Получение функциональных кисломолочных продуктов путем сквашивания молока лактобациллами

Размещено на http://www.allbest.ru/

ДЕПАРТАМЕНТ ОБРАЗОВАНИЯ ГОРОДА МОСКВЫ

Государственное бюджетное общеобразовательное учреждение г. Москвы Школа № 1399

Российский химико-технологический университет имени Менделеева

Получение функциональных кисломолочных продуктов путем сквашивания молока лактобациллами

Алена Николаевна Николаева

Мария Григорьевна Худякова

Научный руководитель:

к.т.н. Борис Андреевич Кареткин

Консультант:

учитель биологии Нона Вагановна Сусанян

Москва, 2018



Содержание

Аннотация

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Функциональное питание

1.1.1 Из истории функционального питания

1.1.2 Концепция функционального питания

1.1.3 Экономика и состояние рынка

1.2 Характеристика пробиотиков

1.2.1Что такое микрофлора

1.2.2 Дисбактериоз

1.2.3 Историческая справка и определение

1.2.4 Требования, предъявляемые к пробиотикам

1.2.5 Актуальность концепции пробиотиков

2. Материалы и методы

2.1. Объекты исследования

2.2. Микробиологические методы анализа

2.3. Химико-аналитические методы

3. Результаты и их обсуждение

3.1. Исследование органолептических свойств полученных кисломолочных продуктов

3.2. Результаты микроскопических исследований

3.3. Результаты химико-аналитических исследований

4. Выводы

5. Благодарности

6. Список литературы

7. Приложение

функциональный питание пробиотик кисломолочный



Аннотация

Работу на тему: “Получение функциональных кисломолочных продуктов путем сквашивания молока лактобациллами” выполнили ученицы 10 класса, биохимической группы школы №1399, Николаева А., Худякова М.

Актуальность данной темы связана с тем, что основным предназначением кисломолочных продуктов является улучшение и сохранение как физического, так и психического здоровья человека, а также уменьшение и предотвращение частоты возникновения заболеваний. Вопросы, касающиеся производства функциональных продуктов питания, находятся в центре внимания специалистов по разработке современных технологий и критериев качества пищевой продукции по всему миру.

Для выполнения работы проведен обзор литературы о роли пробиотиков, материал для практической части был предоставлен кафедрой биотехнологий РХТУ им.Менделеева, где под руководством научного сотрудника кафедры к.т.н. Б.А. Кареткина были получены кисломолочные продукты с использованием лактобактерий. Полученный результат описан, изложен и сделаны выводы. Из пяти штаммов лактобактерий по критериям, выбранным для сравнения, лучшие результаты показали Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus. Думаем, что при выборе кисломолочных продуктов стоит делать выбор именно в пользу этих.



Введение

Молоко -- удивительное изобретение природы. Человек уже давно оценил пищевые и лечебные свойства молока и не только научился использовать этот продукт, но и значительно усовершенствовал его.

Из молока стали производить различные продукты питания. Например: йогурт, кефир, простоквашу, сметану, творог, масло. Со временем появилось много вопросов о качественном составе молока и его влиянии на организм.

Первым, кто увидел микрофлору кисломолочных продуктов, был француз Луи Пастер. Позже, выдающийся русский ученый, лауреат нобелевской премии Илья Ильич Мечников доказал, что включение в рацион питания человека продуктов, содержащих молочнокислые бактерии способствует поддержанию здоровья и увеличению продолжительности жизни. Показана огромная роль в здоровье человека кефира и йогурта. Эти исследования вызвали большой интерес к данной теме. Усилиями ученых-микробиологов были изучены как физиология самих микроорганизмов, так и биохимические процессы брожения, вызываемые бактериями. В результате продолжают выделять новые, более эффективные и создавать на их основе кисломолочные продукты.

Впоследствии, молочнокислые бактерии были отнесены к пробиотикам, т.е. к микроорганизмам, которые при употреблении в разумных количествах, приносят пользу здоровью хозяина.

Взяться за данную тему нас побудила интересная книжка Поля де Крюи “ Охотники за микробами”.

Цель нашего исследования: изучить основные особенности различных видов лактобактерий и полученных с их использованием кисломолочных продуктов.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить на основе данных литературы основные свойства и значение для здоровья человека пробиотиков, а также особенности их использования в кисломолочных продуктах.

