Антиоксидантная активность – интегральный показатель характеристики грунтов в водных экосистемах

Размещено на http: //www. allbest. ru/

Кафедра “Водные биоресурсы и аквакультура”. Казанский государственный энергетический университет. Ул. Красносельская, 51. г. Казань, 420066. Республика Татарстан. Россия. Тел.: (843) 5194353.

Отделение «Физико-химическая биология и инновации» Российской академии естественных наук. Москва. Россия.

СанктПетербургский государственный университет. Ул Университетская, 79. г. СанктПетербург, 199034. Россия.

Антиоксидантная активность - интегральный показатель характеристики грунтов в водных экосистемах

Лапин Анатолий Андреевич, Галеева Мария Эдуардовна,

Зеленков Валерий Николаевич, Попов Александр Иванович,

Калайда Марина Львовна и Русаков Алексей Валентинович

Email: lapinanatol@mail.ru

 Аннотация

В данной работе приведены исследования по определению суммарной антиоксидантной активности различных образцов грунтов. В качестве объектов исследования были выбраны гумусовые и погребенные горизонты дерновоподзолистых и агродерновоподзолистых почв (Ярославская область). В результате проведенных исследований установлено, что показатели суммарной антиоксидантной активности водных суспензий почв изменялись в широких пределах, значительную долю в активность вносят адсорбированные на почве вещества, выделяемые водой и структурированная вода. Выявлено, что на величину суммарной антиоксидантной активности водной суспензии, водной вытяжки и твердых частиц исследованных образцов почв влияет гидролитическая кислотность. Показано влияние обменных оснований (в основном катионов кальция и магния) в почвенном поглощающем комплексе на величину суммарной антиоксидантной активности лишь в случае водной суспензии из почв. Между величинами суммарной антиоксидантной активности как водной суспензии, так и водной выятяжки из исследованных почв и содержанием углерода органических соединений и азота в этих же почвах были выявлены прямые существенные тесные взаимосвязи.

Ключевые слова: суммарная антиоксидантная активность, почва.

Введение

Современный этап развития общества характеризуется интенсивным вмешательством человека в природные процессы, что приводит к нарушению естественного функционирования экосистем. Оценить антропогенное воздействие можно по многим показателям, в том числе и по реакции почвенных микроорганизмов. Это обусловлено их обилием, сложной структурой образуемых сообществ, ролью и значением в почвообразовательных процессах и высокой чувствительностью к различным факторам, как локально действующим экологическим, имеющим место в природе, так и антропогенным. Изучение изменения равновесного состояния в сообществах почвенных микроорганизмов - актуальная проблема современности. В этом плане важны разработки критериев, по которым можно было бы оценить степень воздействия антропогенных факторов. В этих условиях разрушение микробиоценозов можно считать индикатором изменения структуры экосистемы в целом [1].

Суммарную мутагенную активность донных отложений водных экосистем определяют биологическим тестированием с использованием тестобъектов [2], к сожалению, в настоящее время такие биологические методы оценки состояния грунтов используются все еще недостаточно, хотя они незаменимы там, где требуется интегральная оценка состояния экосистем.

Многие донные животные питаются, пропуская через себя грунт, и поэтому важное значение имеет нахождение в нем различных органических веществ, которые образуются в результате попадания в грунт остатков организмов на тех или иных стадиях разложения. Данные отложения тесно взаимодействуют с водой, из грунта в воду непрерывно поступают различные соли, газы, твердые компоненты, навстречу этому потоку идет другой, несущий в донные отложения различные минеральные и органические вещества из толщи воды и из почв, окружающих водоемы. Процессы взаимодействия между ложем водоема, почвами и водной массой имеют большое значение для жизни гидробионтов.

По ГОСТ 25100 почва представляет собой поверхностный слой раздельнозернистого грунта без жестких структурных связей, образованный под влиянием биогенного и атмосферного факторов [3]. Почвенное органическое вещество (ПОВ) представляет собой сложный комплекс, состоящий из специфических (гуминовых) веществ и индивидуальных органических соединений, а также продуктов их взаимодействия между собой и с минеральной частью почвы (рисунок). Обычно оценка качественного состава ПОВ базируется на определении так называемых гуминовых кислот и фульвокислот [4]. По нашему мнению, система оценки качественного состава ПОВ, использующая данные группового и фракционного состава гумуса, - не удовлетворительна, поскольку она слабо связана с плодородием почв и не учитывает поведение ПОВ.

