Санитарная бактериология

Размещено на http://www.allbest.ru

Санитарная бактериология

1. Исследование питьевой воды

Качество воды оценивается по показателям СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества». И СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования качества воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников

Бактериологическое исследование питьевой воды проводится согласно МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».

Таблица № 1

Наименование исследований	количество проб	в %	количество исследований	в %
Всего	9750		17505
Вода питьевая	2378	24,5	7134	40,8
Пищевые продукты	708	7,3	3115	17,8
Смывы	5458	56	5458	31,1
Воздух	247	2,5	247	1,4
Аптечные формы	92	0,9	276	1,6
Материал на стерильность	178	1,8	534	3,1
Прочие	689	7,0	741	4,2

Для отбора проб используем стерильные стеклянные флаконы емкостью 0.5л с пробками. Стерилизация проводится автоклавированием. Отбор производят специалисты, прошедшие инструктаж согласно ГОСТа Р 51593-2000. Для отбора хлорированной воды используем флаконы с 10мг серноватисто-кислого натрия на 500мл. Отобранную пробу маркируем и сопровождаем документом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора и фамилии специалиста, отобравшего пробу. Доставка проб осуществляется при t (4-10 градусов) С. Срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 часов. Если пробы нельзя охладить, посев следует провести в течение 2х часов после забора. Если время доставки не соблюдено и температура хранения не выдержана, анализ воды не проводится.

Проведение анализа питьевой воды, как правило, заключается в определении 2х показателей:

- определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре.

Данный метод определяет общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 градусов в течение 24 часов, видимые при увеличении в 2 раза.

Практически - после тщательного перемешивания пробы воды по 1 мл вносим в стерильные чашки Петри и добавляем 8-12мл расплавленного и остуженного до 45 градусов питательного агара тщательно перемешиваем содержимое чашек. После застывания чашки с посевами помещаем в термостат вверх дном и инкубируем при 37 градусах.

Учет результатов проводим через 24 часа. Подсчитываем все выросшие колонии. Количество колоний на обеих чашках" суммируется и делится на два. Результат выражаем числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1мл исследуемой пробы воды.

- определение общих и термотолерантных колиформных бактерий.

Общие колиформные бактерии (ОКБ)-грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах и ферментирующие лактозу до кислоты и газа при t 37градусов в течение (24-48 ч).

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число ОКБ, обладают всеми их признаками и кроме того способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при t 44 градуса в течение 24 часов.

Для определения ОКБ и ТКБ используем титрационный метод, который основан на накоплении бактерий после посева определенного объема воды в жидкую питательную среду с лактозой. Определение проводим количественно.

Производим посев в лактозо-пептонную среду

З х 100,

З х 10,

З х 1.

Посев 100мл и 10мл воды делаем в 10 и 1мл соответственно концентрированной ЛПС, посев 1мл пробы проводят в 10мл среды обычной концентрации. Посевы инкубируют 48 часов при 37 градусах. Через 24 часа проводим предварительную оценку посевов. Из флаконов, где отмечены изменения - наличие роста, газа производим высев на сектора модифицированной среды Эндо. При отсутствии роста посевы подращиваем еще 24 часа. Посевы без признаков роста считают отрицательными и далее не исследуются. Посевы на среде Эндо инкубируют при 37 градусах в течение 18-20 часов. Делаем мазок и ставим оксидазный тест. Если среда накопления дала помутнение и газ, а на среде Эндо характерный рост, выдаем положительный результат на присутствие ОКБ в данном объеме. Требуется подтверждение если:

среди накопления отмечено лишь помутнение;

принадлежность к лактозоположительным колониям вызывает сомнение, тогда

определяем наличие отпечатка на среде Эндо подозрительных колоний;

выполняем оксидазный тест;

подтверждаем принадлежность к Граму;

- подтверждаем способность к газообразованию при посеве колоний на среду с лактозой в две пробирки. Одни посевы помещаем в термостат с 37 градусами, а вторые при 44 градусах на 24 часа для подтверждения термотолерантных колиформных бактерий. Для учета берутся посевы, давшие на лактозе кислоту и газ.

Отрицательный ответ выдаем если:

среди накоплений нет признаков роста;

на секторах среды Эндо нет роста;

на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных бактерий колонии;

все колонии оксидазоположйтельные;

все колонии грамположительные;

в подтверждающем тесте на среде с углеводом не отмечено газообразование.