2. Используя методы микробиологии изучить особенность выбранных культур рода Lactobacillus. Изготовить в условиях лаборатории кисломолочные продукты с их использованием.

3. Сравнить полученные продукты по основным показателям качества, используя микробиологические и химико-аналитические методы исследования.

4. Проанализировать результаты и сделать выводы.



1.Обзор литературы

1.1 Функциональное питание

1.1.1 Из истории функционального питания

С каждым годом в нашей стране всё больше и больше возрастает интерес к концепции здорового “функционального питания”. Вследствие постоянных стрессов, плохой экологии, малоподвижного образа жизни и многих других неблагоприятных факторов, обогащенные продукты всё чаще начинают появляться в рационе современных людей. Согласно “Научной концепции Функционального питания в Европе”, образованной еще в 1995-1998 гг, основным предназначением таких продуктов является улучшение и сохранение как физического, так и психического здоровья человека, а также уменьшение и предотвращение частоты возникновения заболеваний. К категории функциональных относятся продукты, в которые при производстве либо добавляются новые полезные вещества (бифидо- и лактобактерии, пищевые волокна, минеральные вещества, витамины, флавоноиды, антиоксиданты, полиненасыщенные жирные кислоты), либо увеличивается концентрация уже имеющихся (кальций в молоке), либо уменьшается количество нежелательных компонентов (например, лактозы в молоке).

Особое внимание уделяется кисломолочным продуктам. Ещё в 1908 году русский ученый И.И. Мечников впервые доказал их высокую ценность для здоровья.

Дальнейшее развитие его идеи по введению молочнокислых бактерий в качестве антагонистов патогенной микрофлоры привело к появлению пробиотических препаратов. В переводе с греческого термин “пробиотик” означает “для жизни”. Согласно этому определению, “пробиотики” - живые микроорганизмы, которые, будучи введены в адекватном количестве, приносят пользу здоровью хозяина. Основными представителями данной группы являются молочнокислые бактерии (МКБ) родов Bifidobacterium и Lactobacillus.

1.1.2 Концепция функционального питания

За последний век в развивающихся и экономически развитых странах мира наблюдается значительный рост урбанизации. Всего за 1950-1990 годы численность городского населения по всему земному шару возросла в 3,1 раза и продолжает сохранять тенденцию к увеличению. По прогнозам демографов ООН, к 2025 году процент городских жителей может с лёгкостью достигнуть 80% от общего числа [1]. Современные мегаполисы становятся местом скопления огромного количество людей. Но что же нам даёт такое стремительное распространение городского образа жизни?

Помимо развитой инфраструктуры и возможности лучшей самореализации, большой город обладает и рядом минусов, среди которых очень динамичный, быстрый темп жизни, требующий от человека максимальной отдачи. Мы постоянно куда-то спешим, выполняем одни задачи, ставим перед собой другие, всё новые и новые… Мы спешим жить. Везде хотим успевать, быть первыми. И в спешке нам не удаётся ощутить вкус жизни в полной мере, потому что часто мы просто пропускаем важные её моменты. И всё это в погоне за вещами, которые, казалось бы, должны принести нам счастье. Но почему-то этого не происходит, и вместо него мы получаем только стрессы и беспокойный ум.

Каждый день наш организм подвергается влиянию негативных факторов: постоянное недосыпание; хроническая усталость; сбой в режиме дня; умственное перенапряжение; ухудшение экологической обстановки; некачественное питание (в т. ч. присутствие в продуктах различных искусственных компонентов, таких как красители, консерванты и ароматизаторы), а также питание всухомятку и на ходу; сидячий образ жизни.

Все эти факторы истощают резервы организма, нарушается внутренний баланс. В итоге - раздражение, неудовлетворённость жизнью, и как следствие - многочисленные заболевания, в числе которых также избыточный вес и преждевременное старение населения.

