Рыбий жир в условиях испытания не обладает антимикробным действием. Категория 3.2.

Хранение. В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15 оС до 25 оС.

Примечание. Реактивы, титрованные и эталонные растворы, приведенные в настоящем нормативном документе, описаны в разделе 4 ГФ РБ.

Размещено на Allbest.ru