Разработка методики ВЭЖХ для оценки содержания действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой

Полная исследовательская публикация ____________ Грецкий С.В., Павлова Л.А., Коваленко А.Е.,

Кардонский Д.А.и Еганов А.А.

Размещено на http://www.allbest.ru//

86 ______________ http://butlerov.com/ ______________ ©--Butlerov Communications. 2012. Vol.32. No.11. P.85-90.

Размещено на http://www.allbest.ru//

Разработка методики ВЭЖХ для оценки содержания действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой

Грецкий Сергей Валерьевич

Аннотация

В статье освещаются вопросы по изучению действующих веществ родиолы розовой и их фармакологических свойств. Описывается методика получения сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой. Ключевым аспектом исследования является разработка удобного для практического применения метода определения действующих веществ в сухом экстракте корней и корневищ родиолы розовой в условиях градиентной ВЭЖХ.

Введение

В современном обществе традиционно большое внимание уделяется спорту. Одной из важнейшей проблемой как профессионального, так и массового спорта является поиск эффек-тивных и безопасных, даже при регулярном длительном приеме лекарственных средств, спо-собствующих ускорению восстановительных процессов после физической нагрузки, сниже-нию негативных последствий тренировочного стресса, а также повышающих качество жизни спортсменов. Особое место в решении этой проблемы занимают фитоадаптогены [6].

Одним из растений, обладающих адаптогенными и актопротекторными свойствами является родиола розовая (Rodiola Rosae). Это многолетнее травянистое растение семейства толстянковых (Crassulaceae). В качестве лекарственного сырья используются корневища с корнями родиолы розовой [2, 4].

Подземные органы родиолы содержат фенольный спирт тирозол и его гликозид салид-розид; флавоноид трицин и его гликозиды; флавонол-гликозиды (астрегалин, кемпферол), дубильные вещества (до 20%), галловую кислоту, антрахинон, эфирное масло, микроэлементы. Основными биологически активные веществами родиолы розовой являются тирозол, салид-розид и розавин [2, 4, 7].

Все основные соединения, входящие в состав корневищ с корнями родиолы розовой, проявляют высокую биологическую активность. Так, например, П-тирозол корректирует нарушения ионного и окислительно-восстановительного клеточного гомеостаза. Механизм его защитного действия связан с кальций- и НАДФ-зависимыми процессами, лежащими в основе миелотоксических эффектов ксенобиотиков, которые являются индукторами окислительного стресса. Салидрозид родиолы розовой обладает тонизирующим действием. Фенилпропаноид розавин - выраженной анксиолитической активностью. Флавоноиды родиолы розовой обла-дают адаптогенными и иммуностимулирующими свойствами, повышают работоспособность и сопротивляемость организма неблагоприятным воздействиям [1, 7].

Препараты из родиолы розовой повышают активность сократительных белков актина и миозина. Улучшают кровоснабжение мозга и мышц, снижают накопление в мышцах молочной кислоты за счет более раннего переключения с углеводного на липидный источник энергии, увеличивают синтез белка. Проявляют стимулирующее действие на умственную работоспособность человека, несколько улучшают память и внимание.

Экспериментальная часть

Учитывая высокую биологическую активность родиолы розовой возникла необходимость получения и стандартизации сухого экстракта родиолы розовой [3, 8], как основы для создания БАД и спортивного питания для спортсменов и лиц, занимающихся спортом.

На начальном этапе исследования была отработана методика получения сухого экстракта родиолы розовой. Для достижения поставленной задачи, сырье экстрагировали 40% этанолом. Полученные извлечения упаривали под вакуумом с использованием роторного испарителя Heidolph Laborota 4010 digital. Упаривание извлечения проводили до получения продукта с содержанием влаги 25-35%. Следующей стадией технологического процесса было получение сухого экстракта с исполь-зованием сублимационной сушилки Heotrap CT 60-e.

Сухой экстракт корневищ и корней родиолы розовой представляет собой аморфный, гигро-скопичный порошок светло-коричневого цвета с тонким, специфическим запахом.

Далее был разработан удобный для практического применения метод анализа сухого экстракта родиолы розовой, содержащего рутин, кверцетин, полисахариды, хлорогеновую, аскорбиновую кис-лоты, дубильные вещества, а также салидрозид, тирозол, розавин, розарин, розин.

Результаты и их обсуждение

В фармакопеях (ГФ XII, BP, USP, EP) и в литературных источниках описаны методики определения перечисленных действующих веществ.

Для аскорбиновой кислоты описаны методы определения: титрование, спектрофотометрия.

Для определения дубильных веществ в лекарственных формах родиолы розовой используют методы титриметрии. Определение производных тирозола проводят методом УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ.

