Формування біоплівки штамами pseudomonasaeruginosaз різним рівнем внутрішньоклітинного цикло-ди-гмф за присутності синтетичних аналогів сигнального хінолону

Размещено на http://www.allbest.ru/

Формування біоплівки штамами pseudomonasaeruginosaз різним рівнем внутрішньоклітинного цикло-ди-гмф за присутності синтетичних аналогів сигнального хінолону

М. Б. Галкін, С. В. Водзінський, Л. М. Стрезєва,

М. А. Джура, Б. М. Галкін, Т. О. Філіпова

Одеський національний університет імені І. І. Мечникова,

вул. Дворянська, 2, Одеса, 65082, Україна

Мета роботи - дослідження формування біоплівки клітинами Pseudomonasaeruginosaз різним внутрішньоклітинним рівнем цикло-ди-ГМФ за впливу оригінальних похідних 2-гептил-3-гідрокси-4-хінолону з різною довжиною алкільного ланцюга. Методи. Клітини тест штамів інкубували у 96-лун- кових планшетах за присутності 20, 40 та 80 мкМ досліджуваних сполук. Сполуки були поділені на дві групи - зі зменшеною відносно PQSдовжиною алкільного ланцюга та зі збільшеною відносно PQSдовжиною алкільного ланцюга. Вміст планктонних клітин визначали спектрофотометрично за довжини хвилі 600 нм. Формування біоплівки оцінювали за допомогою CV-тесту (crystalviolet-тесту) спектрофотометрично за довжини хвилі 592 нм. Результати. Отримані результати показали що аналоги PQSзі зменшеною довжиною алкільного ланцюга, у більшості випадків помірно знижують вміст планктонних клітин, тоді як похідні зі збільшеною довжиною алкільного ланцюга більш суттєво впливають на цей показник. PQSі його синтетичні аналоги підвищували масу біоплівокPaeruginosaPA01 іPaeruginosaPA01 pJN2133 на 34-79% та 135-217%, відповідно. У разі штамуPaeruginosaPA01 AwspF1 досліджувані сполуки чинили протилежну дію - знижували масу біоплівок порівняно з контролем в 1,4-2 рази. Висновки. Встановлено, що PQSта його похідні з різною довжиною алкільного замісника модулюють процес формування біоплівкиPaeruginosaзалежно від внутрішньоклітинного вмісту цикло-ди-ГМФ: стимулюють у штамів з природним і зниженим рівнями, але пригнічують його у разі високого вмісту вторинного месенджера..

Ключові слова: PQS, синтетичні аналоги PQS, циклічний 3,5-дигуанозин- монофосфат (цикло-ди-ГМФ), Pseudomonasaeruginosa

Однією з ключових систем мікробної клітини, що впливає на всі аспекти її існування є система міжклітинної комунікації - quorumsensing (QS). Система QSзабезпечує координовану експресію численних індуцибельних генів за рахунок використання малих сигнальних молекул, синтез яких залежить від щільності клітин у популяції [7]. Під контролем системи QSзнаходиться дуже багато ознак, таких як формування біоплівки, синтез вторинних метаболітів і численних факторів патогенності [15, 16]. Все це робить систему QSперспективною мішенню для пошуку інструментів її регуляції, як з точки зору підвищення синтезу біотехнологічно корисних продуктів, так і з точки зору пошуку нових антимікробних препаратів.

Однією з найбільш вивчених є система QSу Pseudomonasaeruginosa. Вона побудована за принципом аутоіндукції та складається з трьох пов'язаних між собою ланок - las-, rhl-та pqs-,в кожній з яких використовується своя сигнальна молекула [6, 8]. Перші дві ланки регулюються ацильованими гомосерин лактонами, що є сигнальними молекулами більшості грамнега- тивних бактерій [7]. Третя ланка регулюється унікальною сигнальною сполукою - 2-гептил-3-гідроксі-4-хінолоном, що носить назву PQS (PseudomonasQuinolonSignal) [14]. Ця молекула грає величезну роль у функціонуванні клітин P. aeruginosa,регулюючи роботу всіх ланок системи QS[6], синтез вторинних метаболітів, таких як рамноліпіди та феназинові пігменти [4], та, навіть, використовується як зброя у конкурентній боротьбі з іншими видами мікроорганізмів [12]. У зв'язку з цим, сьогодні pqs-ланка розглядається як потенційна мішень сполук-модуляторів системи QSPaeruginosa.Серед цих сполук, важливе місце мають займати синтетичні аналоги 2-гептил-3-гідрок- си-4-хінолону з різними замісниками [11]. Процес утворення біоплівки контролюється також важливим вторинним месенджером бактерій - цикліч- ним-3,5-дигуанозинмонофосфатом (цикло-ди-ГМФ) [9].