Учет результатов:

При исследовании количественным методом определяем наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по таблице.

При отрицательном ответе при наличии ОКБ и ТКБ во всех исследованных объемах выдает заключение в протоколе «Не обнаружены в 100мл».

Таблица № 2

Число исследований	Число исследованных проб
	всего	Не отвечают гигиеническим нормам
7134	2378	200

2. Исследование пищевой продукции

Оценка качества пищевых продуктов проводится согласно СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

Гигиенические нормативы по микробиологическим показателям безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов включают следующие группы м/о:

- санитарно-показательные, к которым относятся:

1.количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)

бактерии группы кишечных палочек - БГКП (колиформы)

бактерии семейства Enterobacteriaceae, энтерококки

- условно-патогенные микроорганизмы, к которым относятся, E.coli,S.aureus, B.cereus, Proteus и сульфитредуцирующие клостридии патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы и бактерии рода Yersinia, Listeria monocytogenes.

Микроорганизмы порчи - дрожжи и плесневые грибы, молочнокислые м/о;

Микроорганизмы заквасочной микрофлоры (молочнокислые м/о, дрожжи, бифидобактерии) - в продуктах с нормируемым уровнем биотехнологической микрофлоры.

Нормирование микробиологических показателей безопасности пищевых продуктов осуществляется для большинства групп микроорганизмов по альтернативному принципу, т.е. нормируется масса продукта в которой не допускается бактерии группы кишечных палочек, большинство условно-патогенных микроорганизмов, а так же патогенные в том числе сальмонеллы и listeria monocytogenes. В других случаях норматив отражает количество колониеобразующих единиц в одном грамме или миллилитре продукта (КОЕ/грамм).

При подготовке проб к анализу и культивировании микроорганизмов руководствуемся положениями следующих документов:

ГОСТ Р 51446-99 «Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований»;

ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа»;

ГОСТ 26670-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы культивирования микроорганизмов»;

ГОСТ 10444.15-94 «Продукты пищевые. Методы определения и выявления количества мезофцльных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов»;

ГОСТ Р 50474-93 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)»;

ГОСТ 30726-2001 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli»;

ГОСТ 30519-97 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella»;

ГОСТ 28560-90 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providenscia»;

ГОСТ 29185-91 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий»;

ГОСТ 30347-97 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества Staphilococcus aureus»;

ГОСТ 10444.12-88 «Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов»;

ГОСТ 28556-90 «Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества энтерококков».

пищевая продукция	кол-во проб	в %
Молочная	102	14,4
Мясные продукты	62	8,7
Готовые блюда и кулинарные изделия	341	48,2
Кондитерские изделия	53	7,5
Рыба и рыбопродукт	21	3,0
Масложировая	57	8,0
Напитки	59	8,3
Консервы	9	1,3
Прочие	4	0,6

3. Молоко и молочные продукты

Исследование молока и молочных продуктов проводится согласно НТД:

ГОСТ 9225-84 «Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа»;

«Инструкция по микробиологическому контроле производства на предприятиях молочной промышленности» МЛ 998;

ГОСТ 30347-97 «Молоко и молочные продукты. Методы определения Staphilococcus aureus»;

ГОСТ 10444.11-89 «Продукты пищевые. Метод определения молочнокислых микроорганизмов»;

МУК 4.2.999-00 «Определение количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах»;

Пробы молочных продуктов для анализа отбирают в стерильную посуду, посев проводится не позднее 4х'часов с момента отбора. Пробы должны храниться и транспортироваться при температуре не выше 6 градусов, не допуская подмораживания. Поверхность упаковки перед посевом обрабатывается 70 градусным спиртом и вскрывается у спиртовки. Продукт тщательно перемешиваем. Кисломолочные продукты и закваски нейтрализуем 10% раствором гидрокарбоната натрия! Перед посевом готовим Юкратные разведение продукта в стерильном изотоническом растворе хлористого натрия. Для этого из проб молока, сливок, сметаны, кисломолочных напитков, мороженого, масла отбираем Юкуб.см. и вносим в 90куб.см. раствора хлористого натрия и получаем разведение 1:10, для масла и мороженого раствор хлористого натрия берем подогретый до 40-45градусов. Из проб творога, творожных изделий, сыра делаем навеску Юграмм и добавляем к 90куб.см. хлористого натрия, получая разведение 1:10. Дальнейшие разведения готовим из исходных. Для приготовления каждого разведения пользуемся новой стерильной пипеткой. В молочных продуктах определяем:

Количество МАФАнМ;

БГКП (колиформы);

St.aureus;

Патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы;

Количество плесневых и дрожжевых грибов;

Количество бифидобактерий;

Молочнокислые м/о;

Для определения количества МАФАнМ выбираем те разведения, при посевах которых на чашках вырастает не менее 30 и не более 300 колоний. Посев делаем на 2 стерильные чашки Петри из соответствующих разведений в количестве 1куб.см. Чашки заливаем расплавленным и охлажденным до 45 градусов слабо-щелочным агаром, содержимое чашек тщательно перемешиваем. После застывания чашки переворачиваем и инкубируем в термостате при ЗО градусах в течение 72 часов.

Для определения БГКП пользуемся средой Кесслер. Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки сбраживать в среде Кесслер лактозу, в следствие чего - образуются кислота и газ. Посев проводится по 1куб.см. из соответствующих разведений в 5куб.см. среды Кесслер. Посевы растут при Т 37градусов 18-20часов. Посевы просматриваем и при отсутствии газообразования в пробирках продукт считают не загрязненным БГКП. При наличии газа в засеянном объеме делаем высев на среду Эндо, далее отвиваем на среду с глюкозой.

Для определения наличия патогенных м/о проводим посев 25граммов продукта в магневую среду, посевы выдерживаем в термостате при Т 37градусов в течение 18-24 часов, после инкубации делаем высев на среды Плоскирева, висмут-сульфитный агар, среду Левина. После инкубации чашки просматриваются и отбираются характерные для патогенных колоний. Проводим дальнейшую идентификацию.

Для определения количества стафилококка делаем посев продукта или его разведений в солевой бульон. Соотношение засеваемого продукта и питательной среды 1:10. Выращивание при 37 градусах 24 часа. Для подтверждения выросших на бульоне м/о делаем высев петлей на чашке Петри подсушенного желточно-солевого агара и инкубируем при 37 градусах 24-48 часов. Из характерных колоний делаем препараты, окрашиваем по Граму и микроскопируем. Стафилококки -грамположительны, имеют шарообразную форму и располагаются скоплениями, чаще в виде виноградной грозди. Для подтверждения принадлежности к золотистому стафилококку ставим реакцию плазмокоагуляции. В пробирку с 0.5мл разведенной кроличьей плазмы вносим петлю суточной агаровой культуры, пробирку ставим в термостат и выдерживаем при 37 градусах в течение 3-6 часов. Если через 6 часов не произошло коагуляции плазмы, то оставляем до следующего дня. Если плазма не свернулась через 24 часа, то культуру относят к коагулазоотрицательным.

Наличие плесневых и дрожжевых грибов определяем при посеве продукта и их разведений на среде Сабуро. Посевы выращиваем при комнатной температуре в течение 120 часов. Подсчитываем количество характерных выросших колоний.

Определение количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах проводим после нейтрализации. Берем разведение от 4 до 8 и засеваем пробирки с бифидоагаром, разлитую высоким столбиком не менее Юкуб.см. После тщательного перемешивания посевы .помещаем в термостат при 37 градусах на 72 часа предварительный учет допускается через 48 часов. Подтверждению наличия бифидобактерий проводим методом микроскопирования. Мазки грамположительной палочки, слегка изогнутые с бифуркацией на концах или без нее, расположенные группами в виде римских пятерок, могут образовывать короткие цепочки. На мазке может присутствовать и другая флора (молочнокислые стептококки и палочки или единичные клетки дрожжей).

Определение молочнокислых микроорганизмов распространяется на кисломолочные продукты и закваски. Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в жидкие или агаризованные селективные питательные среды, культивировании посевов при оптимальных условиях и при необходимости определении морфологических и биохимических свойств обнаруженных м/о. Посевы делаем в стерильное обезжиренное молоко, термостатируем при 32 градусах в течение 72 часов. При развитии молочнокислых бактерий молоко свертывается. При необходимости проводим микроскопирование препаратов.

	кол-во проб	из них неудовлетворит.	Число исследований	Из них неудовл.
Молочная продукция	102	38	459	45

бактериологический пищевой кисломолочный

4. Исследование мяса и мясных продуктов

Исследование мясоколбасных изделий проводим согласно ГОСТ 9958-81 «Изделия колбасные и продукты из мяса. Методы бактериологического анализа». Подготовка проб для анализа проводится по ГОСТ Р 51448-99 «Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований».