Рисунок 1 Органическое вещество почв

Как следует из анализа научной литературы [510], отношение стабильных и лабильных частей ПОВ - важная характеристика почв. Как известно [6, 11], разнообразные компоненты ПОВ и различные части органических макромолекул имеют неодинаковую устойчивость к действию экзоферментов почвенной биоты.

Относительно трудно (стабильные) и легко (лабильные) разлагаемые органические соединения выполняют разную роль в экологическом функционировании почв и в проявлении некоторых свойств почв.

Так, легко окисляемые органические соединения активно принимают участие в трофическом цикле почвенной биоты и сосудистых зеленых растений как резервный источник веществ и энергии. Эта часть ПОВ связана с биохимическими свойствами почвы. В свою очередь, трудно окисляемый органический материал, главным образом влияет на физические и физико-химические свойства почвы. Устойчивость компонентов ПОВ к окислению связана не только с химическим составом, но и пространственной трехмерной структурой макромолекул, в том числе нативных ГВ [12].

Для оценки отношения стабильных и лабильных частей ПОВ существует множество методов [10, 1316]. Один из самых распространенных - дифференциальный термический анализ (термическое разложение). Однако данный метод довольно-таки дорогой и сложный.

Другие методы основаны на химическом разложении органического вещества каустобиолитов, в том числе и ПОВ, разнообразными окислителями [1721].

Для определения интегральной оценки состояния экосистем можно использовать параметр общей окисляемости почв, для определения которого применяется метод перманганатометрии, с его помощью можно определять и суммарную антиокислительную активность биологически активных веществ, недостатком данного метода является титрование перманганатом калия в исследуемых образцах веществ, не обладающих восстановительным потенциалом, следовательно, не участвующих в ингибировании активных радикалов [22, 23].

Для решения различных теоретических и практических задач, связанных с поиском биотехнологически ценных штаммов - продуцентов физиологически активных веществ, для сельского и лесного хозяйства, их селекции и конструирования, разрабатываются методы изучения антиоксидантной активности почв из прикорневой зоны растений.

Ранее нами были разработаны методы определения суммарного содержания антиоксидантов в воде [24], растениях [25], пищевых продуктах [26] и напитках [27], биологических жидкостях человека [28] и животных [29] кулонометрическим методом с помощью электрогенерированных радикалов галогенов. Впервые было показано, что их содержание в грунтах, зависит от многих факторов, в том числе, от внесения различных минеральных и органических удобрений [30]. При этом было разработано два метода анализа, при непосредственном введении образцов почв в измерительную ячейку кулонометра и анализом их водных вытяжек.

Цель работы - проведение исследований суммарной антиоксидантной активности образцов почв как интегрального показателя характеристики грунтов, в том числе в водных экосистемах.

1. Экспериментальная часть

В качестве объектов исследования были выбраны гумусовые и погребенные горизонты дерновоподзолистых и агродерновоподзолистых почв (Ярославская область). Все почвы были легкосуглинистыми, развитыми на покровном суглинке. В качестве целинной была выбрана дерновоподзолистая почва (разрез 42), сформированная под еловоберезовым лесом. Из нее были отобраны два образца почв: один - из гумусового, а второй - из гумусовоэлювиального горизонта. Ряд агродерновоподзолистых почв был подобран таким образом, чтобы содержание углерода органических соединений в пахотных горизонтах было различным (разрезы 66, 30 и 34, соответственно). Кроме того, из агродерновоподзолистой почвы (разрез 66) был отобран образец из погребенного гумусового горизонта.

Характеристика выбранных объектов приведена в табл. 1. Тип гумуса (СГК/СФК) во всех гуммусовых горизонтах был гуматнофульватным, а гумусовоэлювиальном горизонте - фульватным. Содержание негидролизуемого остатка во всех случаях было равновеликим.