З огляду на вищенаведене, метою даної роботи було дослідження формування біоплівки клітинами P. aeruginosaз різним внутрішньоклітинним рівнем цикло-ди-ГМФ за впливу оригінальних похідних 2-гептил-3-гідрок- си-4-хінолону з різною довжиною алкільного ланцюга.

Матеріали та методи біоплівка клітина хінолон

Таблиця. Структурні формули та хімічні назви похідних 2-гептил-3-гідрокси-4-хінолону, використаних у дослідженні

У роботі було досліджено синтетичні похідні 2-гептил-3-гідрокси-4-хі- нолону з різною довжиною алкільного ланцюга. Сполуки були синтезовані в Біотехнологічному науково-навчальному центрі Одеського національного університету імені І. І. Мечникова за методикою [10]. Структурні формули досліджених сполук наведені у табл.

В роботі використано штам дикого типу PaeruginosaPA01 з колекції культур кафедри мікробіології, вірусології та біотехнології ОНУ імені І. І. Мечникова і штами P. aeruginosaз низьким (PA01 pJN2133) та підвищеним (PA01 AwspF1) рівнями циклічного дигуанозинмонофосфату, люб'язно надані О. Ржепішевською з університету м. Умео, Швеція. Штами культивували на м'ясо-пептоному агарі при 37 °С та зберігали при 4 °С.

Усі експерименти проводили на рідкому середовищі LB(г/л): пептон - 15,0, дріжджовий екстракт - 10,0, хлорид натрію - 5,0.

Визначення маси біоплівки та кількості планктонних клітин проводили за культивування у 96-лункових плоскодонних планшетах Nuclon. У дослідні лунки додавали по 4 мкл розчинів досліджуваних сполук у диметилсульфок- сиді (ДМСО) до кінцевих концентрацій 20, 40 та 80 мкМ; 20 мкл суспензій клітин тест-штамів P aeruginosa(103 КУО/мл) та 180 мкл середовища LB. У контрольні лунки замість сполук додавали 4 мкл ДМСО. Планшети інкубува- ли при 37 оС впродовж 24 годин.

Кількість клітин у планктоні оцінювали спектрофотометрично за довжині хвилі 600 нм.

Після ретельного відмивання лунок планшетів від неприкріплених клітин біоплівки фіксували 96% етанолом впродовж 10 хв, висушували і забарвлювали 1% розчином кристалічного фіолетового. Через 15 хв барвник видаляли, лунки промивали і після висушування додавали по 200 мкл лізуваль- ного розчину, що містив 0,1 М NaOHі 1% додецилсульфату натрію. Оптичну густину вимірювали за довжини хвилі 592 нм [3].

Вимірювання здійснювали на приладі SmartSpecPlus (Bio-Rad, Hungary).

Усі експерименти проводили у 3-х незалежних дослідах з 8 повторами у кожному. Статистичне опрацювання результатів досліджень проводили з використанням загальноприйнятих методів варіаційного аналізу. Розраховували середні значення показників (Х ) та їх стандартну помилку (SX). Достовірність відмінностей між середніми значеннями визначали за критерієм Стьюдента, оцінюючи вірогідність отриманих результатів на рівні значимості не менше 95% (р < 0,05). Математичні розрахунки проводили за допомогою комп'ютерної програми Excel[2].

Результати та їх обговорення

Використані у роботі штами Paeruginosa3з низьким (PA01 pJN2133) і з високим (PA01 AwspF1) порівняно з батьківським штамом вмістом цик- ло-ди-ГМФ були сконструйовані у лабораторії CarolineS. Harwood[5]. Рівень цикло-ди-ГМФ у клітинах залежить від активності двох специфічних ензимів - дигуанілатсинтази (WspR) та цикло-дигуанілат фосфодиестерази (протеїн PA2133). Виснаження рівня вторинного месенджера у P. aeruginosapJN2133 досягається за рахунок додаткових копій гена РА2133, введених в клітини у складі плазміди pJN105 (пустий вектор). Підвищенню рівня цикло-ди-ГМФ у PaeruginosaAwspF1 сприяє мутація в гені wspF,продукт якого є негативним регулятором дигуанілатсинтази.