Часто, под влиянием стремительного ритма жизни, при появлении первых симптомов, мы игнорируем сигналы, поступающие от нашего организма. Таким образом, мы лишь усугубляем ситуацию, позволяя болезни прогрессировать. И, как правило, начинаем задумываться о помощи профессионала только тогда, когда недуг вызывает у нас ощутимые физические недомогания. Нередко бывает уже поздно…

Первым из строя выходит желудочно-кишечный тракт. Не вся пища, которую мы потребляем, правильно переваривается. Часть непереваренных остатков остаётся на стенках кишечника и превращается в токсины, которые постепенно накапливаются и начинают оказывать пагубное воздействие на процессы всасывания полезных веществ и витаминов. Также часть токсинов попадает в кровяное русло, вызывая интоксикацию всего организма. В итоге какое-то наиболее уязвимое звено конкретного организма начинает работать хуже. Появляются первые симптомы заболевания.

Чаще всего показателями нарушения работы ЖКТ являются: боли в животе; нарушения стула (запор, диарея); повышенное газообразование, вздутие живота.

Из приведённых выше аргументов, можно сделать вывод о том, что питание очень сильно влияет на здоровье и самочувствие человека. Современными учёными доказано, что правильное питание действительно способствует профилактике многих заболеваний, повышает работоспособность, увеличивает продолжительность жизни.

Современная медицина охватывает более широкий спектр пищевых веществ и их компонентов, необходимых для нормальной жизнедеятельности организма, которые раньше просто опускались. Такая современная концепция называется концепцией оптимального питания.

В рамках развития концепции оптимального питания сформировалась концепция функционального питания.

Впервые она была сформулирована ещё в начале 1980-х годов в Японии, где приобрели большую популярность так называемые функциональные (позитивные) продукты (ФП). Функциональные продукты - это продукты, предназначенные для регулярного употребления населением, содержащие в своём составе специальные ингредиенты, которые позволяют сохранить и улучшить здоровье человека, а также повысить сопротивляемость организма к пищевым заболеваниям. Продукты, входящие в её состав, соответствуют определённым требованиям, установленным национальным стандартом в 1991 году. [2].

По мнению японских исследователей, ФП должны соответствовать следующим требованиям:

1) ФП - это пища, которая готовится исключительно из натуральных природных ингредиентов;

2) ФП - рекомендованы для ежедневного приёма;

3) ФП - должны обладать определённым действием, регулирующим какие-либо процессы в организме (например, замедление старения, контроль физического состояния и т. д.)

Основными видами ингредиентов, входящих в состав ФП, являются:

1) Растворимые и нерастворимые пищевые волокна;

2) Витамины (А, В, D и т.д.);

3) Минеральные вещества (кальций, железо);

4) Полиненасыщенные жиры (растительные масла, рыбий жир, омега-3-жирные кислоты);

5) Антиоксиданты (бета-каротин и витамины С и Е);

6) Микроэлементы, лактобактерии, бифидобактерии и другие;

7) Олигосахариды (субстрат для полезных бактерий).

1.1.3 Экономика и состояние рынка

Что касается экономики, то на сегодняшний день продажи функциональных продуктов питания на мировом рынке превышают 50 млрд. долларов США (ежегодно происходит увеличение на 15-20 %). В Японии производство ФП стало стратегическим направлением страны и составляет 8-9 млрд. долларов в год. Во Франции объём производства пробиотических продуктов и БАДов за последнее десятилетие вырос почти в 350 раз. Но, по официальным данным, абсолютным лидером являются США, которым принадлежит около 40% общего рынка.

В нашей стране рынок функциональных продуктов только формируется и стремительно набирает обороты. Условно можно выделить 4 пищевые группы:

1) Продукты на основе зерновых (хлебобулочные изделия, которые обогащаются отрубями, клетчаткой, различными семенами, витаминами, минералами, йодом, натуральными фруктовыми добавками);

2) Продукты масложировой отрасли (комбинированные (облегчённые) масла, низкожирные маргарины и майонезы с функциональными ингредиентами);

3) Безалкогольные напитки (в т. ч. соки, морсы, чаи, квасы и т. д.)

4) Молочные продукты (первая категория, которой был присвоен статус функциональной; направлены преимущественно на нормализацию состава или повышение биологической активности микрофлоры кишечника).

Таким образом, можно сделать вывод о том, что вопросы, касающиеся производства функциональных продуктов питания, находятся в центре внимания специалистов по разработке современных технологий и критериев качества пищевой продукции по всему миру.