грунт гидролитический адсорбированный углерод

Табл. 1 Характеристика гумусовых и погребенных горизонтов дерновоподзолистых и агродерновоподзолистых почв

Физико-химическая характеристика почв проводилась с помощью общепринятых методов [3133]. Групповой и фракционный анализ состава гумуса осуществлялся в соответствии с прописью Пономаревой В.В. и Плотниковой Т.А. [34]. Определение углерода органических соединений в образцах почв и в аликвотах растворов гумусовых кислот производилось методом Тюрина И.В. с колориметрическим окончанием [35, 36].

Для оценки суммарной антиоксидантной активности (САОА) образцов грунтов использовался кулонометрический метод анализа с помощью электрогенерированных радикалов брома на серийном кулонометре “Эксперт006антиоксиданты” НПК “Эконикс-Эксперт” г. Москва по сертифицированной методике в пересчете на стандартный образец рутин [37], ошибка определения САОА не превышала 3% отн.

Для оценки САОА просеянную пробу почвы с фракцией менее 0.4 мм и массой 10 г взвешивали с погрешностью не более 0.001 г в стеклянном стакане емкостью 100 см3.

Дозировали к навеске почвы 50 мл дистиллированной воды и перемешивали содержимое в течение 3 минут с помощью магнитной мешалки, затем анализировали полученную суспензию, стабилизирую ее постоянным перемешиванием.

Для анализа использовали и водную вытяжку, полученную из суспензии центрифугированием в течение 15 минут при 3000 об./мин. САОА твердых частиц почв определяли как разницу активности суспензии и водной вытяжки. Показатели САОА определяли в пересчете на стандартный образец рутин в мг на 100 г абсолютно сухой почвы (АСП). Влажность почв определяли на влагомере МХ50 A&D Company, Limited (Япония), программное обеспечение которого позволяло определять оптимальную температуру их сушки - 110 °С.

Для изучения взаимосвязи значений САОА с параметрами, приведенными в табл. 1, применялись методы вариационной статистической обработки результатов [38, 39], в частности корреляционный и регрессионный анализы. Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием компьютерных программ Microsoft Excel и Statistica 6.0 [40, 41].

2. Результаты и их обсуждение

В результате проведенных исследований установлено, что при обработке водой образцов грунтов (почв) показатели САОА водных суспензий изменяются в широких пределах, значительную долю в активность вносят адсорбированные на них вещества (табл. 2).

Табл. 2 Суммарная антиоксидантная активность образцов почв

Зависимости САОА твердых частиц от водной вытяжки

У1= 0.395Х1 + 7.045

, твердых частиц от водной суспенции

У2= 0.293Х2 + 4.757

и водной вытяжки от суспенции

У3= 0.707Х3 - 4.757

исследованных образцов почв носили линейный характер с величинами достоверности аппроксимации (R2) 0.826; 0.918; 0.925, соответственно.

Для образцов почв с влажностью ниже 3% масс. были найдены линейные корреляции твердых частиц

У4= 4.980Х4 + 5.795

, водных вытяжек

У5= 11.741Х5 - 1.995

и водных суспензий

У6= 16.7742Х6 + 3.855

от их влажности (диапазон R2 составлял 0.872; 0.887; 0.921, соответственно). Этот факт указывал на то, что на антиоксидантную активность значительное влияние оказывала адсорбированная на почвенных частицах структурированная вода, как было показано нами ранее на образцах кремнезема, пектина и хитозана [42].

Между величинами САОА водной суспензии образцов исследованных почв и их физикохимическими и химическими свойствами (Hг, V, Собщ., Nобщ.) были выявлены тесные существенные взаимосвязи (табл. 3).

Табл. 3 Изменение суммарной антиоксидантной активности водной суспензии от параметров образцов почв

Примечания: * - для образцов почв с влажностью ниже 3 % масс; - здесь и далее приведены буквенные обозначения физико-химических и химических параметров исследованных почв (см.: табл. 1).

При этом, корреляционные зависимости между величинами САОА и значениями гидролитической кислотности, а также степенью насыщенности почвенного поглощающего комплекса основаниями описывались квадратичными регрессионными уравнениями. В двух других случаях (между величиинами САОА и Собщ., а также Nобщ.) взаимосвязь была прямолинейной (табл. 3).

Аналогичные корреляционные и регрессионные зависимости были обнаружены между величинами САОА водной вытяжки из почв и значениями гидролитической кислотности, содержанием углерода органических соединений и азота (табл. 4).