Дослідження впливу PQSна вміст планктонних клітин використаних тест-штамів (рис. 1 А-В) показало, що ця сполука дещо знижує їх кількість у штамів з середнім та зменшеним внутрішньоклітинним рівнем цик- ло-ди-ГМФ. Так, за присутності 80 мкМ PQSкількість клітин у планктоні P. aeruginosaРА01 становила 80%, а у планктоні P. aeruginosaРА01 pJN2133 - 69% від контролю.

У той же час, у разі PaeruginosaPA01 AwspF1 характер дії сигнального хінолону відрізнявся від двох інших штамів (рис. 1Б). За присутності 20 мкМ PQSспостерігалося невелике - на 17%, зростання кількості планктонних клітин, тоді як за двох інших концентрацій дані не відрізнялися від контролю.

Синтетичні аналоги PQSзі зменшеним числом атомів вуглецю в ацильному заміснику в цілому виявляли тотожну сигнальному хінолону дію. До відмінностей слід віднести більш значний пригнічувальний вплив сполуки C5Qу концентрації 80 мкМ. Кількість планктонних клітин PaeruginosaРА01, PaeruginosaPA01 AwspF1 і PaeruginosaРА01 pJN2133 достовірно знижувалася у 1,5, 2,5 та 2,7 рази, відповідно. Сполука ^3Qчинила однакову дію на штами PA01 і PA01 AwspF1 за усіх досліджених концентрацій. Крім того, на відміну від PQS, C3Qі C5Q, цей аналог у концентраціях 20 і 40 мкМ не підвищував кількості клітин P. aeruginosaPA01 AwspFlу планктоні (рис. 1Б).

Рис. 1. Вплив PQS та його синтетичних аналогів зі зменшеною довжиною алкільного ланцюга на вміст планктонних клітин тест-штамів P. aeruginosa

Примітка: * - різниця достовірна у порівнянні з контролем

Дані щодо активності похідних з більшою ніж у PQS довжиною алкільного ланцюга наведені на рис. 2.

Встановлено, що усі три сполуки цієї групи - C8Q, C9Q, C11Q, дозо- залежним чином зменшували вміст планктонних клітин всіх досліджених штамів P aeruginosa.Найбільшу активність виявили сполуки C8Q і C9Q, які переважали дію як самого PQS так і його аналогів зі зменшеною довжиною алкільного ланцюга. Особливо суттєві відмінності у порівнянні з контролем та ефектами сигнального хінолону спостерігалися при концентрації 80 мкМ. Встановлено, що усі три сполуки цієї групи - C8Q, C9Q, C11Q, дозозалеж- ним чином зменшували вміст планктонних клітин всіх досліджуваних штамів P aeruginosa.Найбільшу активність виявили сполуки C8Q і C9Q, які переважали дію як самого PQS так і його аналогів зі зменшеною довжиною ал- кільного ланцюга. Особливо суттєві відмінності у порівнянні з контролем та ефектами сигнального хінолону спостерігалися при концентрації 80 мкМ. Так, C8Q знижував проти контролю кількість клітин у планктоні в 2,3; 2,2 та 2,8 рази у штамів PaeruginosaPA01, PA01 AwspFlта PA01 pJN2133, відповідно. При порівнянні з PQSзареєстровано дворазове зменшення кількості планктонних клітин за дії цієї сполуки. 2-Ноніл-3-гідрокси-4-хінолон (C9Q) чинив на досліджувані штами таку саму дію, що і C8Q, з деякими незначними кількісними відмінностями. PaeruginosaPA01 та PA01 pJN2133 виявилися менш чутливими до дії C11Q(рис. 1 А і В). Хоча вплив цієї сполуки на PaeruginosaPA01 AwspFlбув таким самим, що C8Qі C9Q(рис. 1 Б).

