Определение амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Размещено на http://www.allbest.ru/

Определение амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Введение

Разработана методика качественного и количественного анализа амлодипина с использованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены оптимальные хроматографические условия проведения анализа. Методика позволяет осуществлять определение подлинности препарата «Амлодипин».

Одной их основных практических задач современной фармакологии и фармации является создание высокоэффективных лекарственных препаратов, поэтому так важна проблема контроля, связанная с точной оценкой качественного и количественного состава препарата.

В настоящее время большинство фармацевтических фирм для контроля качества своей продукции предпочитают использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), так как она идеально подходит для проверки чистоты и качества лекарственных препаратов, большинство которых являются термически неустойчивыми или обладают низкой летучестью, что затрудняет использование газожидкостной хроматографии [1]. ВЭЖХ включена в отечественную фармакопею [2] и ряд зарубежных фармакопей [3, 4].

Однако в литературе практически нет упоминаний о применении метода ВЭЖХ для анализа лекарственных препаратов, используемых для лечения таких часто встречающихся заболеваний сердечно-сосудистой системы, как артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца.

К лекарственным препаратам, используемым для лечения таких заболеваний, относится амлодипин [5].

Рис. 1. Структурная формула амлопидина

лекарственный хроматография фармация

Амлодипин - лекарственный препарат, относящийся к группе веществ, оказывающих антиан-гинальное, антигипертензивное действие. При стенокардии уменьшает выраженность ишемии миокарда, снижает общее периферические сосудистое сопротивление, уменьшает преднагрузку на сердце, снижает потребность миокарда в кислороде[5].

Структурная формула амлодипина (2-[(2-амино-этокси)метил]-4-(2-хлорфенил)-1,4-дигидро-6-метил-3,5-пиридин дикарбоновой кислоты 3-этил 5-метило-вый эфир в виде безилата и малеата) представлена на рис. 1.

Целью настоящей работы являлось разработка ВЭЖХ-методики определения амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах.

1.Экспериментальная часть

Анализы проводили на жидкостном хроматографе Милихром-1, модифицированном системой подачи подвижной фазы с помощью шприцевого насоса. Детектирование осуществляли УФ-спектрофотометрическим детектором при длине волны 236 нм. Использовали колонку Ultrasep ES 100RP18 (120х4мм), заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц 4 мкм. В качестве элюентов использовали смесь буферного раствора с рН 2.5 и ацетонитрила различного состава. Скорость потока элюента составляла 100 мкл/мин.

Объем вводимой пробы - 40 мкл. В работе использовали ацетонитрил для хроматографии ос.ч. фирмы Криохром (Россия). Исследовали амлопидин, содержащийся в лекарственных препаратах, выпускающихся фирмами «Канонфарм» и «Реплекфарм». Используемые для анализа реактивы имели чистоту не ниже «ч.д.а». Для приготовления всех рабочих растворов и элюента использовали дистиллированную и дегазированную воду с удельным сопротивлением 18 мОм/см. В качестве образца сравнения определяемого лекарственного препарата использовали фармацевтическую субстанцию, проверенную отделом контроля предприятия-изготовителя и соответствующую всем требованиям нормативной документации (НД).

В качестве буферных растворов использовали фосфатный буфер (растворы фосфата калия двузамещенного и ортофосфорной кислоты). Для его приготовления 0.136 г фосфата калия двузамещенного помещали в колбу 1000 мл, прибавляли 800 мл воды и доводили рН раствора ортофосфорной кислотой до 2±0.1 (потенциометрическим методом). Объем раствора доводили водой до метки и перемешивали.

Для приготовления испытуемых растворов готовых лекарственных препаратов таблетки растирали в порошок. Порошок «Амлодипина» массой 0.4 г растворяли в 60 мл дистиллированной воды и раствор обрабатывали ультразвуком до полного диспергирования порошка. Объем полученного раствора доводили до 100 мл дистиллированной воды, перемешивали и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор использовали свежеприготовленным. Растворы стандартных образцов (РСО) готовили аналогично растворам исследуемых лекарственных препаратов. Обработку результатов хроматографического эксперимента проводили с применением системы сбора и обработки данных «МультиХром» 1.52v (Ampersand Ltd). Расчет количественного содержания определяемых компонентов находили по формуле:

Sи и Sст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; тст, тс и тн - соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса в граммах таблетки и масса растертых таблеток, взятых для приготовления испытуемого раствора соответственно.

2.Результаты и их обсуждение

В ходе работы исследовано влияние состава подвижной фазы на хроматографические характеристики удерживания исследуемых соединений.

Для этого проводили хроматографирование растворов стандартного образца вещества - амлодипина (табл. 1). Как видно из таблицы, состав подвижной фазы сильно влияет на времена удерживания анализируемого соединения и в целом на эффективность хроматографирующей системы. С увеличением объемного содержания ацетонитрила в элюенте уменьшается время выхода амлодипина, но разделяющая способность системы улучшается. Использование в качестве элюента смеси вода - ацетонитрил ухудшает разделение вследствие диссоциации молекул амлодипина и на хроматограмме фиксируются 2 пика с практически одинаковой интенсивностью.

Таблица. 1. Времена удерживания амлодипина, содержащихся в РСО, при использовании различных подвижных фаз

Оптимальные соотношения смеси буферного раствора и ацетонитрила для исследуемых веществ составили - 68:32 по объему.

Количественный хроматографический анализ РСО амлопидина и препаратов «Амлодипина» проводили с использованием элюента: фосфатный буфер/ацетонитрил-68 32 (об. %) По формуле определили количественное содержание амлодипина в препарате «Амлодипина». Методом внутренней нормализации находили общее содержание примеси в таблетках.

Рис. 2. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Амлодипин» фирмы «Канонфарм». Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил 68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 - примесь, 2 - амлодипин.

Рис. 3. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Амлодипин» фирмы «Реплекфарм». Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил 68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 - примесь, 2 - амлодипин.

Хроматограммы образцов препарата «Амлодипин» производителей «Канонфарм» и «Реп-лекфарм» представлены на рис. 2-3.

В табл. 2 представлены значения величин, характеризующих эффективность хроматографического разделения для образцов лекарственного препарата «Амлодипин».

Таблица. 2. Результаты хроматографического анализа образца лекарственных препаратов

Результаты количественного анализа лекарственных препаратов представлены в табл. 3.

Таблица. 3. Результаты количественного анализа лекарственного препарата

Выводы

Предложена методика качественного и количественного анализа амлопидина с использованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано, что содержание действующих веществ в исследуемых лекарственных препаратах соответствует требованиям нормативных документов по показателю «Количественное определение».

Предложенную методику можно использовать для судебно-химического и химико-токсикологического исследования, а также для определения подлинности препарата при фармацевтическом контроле.

Литература

лекарственный хроматография фармация

1.Костарной А.В., Голубицкий Г.Б., Басова Е.М., Будко Е.В., Иванов В.М. Журнал аналитической химии. 2008. Т.63. №6. С.566-580.

2.Государственная Фармакопея Российской Федерации. 12 изд., ч. 1. М.: Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения». 2008. 704с.

3.British Pharmacopeia. CD 1998 v. 2.0, System Simulation Ltd. 1998.

4.The United States Pharmacopeia. 23-rd Ed., Rockville. 1995.

5.Чазов Е.И., Беленков Ю.Н. Рациональная фармакотерапия сердечнососудистых заболеваний: Рук-во для практ. врачей. М.: Литтерра. 2005. 972с.

Размещено на Allbest.ru