1.2 Характеристика пробиотиков

1.2.1Что такое микрофлора

Французский учёный Луи Пастер, химик по образованию, ещё в IX веке обнаружил связь многих опасных болезней с микроорганизмами. Им было доказано, что каждое заболевание имеет своего возбудителя. Так зародилась наука иммунология, и возникло такое понятие, как микрофлора.

Микрофлора - это совокупность микроорганизмов, находящихся в полостях нашего организма. Микробы обитают на коже, в слизистых (2-3% у мужчин и 9-12% у женщин), но самой заселённой частью является ЖКТ (75-78%) [3]. Численность бактерий примерно в 10 раз больше, чем суммарное количество клеток всего организма в целом. Разные отделы ЖКТ содержат микробиоту различного количественного и качественного состава. Так, в нижних его частях находится значительно больше микроорганизмов, чем в верхних. По мере продвижения от толстого кишечника к пищеводу, количество клеток уменьшается. На сегодняшний день известно, что микрофлора обеспечивает нормальную деятельность всего организма и защищает от различных патогенных особей, вызывающих заболевания, образуя тем самым иммунную систему человека. Общий вес такой микробной экосистемы составляет от 1 до 3 килограмм. На поддержание работы этого конгломерата тратится примерно одна десятая всей полученной энергии.

Большую часть кишечной микрофлоры занимают полезные бактерии сапрофиты. Их взаимоотношения с организмом человека взаимовыгодные. Так, основными функциями микроорганизмов являются:

· защита от чужеродных клеток;

· участие в синтезе различных соединений (витаминов, ферментов, аминокислот);

· помощь в переваривании пищи;

· улучшение моторики кишечника;

· улучшение всасывания в кровь питательных веществ.

Большое значение в поддержании здоровья ЖКТ имеют бифидобактерии, лактобактерии, кишечная палочка и энтерококки. Так, бифидо- и лактобактерии выделяют специальные противомикробные вещества, которые защищают организм от патогенных микробов и их токсинов. Участвуют в выработке молочной и уксусной кислот, в синтезе витаминов, белков и аминокислот. Также способствуют улучшению усвояемости организмом витамина D, кальция и железа.

1.2.2 Дисбактериоз

Бактериальный состав кишечника начинает формироваться уже с первых дней жизни и носит строго индивидуальный характер. К концу 1-2 года он уже близок к микрофлоре взрослого человека [4]. Важным фактором при формировании микробного биоценоза является естественное вскармливание ребёнка, т.к. женское молоко содержит особые “бифидус-факторы”, способствующие заселению кишечника нужными микроорганизмами. В этот период даже незначительные патологические изменения в организме маленького человека могут привести к серьёзным сбоям в работе кишечника. Особый ущерб наносит нерациональное питание и антибиотикотерапия.

Таким образом, вследствие нарушения микробного баланса, возникает дисбактериоз. В соответствие с отраслевым стандартом, дисбактериоз - это клинико-лабораторный синдром, который возникает при ряде заболеваний и клинических ситуаций. Он характеризуется изменением количественного и качественного состава микрофлоры с избыточным ростом патогенных штаммов. Условно-патогенные бактерии начинают конкурировать с нормофлорой за участие в усвоении питательных веществ и в процессах ферментации. В результате их деятельности происходит нарушение всасывания витаминов, жирных кислот, аминокислот, углеводов и азота. А продукты метаболизма, им принадлежащие, подавляют регенерацию слизистой оболочки, тормозят перистальтику, снижают детоксикационную способность печени, способствуют росту опухолей.

На сегодняшний день для коррекции дисбактериоза применяют пробиотики - препараты на основе микроорганизмов, оказывающие благотворное воздействие на микробиоценоз кишечника.

1.2.3 Пробиотики. Историческая справка и определение

История развития пробиотиков началась в 1904 году, когда русский учёный, лауреат Нобелевской премии И. И. Мечников выдвинул теорию о благотворном влиянии бактерий молочной кислоты (БМК) на организм человека.

“Наша преждевременная и несчастливая старость является следствием постоянного отравления вредными веществами, выделяемыми некоторыми микробами толстого кишечника.