Рис. 2. Вплив синтетичних аналогів PQSзі збільшеною довжиною алкільного ланцюга на вміст планктонних клітин тест-штамів P. aeruginosa

За масою утворюваної біоплівки досліджувані штами, як було показано нами раніше [1], розміщуються таким чином: P. aeruginosaPA01 pJN2133 < P aeruginosa PA01 < P aeruginosa PA01 AwspFl.За результатами даного дослідження відмінності у кількісних значеннях цього показника між штамами становлять 1,9--3,8 рази. При цьому найбільша різниця спостерігається між штамами з низьким (PA01 pJN2133) та підвищеним (PaeruginosaPA01 AwspF1) вмістом внутрішньоклітинного цикло-ди-ГМФ.

Результати дослідження впливу сигнального хінолону та його синтетичних аналогів представлені на рис. 3 і 4.

Встановлено, що на відміну від односпрямованого характеру дії досліджуваних сполук на вміст планктонних клітин усіх штамів Paeruginosa,вони протилежним чином впливають на утворення біоплівок різними штамами. PQSі його аналоги стимулюють цей процес у штамів PaeruginosaPA01 і PaeruginosaPA01 pJN2133 та пригнічують його у PaeruginosaPA01 AwspFl.Як видно на рис. 3 А і В, PQSпропорційно концентрації підвищує масу біоплівок P. aeruginosaPA01 і PaeruginosaPA01 pJN2133 на 34-79% та 135217%, відповідно.

Рис. 3. Вплив PQSта його синтетичних аналогів зі зменшеною довжиною алкільного ланцюга на формування біоплівки тест-штамами P. aeruginosa

Подібні зміни формування біоплівки цими штамами Paeruginosaвикликали і похідні C3Q, іС3Q та C5Q. При цьому слід зазначити, що PQSі його аналоги ефективніше стимулювали даний процес на тлі низького вмісту цикло-ди-ГМФ у штаму PaeruginosaPA01 pJN2133. У разі штаму PaeruginosaPA01 AwspFlдосліджувані сполуки чинили протилежну дію. За їх присутності маса біоплівок порівняно з контролем була нижчою в 1,4-2 рази.

Такий самий характер змін маси біоплівок спостерігався і за впливу аналогів сигнального хінолону зі збільшеною довжиною алкільного замісника (рис. 4).

Рис. 4. Вплив синтетичних аналогів PQSзі збільшеною довжиною алкільного ланцюга на формування біоплівки тест-штамами P. aeruginosa

Примітка: * - різниця достовірна у порівнянні з контролем

Однак, сполука C8Qвиявляла найбільшу стимулювальну дію у концентрації 20 мкМ (штами PA01 і PA01 pJN2133). Підвищення концентрації або відміняло цей ефект (PaeruginosaPA01), або суттєво його знижувало (P. aeruginosaPA01 pJN2133). Синтетичний аналог C9Qу концентраціях 20 та 40 мкМ на 65% підвищував масу біоплівки PaeruginosaPA01, але не змінював її у концентрації 80 мкМ (рис. 4А). У разі PaeruginosaPA01 pJN2133 C9Qвикликав однакове за усіх концентрацій зростання маси біоплівки - у 1,93 рази (рис. 4А). Такий самий якісний і кількісний вплив на біоплівку даного штаму здійснювала сполука C11Q.

Синтетичні аналоги PQSзі збільшеною довжиною алкільного ланцюга, як і сполуки C3Q, ^3Qта C5Q, протилежним чином впливали на формування біоплівки P. aeruginosaPA01 AwspF1 (рис. 4Б). Маса біоплівок була меншою за контрольне значення в усіх варіантах. Максимальні ефекти були зареєстровані за 80 мкМ C9Q- зменшення на 47%, та за усіх концентрацій C11Q- на 37%.

Ґрунтуючись на отриманих результатах можна констатувати, що здатність PQSта його похідних модулювати процес формування біоплівки у Paeruginosaзалежить від внутрішньоклітинного вмісту цикло-ди-ГМФ. З медичної точки зору представляє інтерес пригнічувальна дія аналогів сигнального хінолону на штам P. aeruginosaPA01 AwspFl, клітини якого характеризуються високим рівнем циклічного дигуанозинмонофосфата. Оскільки клітини будь-яких бактерій у складі біоплівок (що спостерігається при інфекціях) мають підвищений рівень цього вторинного месенджера [13] можна припустити перспективність створення на основі досліджених аналогів PQSнових антимікробних засобів з антибіоплівковими властивостями. До найбільш привабливих слід віднести сполуки C5Qі C11Q. Здатність PQSі його аналогів зі зменшеною довжиною алкільного ланцюга стимулювати утворення біоплівки штамом PaeruginosaPA01 pJN2133 на тлі низького вмісту цикло-ди-ГМФ може бути використана для підвищення синтезу корисних речовин у біоплівкових реакторах.