Основными показателями при исследовании мясопродуктов являются:

количество МАФАнМ;

БГКП (колиформы);

St.aureus;

Патогенные микроорганизмы в т.ч. сальмонеллы;

Сульфитредуцирующие клостридии.

Исследования проводятся аналогично исследованиям молока и молочных продуктов. При культивировании сульфитредуцирующих клостридии испытания проводим согласно ГОСТ 29185-91 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридии».

Для продуктов из птицы - ГОСТ 7702.2:6-93 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридии».

Для этого из разведений продукта делаем посев в среду Вильсон-Блер в пробирки разлитые высоким столбиком, хорошо перемешиваем и термостатируем при 37 градусах в течение 72 часов. Из посевов отбираем пробирки с признаками роста -отдельными черными колониями или полностью почерневшей средой. Из выросших колоний делаем препараты, окрашиваем, микроскопируем. Сульфитредуцирующие клостридии представляют собой грамположительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно в виде цепочек или скоплений параллельных клеток. Сульфитредуцирующие клостридии не образуют каталазу.

Продовольственное сырьё и пищевые продукты	Число проб	Число исследований
	Всего	неудовл.	всего	неудовл.
Мясо и мясные продукты	50	7	205	9
Птица и птицепродукты	12	1	52	1

5. Напитки

Исследования проводились согласно НТД:

ГОСТ 30712-2001 «Продукты безалкогольной промышленности. Методы микробиологического анализа»;

Методические рекомендации № 96/225 «Контроль качества и безопасности минеральных вод по химическим и микробиологическим показателям»;

Пищевые продукты	Число проб	Число исследований
	всего	неудовл.	всего	неудовл.
Напитки в т.ч. пиво	59	4	189	4

6. Рыба и рыбопродукты

Исследуем согласно НТД:

- «инструкция по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных»; Л. 1991г.

Микробиологические показатели:

количество МАФАнМ;

БГКП (колиформы);

Патогенные микроорганизмы в т.ч. сальмонеллы;

St.aureus;

Сульфитредуцирующие клостридии;

Дрожжи и плесень.

1 Пищевые продукты	Число проб	Число исследований
	всего	неудовл.	всего	неудовл.
Рыба и рыбопродукты	21	9	116	21

7. Исследование кулинарных изделий и готовых блюд

Исследованию подлежат холодные блюда, в основном, винегреты, салаты, мясные и рыбные изделия кулинарии, вторые горячие блюда, в т.ч. гарниры горячие и холодные, супы, а так же третьи блюда - компоты и кисели. Исследования проводили согласно «МУ по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли пищевыми продуктами» № 2657-82.

Цель санитарно-бактериологического контроля заключается в профилактике пищевых отравлений и острых кишечных инфекциях путем обеспечения выпуска доброкачественной продукции.

Исследования проводились при плановом обследовании и по эпидемиологическим показаниям и в зависимости от этого имели объем определений:

количество МАФАнМ;

БГКП (колиформы);

E.coli;

St.aureus;

Proteus;

Патогенные м/о, в т.ч. сальмонеллы.

Посев на бактерии рода Proteus проводился по методу Шукевича: в две параллельные пробирки свёжескошенного слабощелочного агара вносится по 0.5мл из разведения 1:10 исследуемого продукта, термостатируем при Т 37 градусов 24 часа. При наличии вуалеобразного ползущего по скосу вверх роста, делаем препарат после окрашивания микроскопии. Если мазки грамотрицательные полиморфные палочки, то выдаем результат о наличии протея в данном объеме продукта.

Пищевые продукты	Число проб роб	Число исследований
	всего	неудовл.	всего	неудовл.
Кулинарные изделия и готовые блюда	341	17	1534	28

8. Консервы

Исследуем по ГОСТ 30425-97 «Консервы. Метод определения промышленной стерильности».

Анализ проводится по схеме.

Посевы делаем в условиях бокса.

Пищевые продукты	Число проб	Число исследований
	Всего	неудовл.	всего	неудовл.
Консервы	9	-	27	-

9. Исследование по контролю санитарно гигиенического режима, текущей и заключительной дезинфекции

Контроль методом смывов осуществляется за детскими дошкольными и лечебными учреждениями, школами, предприятиями общественного питания, молокозаводами, очагами.

Бактериологический контроль осуществляется согласно НТД:

МУ № 2657-84 «Методические указания по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли пищевыми продуктами»;

Приказ № 254 от 03.08.1991 г. «О развитии дезинфекционного дела в стране»;

Приказ № 720 от 03.07.1978г. «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилением мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией».