Совершенно очевидно, что уменьшение количества этих микробов отдаляет старость и смягчает её проявления”, - говорил учёный, наблюдая за жителями Болгарии, которые постоянно употребляли в пищу традиционный кисломолочный продукт - “болгарский йогурт” и отличались хорошим здоровьем и долголетием.

Таким образом, Мечников разработал диету, обязательным условием которой стало включение в пищевой рацион молока, ферментированного бактерией, которую он назвал “Болгарской палочкой”.

1.2.4 Требования, предъявляемые к пробиотикам

Т. к. пробиотики широко используются в продуктах питания, пищевых добавках и в лекарственных средствах, то микроорганизмы, входящие в их состав, должны отвечать следующим требованиям:

· быть нетоксигенными;

· быть непатогенными;

· должны сохранять жизнестойкость при прохождении через ЖКТ и при длительном хранении.

1.2.5 Актуальность концепции пробиотиков

Для того чтобы создавать пробиотические продукты для определённых целей, медикам и учёным необходимо знать свойства используемых в этих целях штаммов.

На сегодняшний день наиболее изученными пробиотиками в мире являются лактобактерии.

L. acidophilus и L. plantarum показывает высокую эффективность против сальмонеллы.

В Канаде, в связи со способностью к снижению инфекций, данный штамм успешно используется в качестве лечебного препарата для людей, перенесших хирургическое вмешательство.

Таким образом, открываются новые перспективы в исследовании пробиотиков, показывающие роль последних в лечении психического стресса, депрессий, а также в формировании психического здоровья человека.



2. Материалы и методы

2.1Объекты исследования

Основными объектами исследования являлись молочнокислые бактерий видов Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus из коллекции кафедры биотехнологии РХТУ им. Д. И. Менделеева. Для получения кисломолочных продуктов использовали молоко обезжиренное, приобретенное в магазинах города Москва.

2.2 Микробиологические методы анализа

Для получения инокулята лактобактерий использовали среду MRS стандартного состава (г/л): глюкоза - 20,0; пептон - 10,0; гидролизат казеина - 10,0; K₂HPO₄·3H₂O - 2,0; CH?COONa·3H₂O - 5,0; MgSO₄ ·7H₂O - 0,2; C₆H₁₇O₇N₃ - 2,0; MnSO₄·4H₂O - 0,05; дрожжевой экстракт - 5,0; дистиллированная вода; pH 7,0.

Молоко разливали в пробирки стеклянные с ватно-марлевыми пробками по 20 мл. с помощью мерного цилиндра.

Стерилизацию питательной среды и молока проводили в лабораторном стерилизаторе при температуре 112°C в течение 30 мин.

Культивирование лактобактерий осуществляли при температуре 37 °C в течение 18 часов без перемешивания и ограничения доступа воздуха.

Для изучения клеток бактерий нам предоставили фиксированные препараты, окрашенные по Граму. Исследования проводили на микроскопе Zeiss (увеличение 1000х)



2.3 Химико-аналитические методы

Определение активной кислотности проводили потенциометрическим способом с использованием рН-метра.



3. Результаты и обсуждение

3.1 Исследование органолептических свойств полученных кисломолочных продуктов

Lactobacillus plantarum (Лактобактерии плантарум), Lactobacillus rhamnosus (Лактобактерии рамнозус): ярко выраженного вкуса обнаружено не было, так же как и в описании не обнаружено разницы с контрольным экземпляром.

Lactobacillus bulgaricus (Болгарская палочка): образовался сгусток, на стенках пробирки оседает остаток, имеет слобовыраженный запах, средней густоты, нейтральный вкус, имеются сгустки, которые являются стабилизированными углеводами.

Lactobacillus acidophilus (Лактобактерии ацидофильные): образовался остаток, находится в густом состоянии, на стенках пробирки оседает остаток, почти отсутствует жидкая среда, имеется резкий запах, нейтральный вкус, сгусток образует полисахариды.

Lactobacillus helveticus (Лактобацилл хелветикус): образовался остаток (сыворотка), почти отсутствует жидкая среда, кислый вкус, без брожения.

См. Приложение 1.