С помощью расчетов, входящих в теорию метода “Множественной корреляции” и программы Microsoft Excel на основе полученных данных было установлено уравнения регрессии для САОА водной суспензии (R2 = 0.997, ошибка среднего значения = 0.411):

САОА= 10.181Х1+1.176Х2 - 235.654Х4.

Табл. 4 Изменение суммарной антиоксидантной активности водной вытяжки от параметров образцов почв

В свою очередь, между величинами САОА твердых частиц образцов почв была выявлена только одна существенная тесная взаимосвязь - со значениями гидролитической кислотности (R2 = 0.994, ошибка среднего значения = 0.198), которая описывалась следующим квадратичным уравнением:

САОА = 0.133х12 - 1.902х1 + 17.584.

Между характеристиками биохимического состава изученных почв (табл. 1) существенных зависимостей установить не удалось.

Гидролитическая кислотность почв - это такая кислотность почв, которая обуславливается ионами водорода и алюминия, находящихся в обменном (частично в необменном) состоянии в почвенном поглощающем комплексе.

Этот вид почвенной кислотности определяется при обработке почвы только растворами щелочей или гидролитически щелочных солей, например, ацетата натрия. Как известно [43], окислительно-восстановительный потенциал почв и почвенная кислотность функционально связаны. По всей видимости, именно ионы водорода и алюминия, способные к обменным реакциям, в большей степени повлияли на величину САОА водной суспензии, водной вытяжки и твёрдых частиц исследованных образцов почв.

На долю ГВ приходится до 8090% суммарного содержания органической составляющей минеральных почв [4345]. Гуминовые вещества, как главный компонент почвенного органического вещества - высокомолекулярные органические азотсодержащие рандомизованные редоксгетерополимеры арилгликопротеидный природы [46].

Разнообразные функциональные группы (кислород и азотсодержащие) обусловливают участие ГВ в химических реакциях окислениявосстановления. Количество водорастворимой части, обычно пропорционально содержанию органического материала в почвах [4445].

Поэтому между величинами САОА водной суспензии и водной выятяжки и содержанием углерода органических соединений и азота в почвах были выявлены прямые регрессионные зависимости.

Выводы

1. Показатели суммарной антиоксидантной активности водных суспензий почв изменяются в широких пределах, значительную долю в активность вносят адсорбированные на почве вещества, проявляющие антиоксидантную активность, экстрагируемые водой и структурированная вода.

2. На величину суммарной антиоксидантной активности водных суспензии, водных вытяжек и твердых частиц исследованных образцов почв влияет гидролитическая кислотность, во всех этих случаях регрессионная зависимость является квадратичной.

3. Наличие в почвенном поглощающем комплексе обменных оснований (в основном катионов кальция и магния) оказывает влияние на величину суммарной антиоксидантной активности лишь в случае водной суспензии образцов почв.

4. Между величинами суммарной антиоксидантной активности, как водной суспензии, так и водной выятяжки из исследованных образцов почв и содержанием углерода органических соединений и азота в этих же образцах были выявлены прямые существенные тесные взаимосвязи.

5. С помощью расчетов, входящих в теорию метода “Множественной корреляции” было установлено уравнения регрессии для суммарной антиоксидантной активности водной суспензии гидролитической кислотностью, степенью насыщенности основаниями и содержанием общего азота в образцах почв.

Литература

1. Назарько М.Д. Изменение состава почвенных микромицетов при интенсивном антропогенном воздействии в северных районах Кубани. Изв. вузов. Пищевая технология. 2007. №4. С.110111.

2. Голинская Л.В. Экологогенотоксический мониторинг состояния водных экосистем на территорииОренбургской области: Дис. … канд. биол. наук. ГОУ ВПО Оренбургская государственная академия министерства здравоохранения и социального развития РФ. 2011. 209с.

3. ГОСТ 2510095. Грунты. Классификация. М.: Издво Стандартов. 2002. 35с.

4. Гришина Л.А., Орлов Д.С. Система показателей гумусного состояния почв. Проблемы почвоведения. Советские почвоведы к 6 Междунар. конгрессу почвоведов в Канаде, 1978. М.: Издво Наука. 1978. С.4247.

5. Соколовский А.Н. Из области явлений, связанных с коллоидной частью почвы. Известия Петровск. с.х. акад. 1919. Вып.14. С.85225.