Разработку методики определения действующих веществ в родиоле розовой проводили с использованием стандартов фирмы Sigma. При подборе подвижной фазы для вышеуказанных веществ, на основе их растворимости, было установлено, что рутин необходимо определять отдельно, так как он не растворяется в подвижной фазе с ацетонитрилом. Поскольку кверцетин, кемпферол, ряд других флавоноидов, существенно отличаются по гидрофобности, их совместный анализ возможен только в условиях градиентной ВЭЖХ.

Далее в составе каждой группы анализировались индивидуальные соединения на предмет возможности их детектирования на УФ-детекторе. Следующим этапом был подбор максимума поглощения (длины волны), обеспечивающего оптимальную чувствительность.

Проводился подбор градиента (соотношение растворителей в разные моменты времени) для наилучшего разделения анализируемых компонентов.

Подобрав условия анализа, переходили к реальным экстрактам, содержащим наряду с анализируемыми веществами целый ряд соэкстрактивных веществ, в большинстве случаев мешающих определению целевых компонентов. На данном этапе, изменяя условия (градиент, температура колонки, скорость потока растворителей) добивались полного разделения компонентов сложной матрицы.

Количественное определение аскор-биновой кислоты проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФ-де-тектором 2487 при следующих условиях: Колонка Symmetry C-18, 4.6x150 mm, 5 µm. Подвижная фаза:

А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде;

В - ацетонитрил.

Калибровку проводили по стандарту анализируемого вещества. Был приготовлен стандартный раствор с концентрациями: аскорбиновая кислота 10.0 мг в 10 мл воды. Для построения калибровочного графика анализируемого вещества последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.

Количественное определение хлороге-новой кислоты и кверцетина проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФ-детектором 2487 при следующих условиях:

Колонка Symmetry C-18, 4.6x150 mm, 5µm. Подвижная фаза:

А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде;

В - ацетонитрил.

Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлены стандартные растворы с концентрациями: хлорогеновой кислота 2.8 мг, кверцетин 2.8 мг в 10 мл смеси (50:50) мобильной фазы А и В. Для построения калибровочных графиков анализируемых веществ последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.

Количественное определение рутина проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФ-детектором 2487 при следующих условиях:

Колонка Symmetry C-18, 4.6x150 mm, 5µm

Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - метанол.

Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлен стандартный раствор с концентрацией рутина 7.1 мг в 10 мл подвижной фазы В. Для построения калибровочных графиков анализируемого вещества последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора. Количественное определение анализируемого вещества осуществлялось с использованием данных калибровок стандартного раствора.

Количественное определение розарина, розавина, розина, салидрозида и тирозола в экстракте родиолы проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФ-детектором 2487 при следующих условиях:

Колонка Symmetry C-18, 4.6x150 mm, 5µm

Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - метанол.

Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлены стандартные растворы розарина, розавина, розина, салидрозида и тирозола с концентрацией каждого компонента 100 мкг/мл мобильной фазы В. Для построения калибровочных графиков анализируемых веществ последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.

Результаты анализа сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой приведены в табл. 1, 2.

Табл. 1. Содержание основных биологически-активных веществ в сухом экстракте родиолы розовой

хроматография родиола экстракт действующий

Табл. 2. Содержание розавина, розарина, розина, салидрозида и тирозола в экстракте родиолы розовой

Таким образом, получен сухой экстракт родиолы розовой и разработан метод анализа ВЭЖХ, позволяющий одновременно определять несколько действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой.

Выводы

Разработан удобный для практического применения метод анализа сухого экстракта родиолы розовой, содержащего рутин, кверцетин, полисахариды, хлорогеновую, аскорбиновую кислоты, дубильные вещества, а также салидрозид, тирозол, розавин, розарин, розин.

Литература

Барнаулов О.Д., Лимаренко А.Ю., Куркин В.А. и др. Сравнительная оценка биологической активности соединений, выделенных из видов Rhodiola L. Химико-фармацевтический журнал. 1986. №9. С.1107-1112.

Крендаль Ф.П., Козин С.В., Левина Л.В. Сравнительная характеристика препаратов из группы фитоадаптогенов - женьшеня, элеутерококка и родиолы розовой. М.: Профиль. 2007. 392с.

Быков В.А., Запесочная Г.Г., Куркин В.А. Родиола розовая (Rhodiola rosea L.), традиционные и биотехнологические аспекты получения лекарственных средств. Хим.- фармац. ж. 1999. №1. С.28-39.

Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. М.: Медицина. 1984. 464с.

Государственная фармакопея российской федерации. «Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения». 2008. 704с.

Адамчук Л.В. Адаптогенный эффект препаратов золотого корня при длительноых мышечных нагрузках. Материалы XVI Всесоюзной конференции по спортивной медицине. 1969. С.115-116.

Аксенова Р.А. К фармакологии родиолозида. Дисс. …канд. биол. наук. Томск. 1968. С.90-93.

Ежков В.Н. Исследование по разработке и стандартизации препаратов на основе корневищ родиолы розовой. Автореф. дис. … канд. фармац. наук. М. 2000. 23с.

Размещено на Allbest.ru