3.2 Результаты микроскопических исследований приведены в Приложении 2

3.3 Результаты химико-аналитических исследований

Основными показателями качества кисломолочных продуктов являются активная кислотность (рН) и титруемая кислотность, которые характеризуют способность молочнокислых бактерий образовывать органические кислоты, являющиеся фактором антагонизма против патогенных микробов. Изначальный рН молока примерно 7. Поэтому о том, насколько активно растет в нем та или иная культура можно судить по изменению рН. Известно, что в ходе сбраживания лактозы, лактобациллы образуют преимущественно молочную кислоту и в небольших количествах другие органические кислоты (например, уксусную) и углекислый газ. Данные продукты подавляют рост сапрофитных и патогенных микроорганизмов, которые приводят к порче молока и инфекционным заболеваниям ЖКТ человека. Также молочная и уксусная кислота являются “природными” консервантами, которые нашли широкое применение в пищевой промышленности.

С другой стороны слишком интенсивное образование кислот будет придавать продукту избыточно кислый вкус, делать его менее вкусным.

Также важным показателем, характеризующим качество кисломолочных продуктов, является так называемая титруемая кислотность. Это интегральный показатель, которые дает количественную меру образования кислот в кисломолочных продуктах. Например, для йогуртов данный показатель установлен в пределах 75-140 °T (ГОСТ 31981-2013), для ацидофилина 75-130 °T (ГОСТ 31668-2012). Результаты контроля по обоим показателям представлены в таблице.

Вид бактерий	Активная кислотность (рН)	Титруемая кислотность
		Объем 0,1 н. NaOH, пошедшей на титрование	Титруемая кислотность, °T
Lactobacillus bulgaricus	5,39	8,3	83
Lactobacillus rhamnosus	5,82	3,03	30,3
Lactobacillus acidophilus	5,1	15,64	156,4
Lactobacillus plantarum	5,68	2,85	28,5
Lactobacillus helveticus	4,34	9,13	91,3

Как видно из результатов, Lactobacillus plantarum и Lactobacillus rhamnosus характеризуются слабой бродильной активностью. Наибольшей активностью кислотобразования обладает культура ацидофильной палочки, Lactobacillus acidophilus, она даже превышает установленные нормы, т.е. процесс сбраживания можно проводить не так долго. Интенсивное брожение также привело к образованию резкого запаха и сильного вкуса (см. выше), что можно отнести, скорее к недостаткам. В целом умеренное, но соответствующее установленным нормам кислотообразование продемонстрировали болгарская палочка (Lactobacillus bulgaricus) и Lactobacillus helveticus , а полученные с их использованием продукты также обладали более нейтральными и “мягкими” органолептическими показателями.



Выводы

1. Изучив источники,установлено, что среди “полезных” бактерий микробиоты преоболадают представители родов Bifidobacterium и Lactobacillus. Штаммы лактобациллы также являются основными производственными культурами для получения кисломолочных продуктов, как кефир, йогурт, простокваша, ацидофилин и т.д.

2. Изучена молокосвертывающая способность подобранных для исследований культур лактобактерий Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus. Проведен контроль сквашенных кисломолочных продуктов по органолептическим показателям.

3. Проведен контроль полученных в лабораторных условиях кисломолочных продуктов по показателям активная и титруемая кислотность. Установлено, что наиболее активным кислотообразователем является культура Lactobacillus acidophilus.

4. На основании полученных результатов можно отметить, что применение Lactobacillus bulgaricus дает лучший по органолептическим свойства продукт, а Lactobacillus acidophilus - сочетает хорошие значения органолептических и лучшее значение активности кислотообразования (титруемой кислотности).

Благодарности: Хочется выразить благодарность учителю химии Каплиной Ольге Владимировне за консультацию по вопросам титруемой кислотности.



Список литературы

1. Ю. Л. ПИВОВАРОВ Мировая урбанизация и Россия на пороге XXI века, М. 2013, с. 13.

2. Кочеткова А.А. Функциональное питание / А.А. Кочеткова, В.И. Тужилкин, И.Н. Нестерова, А.Ю. Колеснов, Н.Д. Войткевич// Вопросы питания. - №4. - 2000.

3. С.В. Бельмер, А. В. Малкоч; Кишечная микрофлора и значение пребиотиков для ей развития. М.,2012

4. Хавкин А. И. Микрофлора пищеварительного тракта. М., 2009.



Приложение 1



Приложение 2

Результаты микроскопических исследований.

Размещено на Allbest.ru

...