6. Кононова М.М. Органическое вещество почвы, его природа, свойства и методы изучения. М.: Издво АН СССР. 1963. 314с.

7. Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации. Л.: Издво Наука. 1980. 287с.

8. A.E. Johnston. Soil Fertility and Soil Organic Matter. Advances in Soil Organic Matter Research: The Impact on Agriculture and Environment. Ed. W.S. Wilson. Advisory Eds T.R.G. Gray, D.J. Greenslade, R.M. Harrison and M.H.B. Hayes. Cambridge: The Royal Society of Chemistry. 1991. P.299314.

9. L. Beyer, C. Wachendorf, C. Koebbemann. A simple wet chemical extraction procedure to characterize soil organic matter (SOM). I. Application and recovery rate. Commun. Soil Sci. Anal. 1993. Vol.24. No.1314. P.16451663.

10. R.S. Swift. Organic Matter Characterization. Methods of Soil Analysis. Part 3. Chemical Methods/ SSSA Book Series no. 5. 1996. P.10111069.

11. D.S. Jenkinson, J.H. Rayner. The turnover of soil organic matter in some of the Rothamsted classical experiments. Soil sci. 1977. Vol.123. No.5. P.298305.

12. H.R. Schulten, M. Schnitzer. Chemical model structures for soil organic matter and soils. Soil Sci. 1997. Vol.162. No.2. P.115130.

13. M. Schnitzer, S.U. Khan. Humus Substances: Chemistry and Reactions. Soil Organic Matter. Development of Soil Science (No 8). Ottawa. 1978. P.164.

14. Лыков А.М., Черников В.А., Боинчан Б.П. Оценка гумуса по характеристике его лабильной части. Известия Тимирязевск. с.х. акад. 1981. Вып.5. С.6570.

15. Пупков А.М. Окультуривание почв Нечерноземной зоны РСФСР. Л.: Издво Наука. 1989. 20с.

16. L. Beyer. The chemical composition of soil organic matter in classical humic compound fractions and in bulk samples a rewiew. Z. Pflanzenernhr. Bodenk. 1996. Vol.159. P.527539.

17. M. Djuricic, R.C. Murphy, D. Vitorovic, K. Biekmann. Organic acids obtained by alkaline permanganate oxidation of kerogen from the Green River (Colorado) shale. Geochimica et Cosmochimica Acta. 1971. Vol.35. P.12011207.

18. J.F. Dormaar. Alkaline cupric oxide oxidation of roots and alkalineextractable organic matter of chernozemic soils. Can. J. Soil Sci. 1979. Vol.59. No.11. P.2735.

19. T. Kiyoshi, K. Shozo. Shemical studies on soil humic acids. V. Degradation of humic acids with potassium hydroxide. Soil Sci. and Plant Nutr. 1979. Vol.25. No.2. P.183195.

20. W. Loginow, W. Wisniewski. Studies on humus fractioning based on its susceptibility to oxidizing agents. Pol. Ecol. Stud. 1979. Vol.2. No.1. P.4351.

21. J. Rullktter, W. Michaelis. The structure of kerogen and related materials. Areview of recent progress and future trends. Organic geochemistry. 1990. Vol.16. No.46. P.829852.

22. Нургалиева Д.А. Методика проведения перманганатометрических определений [Докл. Международная конференция по аналитической химии, посвященная 100летию со дня рождения академика НАН РК М.Т. Козловского, Алматы, 2931 окт., 2003]. Вестник Каз НУ. Сер. Хим. 2003. С.278282.

23. Пахомов В.П., Яшин Я.И., Яшин А.Я., Багирова В.Л., Арзамаева А.П., Кукес В.Г., Ших Е.В. Способ определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных соединений. Патент РФ № 2238554. G 01N 33/15, G 01N 27/26. Приоритет от 25.07. 2003г.

24. Галеева М.Э., Лапин А.А., Чугунов Ю.В., Калайда М.Л. Антиоксидантная активность - перспективный интегральный показатель для определения индекса качества вод. Бутлеровские сообщения. 2012. Т.29. №3. С.110119.

25. Лапин А.А., Музычук А.С., Зеленков В.Н. Антиоксидантный статус перспективных сортов и гибридов топинамбура. Бутлеровские сообщения. 2010. Т.20. №4. С.7985.