Приказ № 345 от 26.11.1997 «О совершенствовании мероприятий по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах».

Исследование смывов проводится на присутствие в них:

БГКП;

Патогенные м/о: шигеллы, сальмонеллы.

Условно-патогенные м/о st.aureus и P.aereuginosae.

Для обнаружения БГКП пользуемся средой Кесслер, с последующим высевом на среду Эндо. Из выросших колоний, делаем препараты, окрашиваем и микроскопируем и отвиваем на среду с глюкозой. Характерный рост на среде Эндо наличие в мазке грамотрицательных палочек и сбраживание глюкозы до кислоты и газа указывают на наличие в данном смыве БГКП (колиформы).

Отбор смывов на патогенную флору производим в 0.1% пептонную воду с последующим посевом в две накопительные среды: селенитовый бульон и магневую. После термостатирования при 37 градусах в течение 17-20 часов делаем высев на среду Плоскирева и висмут-сульфитный агар. Далее ведем исследование по общепринятой схеме.

На стафилококк отбор проводим в солевой бульон и через 24 часа термостатирования при 37 градусах делаем высев на чашке с желточно-солевым агаром. Характерные колонии микроскопируем. Ставим реакции плазмокоагуляции и аэробное сбраживание маннита. При наличии в мазке кокков на желточно-солевом агаре лецитоветилазной активности и коагулазной активности выдаем результат о наличии золотистого стафилококка.

При просмотре чашек Эндо, подозрительные на синегнойную палочку, колонии отвиваем на скошенный слабощелочной агар. Через 24 часа роста при Т 37 градусов синегнойная палочка на поверхности агара дает обильный рост с зеленоватым оттенком, маслянистой консистенцией и характерным медовым запахом, делаем препарат, окрашиваем, микроскопируем. Если в мазке грамотрицательные палочки, оксидазоположительные, подвижные, безиндольные, безсероводородные, то выдаем положительный результат о наличии P.aeruginosae.

	Число исследований	Из них не отвечают гигиеническим нормам
Число исследованных смывов	5458	237
В т.ч. по сан-гигиеническому режиму	2620	144
Контроль качества дезинфекции	2838	93

10. Исследование воздуха и материала на стерильность

Исследования проводятся по приказу № 720 от 31 июля 1978 года «об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией». Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функционального назначения и класса чистоты, нормируются согласно СанПиН 2.1.3.1375-03 «Гигиенические требования к размещению, устройству, оборудованию и эксплуатации больниц, родильных домов и других лечебных стационаров.

Отбор проб воздуха в хирургических и родильных отделениях проводим аппаратом Кротрва. Определяем количество:

ОМЧ в 1 куб.м

St.aureus воздуха

Плесень воздуха

Стерильные формы, шовный и перевязочный материал засеваем в условиях бокса в 3 среды:

Сахарный бульон;

Тиогликолевую среду;

Бульон Сабуро.

Выращиваем в течение 8 суток t 22-37 градусов. Если нет изменений в среде, то материал считаем стерильным.

Объект исследования	Число проб	Из них не отвечают гигиеническим нормам
Воздух	247	16
Материал на стерильность	178	-

11. Исследование почвы

Оценка качества почвы проводится согласно

- СанПиН 2.1.7.1287-03 «Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы».

- ГОСТ 17.4.3.01-83. «Общие требования к отбору проб почвы».

- МУ 2.1.7.730-99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест».

Исследования проводятся согласно МР от 2005 года «Методы микробиологического контроля почвы».

Объект исследования	Число проб	Из них не отвечают гигиеническим нормам
Почва	39	10

12. Инфекционная бактериология. Группа кишечных инфекций

Исследования на возбудителей кишечных инфекций проводим в соответствии со следующей документацией;

Приказ № 475 от 16.08.1989г. «О мерах по дальнейшему совершенствованию профилактики заболеваемости острыми кишечными инфекциями в стране»;

Методические указания по «лабораторной диагностике, эпидемиологии и профилактике сальмонеллезов». МЗ РСФСР от 1975г.;

Диагностика и профилактика острых кишечных заболеваний взрослых и детей, вызываемых энтеропатогенными кишечными палочками II категории

(О 124: К 72 и др.) 1973г.;

Методические рекомендации «Комплексные подходы к диагностике острых кишечных инфекций». М. 1988г.