Стимуляція дослідженими сполуками формування біоплівки PaeruginosaPA01, клітини якого мають «нормальний», проміжний між двома іншими штамами, рівень цикло-ди-ГМФ, свідчить про їх модулювальний вплив на систему quorumsensingі, перш за все, на її pqs-ланку. Одержані результати також викликають цікаве запитання - чи можуть PQSта його синтетичні аналоги впливати на систему обміну цикло-ди-ГМФ? Порівняння їх впливу на штами P. aeruginosaз різними рівнями вторинного месенджера створює враження, що ці молекули можуть повертати вміст цикло-ди-ГМФ до концентрацій, характерних для батьківського штаму дикого типу. З'ясуванню такої можливості будуть присвячені подальші дослідження.

СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ

1. ГалкінМ. Б., Семенець А. С., ФіногеноваМ. О., Галкін Б. М., Філіпова Т О. Утворення біоплівки та рухливість бактерій Pseudomonasaeruginosaз різними рівнями вмісту циклічного дигуанозинмонофосфату // Мікробіологія і біотехнологія - 2017. - № 2. - С. 40-50.

2. Лапач С. Н., Чубенко А. В., Бабич П. Н.Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel. - К.: Морион.- 2001. - 260 с.

3. Christensen G. D., W A. Simpson, J. J. Younger et al. Adherence of coagulase-negative Staphylococci to plastic tissue culture plates: a quantitative model for the adherence of Staphylococci to medical devices // J. clin. microbiol. 1985. -V 22, № 6. - P 996-1006.

4. Dietrich L.E.P., Price-Whelan A., Petersen A., et al. The phenazine pyocyanin is a terminal signaling factor in the quorum sensing network of Pseudomonas aeruginosa// Molecular Microbiology. - 2006. - V 61. - P. 13081320

5. Hickman J. W., Tifrea D. F, Harwood C. S. A chemosensory system that regulates biofilm formation through modulation of cyclic diguanylate levels // PNAS. - 2005. - V 102. - P. 14422-14427.

6. McKnight S. L., Iglewski B H., Pesci E C. The Pseudomonas quinolone signal regulates rhl quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa// Journal of Bacteriology. - 2000. - V 182. - P. 2702-2708.

7. Ng W. L., Bassler B. L. Bacterial quorum-sensing network architectures // Annu. Rev. Genet. - 2009. - V 43. - P 197-222.

8. Pesci E. C., Iglewski B. H. The chain of command in Pseudomonas aeruginosa quorum sensing // Trends Microbiol. - 1997. - Vol. 5. - P 132-134.

9. Rцmling U., Gomelsky M., Galperin M. Y. C-di-GMP: the dawning of a novel bacterial signalling system. // Molecular Microbiology. - 2005. - V 57, №

3. - P 629-639.

10. Somanathan R., Smith K. M. Synthesis of some 2-alkyl-4-quinolone and 2-alkyl-4-methoxyquinoline alkaloids // J. heterocycl. Chem. - 1981. - V 18. - №

6. - P 1077-1079.

11. Soukarieh F , Oton E. V, Dubern J-F, et al. In Silico and in Vitro- Guided Identification of Inhibitors of Alkylquinolone-Dependent Quorum Sensing in Pseudomonas aeruginosa// Molecules - 2018. - V 23. - P 257-272.

12. Szamosvari D., Bцttcher T 4-Quinolone N-oxides as bacterial weapons // Synlett. - 2018. - V 29. - 542-547.

13. ValentiniM., Filloux A. Biofilms and cyclic di-GMP (c-di-GMP) signaling: Lessons from Pseudomonas aeruginosa and other bacteria // J. Biol. Chem. - 2016. - V 291, № 24. - P. 12547-12555.

14. Welch M., Hodgkinson J. T., Gross J., et al. Ligand binding kinetics of the quorum sensingmregulator PqsR // Biochemistry. - 2013. - V 52. - P 4433-4438.