26. Лапин А.А., Яровой С.А., Полянский К.К. Хлебобулочные изделия для функционального питания и их антиоксидантные свойства. Бутлеровские сообщения. 2010. Т.21. №9. С.7887.

27. Горбунова Е.В., Герасимов М.К., Лапин А.А. Прогнозирование суммарной антиоксидантной активности красных вин на основе физикохимических показателей. Бутлеровские сообщения. 2010. Т.19. №1. С.6165.

28. Лапин А.А., Виха Г.В. Показатель суммарной антиоксидантной активности ротовой жидкости неинвазивный метод определения антиоксидантного статуса организма. Бутлеровские сообщения. 2010. Т.22. №12. С.3845.

29. Балакирева Ю.В., Ахмадуллина Ф. Ю., Лопухов Л. В. Влияние промышленных режимов пастеризации на интегральную антиоксидантную и витаминную активности коровьего молока.

30. Бутлеровские сообщения. 2010. Т.19. №2. С.1925.

31. Лапин А.А., Ковылин В.М., Васючков И.Ю., Борисов В.А., Зеленков В.Н. Антиоксидантная активность почвы. Материалы IY Российской научнопрактической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создание функциональных продуктов». М.: Издво РАЕН. 2007. С.3334.

32. ГОСТ 2648385. Почвы. Приготовление солевой вытяжки и определение ее рН по методу ЦИНАО. М.: Издво Стандартов. 1985. 6с.

33. Аринушкина Е.В. Руководство по химическому анализу почв. М.: Издво Моск. унта. 1970. 487с.

34. Александрова Л.Н., Найденова О.А. Лабораторнопрактические занятия по почвоведению. Учебники и учеб. пособия для высш. учеб. Заведений. 4е изде, перераб. и доп. Л.: Издво Агропромиздат, Ленингр. отдние. 1986. 295с.

35. Пономарева В.В., Плотникова Т.А. Гумус и почвообразование (методы и результаты изучения). Л.: Наука. 1980. 222с.

36. Цыпленков В.П. Быстрый колориметрический метод определения содержания гумуса в почвах и почвенных растворах. Почвоведение. 1963. №10. С.9195.

37. Цыпленков В.П., Попов А.И. Колориметрическое определение органического углерода в растворах. Вестник Ленингр. унта. Серия биол. 1979. Вып.4. №21. С.112113.

38. Лапин А.А. МВИ0014453805407. Суммарная антиоксидантная активность. Методика выполнения измерений на кулонометрическом анализаторе. ООО Концерн «Отечественные инновационные технологии», г. Жердевка, Тамбовской обл. 2007. 6с.

39. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. Пособие для биологич. спец. вузов. 3е изд., перераб. и доп. М.: Высш. Школа. 1980. 293с.

40. Боровиков В.П., Боровиков И.П. Statistica Статистический анализ и обработка данных в среде Windows М.: Информационноиздательский дом «Филинъ». 1997. 608с.

41. Берк К., Кэйри П. Анализ данных с помощью Microsoft Excel.: Пер. с англ. М.: Издво Издательский дом “Вильямс”. 2005. 560с.

42. Бараз В.Р. Корреляционнорегрессионный анализ связи показателей коммерческой деятельности с использованием программы Excel: учебное пособие. Екатеринбург.: Издво ГОУ ВПО «УГТУУПИ». 2005. 102с.

43. Лапин А.А., Зеленков В.Н., Потапов В.В., Албулов А.И. Антиоксидантная активность структурированной воды на биологически активных сорбентах. Тезисы докладов VIII Международной конференции «Биоантиоксидант» (г. Москва 46 октября 2010 г.). М.: Издво РУДН. 2010. С.249250.

44. Орлов Д.С. Химия почв: Учебник. М.: Издво Моск. унта. 1985. 376с.

45. Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации. Л.: Наука. 1980. 287с.

46. Кононова М.М. Органическое вещество почвы, его природа, свойства и методы изучения. М.: Издво АН СССР. 1963. 314с.

47. Попов А.И., Ермаков Е.И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образование. СПб.: Издво С. Петерб. унта. 2004. 248с.

Размещено на Allbest.ru