Инструкция «По микробиологической диагностике кишечных заболеваний, вызванных шигеллами, сальмонеллами и энтеропатогенными кишечными палочками». Медицина, 1977г.;

Методические указания по «Микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями». № 04-23/3 от 17.12.1984г.;

Методические рекомендации по «Микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями» № Б-29 от 17.02.1986г.;

Информационное письмо «О типировании свежевыделенных штаммов E.coli с помощью адсорбированных О и Н сывороток» (О 157);

«Эпидемиология, профилактика и лабораторная диагностика брюшного тифа»; MP от 1985г.

Важнейшей задачей этого раздела является выделение и идентификация микроорганизмов. Материал подлежащий исследованию: выделения, жидкость, ткани организма. Отбор материала производится с учетом предполагаемости инфекции и учет места максимальной концентрации возбудителя, путей его выделения в окружающую среду. Материалы отбираем в стерильную посуду (пробирки, банки) с соблюдением правил ассептики. Для транспортировки используем различные консерванты (пептонная вода, буферный раствор, изотонический раствор хлористого натрия).

Доставленный материал исследуем поэтапно:

1. Первичный посев на плотные питательные среды: Плоскирева, Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар, учитывая особенности каждой из них.

2. В качестве среды накопления используем селенитовый бульон с последующим высевом на пластинчатые среды. Термостатируем при 37 градусах 1-8-20 часов.

3. Просматриваем чашки и подозрительные колонии отвиваем на ср.Клиглера или ср.Олькеницкого и полужидкий агар.

Термостатируем при 37 градусах 24 часа.

4. Проводим учет отвивок.

На среде Олькеницкого. происходит сбраживание лактозы и глюкозы; образование сероводорода и газа.

На полужидком агаре определяем подвижность и наличие индола. Это необходимо для предположительного установления рода культур.

5. Выделенную культуру ставим на биохимический ряд и параллельно проводим реакцию агглютинации на стекле с соответствующими сыворотками. При положительной реакции с сыворотками к шигеллам Зоне; определяем биовар культуры с сахарами Гиса - ксилозой; рамнозой и мальтозой. Для шигелл Флекснера с помощью типовых и групповых сывороток определяем серотип культуры. Для типирования сальмонелл используем О и Н сыворотки согласно схеме Кауфмана - Уайта. За 2007 год на кишечную группу сделано 7848 анализов

Выделено 71 культура, из них:

Количество выделенных сальмонелл

ВСЕГО	62
S. enteritidis гр. «D»	43
S. senftenberg гр. «Е»	1
S. infantis гр «С»	1
S. tenessi гр. «С»	1
S. brandenburg rp. «В»	8
S. tiphi murium rp. «B»	4
S. anatum гр. «Е»	1
S. london гр. «Е»	2
S. westhampton гр. «Е»	1

Количество выделенных шигелл

ВСЕГО	10
Sh Sonnei II д	5
Sh Flexneri 2а	2
Sh Flexneri 2в	2
Sh Flexneri 1а	1

Количество выделенных ЭПКП

ВСЕГО	4
Е. О 151	1
Е. О 1	1
Е. О 144	2

Серологические исследования крови больного на возбудителя дизентерии; сальмонеллеза; брюшного тифа; сыпного тифа; туляремии оказывают определенную помощь в диагностике. Реакция Видаля; РНГА - реакция непрямой гемагглютинации. Эти реакции основаны на взаимодействии антигена с антителом. Кровь для анализа берется из локтевой вены в стерильную пробирку в количестве 5 мл. Забор лучше производить дважды:

1) 2-3 день от начала заболевания

2) 2-3 недели; чтобы практически видеть нарастание титра специфических антител.

13. Исследования на холеру

При исследованиях на холеру пользуемся следующими документами:

Методические указания 3.4.1030-01 «Санитарная охрана территории. Организация обеспечения и оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий в случае завоза или возникновения особо опасных инфекций, контогенозных вирусных геморрагических лихорадок, инфекционных болезней неясной теологии, представляющих опасность для населения Российской Федерации и международного сообщения»;

СП 3.1.1086-02 «профилактика инфекционных заболеваний. Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой»;

Методические указания 4.2.1097-02 «Лабораторная диагностика холеры».