15. WinsonM. K., CamaraM., LayifiA., et al. Multiple N-acyl-L-homoserine lactone signal molecules regulate production of virulence determinants and secondary metabolites in Pseudomonas aeruginosa (autoinducers/quorum sensing/ gene regulation) // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1995. - V 92. - P 9427-9431.

16. Winzer K., Williams P. Quorum sensing and the regulation of virulence gene expression in pathogenic bacteria // Int. J. Med. Microbiol. - 2001. - V 291. - P. 131-143.

References

1. Galkin MB, Semenets AS, Finogenova MO, Galkin BM, Filipova TO. Biofilm formation and motility of bacteria Pseudomonas aeruginosa with different c-di-GMP level. Microbiology and Biotechnology. 2017;38(2):40-50. (in Ukranian) doi: 10.18524/2307-4663.2017.2(38)/105020

2. Lapach CN, Chubenko AV, Babich PN. Statisticheskie metodi v medikobiologicheskich issledovaniyach s ispolsovaniem Excel. - K.: Morion. - 2001. -260p. (in Russian)

3. Christensen GD, Simpson WA, Younger JJ, et al. Adherence of coagulase- negative Staphylococci to plastic tissue culture plates: a quantitative model for the adherence of Staphylococci to medical devices. J. clin. microbiol. 1985;22(6):996- 1006

4. Dietrich LEP, Price-Whelan A, Petersen A, et al. The phenazine pyocyanin

is a terminal signaling factor in the quorum sensing network of Pseudomonas aeruginosa. Mol. Microbiol. 2006;6:1308-1320. doi: 10.1111/j.1365-

2958.2006.05306.x

5. Hickman JW, Tifrea DF, Harwood CS A chemosensory system that regulates biofilm formation through modulation of cyclic diguanylate levels. PNAS.2005;102:14422-14427. doi: 10.1073/pnas.0507170102

6. McKnight S L, Iglewski BH, Pesci EC. The Pseudomonas quinolone signal regulates rhl quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa. J. Bact.2000;182:2702- 2708.

7. Ng WL, Bassler B. Bacterial quorum-sensing network architectures. Annu. Rev. Genet.2009;43:197-222. doi: 10.1146/annurev-genet-102108-134304

8. Pesci EC, Iglewski BH. The chain of command in Pseudomonas aeruginosa quorum sensing. Trends Microbiol.1997;5:132-134. doi: 10.1016/ S0966-842X(97)01008-1

9. Rцmling U, Gomelsky M, Galperin MY. C-di-GMP: the dawning of a novel bacterial signalling system. Mol. Microbiol. 2005;57(3):629-639. doi: 10.1111/j.1365-2958.2005.04697.x

10. Somanathan R, Smith KM. Synthesis of some 2-alkyl-4-quinolone and 2-alkyl-4-methoxyquinoline alkaloids J. heterocycl. Chem. 1981;18(6):1077- 1079. doi: 10.1002/jhet.5570180603

11. Soukarieh F, Oton EV, Dubern J-F, et al. In Silico and in Vitro-Guided

Identification of Inhibitors of Alkylquinolone-Dependent Quorum Sensing in Pseudomonas aeruginosa.Molecules. 2018;23:257-272. doi: 10.3390/

molecules23020257

12. Szamosvвri D, Bцttcher T. 4-Quinolone N-oxides as bacterial weapons. Synlett. 2018;29:542-547.

13. Valentini M, Filloux A. Biofilms and cyclic di-GMP (c-di-GMP) signaling: Lessons from Pseudomonas aeruginosa and other bacteria. J. Biol. Chem. - 2016;291:12547-12555.

14. Welch M, Hodgkinson JT, Gross J, et al. Ligand binding kinetics of the quorum sensingmregulator PqsR. Biochemistry. 2013;52:4433-4438. doi: 10.1021/ bi400315s

15. Winson MK, Camara M, Layifi A, et al. Multiple N-acyl-L-homoserine lactone signal molecules regulate production of virulence determinants and secondary metabolites in Pseudomonas aeruginosa (autoinducers/quorum sensing/ gene regulation). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995;92:9427-9431.

16. Winzer K, Williams P Quorum sensing and the regulation of virulence gene expression in pathogenic bacteria. Int. J. Med. Microbiol. 2001;291:131-143. doi: 10.1078/1438-4221-00110.

Размещено на Allbest.ru