Для исследования используемые среды - 10% пептонную воду и щелочной агар получаем из областного центра ГСЭН. Холера - острая инфекционная болезнь с диарейным синдромом, водным, пищевым и контактно-бытовым путями распространения инфекции. Для исследования берутся испражнения, рвотные массы больных или вибрионосителей. Материал отбирается в 1% пептонную воду в 5мл, которая используется для посева в 50мл среды накопления. Исследование ведется поэтапно согласно схеме. Схема анализа объектов окружающей среды-отличается от схемы исследования материала от больных только на первом этапе. Воду на холерный вибрион отбираем в стерильные бутылки в количестве 1л, доливаем 10% пептонной водой для получения 1% пептонной воды в количестве 100мл. Оставляем при комнатной температуре до следующего дня - это первая пептонная вода. Через 18-20 часов делаем высев петлей на чашке со щелочным агаром и 2-4мл в 100мл 1% пептонной воды - это вторая пептонная вода, с которой через 6 часов делаем высев на чашке со щелочным агаром. Чашки просматриваются через 18-20 часов. Проводим отбор подозрительных колоний и высеваем на косячок лактозо-сахарозной среды. Подращиваем 24 часа при Т 37 градусов. Далее проводим учет на среде Рессель. Безгазовые, сбродившие лактозу и неизменившие сахарозу культуры агглютинируем с сыворотками «О» и «OR». Для дальнейшей идентификации отправляем в областной отдел особо опасных инфекций.

всего проб	Выделено культур
37	-

14. Капельные инфекции

Дифтерия

По дифтерии работа проводится согласно:

методическим указаниям 4.2.698-98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы.

Приказ № 36 от 03.02.97г. «О совершенствовании мероприятий по профилактике дифтерии».

С 1.06.2002г. введены СП 3.1.2.1108-02, устанавливающие требования к комплексу организационных, лечебных и санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий, полное и своевременное проведение которых должно обеспечить предупреждение заболеваний дифтерией.

Бактериологическое исследование проводят с целью лабораторной диагностики дифтерийной инфекции, выявление источников инфекции и наблюдение за распространением токсичных коринобактерий дифтерии.

Отбор анализов на дифтерию проводят работники лечебных учреждений, с которыми проводится учеба о правильности отбора, транспортировки и оформлении сопроводительных документов. Обследованию подлежат больные с ангинами, лица поступающие на работу в детские и лечебные учреждения, бактерионосители. Мазки берем сухими ватными тампонами смонтированными и простерилизованными, отдельно для зева и носа. При дифтерии редкий локализаций мазки берутся с пораженных участков (глаз, ухо, кожа, раны, влагалище). Посев делаем не позднее 2-Зх часов после отбора на коринобактоагар. Просмотр чашек через 24-48 часов под микроскопом бинокулярным. Подозрительные колонии - выпуклые, с ровными или слегка изрезанными краями, черного цвета, крошащиеся при прикосновении петлей - отвиваем на сывороточный агар и среду Пизу и проводим исследования их токсигенных свойств. Через 24 часа при появлении специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности, положительной пробе на цистиназу, изучаемую культуру идентифицируют как коринобактерий дифтерии токсигенные и выдают ответ. Культуру выросшую на скошенном сывороточном агаре засевают на среды для изучения биохимических свойств (среды Гисса с сахарозой, глюкозой, крахмалом и бульон с мочевиной).

При отсутствии роста на чашках первичного посева через 48 часов с диагностической целью берем материал повторно.

Группы обследуемых	Число исследований	Выделено культур
Больные и лица с подозрением на заболевание	1776	-
Лица, обследованные с профилакт. Целью	6010	1 н/т
Всего	7786	1

Стафилококк

Исследования на стафилококк проводим согласно:

Приказ № 720 от 31.07.1978г. «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими, заболеваниями и усилением мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией»;

Приказ № 413 от 22.12.84г. «Об организации борьбы и внутрибольничными заболеваниями в ЛПУ»;

Приложение № 3 к приказу МЗ СССР от 28.12.89г. № 691 «О профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах».

Приказ № 345 от 26.02.1997г. «О совершенствовании мероприятий по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах».

Обследованию на стафилококк подлежат сотрудники родильного и хирургического отделений, беременные женщины, поступающие в ЛПУ и переболевшие. Отбор материала производим стерильным ватным тампоном в 5мл изотонического раствора хлорида натрия, хорошо встряхиваем и делаем посев 0.1мл на чашку с желточно-солевым агаром. Чашки выращиваем при 37 градусах 48 часов. Выросшие колонии -круглые с ровным краем, выпуклые от белого до желтого цвета, чаще с ЛВА отвиваем на косячок слабощелочного агара. Ставим реакцию плазмокоагуляции, для которой используем кроличью плазму. Делаем препараты, окрашиваем по Граму и микроскопируем. Если в мазках грамположительные кокки расположенные в виде скоплений («гроздья винограда»), не образуют спор, лецитилазоположительные, плазмокоагулирующие, то выдаем ответ о наличии St.aureus.

Всего	С положительным результатом
715	45

Менингококк

Исследования проводим согласно:

Приказ № 375 от 23.12.1998г. «О мерах по усилению эпидемиологического надзора и профилактики менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитах».

№ 11/23 от 15.02.1999г. «Об усилении мероприятий по профилактике менингококковой инфекции в Ивановской области».

Посев материала - слизь задней стенки носоглотки - проводим на две чашки с менингоагаром. На одну чашку накладываем диски с ристомицином или линкомицином для подавления роста грамположительной микрофлоры. Посев делаем непосредственно на месте отбора. Чашки с засеянным материалом доставляем в лабораторию в термосумках с грелкой. Просмотр чашек проводим с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа. Подозрительные колонии отсеваем на секторы чашки с сывороточным агаром (не менее 3-5 колоний).

Для дальнейшего исследования берем только не пигментированные, дающие нежный рост колонии, делаем мазки, окрашиваем по Граму в модификации Калины. В мазках менингококки - это полиморфные, грамотрицательные неравномерно окрашенные диплококки. Идентифицируем с помощью тестов: «голодный» - рост на слабощелочном агаре без сыворотки при 37 градусах; «холодный» - рост на сывороточном агаре при комнатной температуре. Для менингококка оба теста отрицательные, параллельно делаем посев на среду с углеводами - лактозой, глюкозой, сахарозой, мальтозой. Ставим пробу на оксидазу и каталазу. Обе пробы должны быть положительны, а проба на уреазу - отрицательной.

Всего за 2007 г. на менингококковую инфекцию проведено 81 анализ, выделено не было.

Всего	Выделено
81	--

Исследования на коклюш и паракоклюш

В работе пользуемся:

Методические рекомендации «Коклюш и паракоклюш. Профилактика, клиника, диагностика». МЛ984г.;

Инструкция «По бактериологическому и серологическому исследованию при коклюше и паракоклюше» от 1984г.

Обследованию подлежат:

больные;

контактные;

длительно кашляющие(более 5 суток);

Материал для исследований - слизь задней стенки глотки. Отбираем двумя способами:

Заднеглоточным тампоном;

2. Методом кашлевых пластинок.

Посев производим на две чашки бордетеллагара. На одну из чашек накладываем диски с пеницилином. Чашки инкубируем до 5 суток с ежедневным просмотром под бинокулярным микроскопом. Подозрительные колонии идентифицируем в реакции агглютинации на стекле с адсорбированными сыворотками. Ставим пробу с тирозином на уреазу и на цитрат натрия.

При массовом обследовании контактных, лаборант выезжает вместе с оперативными работниками, и делают посев на месте.

всего	выделено
--	--

15. Контроль стерилизующей аппаратуры

Контроль работы паровых и воздушных стерилизаторов производятся согласно

- МУ № 15/ 6-5 от 28.02.1991 года «Методическим указаниям по контролю паровых и воздушных стерилизаторов».

- МУК № 4.2.1035-01 «Контроль дез.камер».

Бактериологический метод контроля работы стерилизаторов осуществляется с помощью биотестов. Для контроля работы паровых стерилизаторов используем тест - культуры В.stearothermophilis. Для контроля работы воздушных стерилизаторов используем споры тест-культуры B.licheniformis.

Для культивирования тест - культур используем сахарный бульон. Бактериологический метод позволяет контролировать эффективность работы стерилизаторов в процессе их эксплуатации.

Число исследований	Число исследований	с положительным результатом
Паровые стерилизаторы	95	-
Воздушные стерилизаторы	470	3
Дез.камера	72	-
ВСЕГО:	637	3

В инфекционной бактериологии работу лаборатории характеризуют следующие показатели:

- бактериологическое подтверждение диагноза в сравнении с уровнем заболеваемости

- высеваемость

- структура бактериологических исследований

- полная серологическая и биологическая индентификация патогенных культур

- определение ферментативных типов; что облегчает эпидемиологическое расследование и поиски источников инфекции.

Размещено на Allbest.ru

...